黃酮類中藥單體對(duì)肺纖維化信號(hào)通路調(diào)控作用的研究進(jìn)展 Δ

蒙建華 ，劉 銳 ，潘 玲 ，羅珍貞 ，宋偉賢 ，陸 玨 （.廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，南寧 530004；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，南寧 53000）

肺纖維化（pulmonary fibrosis，PF）是呼吸系統(tǒng)疾病中常見的慢性、間質(zhì)性肺疾病，其特征是進(jìn)行性呼吸困難，隨著病情進(jìn)展患者可能出現(xiàn)呼吸衰竭，而致死亡。PF 患者確診后的中位生存期較短，預(yù)后極差[1]。目前，PF治療方法十分有限，臨床以抗肺纖維化藥物及肺移植為主要手段[2]。由于PF患者通常合并其他并發(fā)癥，在使用抗肺纖維化藥物時(shí)易受并發(fā)癥的限制，治療效果往往不甚理想。而肺移植成本過(guò)高，且存在器官匱乏、受體適應(yīng)性差等問(wèn)題，難以成為治療首選[3]。因此，開發(fā)更適宜的治療藥物成為治療PF亟待解決的問(wèn)題。

黃酮類中藥單體作為中醫(yī)藥寶庫(kù)中的重要藥效成分，具有一定的抗炎、抗氧化應(yīng)激、抗細(xì)胞凋亡等作用[4]。黃酮類化合物是一種含有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu)的天然化合物[5]，代表成分有黃芪總黃酮、槲皮素、姜黃素、銀杏葉提取物、異甘草素等。大量研究發(fā)現(xiàn)，黃酮類化合物具有顯著改善PF 的作用，但學(xué)界對(duì)其作用機(jī)制尚無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)?；诖?，本文綜述了黃酮類中藥單體對(duì)PF 信號(hào)通路調(diào)控作用的研究進(jìn)展，以期為黃酮類中藥單體治療PF的相關(guān)研究和藥物研發(fā)提供參考。

1 TGF-β1/Smad信號(hào)通路相關(guān)機(jī)制

1.1 TGF-β1/Smad信號(hào)通路與PF的關(guān)系

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡及遷移的多功能因子，目前較多觀點(diǎn)認(rèn)為TGF-β1在調(diào)控PF 過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[6]。TGF-β1廣泛存在于內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中，經(jīng)多肽復(fù)合物催化為成熟的TGF-β1后與其受體（Tβ1）結(jié)合，可激活果蠅MAD 蛋白（Smad）經(jīng)典和非經(jīng)典信號(hào)途徑，參與生物學(xué)進(jìn)程[7]。Tβ1可促使Smad2/3 磷酸化，招募Smad4 形成三元復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)而參與下游促PF 靶基因轉(zhuǎn)錄，引起PF[8]。與Smad2/3、Smad4 不同，Smad7 是PF 的負(fù)向調(diào)控因子，能夠阻斷Smad 生成以拮抗TGF-β1，同時(shí)，Smad7 也能與Tβ1受體結(jié)合，進(jìn)而阻止Smad2/3磷酸化，從而發(fā)揮調(diào)節(jié)肺組織損傷的作用[9]。

1.2 黃酮類中藥單體通過(guò)調(diào)控TGF-β1/Smad信號(hào)通路改善PF

徐昌君等[10]前期研究發(fā)現(xiàn)，黃芪總黃酮能夠明顯改善博來(lái)霉素（bleomycin，BLM）誘導(dǎo)的PF 模型小鼠肺泡炎癥及肺組織膠原蛋白沉積，抑制腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）及TGF-β1蛋白表達(dá)，且黃芪總黃酮組的治療效果顯著優(yōu)于黃芪多糖組和黃芪皂苷對(duì)照組。該團(tuán)隊(duì)研究還發(fā)現(xiàn)，黃芪總黃酮可能通過(guò)調(diào)節(jié)微小RNA-21（miRNA-21）/ miRNA let-7d減少TGF-β1產(chǎn)生，同時(shí)增強(qiáng)Smad7信號(hào)傳導(dǎo)，抑制Smad3磷酸化，有效改善PF 小鼠上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相關(guān)指標(biāo)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）和E-鈣黏蛋白的表達(dá)，減輕肺功能損傷和肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，提示黃芪總黃酮可能通過(guò)TGF-β1/Smad信號(hào)通路抑制炎癥反應(yīng)和膠原纖維蛋白分泌，阻止EMT表達(dá)，來(lái)發(fā)揮抗PF作用[11]。

張旭等[12]在缺氧誘導(dǎo)的肺組織炎癥模型大鼠中發(fā)現(xiàn)，予模型大鼠燈盞花素干預(yù)后，大鼠肺泡炎癥因子TNF-α的表達(dá)顯著減少，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及肺組織水腫均被逆轉(zhuǎn)，TGF-β1、Smad4及mRNA表達(dá)水平均顯著下調(diào)，Ⅰ型膠原蛋白（typeⅠ collagen，Col Ⅰ）水平同步下降，推測(cè)燈盞花素能夠通過(guò)TGF-β1/Smad4信號(hào)通路抑制PF早期肺泡炎癥。丘圓圓[13]研究表明，燈盞花乙素對(duì)肺纖維灶同樣具有明顯的改善作用，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均表明，燈盞花乙素能明顯降低TGF-β1敏感性，減少下游因子Smad2/Smad3磷酸化，抑制肺成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志物纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）、α-SMA 和Col Ⅰ等的表達(dá)，減緩EMT 進(jìn)程以改善PF。可見，燈盞花乙素對(duì)PF早期肺泡炎癥和中后期的肺纖維灶的改善作用均可能與TGF-β1/Smad信號(hào)通路相關(guān)。

Li 等[14]用苦參堿衍生物對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人胚肺成纖維細(xì)胞（MRC-5）PF模型進(jìn)行預(yù)處理后發(fā)現(xiàn)，苦參堿衍生物能夠顯著降低MRC-5細(xì)胞存活率，使TGF-β1與Tβ1結(jié)合受限、Smad2/3 水平下調(diào)、膠原沉積物減少、細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核移位受阻，提示苦參堿衍生物可能通過(guò)TGFβ1/Smad 信號(hào)通路來(lái)抑制MRC-5 細(xì)胞的增殖與活化，從而改變細(xì)胞生物學(xué)形態(tài)，治療PF。此外，劉勇等[15]以BLM 誘導(dǎo)的PF 模型大鼠為對(duì)象的研究也證實(shí)，苦參素可通過(guò)抑制TGF-β1/Smad信號(hào)通路，減輕大鼠肺泡炎癥及纖維化程度。

皮娜[16]在脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷及BLM 誘導(dǎo)的PF 小鼠中發(fā)現(xiàn)，黃藤素可通過(guò)抑制核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）p65 蛋白的表達(dá)，減少炎癥因子TNFα、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-8 釋放，減輕急性肺損傷，同時(shí)下調(diào)PF 小鼠肺組織丙二醛（malondialdehyde，MDA）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）氧化應(yīng)激水平，從而降低TGF-β1、Smad2/3活性，提高上皮標(biāo)志物E-鈣黏蛋白的表達(dá)，下調(diào)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA、Col Ⅰ蛋白的表達(dá)，提示黃藤素可通過(guò)NF-κB/TGF-β1/Smad信號(hào)通路抑制氧化應(yīng)激，減輕急性肺損傷，降低細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）沉積，從而抑制EMT進(jìn)程以治療PF。

2 JAK/STAT信號(hào)通路相關(guān)機(jī)制

2.1 JAK/STAT信號(hào)通路與PF的關(guān)系

Janus激酶（JAK）家族是一種非跨膜酪氨酸激酶，廣泛存在于各類細(xì)胞中[17]。細(xì)胞質(zhì)中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）家族作為JAK的下游靶點(diǎn)，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄中具有十分重要的作用[18]。JAK/STAT 信號(hào)通路參與了PF發(fā)生發(fā)展的多個(gè)生物學(xué)進(jìn)程，包括炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等。JAK/STAT 信號(hào)通路能被多種細(xì)胞因子及干擾素介導(dǎo)，如炎癥因子IL-4、IL-6 和IL-13 以及促纖維因子TGF-β1等[19]。當(dāng)JAK/STAT信號(hào)通路受到細(xì)胞因子刺激時(shí)，STAT 轉(zhuǎn)錄因子首先被激活并釋放信號(hào)傳導(dǎo)至下游JAK，JAK家族通過(guò)介導(dǎo)STAT1、STAT3發(fā)生磷酸化以激活JAK/STAT 信號(hào)通路，進(jìn)而將信號(hào)傳導(dǎo)至細(xì)胞核內(nèi)參與轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞活化，促進(jìn)PF 的形成[20]。

2.2 黃酮類中藥單體通過(guò)調(diào)控JAK/STAT 信號(hào)通路改善PF

李欣澤等[21]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，鐮形棘豆總黃酮能夠明顯改善BLM 誘導(dǎo)的大鼠PF，其機(jī)制可能與鐮形棘豆總黃酮能抑制纖維蛋白α-SMA、ColⅠ、Col Ⅲ表達(dá)，減少基質(zhì)蛋白過(guò)度沉積和EMT 的影響，進(jìn)而減輕PF 程度有關(guān)。該團(tuán)隊(duì)還發(fā)現(xiàn)，鐮形棘豆總黃酮對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞同樣具有顯著的改善作用，能降低炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)，增加細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制因子3 的表達(dá)，下調(diào)JAK1、STAT1 蛋白表達(dá)，并降低ECM 產(chǎn)物及纖維化蛋白中α-SMA、ColⅠ、Col Ⅲ的含量，且鐮形棘豆總黃酮的上述改善效果與吡非尼酮相當(dāng)，表明鐮形棘豆總黃酮改善PF 的可能機(jī)制與抑制JAK1/STAT1信號(hào)通路相關(guān)[22]。

虢強(qiáng)等[23]研究發(fā)現(xiàn)，紅景天苷對(duì)盲腸結(jié)扎穿孔誘導(dǎo)的膿毒癥急性肺損傷及PF 小鼠具有明顯的改善作用，其可降低急性肺損傷過(guò)程中釋放的炎癥因子IL-6、IL-4、IL-10 水平，并下調(diào)JAK2、STAT3 蛋白表達(dá)，抑制肺組織中纖維化產(chǎn)物波形蛋白、α-SMA、FN、ColⅠ表達(dá)，提示紅景天苷可能通過(guò)抑制JAK2/STAT3信號(hào)通路減少炎癥反應(yīng)，促進(jìn)膠原纖維降解，發(fā)揮抗PF作用。

3 NF-κB信號(hào)通路相關(guān)機(jī)制

3.1 NF-κB信號(hào)通路與PF的關(guān)系

NF-κB 作為Rel 蛋白家族中的重要一員，在參與細(xì)胞因子的炎癥、轉(zhuǎn)錄、增殖、分化等生物學(xué)過(guò)程中表現(xiàn)突出。NF-κB 信號(hào)通路通常由經(jīng)典與非經(jīng)典途徑激活：Toll樣受體、IL家族及TNF-α等受體作為經(jīng)典途徑中的上游活化因子，可通過(guò)聯(lián)合IκB 激酶β（IκB kinase β，IKK β）復(fù)合物在絲氨酸殘基處發(fā)生磷酸化以降解IκB；降解后的IκB 可生成p65 和p50 蛋白，進(jìn)而促使NF-κB從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，完成NF-κB 靶基因的經(jīng)典轉(zhuǎn)錄[24]。非經(jīng)典途徑則通過(guò)E3 連接酶降解TNF 受體相關(guān)因子3 并激活I(lǐng)KK α 來(lái)完成，進(jìn)而誘導(dǎo)p100、p50 和p52蛋白磷酸化，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞因子特異性轉(zhuǎn)錄[25]。激活后的NF-κB 又能反向釋放IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α 等炎癥因子，進(jìn)一步擴(kuò)大炎癥反應(yīng)，形成復(fù)雜且循環(huán)的炎癥環(huán)路[26]。

3.2 黃酮類中藥單體通過(guò)調(diào)控NF-κB信號(hào)通路改善PF

Verma 等[27]對(duì)放射性肺損傷及PF 小鼠開展的研究表明，槲皮素不僅可以抑制IL-6、IL-18、IL-1β、TNF-α等炎癥因子的釋放，阻斷NF-κB 信號(hào)通路，下調(diào)凋亡因子胱天蛋白酶3（caspase-3）、體內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）和一氧化氮水平，減輕肺組織DNA 損傷，而且能夠改善TGF-β1/Smad3介導(dǎo)的PF，降低α-SMA蛋白表達(dá)，提示該機(jī)制可能與槲皮素抑制NF-κB 信號(hào)通路，從而減少細(xì)胞凋亡、清除氧自由基、縮小炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)相關(guān)。此外，門翔等[28]發(fā)現(xiàn)，槲皮素可呈劑量依賴地降低PF小鼠肺組織中TGF-β1和p38絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases，MAPK）蛋白表達(dá)，阻止NF-κB 信號(hào)傳導(dǎo)，抑制TNF-α、IL-6、IL-8 等炎癥因子釋放，減少炎癥及纖維細(xì)胞浸潤(rùn)，其機(jī)制可能與槲皮素能抑制NF-κB 信號(hào)通路、調(diào)控炎癥及PF 介質(zhì)表達(dá)有關(guān)。

Pan 等[29]研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉提取物能夠明顯減少炎癥因子NF-κB釋放，促進(jìn)M1/M2巨噬細(xì)胞平衡，抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白B 細(xì)胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bcl-2-associated X，Bax）、caspase-3、caspase-9 表達(dá)，下調(diào)TGF-β1及α-SMA 促纖維相關(guān)蛋白，從而發(fā)揮改善PF 作用。此外，黃茹妍等[30]研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉提取物不僅能夠抑制PF 模型大鼠肺組織中NF-κB p65 的含量，下調(diào)IL-4 及人干擾素-γ 表達(dá)，而且可以平衡Th1/Th2 細(xì)胞因子，明顯改善大鼠肺組織炎癥及纖維化程度。該研究認(rèn)為，銀杏葉提取物可能通過(guò)阻斷NF-κB 信號(hào)通路來(lái)平衡M1/M2 巨噬細(xì)胞和Th1/Th2 細(xì)胞因子，抑制巨噬細(xì)胞極化和過(guò)度凋亡，發(fā)揮抗PF作用。

張少波等[31]基于PF模型小鼠的研究結(jié)果提示，姜黃素可改善PF 模型小鼠肺部形態(tài)學(xué)變化，提高小鼠肺組織的抗氧化能力，其機(jī)制可能與姜黃素能通過(guò)抑制NFκB 信號(hào)通路，降低SOD、MDA 表達(dá)，下調(diào)血清中TNFα、IL-6 含量，同時(shí)降低纖維化肺組織中羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）水平有關(guān)。楊青等[32]還發(fā)現(xiàn)，姜黃素能夠通過(guò)沉默信息調(diào)節(jié)因子1（sirtuin 1，SIRT1）/NF-κB通路喚醒細(xì)菌性肺炎幼鼠的免疫應(yīng)答并改善PF，其機(jī)制可能是姜黃素可通過(guò)抑制NF-κB 信號(hào)通路改善氧化應(yīng)激，提高機(jī)體免疫調(diào)節(jié)水平，抑制肺組織細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮抗PF作用。

4 PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)機(jī)制

4.1 PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路與PF的關(guān)系

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）是一種與細(xì)胞增殖、凋亡、代謝相關(guān)的脂質(zhì)激酶，具有活性的PI3K 可作用于下游的蛋白激酶B（protein kinase B，Akt），進(jìn)而活化PI3K/Akt信號(hào)通路下游的調(diào)節(jié)因子，如哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、缺氧誘導(dǎo)因子1α 和重組人蛋白，從而參與生物學(xué)進(jìn)程[33]。PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路與PF的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。其中，PI3K的α和γ亞型因子在肺成纖維細(xì)胞表面高度表達(dá)，PI3K 介導(dǎo)的TGF-β1誘導(dǎo)因子可能參與了自噬小體膜形成與分化過(guò)程，從而間接影響PF[34]；磷酸化的Akt1 和Akt2 可調(diào)控肺泡上皮細(xì)胞凋亡及巨噬細(xì)胞極化，自噬小體mTORC2則可在干擾素調(diào)節(jié)因子4的刺激下參與巨噬細(xì)胞極化，促使肺組織炎癥及纖維化[35]。

4.2 黃酮類中藥單體通過(guò)調(diào)控PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路改善PF

袁婷[36]通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，漆黃素能夠顯著改善BLM 誘導(dǎo)的PF 小鼠肺組織炎癥及纖維化程度，并且對(duì)TGF-β1刺激的人肺成纖維細(xì)胞的增殖、分化、遷移等有明顯抑制作用，能降低成纖維細(xì)胞活性及PI3K、Akt、mTOR 磷酸化表達(dá)，減少FN、ColⅠ、α-SMA 蛋白及mRNA 產(chǎn)生。這表明，漆黃素可能通過(guò)阻斷PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路，從而抑制人肺成纖維細(xì)胞增殖、活化，減少細(xì)胞遷移，抑制成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，激活PF保護(hù)機(jī)制。

李江[37]研究發(fā)現(xiàn)，在TGF-β1誘導(dǎo)的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（NIH3T3）中，與TGF-β1組相比，原花青素治療組與PI3K抑制劑組均能明顯抑制細(xì)胞增殖活力，縮小肺組織中肌成纖維細(xì)胞，降低TGF-β1、PI3K、Akt 表達(dá)，下調(diào)膠原沉積產(chǎn)物α-SMA、Col Ⅰ的表達(dá)，提示原花青素可能通過(guò)抑制TGF-β1，進(jìn)而阻斷PI3K/Akt 信號(hào)通路，抑制肺成纖維細(xì)胞增殖、分化，減少成纖維細(xì)胞膠原蛋白合成，促進(jìn)肺組織肌成纖維細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變，增強(qiáng)抗PF敏感性。

5 NLRP3信號(hào)通路相關(guān)機(jī)制

5.1 NLRP3信號(hào)通路與PF的關(guān)系

NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）是一種細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的炎癥小體，由免疫受體蛋白、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（apoptosis-associated specklike protein，ASC）和caspase-1 前體蛋白構(gòu)成，主要存在于免疫細(xì)胞和炎癥細(xì)胞中。當(dāng)機(jī)體受到氧化應(yīng)激、鉀離子外泄、線粒體功能障礙等刺激時(shí)，細(xì)胞或病原微生物可沖破病原體相關(guān)分子模式和其他模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRRs）構(gòu)成的免疫防線，激活NLRP3；活化的NLRP3 進(jìn)一步催化成熟肺泡巨噬細(xì)胞釋放IL-1β和IL-18，促使肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及膠原產(chǎn)物沉積；同時(shí)，肺泡上皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的NLRP3能夠釋放TGF-β1，擴(kuò)大炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，加快EMT 進(jìn)程，進(jìn)而加重PF[38]。

5.2 黃酮類中藥單體通過(guò)調(diào)控NLRP3 信號(hào)通路改善PF

蔣怡芳等[39]將不同濃度的柚皮素作用于BLM 誘導(dǎo)的PF小鼠后發(fā)現(xiàn)，隨著柚皮素濃度升高，小鼠肺組織中NLRP3、ASC、caspase-1 蛋白及mRNA 的表達(dá)越少，IL-1β 和IL-18 的釋放受到抑制，TGF-β1、Col Ⅰ、α-SMA 和波形蛋白水平均顯著降低，E-鈣黏蛋白水平顯著升高，肺組織損傷顯著改善，ECM及沉積物明顯減少。其機(jī)制可能是柚皮素通過(guò)抑制NLRP3信號(hào)通路阻止細(xì)胞焦亡而發(fā)揮抗炎、抗PF 作用。宋占帥[40]用木犀草素對(duì)PF 模型大鼠和肺泡巨噬細(xì)胞進(jìn)行的體內(nèi)外干預(yù)研究也證實(shí)，木犀草素可能通過(guò)阻斷NLRP3/IL-1β/TGF-β1信號(hào)通路來(lái)抑制巨噬細(xì)胞焦亡和炎癥因子分泌，從而減輕肺組織炎癥及纖維化。

6 Nrf2/ARE信號(hào)通路相關(guān)機(jī)制

6.1 Nrf2/ARE信號(hào)通路與PF的關(guān)系

核轉(zhuǎn)錄因子紅系2 相關(guān)因子2（nuclear factorerythroid 2-related factor 2，Nrf2）是一種對(duì)氧化應(yīng)激高度敏感的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子；抗氧化響應(yīng)元件（antioxidant response element，ARE）在細(xì)胞核內(nèi)與Nrf2結(jié)合，可啟動(dòng)下游調(diào)節(jié)因子血紅素加氧酶1（heme oxygenase 1，HO-1）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、醌氧化還原酶[NAD（P）H：quinone oxidoreductase 1，NQO1]、SOD 以及過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）等，這對(duì)于維持機(jī)體氧化還原內(nèi)環(huán)境具有重要意義[41]。

氧化還原失衡是PF 形成的重要環(huán)節(jié)，當(dāng)氧化劑刺激肺泡細(xì)胞時(shí)，機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生大量ROS及活性氮以啟動(dòng)氧化應(yīng)激反應(yīng)，觸發(fā)線粒體功能障礙，導(dǎo)致DNA損傷等，同時(shí)誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡、M2巨噬細(xì)胞極化及肺組織肌成纖維細(xì)胞異常增殖，進(jìn)而推動(dòng)PF進(jìn)展。Nrf2/ARE信號(hào)通路作為經(jīng)典的抗氧化通路，一方面，其能促使大量抗氧化酶產(chǎn)生以抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而保護(hù)肺泡細(xì)胞；另一方面，其能通過(guò)抑制肺組織炎癥損傷來(lái)減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，改善肺泡塌陷引起的肺纖維化增生[42]。

6.2 黃酮類中藥單體通過(guò)調(diào)控Nrf2/ARE 信號(hào)通路改善PF

張玉蝶等[43]在二氧化硅誘導(dǎo)的PF模型小鼠中發(fā)現(xiàn)，余甘子醇提物能夠顯著改善模型小鼠肺組織炎癥損傷，恢復(fù)肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，增加Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白表達(dá)，提高血清中SOD、CAT等抗氧化酶的含量，減少肺纖維化產(chǎn)物HYP的沉積。該研究表明，余甘子醇提物可能通過(guò)激活Nrf2/ARE信號(hào)通路、提高機(jī)體抗氧化能力、清除氧自由基、減輕肺組織氧化損傷來(lái)改善PF。

7 ERK信號(hào)通路相關(guān)機(jī)制

7.1 ERK信號(hào)通路與PF的關(guān)系

胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）信號(hào)通路是MAPK家族中的重要成員，其參與了細(xì)胞凋亡、分化、代謝等生物學(xué)效應(yīng)。抑制ERK 信號(hào)通路能夠減少ECM 沉積和肺成纖維細(xì)胞增殖，從而減少促纖維因子誘導(dǎo)的肺組織損傷及纖維化[44]。

7.2 黃酮類中藥單體通過(guò)調(diào)控ERK信號(hào)通路改善PF

蔡風(fēng)林等[45]研究發(fā)現(xiàn)，異甘草素能夠抑制PF模型細(xì)胞（A549）MAPK、ERK 的表達(dá)，下調(diào)N-鈣黏蛋白、波形蛋白、α-SMA、FN等EMT轉(zhuǎn)錄蛋白，上調(diào)E-鈣黏蛋白及mRNA 水平，逆轉(zhuǎn)上皮細(xì)胞向成纖維細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變，抑制肺成纖維細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，其機(jī)制可能是異甘草素阻斷了TGF-β1介導(dǎo)的MAPK/ERK 信號(hào)通路，恢復(fù)A549 細(xì)胞上皮樣改變，從而抑制成纖維細(xì)胞增殖、活化、遷移，阻止EMT進(jìn)程，進(jìn)而改善PF。

8 總結(jié)與展望

PF的發(fā)展是由諸多因素共同參與的結(jié)果，中藥單體改善PF 具有多靶點(diǎn)、多途徑、多通路的特點(diǎn)，目前以黃酮類化合物研究居多。其中，黃芪總黃酮、燈盞花乙素、苦參堿、黃藤素能夠通過(guò)干預(yù)TGF-β1/Smad信號(hào)通路減輕炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，改善PF 模型動(dòng)物急性肺損傷和ECM沉積；鐮形棘豆總黃酮、紅景天苷可通過(guò)介導(dǎo)JAK/STAT信號(hào)通路抑制肺組織炎癥反應(yīng)，阻止EMT 進(jìn)程；槲皮素、銀杏葉提取物、姜黃素可通過(guò)抑制NF-κB 信號(hào)通路減少巨噬細(xì)胞凋亡，平衡M1/M2巨噬細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞因子、提高免疫調(diào)節(jié)，發(fā)揮抗PF作用；漆黃素、原花青素可通過(guò)PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路調(diào)節(jié)肺成纖維細(xì)胞增殖、遷移及表型轉(zhuǎn)化，減少ECM沉積，提高抗PF作用；柚皮素、木犀草素可通過(guò)NLRP3 信號(hào)通路抑制巨噬細(xì)胞焦亡和炎癥反應(yīng)，改善肺功能及肺組織損傷，減少肺纖維灶形成；余甘子醇提物、毛蕊異黃酮可通過(guò)激活Nrf2/ARE信號(hào)通路改善肺組織炎癥損傷和纖維化；異甘草素則可通過(guò)抑制ERK 信號(hào)通路阻止上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，抑制成纖維細(xì)胞增殖、活化、遷移，延緩PF進(jìn)程。

值得注意的是，雖然黃酮類中藥單體對(duì)PF 的作用研究取得了一定成效，但目前相關(guān)研究成果大部分仍停留在動(dòng)物及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)階段，缺乏相對(duì)有效的臨床數(shù)據(jù)，因此難以客觀評(píng)價(jià)其治療價(jià)值；PF介導(dǎo)信號(hào)通路的分子機(jī)制是錯(cuò)綜復(fù)雜而非獨(dú)立存在的，現(xiàn)有研究往往僅對(duì)單一通路進(jìn)行了探討，缺乏不同靶點(diǎn)相互串聯(lián)的機(jī)制探討；此外，雖然大部分黃酮類中藥單體毒理學(xué)研究短期內(nèi)提示具有良好的安全性，但由于其水溶性較差，生物利用度較低，可能引起胃腸道不良反應(yīng)，且對(duì)于長(zhǎng)期使用產(chǎn)生的肝腎功能損害、致突變、致癌等毒副作用尚未明確，藥物的安全性及時(shí)效性問(wèn)題有待商榷。

總之，黃酮類中藥單體對(duì)PF 信號(hào)通路調(diào)控作用具有潛在的治療價(jià)值，后續(xù)學(xué)者可考慮開發(fā)適當(dāng)?shù)乃幬镙d體，提高其生物利用度，并結(jié)合藥物代謝組學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、生物信息學(xué)等途徑深入研究藥物的作用靶點(diǎn)和途徑，為黃酮類中藥單體走向臨床實(shí)踐提供循證依據(jù)。