• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    銀杏葉黃酮及多糖超聲波輔助提取工藝優(yōu)化

    2023-10-20 09:11:26景年華史俊友安仙香劉超穎
    中國野生植物資源 2023年9期
    關(guān)鍵詞:黃酮實驗

    景年華,史俊友,安仙香,劉超穎

    (1.曲靖師范學(xué)院 生物資源與食品工程學(xué)院,云南 曲靖 655011;2.曲靖師范學(xué)院 化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,云南 曲靖655011)

    銀杏科(Ginkgoaceae)植物銀杏(Ginkgo bilobaL.)為落葉喬木,被譽為植物界的活化石[1]。據(jù)記載,銀杏葉性平、味甘苦,具有活血化瘀、通絡(luò)止痛、斂肺平喘、化濁降脂之功效[2];現(xiàn)代研究表明,銀杏葉有效成分包括黃酮類、多糖類等活性物質(zhì),具有保護神經(jīng)系統(tǒng)、改變血液流變學(xué)、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、降血脂等生物活性[3-8]。因此,開展提高黃酮含量以利用銀杏葉藥用價值為目標(biāo)的提取工藝優(yōu)化具有重要現(xiàn)實意義。多種癌細(xì)胞活性受黃酮類化合物抑制,例如肺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞。Jiang等[9]研究發(fā)現(xiàn)木犀草素,對A549細(xì)胞及H460 細(xì)胞均有抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用,H460 裸鼠移植瘤模型中發(fā)現(xiàn)木犀草素顯著抑制了腫瘤生長,同時發(fā)現(xiàn)木犀草素對非小細(xì)胞肺癌具有顯著腫瘤抑制活性作用。類黃酮可抑制卵巢癌細(xì)胞自噬,改善細(xì)胞凋亡,從而在抵抗卵巢癌中發(fā)揮作用[10]。黃酮類化合物具有較好的抗炎作用,有實驗表明白簕植物黃酮提取物可有效抑制角叉菜膠誘發(fā)的大鼠腳趾腫脹[11]。二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳朵腫脹實驗表明,黃酮可有效降低腫脹程度[12]。黃酮具較高抗氧化活性,銀杏葉黃酮是天然植物抗氧化劑,可有效清除機體自由基[13],并有效消除人體內(nèi)氧化生成的各種不飽和脂類自由基、蛋白質(zhì)自由基,避免人體細(xì)胞及組織氧化損傷,同時有證據(jù)表明黃酮類化合物對豬油自氧化有明顯的抑制作用[14]。

    近年來,銀杏葉多糖在免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤等方面的活性不斷被發(fā)現(xiàn),具有十分可觀的藥用價值及潛在的醫(yī)藥開發(fā)前景[15-18]。多糖廣泛存在于植物、動物及微生物組織中[19]。人類對其初始研究可追溯到1936 年對多糖抗腫瘤活性的發(fā)現(xiàn)[20]。至50 年代,陸續(xù)發(fā)現(xiàn)一些真菌多糖和高等植物多糖具有明顯的抑瘤活性[21],隨著研究的進一步深入,人們發(fā)現(xiàn)多糖還具有增強免疫力、抗肝炎、降血糖、降血脂、抗衰老、抗病毒病菌、消炎、緩解疲勞等作用[15-18]。天然多糖因其獨特的功能和很低的毒性,已成為天然藥物學(xué)和保健食品學(xué)的研究熱點。它既是尋找高效天然無毒副作用藥物的有效途徑,也是保健功能因子的研究項目之一。

    目前,關(guān)于銀杏葉多糖類化合物及黃酮類化合物的提取方法主要集中于水提醇沉法、酶解法、超聲波法、微波法及其相互間的技術(shù)聯(lián)用等,且提取時僅僅集中于其中一種有效成分的提取[13,22,23]。利用超聲波產(chǎn)生的空化作用迅速破裂細(xì)胞,使黃酮類化合物及多糖類化合物在超聲波熱效應(yīng)下更易溶解,縮短了提取時間,增加了提取率及原料利用率。常波等[24]應(yīng)用超聲波輔助萃取所得植物總黃酮的得率最高,且操作簡單?;诔暡ㄝo助萃取法的優(yōu)點,本文在單因素試驗的基礎(chǔ)上,對銀杏葉黃酮及多糖提取工藝進行了優(yōu)化,旨在通過超聲輔助萃取法提取銀杏黃酮及多糖有效成分,為銀杏葉相關(guān)保健產(chǎn)品的開發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

    1 材料與儀器

    1.1 材料與試劑

    銀杏葉采自云南曲靖。使用試劑為無水乙醇、亞硝酸納、氫氧化鈉、濃硫酸、苯酚等均為分析純。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品:成都埃及生物科技有限公司;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品:國藥集團化學(xué)試劑公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    DHG-9245 型電熱鼓風(fēng)干燥箱:上海一恒科學(xué)儀器有限公司;SK3200LHC 超聲波清洗儀:上??茖?dǎo)超聲儀器有限公司;SHZ-DIII 循環(huán)水式真空泵:鞏義予華儀器有限責(zé)任公司;XA-1 高速萬能粉碎機:金壇市白塔金昌實驗儀器廠;CP214 電子天平:奧豪斯儀器上海有限公司;TU-1810 紫外可見分光光度計:北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

    2 實驗方法

    2.1 銀杏葉總黃酮提取工藝優(yōu)化

    2.1.1 實驗流程

    銀杏葉清洗→干燥→粉碎→準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量銀杏葉→以不同濃度乙醇為提取溶劑超聲輔助提取總黃酮→抽濾→紫外可見分光光度法測其黃酮含量

    2.1.2 蘆丁最大吸收波長λmax的確定

    準(zhǔn)確量取1.00 mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg·mL-1)置于10 mL 比色管中,依據(jù)姜洪芳等的方法[25],顯色后,用無水乙醇定容至10 mL,搖勻,于300~600 nm波長范圍進行光譜掃描,得光的吸收曲線及最大吸收波長λmax。

    2.1.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    分別量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg·mL-1)0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL、3.00 mL、3.50 mL 于10 mL 比色管中,如2.1.2 所述顯色后,于波長λ = 389.1nm 處測定其吸光度值A(chǔ)。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(mg)為橫坐標(biāo),吸光度值A(chǔ) 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    2.1.4 銀杏葉黃酮最大吸收波長λmax的確定

    準(zhǔn)確稱取5 g 銀杏葉干燥粉末,設(shè)定超聲功率(100 W),超聲持續(xù)時間(40 min),超聲溫度(35℃),提取溶劑(75%乙醇),料液比(1 ∶ 20 g·mL-1),對銀杏葉黃酮進行超聲提取。超聲提取后,抽濾得濾液,濾液稀釋后依據(jù)2.1.2 所述實驗方法顯色,于340~800 nm 波長范圍進行光譜掃描,得光的吸收曲線及銀杏葉黃酮顯色后最大吸收波長λmax。

    2.1.5 單因素試驗

    2.1.5.1 料液比對銀杏葉黃酮提取率的影響

    分別準(zhǔn)確稱取5 g銀杏葉干燥粉末5份,設(shè)定超聲功率(100 W),超聲持續(xù)時間(40 min),超聲溫度(35℃),提取溶劑(75%乙醇),通過改變料液比即料液比分別為1 ∶ 10 g·mL-1、1 ∶ 20 g·mL-1、1 ∶ 30 g·mL-1、1 ∶ 40 g·mL-1、1 ∶ 50 g·mL-1進行單因素試驗。超聲提取后,抽濾得濾液,濾液顯色后測定吸光度值A(chǔ),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算黃酮提取率。

    2.1.5.2 乙醇濃度對銀杏葉黃酮提取率的影響

    分別準(zhǔn)確稱取5 g 銀杏葉干燥粉末5 份,設(shè)定超聲功率(100 W),超聲持續(xù)時間(40 min),超聲溫度(35℃),料液比(1 ∶ 20 g·mL-1),通過改變提取溶劑即55%乙醇、65%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇進行單因素試驗。超聲提取后,抽濾得濾液,濾液顯色后測定吸光度值A(chǔ),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算黃酮提取率。

    2.1.5.3 提取超聲時間對銀杏葉黃酮提取率的影響

    分別準(zhǔn)確稱取5 g 銀杏葉干燥粉末5 份,設(shè)定超聲功率(100 W),超聲溫度(35℃),料液比(1 ∶20 g·mL-1),提取溶劑(85%乙醇),通過改變超聲時間即40 min、50 min、60 min、70 min、80 min 進行單因素試驗。超聲提取后,抽濾得濾液,濾液顯色后測定吸光度值A(chǔ),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算黃酮提取率。

    2.1.5.4 提取超聲功率對銀杏葉黃酮提取率的影響

    分別準(zhǔn)確稱取5 g 銀杏葉干燥粉末5 份,設(shè)定超聲溫度(35℃),料液比(1 ∶ 20 g·mL-1),提取溶劑(85%乙醇),超聲時間(50 min),通過改變超聲功率即100 W、200 W、300 W、400 W、500 W 進行單因素試驗。超聲提取后,抽濾得濾液,濾液顯色后測定吸光度值A(chǔ),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算黃酮提取率。

    2.1.6 正交試驗

    據(jù)2.1.5 實驗結(jié)果,以黃酮提取率為考察指標(biāo),選擇影響黃酮提取率的4 個因素即料液比、乙醇濃度、超聲時間、超聲功率進行4 因素3 水平L9(43)正交實驗。正交因素水平見表1。

    表1 銀杏葉黃酮提取正交實驗因素水平表Tab.1 Orthogonal experimental factors and levels of extraction of flavonoids from leaves of Ginkgo biloba

    2.2 銀杏葉多糖提取工藝優(yōu)化

    2.2.1 銀杏葉多糖提取流程

    銀杏葉清洗→干燥→粉碎→準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量銀杏葉→超聲輔助提取多糖→離心→抽濾→醇沉(80%乙醇醇沉)→離心(對醇沉所得白色絮狀多糖進行2次離心)→洗滌、烘干→粗多糖→配制粗多糖溶液→苯酚-硫酸法測定多糖含量。

    2.2.2 葡萄糖最大吸收波長λmax的確定

    準(zhǔn)確量取0.00 mL、1.00 mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg·mL-1)于10 mL 比色管中,分別加入蒸餾水補足體積至2 mL,搖勻,利用苯酚-硫酸法顯色,于300~600 nm 波長范圍內(nèi)進行光譜掃描得光的吸收曲線及最大吸收波長λmax以用于后續(xù)實驗[26]。

    2.2.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    分 別 準(zhǔn) 確 移 取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.20 mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg·mL-1)于比色管中,按2.2.2 所述操作顯色后,于波長λ = 490 nm 處測定吸光度值A(chǔ)。以葡萄糖質(zhì)量(mg)對吸光度值A(chǔ) 進行線性回歸,得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    2.2.4 銀杏葉多糖最大吸收波長λmax的確定

    準(zhǔn)確稱取5 g 銀杏葉干燥粉末,以水為提取溶劑,設(shè)定超聲溫度(45℃),料液比(1 ∶ 20 g·mL-1),超聲功率(500 W),超聲時間(40 min),對銀杏葉多糖進行超聲提取。超聲提取后,經(jīng)醇沉、離心、洗滌烘干得粗多糖。配置0.2 mg·mL-1粗多糖溶液,依據(jù)2.2.2所述實驗方法顯色,于400~800 nm波長范圍進行光譜掃描,得光的吸收曲線及銀杏葉多糖顯色后最大吸收波長λmax。

    2.2.5 單因素試驗

    2.2.5.1 超聲時間對銀杏葉多糖提取率的影響

    設(shè)定超聲溫度(45℃),料液比(1 ∶ 20 g·mL-1),超聲功率(500 W),通過改變超聲時間即20 min、30 min、40 min、50 min、60 min 進行單因素試驗。超聲后,4000 r/min離心10 min,收集上清液,殘渣同前重復(fù)提取1 次,合并2 次提取上清液,抽濾,濾液醇沉、離心、洗滌烘干得粗多糖。準(zhǔn)確稱取0.0100 g 粗多糖,定容至50 mL 得0.2 mg·mL-1粗多糖溶液。粗多糖溶液顯色測其吸光度值A(chǔ),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算多糖提取率。

    2.2.5.2 超聲功率對銀杏葉多糖提取率的影響

    設(shè)定超聲溫度(45℃),料液比(1 ∶ 20 g·mL-1),超聲時間(40 min),通過改變超聲功率即100 W、200 W、300 W、400 W、500 W進行單因素試驗。超聲后4000 r/min 離心10 min,收集上清液,殘渣同前重復(fù)提取一次,合并上清液抽濾,濾液醇沉、離心、洗滌烘干得粗多糖。配制0.2 mg·mL-1粗多糖溶液、顯色測其吸光度值A(chǔ),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算多糖提取率。

    2.2.5.3 超聲溫度對銀杏葉多糖提取率的影響

    設(shè)定超聲時間(40 min),料液比(1 ∶ 20 g·mL-1)超聲功率(300 W),通過改變超聲溫度即20℃、30℃、40℃、50℃、60℃進行單因素試驗,超聲后4000 r/min 離心10 min,收集上清液,殘渣同前重復(fù)提取一次,合并上清液抽濾,濾液醇沉、離心、洗滌烘干得粗多糖,配制粗多糖溶液(0.2 mg·mL-1),顯色后測其吸光度值A(chǔ),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算多糖提取率。

    2.2.6 正交實驗設(shè)計

    據(jù)2.2.5 單因素試驗結(jié)果,以銀杏葉多糖提取率為考察指標(biāo),以超聲時間、超聲功率、超聲溫度為因素進行3 因素3 水平L9(33)正交實驗。正交實驗因素及水平見表2。

    表2 銀杏葉多糖提取正交實驗因素水平表Tab.2 Orthogonal experimental factors and levels of extraction of polysaccharides from leaves of Ginkgo biloba

    3 結(jié)果與分析

    3.1 最大吸收波長的λ max確定

    于波長300~600 nm 范圍內(nèi)進行光譜掃描,蘆丁顯色后光的吸收曲線于389.1 nm 處有最高峰,即λmax= 389.1 nm;葡萄糖顯色后吸收曲線于490 nm處有最高峰,即λmax= 490 nm。另外,于波長340~800 nm及400~800 nm 處分別對顯色后銀杏葉黃酮及多糖進行光譜掃描,光吸收曲線見圖1。由圖1可知顯色后銀杏葉黃酮及多糖λmax分別為397.5 nm、487.5 nm,與標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁及葡萄糖顯色后λmax相近,依據(jù)文獻[27-30],往往選擇標(biāo)準(zhǔn)品顯色后最大吸收波長進行含量測定,故后續(xù)對黃酮及多糖含量測定時,分別選擇蘆丁顯色后λmax(389.1 nm)及葡萄糖λmax(490 nm)進行測定。

    圖1 銀杏葉黃酮和多糖的光吸收曲線Fig.1 Spectral absorption curves of flavonoids and polysaccharides from leaves of Ginkgo biloba

    3.2 銀杏葉總黃酮提取工藝優(yōu)化

    相關(guān)研究表明[31,32],在冷凍條件下總黃酮含量相對穩(wěn)定,隨著溫度的升高,總黃酮含量降低速率逐漸增加,充分考慮到總黃酮這一性質(zhì),總黃酮提取時考慮超聲溫度對銀杏葉總黃酮提取的影響,實驗結(jié)果如圖2所示,超聲溫度在35~45℃范圍內(nèi)黃酮提取率逐漸降低,超聲溫度為45℃時,提取率達最小值19.62 mg·g-1;超聲溫度在45~50℃范圍內(nèi),隨著超聲溫度增大,黃酮提取率上升,超聲溫度為55℃時,黃酮提取率有所下降;超聲溫度為35℃,銀杏葉黃酮提取率達最大值22.26 mg·g-1。因此,銀杏葉總黃酮超聲提取時,超聲溫度選擇相對較低溫度35℃,盡可能降低溫度對總黃酮含量的影響。實驗時,選擇料液比、乙醇濃度、超聲時間及超聲功率4個因素進行銀杏葉總黃酮提取工藝優(yōu)化。

    圖2 超聲溫度對銀杏葉黃酮提取率的影響Fig.2 Effect of ultrasonic temperature on the extraction of flavonoids from leaves of Ginkgo biloba

    3.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    以蘆丁質(zhì)量(mg)為橫坐標(biāo),吸光度值A(chǔ) 為縱坐標(biāo)進行線性回歸,得線性方程為Y = 3.087 9 X +0.193,R2= 0.999 1,蘆丁質(zhì)量在0.05 ~ 0.35 mg 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。實驗結(jié)果如圖3所示。

    圖3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Rutin standard curve

    3.2.2 黃酮提取單因素試驗

    3.2.2.1 料液比對銀杏葉黃酮提取率的影響

    由圖4 可知,料液比在1 ∶ 10 ~ 1 ∶ 20 g·mL-1范圍內(nèi)黃酮提取率逐漸增加,料液比為1 ∶ 20 g·mL-1時,提取率達最大值28.14 mg·g-1;料液比在1 ∶ 20 ~1 ∶ 50 g·mL-1范圍內(nèi),隨著提取溶劑體積增大,黃酮提取率逐漸下降,料液比為1 ∶ 50 g·mL-1時提取率降至26.89 mg·g-1。這可能是料液比為1 ∶ 10 ~ 1 ∶20 g·mL-1時,溶劑用量未達到飽和,所以黃酮提取率隨著溶劑用量的增加而增大。繼續(xù)增加溶劑用量,其他可溶性雜質(zhì)提取量增加,黃酮得率反而降低。所以1 ∶ 20 g·mL-1為銀杏葉黃酮提取最佳料液比。選取料液比1 ∶ 10 g·mL-1、1 ∶ 20 g·mL-1、1 ∶30 g·mL-1進行正交試驗。

    圖4 料液比對銀杏葉黃酮提取率的影響Fig.4 Effect of solid-liquid ratio on the extraction of flavonoids from leaves of Ginkgo biloba

    3.2.2.2 乙醇濃度對銀杏葉黃酮提取率的影響

    由圖5 可知,乙醇濃度為55% ~ 85%時,銀杏葉黃酮提取率隨乙醇濃度的增大而增大,乙醇濃度為85%時,提取率達最大值達47.20 mg·g-1;乙醇濃度為95% 時,黃酮提取率有所降低,提取率為43.53 mg·g-1。主要原因可能是黃酮類化合物具有廣泛極性,當(dāng)溶液極性過高或過低時,會減少黃酮類化合物的溶解,導(dǎo)致總黃酮提取率降低。所以銀杏葉黃酮提取以乙醇為提取溶劑,其濃度為85%。

    圖5 乙醇濃度對銀杏葉黃酮提取率的影響Fig.5 Effect of ethanol concentration on the extraction of flavonoids from leaves of Ginkgo biloba

    3.2.2.3 超聲時間對銀杏葉黃酮提取率的影響

    超聲時間對銀杏葉黃酮提取率的影響見圖6,隨著超聲時間的延長,黃酮提取率呈先增大后降低的趨勢。超聲時間在40 ~ 50 min 范圍內(nèi),黃酮提取率隨時間增加隨之增大,超聲時間為50 min 時,黃酮提取率最大,為47.64 mg·g-1。超聲時間在50 ~80 min 范圍,黃酮提取率下降, 80 min 時提取率下降至30.12 mg·g-1。主要原因可能是超聲時間會影響提取的傳質(zhì)過程,超聲時間過短,傳質(zhì)不能達到平衡,其提取率偏低,超聲時間適宜,傳質(zhì)達到基本平衡,提取率最佳,超聲時間過長,多種雜質(zhì)溶解,溶液黏度增大,黃酮溶出受阻,同時部分黃酮苷水解,提取率隨之降低。所以銀杏葉黃酮最佳超聲時間為50 min。

    圖6 超聲時間對銀杏葉黃酮提取率的影響Fig.6 Effect of ultrasound time on the extraction of flavonoids from leaves of Ginkgo biloba

    3.2.2.4 超聲功率對銀杏葉黃酮提取率的影響

    超聲功率在100~400 W 范圍內(nèi),黃酮提取率隨超聲功率的增大不斷增加,超聲功率為400 W 時,黃酮提取率最大,為34.90 mg·g-1。超聲功率在400~500 W 范圍內(nèi),黃酮提取率隨超聲功率的增大而下降,超聲功率為500 W 時,黃酮提取率降至32.84 mg·g-1。原因可能為超聲功率為100~400 W時,銀杏葉黃酮分子運動加速從而使黃酮提取得率增大,當(dāng)超聲功率 > 400 W 時,可能由于超聲波空化效應(yīng)及機械效應(yīng)[33],引起黃酮類物質(zhì)分解,所以黃酮提取率出現(xiàn)下降。因此,最佳超聲提取功率為400 W(圖7)。

    圖7 超聲功率對銀杏葉黃酮提取率的影響Fig.7 Effect of ultrasonic power on the extraction of flavonoids from leaves of Ginkgo biloba

    3.2.3 正交實驗分析

    由表3 黃酮提取率極差可得,超聲波輔助提取銀杏葉黃酮類化合物的影響因素依次為A(料液比) > D(超聲功率) > B(乙醇濃度) > C(超聲時間)。由正交試驗結(jié)果可得,銀杏葉黃酮最佳提取工藝為A2B3C3D1,進行驗證實驗(n = 3),得黃酮的提取率為37.50 mg·g-1,高于其它各正交實驗值,確定該提取工藝穩(wěn)定性好,可行性高。因此,確定銀杏葉黃酮提取最佳工藝條件為,料液比為1 ∶20 g·mL-1,乙 醇 濃 度 為95%,超 聲 持 續(xù) 時 間 為60 min,超聲功率300 W。

    3.3 多糖提取工藝優(yōu)化

    銀杏葉多糖提取時,如圖8 所示,料液比在1 ∶15 ~ 1 ∶ 20 g·mL-1范圍內(nèi),多糖提取率逐漸增大,料液比為1 ∶ 20 g·mL-1時,多糖提取率最大,提取率為50.08 mg·g-1,料液比在1 ∶ 20 ~ 1 ∶ 35 g·mL-1范圍內(nèi),多糖提取率呈下降趨勢,最低值達40.35 mg·g-1。料液比對銀杏葉多糖提取的影響相較于超聲時間、超聲功率及超聲溫度對多糖提取率的影響較小,因此實驗時,選擇超聲時間、超聲功率及超聲溫度3個因素進行銀杏葉多糖提取工藝優(yōu)化。

    圖8 料液比對銀杏葉多糖提取率的影響Fig.8 Effect of solid-liquid ratio on the extraction of polysaccharide from leaves of Ginkgo biloba

    3.3.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

    以葡萄糖質(zhì)量(mg)對吸光度值A(chǔ) 做線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y = 1.685 8 X - 0.021 3,R2=0.999,標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖9所示。

    圖9 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.9 Glucose standard curve

    3.3.2 單因素實驗

    3.3.2.1 超聲時間對銀杏葉多糖提取率的影響

    超聲時間對多糖提取率的影響見圖10。超聲時間在20~40 min 范圍內(nèi),多糖提取率逐漸升高,當(dāng)時間為40 min時,多糖提取率最大,提取率為43.70 mg·g-1,超聲時間 > 40 min時,多糖提取率呈下降趨勢,超聲時間達60 min 時,多糖提取率降至13.70 mg·g-1。主要原因可能是超聲時間過長,較多雜質(zhì)溶出從而使溶出物濃度差降低,影響多糖溶解,且因超聲時間過長部分多糖水解,導(dǎo)致銀杏葉多糖提取率下降。因此多糖最佳超聲時間為40 min。

    圖10 超聲時間對銀杏葉多糖提取率的影響Fig.10 Effect of ultrasound time on the extraction of polysaccharide from leaves of Ginkgo biloba

    3.3.2.2 超聲功率對銀杏葉多糖提取率的影響

    超聲功率對銀杏葉多糖提取的影響見圖11。超聲功率在100 ~ 300 W范圍內(nèi),多糖提取率持續(xù)增大,多糖提取率為16.10 ~ 28.00 mg·g-1。超聲功率為300 W 時,多糖提取率達最大值,為28.00 mg·g-1。超聲功率 > 300 W 時,隨著超聲功率的增大,雜質(zhì)溶出,溶液黏度增大,降低了多糖類物質(zhì)的溶出,導(dǎo)致多糖提取率降低,其提取率下降至22.00 mg·g-1。因此,銀杏葉多糖最佳超聲功率為300 W。

    圖11 超聲功率對銀杏葉多糖提取率的影響Fig.11 Effect of ultrasonic power on the extraction of polysaccharide from leaves of Ginkgo biloba

    3.3.2.3 超聲溫度對銀杏葉多糖提取率的影響

    超聲溫度對銀杏葉多糖的影響見圖12。溫度影響分子擴散,隨著提取溫度的升高,分子運動加快。因此,溫度的升高加快了溶劑分子在細(xì)胞內(nèi)的運動。超聲溫度在20~60℃范圍內(nèi),隨著提取溫度的升高,多糖提取率不斷增大,當(dāng)溫度達到60℃時,多糖提取率為32.60 mg·g-1。因此,選取超聲溫度為60℃進行銀杏葉多糖提取。

    3.3.3 正交實驗分析

    由表4 銀杏葉多糖提取率極差可知,超聲波輔助提取銀杏葉多糖,各因素對銀杏葉中多糖提取影響由大到小排列依次為為A(超聲時間) > C(超聲溫度) > B(超聲功率)。正交試驗最優(yōu)組合為A2B1C2,在此工藝條件下,銀杏葉多糖的提取率平均值為48.98 mg·g-1,提取率均高于其他正交試驗,因此,銀杏葉多糖最佳提取工藝為即超聲時間40 min、超聲功率為200 W、超聲溫度為50℃。

    表4 銀杏葉多糖超聲提取工藝優(yōu)化正交實驗Tab.4 Orthogonal design of optimization of ultrasonic assisted extraction of polysaccharides from leaves of Ginkgo biloba

    4 討論

    銀杏葉有效成分包括黃酮類、多糖類等活性物質(zhì),具有保護神經(jīng)系統(tǒng)、改變血液流變學(xué)、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、降血脂等生物活性。因此,開展提高黃酮含量及多糖含量以利用銀杏葉藥用價值為目標(biāo)的提取工藝優(yōu)化具有重要現(xiàn)實意義。以銀杏葉為原料,結(jié)合超聲波輔助提取法,利用單因素試驗及正交試驗研究不同因素對銀杏葉黃酮及多糖提取率的影響以確定銀杏葉最佳黃酮及多糖提取工藝條件,建立了銀杏葉黃酮及多糖有效成分超聲波輔助提取工藝。研究結(jié)果表明,銀杏葉黃酮提取時,料液比為1 ∶ 20 g·mL-1、提取溶劑為95%乙醇、超聲時間為60 min 及超聲功率為300 W 時,黃酮的提取率為37.50 mg·g-1, 提取率最大。超聲波輔助提取銀杏葉多糖時,其最佳提取工藝為超聲時間40 min、超聲功率200 W 及超聲溫度50 ℃,在此條件下,銀杏葉多糖提取率為48.98 mg·g-1。銀杏葉易于獲得,且其黃酮類化合物和多糖含量較高,對其提取工藝進行優(yōu)化,可為銀杏葉相關(guān)保健產(chǎn)品的開發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

    猜你喜歡
    黃酮實驗
    記一次有趣的實驗
    微型實驗里看“燃燒”
    桑黃黃酮的研究進展
    做個怪怪長實驗
    一測多評法同時測定腦心清片中6種黃酮
    中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:00
    HPLC法同時測定固本補腎口服液中3種黃酮
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:40
    MIPs-HPLC法同時測定覆盆子中4種黃酮
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:13
    DAD-HPLC法同時測定龍須藤總黃酮中5種多甲氧基黃酮
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:50
    NO與NO2相互轉(zhuǎn)化實驗的改進
    實踐十號上的19項實驗
    太空探索(2016年5期)2016-07-12 15:17:55
    日韩成人在线观看一区二区三区| 久久性视频一级片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲精品国产区一区二| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲中文字幕日韩| 日韩中文字幕欧美一区二区| 精品电影一区二区在线| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 午夜福利高清视频| 免费看a级黄色片| 97碰自拍视频| 午夜免费成人在线视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| ponron亚洲| 日韩免费av在线播放| 97碰自拍视频| 啦啦啦免费观看视频1| 搡老岳熟女国产| 香蕉av资源在线| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线天堂中文资源库| 91成年电影在线观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久久久久久精品吃奶| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精华一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| av福利片在线| 亚洲免费av在线视频| 国产精品1区2区在线观看.| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 精品久久久久久久久久久久久 | 波多野结衣巨乳人妻| 在线看三级毛片| 午夜成年电影在线免费观看| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 成人特级黄色片久久久久久久| 美女国产高潮福利片在线看| 成年版毛片免费区| 亚洲三区欧美一区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 极品教师在线免费播放| а√天堂www在线а√下载| 欧美精品亚洲一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 黑人操中国人逼视频| 黄色毛片三级朝国网站| 国产成人av激情在线播放| 国产激情偷乱视频一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 人人妻人人看人人澡| 欧美精品亚洲一区二区| 午夜福利18| 成人亚洲精品一区在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久精品国产清高在天天线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 黑丝袜美女国产一区| 91国产中文字幕| 国产色视频综合| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品永久免费网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产熟女xx| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 久久精品91无色码中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 在线观看www视频免费| 久久久久久久久久黄片| 国产国语露脸激情在线看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜福利高清视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 最新在线观看一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 在线免费观看的www视频| 午夜免费激情av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产视频一区二区在线看| 亚洲成人国产一区在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 成人精品一区二区免费| 亚洲国产看品久久| 午夜福利在线观看吧| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 又紧又爽又黄一区二区| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 淫妇啪啪啪对白视频| 丝袜在线中文字幕| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品 欧美亚洲| 精品不卡国产一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久| 日韩有码中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲国产精品999在线| 性色av乱码一区二区三区2| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲片人在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产人伦9x9x在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲九九香蕉| 老司机福利观看| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品九九99| 美女 人体艺术 gogo| 久久精品国产综合久久久| av中文乱码字幕在线| 满18在线观看网站| 亚洲在线自拍视频| 日韩免费av在线播放| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 色老头精品视频在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 又大又爽又粗| 国产激情欧美一区二区| www日本黄色视频网| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 日本三级黄在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产精品二区激情视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 99热只有精品国产| 国产区一区二久久| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲精品美女久久av网站| bbb黄色大片| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲第一av免费看| 麻豆成人午夜福利视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 成人午夜高清在线视频 | 美女高潮到喷水免费观看| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美三级亚洲精品| 18禁美女被吸乳视频| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 最新在线观看一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 91麻豆av在线| 久久精品91蜜桃| 露出奶头的视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 精品久久久久久久毛片微露脸| 91麻豆av在线| 黄色 视频免费看| 成在线人永久免费视频| 级片在线观看| 男人舔奶头视频| 一夜夜www| 伦理电影免费视频| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲精华国产精华精| 中文字幕久久专区| 午夜福利一区二区在线看| 国产av又大| 国产亚洲精品一区二区www| 国产不卡一卡二| 国产成人影院久久av| 国产激情欧美一区二区| av欧美777| 麻豆国产av国片精品| 搡老熟女国产l中国老女人| 午夜a级毛片| 精品福利观看| 黄色视频不卡| 国产单亲对白刺激| 亚洲专区中文字幕在线| 麻豆av在线久日| 亚洲精品av麻豆狂野| 啦啦啦免费观看视频1| 成人手机av| 亚洲国产欧美网| av在线播放免费不卡| 国产av又大| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 人人妻人人澡人人看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 色在线成人网| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久精品91无色码中文字幕| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲专区字幕在线| 亚洲 国产 在线| 99在线人妻在线中文字幕| 久久精品91无色码中文字幕| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产亚洲av高清不卡| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 人妻久久中文字幕网| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美日韩乱码在线| 精品一区二区三区av网在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美色视频一区免费| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲avbb在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 欧美成人一区二区免费高清观看 | 人人澡人人妻人| 国产野战对白在线观看| 久99久视频精品免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 美女午夜性视频免费| 一本一本综合久久| 亚洲av五月六月丁香网| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 免费在线观看日本一区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 99热6这里只有精品| 国产精品免费视频内射| 午夜亚洲福利在线播放| 看黄色毛片网站| 午夜福利一区二区在线看| 免费在线观看亚洲国产| 黄色 视频免费看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 麻豆一二三区av精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 很黄的视频免费| 亚洲中文字幕日韩| a级毛片在线看网站| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品一区二区三区四区久久 | 婷婷精品国产亚洲av在线| 黄片大片在线免费观看| 老司机在亚洲福利影院| 日韩视频一区二区在线观看| 看片在线看免费视频| 国产欧美日韩一区二区三| 桃色一区二区三区在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 香蕉国产在线看| 女性被躁到高潮视频| 国产黄a三级三级三级人| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 男人操女人黄网站| 欧美成人午夜精品| 中亚洲国语对白在线视频| 国产伦在线观看视频一区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 999精品在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久久久久久久中文| 久久精品国产清高在天天线| 成人18禁在线播放| 99re在线观看精品视频| 十分钟在线观看高清视频www| 国产一区二区三区视频了| 欧美成人性av电影在线观看| 国产1区2区3区精品| 丰满的人妻完整版| 日本在线视频免费播放| 99re在线观看精品视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩欧美 国产精品| 亚洲精华国产精华精| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男女午夜视频在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩视频一区二区在线观看| 久久久久久久久中文| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲男人的天堂狠狠| 91成人精品电影| 中文字幕人妻熟女乱码| 丝袜在线中文字幕| 国产欧美日韩一区二区精品| 在线观看www视频免费| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲九九香蕉| 在线观看舔阴道视频| 亚洲av成人av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 免费av毛片视频| 精品日产1卡2卡| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品欧美国产一区二区三| av免费在线观看网站| 日本免费a在线| 久久 成人 亚洲| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 精品久久久久久久久久久久久 | 久久久国产成人免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产精品久久视频播放| 少妇 在线观看| cao死你这个sao货| 国产乱人伦免费视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 成人永久免费在线观看视频| 99国产综合亚洲精品| 丁香六月欧美| 日韩三级视频一区二区三区| 久久青草综合色| 久久精品国产清高在天天线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美又色又爽又黄视频| 国产日本99.免费观看| 日韩欧美 国产精品| 亚洲成av人片免费观看| 动漫黄色视频在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 麻豆成人av在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 又黄又粗又硬又大视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久国产亚洲av麻豆专区| 哪里可以看免费的av片| 脱女人内裤的视频| 久久久久久国产a免费观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 99热6这里只有精品| 男人舔女人的私密视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 一区二区三区高清视频在线| 久久久国产成人免费| 不卡一级毛片| 后天国语完整版免费观看| 妹子高潮喷水视频| 一本一本综合久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产色视频综合| 亚洲电影在线观看av| 黄片大片在线免费观看| 身体一侧抽搐| 欧美色视频一区免费| 身体一侧抽搐| 一进一出抽搐动态| 99国产极品粉嫩在线观看| 人人妻人人澡人人看| 91字幕亚洲| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品影院久久| 女人被狂操c到高潮| 精品人妻1区二区| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲 国产 在线| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲 国产 在线| 无人区码免费观看不卡| 久久精品人妻少妇| 国产成人av教育| 久久久久久九九精品二区国产 | 国产激情欧美一区二区| 淫秽高清视频在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 又黄又爽又免费观看的视频| 中国美女看黄片| 国产亚洲av高清不卡| 十八禁人妻一区二区| 久热爱精品视频在线9| 视频在线观看一区二区三区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 大香蕉久久成人网| 999精品在线视频| 国产真实乱freesex| 老司机靠b影院| 国产欧美日韩一区二区精品| www.自偷自拍.com| 很黄的视频免费| 国产野战对白在线观看| 精品久久蜜臀av无| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 国产成人系列免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 国产私拍福利视频在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 久久精品影院6| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 黄色成人免费大全| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日韩免费av在线播放| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久久国产欧美日韩av| 国产激情久久老熟女| 国产精品久久久久久精品电影 | 99国产综合亚洲精品| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久亚洲真实| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久国产成人免费| 欧美+亚洲+日韩+国产| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 精品久久久久久,| 国产亚洲欧美精品永久| 在线永久观看黄色视频| 怎么达到女性高潮| 天天添夜夜摸| 欧美国产精品va在线观看不卡| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 成人亚洲精品一区在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产精品1区2区在线观看.| a在线观看视频网站| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 窝窝影院91人妻| 国产精品精品国产色婷婷| 美国免费a级毛片| 69av精品久久久久久| av免费在线观看网站| 青草久久国产| 免费在线观看亚洲国产| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲国产精品久久男人天堂| 十八禁网站免费在线| 成人精品一区二区免费| 两个人视频免费观看高清| 国产黄片美女视频| 成人手机av| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 成人国语在线视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 脱女人内裤的视频| 免费观看人在逋| 婷婷精品国产亚洲av| 十八禁人妻一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久久国产成人精品二区| 一a级毛片在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 黄片小视频在线播放| 脱女人内裤的视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲久久久国产精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 日韩欧美在线二视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 色综合婷婷激情| 亚洲七黄色美女视频| 久热爱精品视频在线9| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日本五十路高清| 成人三级做爰电影| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久国产精品影院| bbb黄色大片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 91大片在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 日韩精品中文字幕看吧| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久久久人人人人人| 99久久综合精品五月天人人| 18禁国产床啪视频网站| 国产1区2区3区精品| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜两性在线视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 欧美性长视频在线观看| 成人手机av| 国产三级在线视频| 中文在线观看免费www的网站 | 三级毛片av免费| av在线播放免费不卡| 国内精品久久久久精免费| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久热爱精品视频在线9| 亚洲成人久久爱视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产人伦9x9x在线观看| 嫩草影院精品99| 亚洲专区国产一区二区| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 成人国语在线视频| 日韩欧美三级三区| av电影中文网址| 色精品久久人妻99蜜桃| www.自偷自拍.com| 日本在线视频免费播放| 视频区欧美日本亚洲| 老司机在亚洲福利影院| 日本一区二区免费在线视频| 久久亚洲精品不卡| 波多野结衣巨乳人妻| 夜夜爽天天搞| 欧美+亚洲+日韩+国产| 午夜成年电影在线免费观看| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美色视频一区免费| 精华霜和精华液先用哪个| 黄片播放在线免费| 香蕉丝袜av| 在线观看www视频免费| 首页视频小说图片口味搜索| 18禁国产床啪视频网站| 国产伦在线观看视频一区| 男人的好看免费观看在线视频 | 日韩高清综合在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日韩欧美在线二视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 激情在线观看视频在线高清| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲成人久久性| 成人亚洲精品av一区二区| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 欧美日韩一级在线毛片| 一a级毛片在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美在线一区亚洲| 一进一出抽搐gif免费好疼| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲专区国产一区二区| av片东京热男人的天堂| 亚洲精品色激情综合| 美国免费a级毛片| 午夜福利视频1000在线观看| 国产在线观看jvid| 可以在线观看毛片的网站| 久久亚洲真实| 日本五十路高清| 国产精品一区二区免费欧美| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产精品亚洲av一区麻豆| 一二三四社区在线视频社区8| 色老头精品视频在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 一本综合久久免费| 欧美色视频一区免费| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 色综合婷婷激情| 男人的好看免费观看在线视频 | 久久久久久久精品吃奶| 欧美+亚洲+日韩+国产| 午夜久久久久精精品| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久久人人人人人| 黄色丝袜av网址大全| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 免费在线观看影片大全网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| videosex国产| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲免费av在线视频| АⅤ资源中文在线天堂| 激情在线观看视频在线高清| 很黄的视频免费| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 人人妻人人澡人人看| 久久中文看片网| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲人成电影免费在线| 午夜免费观看网址| 一本大道久久a久久精品| 99精品久久久久人妻精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久久国产欧美日韩av| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品久久视频播放| 亚洲欧美日韩无卡精品| 黄色毛片三级朝国网站| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产又爽黄色视频| 色综合婷婷激情| 一本一本综合久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 香蕉久久夜色| 好男人在线观看高清免费视频 | 可以在线观看毛片的网站| 丝袜人妻中文字幕| 欧美在线黄色| 成人精品一区二区免费|