貝萊斯芽胞桿菌SH-1471可濕性粉劑研制及其對番茄枯萎病的防治效果

申云鑫，李銘剛，施竹鳳，趙江源，王 楠，李者芬，楊明英，陳齊斌，楊佩文*

（1.云南農業(yè)大學植物保護學院，昆明 650201；2.云南省農業(yè)科學院農業(yè)環(huán)境資源研究所，昆明 650205；3.云南省微生物研究所，昆明 650091）

由尖孢鐮刀菌Fusariumoxysporum引起的番茄枯萎病，可通過侵染番茄根部并在維管束繁殖，引起維管束阻塞，導致植株萎蔫、枯死[1]。具有危害損失大、防治困難等特點，還可危害瓜類、茄類、豆類等多種經濟作物。目前針對番茄枯萎病主要使用咯菌腈、惡霉靈、咪鮮胺等化學農藥進行防治，而化學農藥處理易造成環(huán)境污染、農藥殘留等問題，嚴重危害人類與環(huán)境健康[2]。

在可持續(xù)發(fā)展和生態(tài)文明建設的背景下，隨著《農藥工業(yè)“十三五”發(fā)展規(guī)劃》、《“十四五”全國農業(yè)綠色發(fā)展規(guī)劃》等政策的推出，大力助推了生物農藥產業(yè)的發(fā)展[3-5]。但目前新生物農藥仍面臨著研發(fā)難度大、生產工藝以及推廣應用等方面的問題[6-8]。因此，加強對新生物農藥產品的研發(fā)以及生產工藝優(yōu)化，是推進其產業(yè)化、商業(yè)化的重要措施之一，且對推進農業(yè)綠色發(fā)展、實現綠色防控具有重大意義。截至2022年，全國已登記的118 個芽胞桿菌屬微生物可濕性粉劑（Wettable powder）中，貝萊斯芽胞桿菌Bacillus velezensisWP 僅占1 個（來源于中國農藥信息網：http://www.icama.org.cn/fwb/index.jhtml）。近年來，有關貝萊斯芽胞桿菌防治植物病害的研究報道日益增加，但缺乏對其可濕性粉劑研發(fā)的相關報道，以及缺乏對其進行商業(yè)化、產業(yè)化的開發(fā)利用。研究表明，貝萊斯芽胞桿菌具有無致病性、抗逆性強，產抑菌次級代謝產物種類豐富、抗菌譜廣以及可提高作物生長性能和抗病力等特點，已成為植物病害生物防治的理想微生物之一[9,10]。貝萊斯芽胞桿菌L-1 可抑制引起梨紋病的貝倫格葡萄座腔菌和粉紅單端孢菌的生長，且可長期定殖于植株內部[11,12]；分離自水稻OryzasativaL葉片的貝萊斯芽胞桿菌E69，在高效防治葉瘟病的同時，可定殖于作物莖、葉以及維管束等部位，從而達到病害持續(xù)防控的目的[13]；從多花黃精根部分離的貝萊斯芽胞桿菌ZJU-3，不僅具有產表面活性素、泛革素和伊枯草菌素等脂肽類抑菌化合物的功能，而且可產生吲哚乙酸、激動素、玉米素和赤霉素等植物促生激素[14]；貝萊斯芽胞桿菌8-4 能夠有效抑制馬鈴薯瘡痂病的病原鏈霉菌Streptomycesgalilaeus生長，且能提高馬鈴薯的產量[15]。總體來說，貝萊斯芽胞桿菌在生物防治、藥物研發(fā)、食品發(fā)酵和工業(yè)酶制劑等領域是當前研究的熱點菌株[16,17]，但由于其在菌種資源、生產工藝和定殖能力等方面存在問題，導致其缺乏規(guī)?；蜕虡I(yè)化應用[18]。此外，國內外對于貝萊斯芽胞桿菌WP 的研發(fā)相關報道較少，亟需加強對貝萊斯芽胞桿菌WP 生產工藝的探索和優(yōu)化并進行實際生防試驗進行研究。

貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 分離自健康煙草根際土壤，其對番茄枯萎病菌具有良好的拮抗作用，且具有srfA、fenB、ituA、ituD、bymA等抗生素的合成基因，以及產蛋白酶、纖維素酶、解磷、固氮、分泌鐵載體的能力[19]，具有廣闊的應用前景。為使其可更加高效地應用于農業(yè)生產中作物病害的生物防治，并有效實現產業(yè)化發(fā)展，本文以其為研究對象，通過試驗對其載體、潤濕劑、分散劑、穩(wěn)定劑、紫外保護劑及其復配比例進行篩選，研制貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 WP，根據可濕性粉劑質量檢測標準檢測其各項指標，測定其貯存穩(wěn)定性，并采用室內盆栽試驗模型測定SH-1471 WP 對番茄枯萎病的防治效果，為貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 WP 的開發(fā)及進一步推廣應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 菌種 供試菌種：貝萊斯芽胞桿菌 SH-1471 由云南省農業(yè)科學院農業(yè)環(huán)境資源研究所于健康煙草根際土壤分離、鑒定與保存，于2022 年6 月20 日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（保藏編號：CCTCC NO:M 2022923，專利號：ZL 2022 1 1479280.X）。

供試病原物：文中涉及的指示病原物番茄枯萎病菌由云南省農業(yè)科學院農業(yè)環(huán)境資源研究所分離、鑒定與保存。

1.1.2 培養(yǎng)基 NA 培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L，牛肉粉3 g/L，氯化鈉5 g/L，瓊脂15 g/L，pH 7.0～7.4，蒸餾水1 L；種子培養(yǎng)基（本實驗室優(yōu)化所得）：蔗糖10 g/L，豆粉10 g/L，硫酸鎂2.5 g/L，酵母膏5 g/L，蒸餾水1 L；發(fā)酵培養(yǎng)基：麩皮10 g/L，玉米粉30 g/L，黃豆粉30 g/L，KH2PO40.3 g/L，Na2HPO44 g/L，蒸餾水1 L，pH 7.0～7.2。

1.1.3 載體和助劑 載體：膨潤土、滑石粉、高嶺土、硅藻土、白炭黑、凹凸棒土、高嶺土、輕質碳酸鈣等。潤濕劑：洗衣粉、皂角粉、D425、木質素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉CMC-Na（Carboxymethylcellulose）、十二烷基硫酸鈉SDS（Sodium sulfate）、十二烷基苯磺酸鈉DBS (Dodecyl benzene sulfonate)、吐溫-60 等。分散劑：NNO、聚乙烯醇（PEG8000）、木質素磺酸鈣。穩(wěn)定劑：磷酸氫二鉀（K2HPO4）、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）、海藻酸鈉、黃原膠、輕質碳酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉（DBS）。紫外保護劑：糊精、抗壞血酸VC（Vitamin C）、海藻酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉（DBS）。文中涉及所有載體和助劑均購自上海源葉生物科技有限公司。

1.2 種子液制備

將培養(yǎng)好的解淀粉芽胞桿菌SH-1471 菌株用接種針劃線培養(yǎng)接種于NA 固體培養(yǎng)基上，28 ℃倒置培養(yǎng)24 h，獲得單菌落。挑取單菌落接種于裝有100 mL 種子培養(yǎng)基的250 mL 錐形瓶中，30 ℃、200 r/min（本實驗室優(yōu)化所得）振蕩培養(yǎng)24 h，得到種子液。

1.3 發(fā)酵培養(yǎng)

取貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 菌株種子液，以6%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基，30 ℃，200 r/min 振蕩培養(yǎng)2 d，得到菌株發(fā)酵液。

1.4 可濕性粉劑載體和助劑的篩選

1.4.1 可濕性粉劑載體篩選及母粉制備 載體吸附能力測定：分別取無菌供試載體100 g 置于三角瓶，將SH-1471 菌株發(fā)酵液緩慢倒入三角瓶中，玻璃棒同時攪拌至載體呈流動狀且不結塊、不溢水，記錄所倒入發(fā)酵液的體積V，并計算載體最大吸附量：H=V/0.1（Kg/L）。潤濕時間和懸浮率測定：將菌株發(fā)酵液與各載體均勻混合，經進風溫度175 ℃，出風溫度60 ℃進行噴霧干燥后制成母粉，并參照1.4.4 中質量檢測標準中的方法，分別測定潤濕時間、懸浮率。最綜合考慮潤濕時間、懸浮率、吸附容量以及成本等擇優(yōu)選擇載體類型。

1.4.2 可濕性粉劑助劑篩選 潤濕劑和分散劑篩選：將貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 母粉分別與待選潤濕劑（12%）和分散劑（12%）經超微粉碎機粉碎混合均勻后加工制成可濕性粉劑，每個處理設置3 個重復，參照1.4.4 中質量檢測標準中的方法測定潤濕時間和懸浮率，并測定胞子萌發(fā)率，結合潤濕時間、懸浮率和胞子萌發(fā)率選擇最佳潤濕劑和分散劑。

潤濕劑和分散劑最佳質量配比篩選：結合潤濕時間和懸浮率分別挑選出潤濕劑和分散劑，以潤濕劑與分散劑：1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1 的含量與貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 母粉經超微粉碎機粉碎，混合均勻后加工制成可濕性粉劑，每個處理設置3 個重復，測定潤濕時間、懸浮率和胞子萌發(fā)率，結合潤濕時間和懸浮率以及胞子萌發(fā)率選擇最佳配比。

潤濕劑和分散劑總用量對可濕性粉劑性能的影響：將篩選所得濕潤劑和分散劑經超微粉碎機粉碎混勻，按上述比例均勻混合后過325 目篩，分別以2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%、18%的用量與貝萊斯芽胞桿菌母粉均勻混合，測定潤濕時間、懸浮率和胞子萌發(fā)率。綜合考慮制劑潤濕性、懸浮率以及胞子萌發(fā)率，篩選出濕潤劑和分散劑的最佳用量。

穩(wěn)定劑篩選：將貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 母粉與潤濕劑、分散劑及待選穩(wěn)定劑（1%、2%、3%）經超微粉碎機粉碎混合均勻后加工制成可濕性粉劑，以不加穩(wěn)定劑為對照每個處理設置3 個重復；采用《農藥可濕性粉劑產品標準編寫規(guī)范》（GB/T 19136-2003）中的試驗方法進行加速貯藏穩(wěn)定性測定：熱貯（54±2）℃，14 d 后測定芽胞含量的變化，計算芽胞損失率（%）=（儲藏前芽胞含量－儲藏后芽胞含量）/儲藏前芽胞含量×100。

紫外保護劑篩選：將貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 母粉與已篩選所得的潤濕劑、分散劑、穩(wěn)定劑及待篩選紫外保護劑（0.5%、1.0%、1.5%）經超微粉碎機粉碎混合均勻后加工制成可濕性粉劑，以不加保護劑為對照，稀釋涂布在平板上，在254 nm 紫外燈（20W）距離40 cm 處照射12、24 h 后，計算芽胞存活率，篩選出最佳紫外保護劑。

1.4.3 可濕性粉劑研制 將貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 發(fā)酵液與粉碎后的1.2.3 中篩選所得載體、潤濕劑、分散劑、穩(wěn)定劑、紫外保護劑等按優(yōu)化后的配比同時混合，邊攪拌邊進行噴霧干燥制成可濕性粉劑。

1.4.4 可濕性粉劑質量檢測 標準硬水的配制：稱取無水氯化鈣0.304 g，帶結晶水的氯化鎂0.139 g，放入1000 mL 容量瓶中，用蒸餾水溶解、稀釋至刻度。

（1）含孢量測定：參考《中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準》（NY/T 2293.1-2012）進行含孢量測定。

（2）懸浮率測定：參考《農藥可濕性粉劑懸浮率的測定》（GB/T 14825-2006）為本試驗參考標準。

（3）潤濕時間測定：參考《可濕性粉劑潤濕性的測定》（GB/T 5451-2001）為本試驗參考標準。

（4）細度測定：參考《農藥可濕性粉劑懸浮率的測定》（GB/T 16150-1995）為本試驗參考標準。

（5）含水率測定：參考《農藥水分測定》（GB/T 1600-2001）為本試驗參考標準。

（6）pH 測定方法：參考《農藥pH 值的測定》（GB/T 1601-1993）為本試驗參考標準。

（7）雜菌率測定：將可濕性粉劑樣品梯度稀釋后，分別涂布在NA 和PDA 培養(yǎng)基上，在PDA 平板上檢測真菌雜菌數，在NA 平板上檢測細菌雜菌數，細菌與真菌總和所占總比例為雜菌率。

1.4.5 制劑穩(wěn)定性的測定 稱取一定量的貝萊斯芽胞桿菌WP 分別在低溫（4 ℃±2 ℃）條件下以及室溫（25 ℃）下連續(xù)貯存180 d，并每10 d 使用平板計數法檢測并計算貝萊斯芽胞桿菌WP 的芽胞存活率。

番茄枯萎病發(fā)病情況調查分組標準如下：0：無癥狀；1：一片或兩片葉子變黃；2：三片或者四片真葉變黃葉片萎蔫下垂；3：五片或六片真葉變黃或真葉萎蔫下垂；4：全株嚴重萎蔫以致枯死。

病情指數=（各級病株數×該病級值）/（總株數×最高級值）×100；

防效（%）=（對照組病情指數-處理組病情指數）/對照組病情指數×100。

1.5 數據統(tǒng)計與統(tǒng)計

數據采用單因素方差分析、多重比較及獨立樣本t檢驗分析比較處理間的顯著性差異。選擇Excel 和SPSS Statistics 20.0 軟件進行數據統(tǒng)計分析，以及采用Origin 2018 和GraphPad Prism 8 軟件制圖。

2 結果與分析

2.1 載體篩選

以吸附容量、潤濕時間和懸浮率為指標進行載體篩選結果如表1，7 種載體在吸附容量上具有顯著差異，其中白炭黑的吸附容量最高，為3.7 mL/g，其次為硅藻土、凹凸棒土和高嶺土，吸附容量分別為2.8、2.6 和1.9 mL/g；高嶺土的潤濕時間最短，為15.7 s，其次為硅藻土和白炭黑，分別為17.8 和18.4 s，凹凸棒土和膨潤土的潤濕時間最長，分別為61.6 和75.5 s；高嶺土和硅藻土的懸浮率最高，均超過70%，分別為79.5%和66.5%，故選擇高嶺土作為貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 可濕性粉劑的載體。

表1 SH-1471 WP 載體篩選結果Table 1 Screening results of SH-1471 WP vector

2.2 潤濕劑和分散劑的篩選

將待選潤濕劑和分散劑以12%的含量與選定的載體、發(fā)酵液混合均勻，噴霧干燥制成可濕性粉劑，檢測其潤濕時間和懸浮率，結果如表2 所示，以潤濕時間為指標，潤濕劑中木質素磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉（DBS）、洗衣粉及羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）的潤濕時間最短，依次為11.8、12.2、16.8 和17.8 s；分散劑中NNO、木質素磺酸鈣及聚乙烯醇（PEG 8000）的潤濕時間最短，分別為13.1、15.6 和15.8 s；以懸浮率為指標，NNO 的懸浮率最高，達90.9%，其次為木質素磺酸鈉，達84.9%，再次為三聚磷酸鈉，達84.8%，十二烷基硫酸鈉（SDS）、拉開粉、木質素磺酸鈣、皂角粉、洗衣粉和吐溫-60 的懸浮率均超過70%，以木質素磺酸鈉和羧甲基纖維素鈉作為潤濕劑時，活菌數最高為2.79×109CFU/g，以NNO 為分散劑時，活菌數最高為2.58×109CFU/g。綜合潤濕時間、懸浮率和活菌數，選擇NNO 作為分散劑、木質素磺酸鈉作為潤濕劑。

表2 SH-1471 WP 潤濕劑、分散劑篩選結果Table 2 Screening results of wetting agent and dispersant for SH-1471 WP

2.3 潤濕劑與分散劑配比篩選

由表3 可知，潤濕時間隨著潤濕劑木質素磺酸鈉含量增多而降低，懸浮率隨著分散劑NNO 的含量降低而降低，其潤濕時間最高為12.3 s，已達標準，當木質素纖維素鈉:NNO 為1:9 時，潤濕時間為12.3 s，懸浮率最高為88.6%，芽胞含量為2.73×109CFU/g；當木質素磺酸鈉:NNO 為2:8 時，潤濕時間為10.1 s，懸浮率為87.2%，芽胞含量為2.86×109CFU/g。結合潤濕時間、懸浮率及芽胞含量結果，故確定木質素磺酸鈉:NNO 的比例為2:8。

科文學院擬將新教學樓北區(qū)3層及4層的8個多媒體教室的320臺電腦開通視頻點播系統(tǒng),以便學生點播優(yōu)秀的視頻課件．為此,在網絡中心增加1臺視頻服務器,并將其命名為Video Destination,通過6類雙絞線千兆連接到核心交換機CS6509上,利用OPNET Modeler提供的Video Conferencing業(yè)務進行仿真．

表3 潤濕劑與分散劑最佳配比篩選結果Table 3 Screening results of optimum ratio of wetting agent and dispersant

2.4 潤濕劑和分散劑總用量的篩選

由表4 可知，隨著潤濕劑和分散劑總用量的增加，貝萊斯芽胞桿菌WP 的潤濕時間逐漸變短，當二者總用量僅為2%時，制劑潤濕時間為21.6 s，顯著高于其他用量，當二者總用量為12%時，潤濕時間最短為10.1 s；說明增加潤濕劑和分散劑總用量對貝萊斯芽胞桿菌WP 的潤濕時間的變短具有促進作用；且隨著潤濕劑和分散劑總用量的增加，其懸浮率具有明顯的提高，當用量為2%時，懸浮率僅為51.4%，當用量提高至18%時，懸浮率達89.9%，表明增加潤濕劑和分散劑總用量對其潤濕性和懸浮率均有促進作用，但隨著潤濕劑和分散劑總用量的提高，制劑中芽胞存活率會有一定的損失，總用量為18%時，芽胞含量僅為2.42×109CFU/g，相比低濃度具有一定的損失。結合潤濕時間、懸浮率以及芽胞存活率，本試驗中選擇潤濕劑和分散劑總用量為10%，此時貝萊斯芽胞桿菌WP 的潤濕時間為10.3 s，懸浮率為88.6%，芽胞含量為2.92×109CFU/g。

表4 潤濕劑和分散劑總用量篩選結果Table 4 Screening results of total dosage of wetting agent and dispersant

2.5 穩(wěn)定劑篩選

結合表5 的試驗結果可知，與CK1（不加穩(wěn)定劑，不熱儲）和CK2（不加穩(wěn)定劑，熱儲）相比，穩(wěn)定劑的添加，可降低高溫脅迫下的芽胞熱儲損失率，在（54±2）℃下儲存7 d 時，與CK2（不加穩(wěn)定劑，熱儲7 d）相比，加了穩(wěn)定劑后貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 可濕性粉劑的芽胞損失率均降低，其中以穩(wěn)定劑2%黃原膠的保護效果最好，可將熱儲損失率降低至14.01%，當（54±2）℃下儲存14 d 時，在添加2%黃原膠作為保護劑，可使熱儲損失率降低至30.74%。結合生物相容性和熱儲實驗結果，選擇黃原膠2%作為貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 可濕性粉劑的穩(wěn)定劑。

表5 SH-1471 WP 穩(wěn)定劑篩選結果Table 5 Screening results of SH-1471 WP stabilizer

2.6 紫外保護劑篩選

由表6 可知，與CK1（不加紫外保護劑，不照射）和CK2（不加紫外保護劑，照射）相比，紫外保護劑的添加，可降低紫外脅迫下的芽胞存活率，當添加1%的紫外保護劑，在254 nm 紫外燈（20W）距離40 cm處照射12、24 h 后，以1%抗壞血酸（VC）為紫外保護劑時的存活率最高，照射12 h 時存活率為71.43%，照射24 h 時存活率為59.52%，其次為糊精（1%）和海藻酸鈉（1%），12 h 的存活率分別為65.31%和38.14%，24 h 的存活率分別為36.73%和4.24%。而十二烷基苯磺酸鈉（DBS）的存活率最低。結合紫外保護效果與生物相容性試驗結果，選擇1%抗壞血酸（VC）作為貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 可濕性粉劑的紫外保護劑。

表6 SH-1471 WP 紫外保護劑篩選結果Table 6 Screening results of SH-1471 WP UV protectant

2.7 質量檢測

將貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 發(fā)酵液與篩選所得并粉碎載體、潤濕劑、分散劑、穩(wěn)定劑、紫外保護劑等按優(yōu)化后的配比同時混合，邊攪拌邊進行噴霧干燥制得貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 WP。對貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 WP 進行質量檢測結果如表7 所示，根據檢測測量值與質量檢測標準值，貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 WP 細度、潤濕時間、懸浮率、干燥減量、pH、活菌數以及雜菌率均符合質量檢測標準值，可應用于植物病害的生物防治。

表7 SH-1471 WP 質量檢測結果Table 7 SH-1471 WP quality test results

2.8 儲藏存活率檢測

貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 可濕性粉劑經室溫4 ℃、25 ℃連續(xù)儲藏180 d，每10 d 測定依次芽胞存活率，測定結果如圖1 所示，貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 可濕性粉劑在4 ℃下，180 d 后芽胞存活為87.65%，而在室溫25 ℃下儲藏180 d 結果表明，其芽胞存活率為82.45%。該結果表明，低溫對菌株的存活率影響較小，而高溫對菌株的存活率有一定的影響。

圖1 SH-1471 WP 連續(xù)180 d 儲藏結果Fig.1 SH-1471 WP continuous 180 d storage results

2.9 室內盆栽防效測定

室內盆栽防效實驗結果如表8 所示，采用拌土+灌根、拌土和灌根三種方式評價貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 可濕性粉劑對番茄枯萎病的防治效果，與CK1（單接病原菌）相比，貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 WP 灌根+拌土對番茄枯萎病的防效最好，發(fā)病率僅為4.2%，防治效果可達93.7%，防效顯著優(yōu)于3% 多抗霉素WP；其次為拌土，發(fā)病率僅為8.6%，防治效果為85.8%；灌根處理下發(fā)病率為9.2%，防治效果為83.3%。

表8 SH-1471 WP 盆栽防治效果Table 8 Potting control effect of SH-1471 WP

3 討論

可濕性粉劑是我國微生物農藥的主要劑型，在病蟲害綠色防控中發(fā)揮越來越大的作用，因其相比于液體制劑和其他固體制劑具有生產成本低，有效成分含量高，濕潤性好、易于運輸和貯運，且防病范圍更廣等特點，在生產上得到廣泛應用[20]。其通常由載體、潤濕劑、懸浮劑、分散劑、穩(wěn)定劑以及保護劑等組成，并以有效成分含量、懸浮率、潤濕時間、干燥減量、細度以及pH 等作為質量檢測指標進行產品研發(fā)以及工藝優(yōu)化[21]。

載體在可濕性粉劑中所占比例最大，探究載體與菌株之間的生物相容性是極其重要的。本研究發(fā)現，高嶺土和硅藻土與菌株的生物相容性最好，顯著高于白炭黑、滑石粉等。Chiou 等[22]則發(fā)現，以高嶺土為載體，可提高芽胞存活率。王劍等[23]和孫麗麗等[24]等[的研究結果與本研究相同，以硅藻土為載體時，制劑芽胞存活率較高。而陳茹等[25]研究則表明，當使用硅藻土為WP 的載體時，其孢子萌發(fā)率會受到抑制。由此可知，盡管大部分載體為惰性材料，但不同菌株對同種載體的適應能力不同，且同種載體對不同菌株的生物相容性亦存在差異。因此，菌株與載體的生物相容性測定尤為重要。

懸浮率和潤濕時間是評價農藥可濕性粉劑質量的重要指標，直接影響制劑的操作便利性和混合均一穩(wěn)定性[26]。本研究結果發(fā)現，木質素磺酸鈉可顯著縮短制劑的潤濕時間，僅為11.8 s，且不對菌株有抑制作用，而十二烷基苯磺酸鈉（DBS）的潤濕時間為12.2 s，且菌株孢子萌發(fā)率大幅下降，表明其對菌株具有一定的毒害作用。相同地，錢一鑫等[27]試驗結果十二烷基苯磺酸鈉（DBS）可縮短制劑潤濕時間至11 s，但對菌株芽胞含量會造成一定的損失。本制劑在加入NNO 作為分散劑時，懸浮率得到顯著提高，達90.9%，顯著優(yōu)于張成等[28]的木霉菌TrichodermavirideT069 可濕性粉劑懸浮率（73.04%），以及且顯著優(yōu)于劉盼西等[29]的海洋芽胞桿菌B.marinus可濕性粉劑的懸浮率（73.13%）；基于此基礎，本研究還進行了潤濕劑與分散劑的比例優(yōu)化和總用量優(yōu)化，最終確定總用量為10%，比例為2:8 時，以此制劑潤濕時間最短，懸浮率最佳，且芽胞含量最高。

穩(wěn)定劑有利于制劑芽胞含量在長時間內處于穩(wěn)定狀態(tài)，紫外保護劑可減少自然條件下紫外線對芽胞造成的不利影響[30]。本研究結果表明，黃原膠（2%）可降低菌株在溫度（54±2）℃下儲藏的損失率，僅為14.01%，以羧甲基纖維素鈉作為穩(wěn)定劑時，熱儲損失率高達49.38%。優(yōu)于李舒雯等[31]以羧甲基纖維素鈉作為穩(wěn)定劑時的內生短短芽胞桿菌B.endophytes可濕性粉劑的芽胞損失率（49%）。表明同一物質對不同菌株的保護機制和保護效果不同，與張正一等[32]和張成等[28]的試驗結果類似，本研究以抗壞血酸（VC）（1%）作為紫外保護劑時，可提高菌株在紫外照射下的存活率。貝萊斯芽胞桿菌SH-1471 WP 在25℃下儲藏180 d 后的存活率為82.45%，今后可進一步對其配方進行優(yōu)化，以提高其在室溫條件下的儲藏穩(wěn)定性及其環(huán)境適應能力。此外，室內盆栽試驗結果表明本制劑可有效降低番茄枯萎病的發(fā)病率，防效達93.7%，防效高于3%多抗霉素。而羅嫚等[33]的研究表明，咪鮮胺和咯菌腈對番茄枯萎病的防治效果分別為52.5%、53.33%，表明貝萊斯芽胞桿菌WP 對番茄枯萎病具有良好的防治效果。

前期研究表明菌株SH-1471 還具有解磷、固氮等活性，可進一步進行盆栽試驗驗證其在促進植物生長以及提高作物抗逆性等方面的活性，并結合大田試驗驗證，探究和挖掘其生防、促生功能，以便發(fā)揮其在農業(yè)病害防治和作物促生增產中的應用價值。