下肢缺血再灌注損傷患者檢測8-異前列腺素F2α和血栓烷B2的臨床意義

梁祥森，楊勝壯，黃高昇

（廣西醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院胸心血管外科，廣西 南寧 530000）

缺血再灌注損傷（IRI）是指正常組織器官的細胞發(fā)生缺血后，血流再次恢復，從而引起細胞功能代謝障礙、結構破壞持續(xù)加重等損傷[1]。下肢IRI 可引起患肢壞死，毒素經(jīng)吸收可影響全身多器官功能，嚴重時可引起多器官功能衰竭，危及生命[2]。近年來有研究指出，8- 異前列腺素F2ɑ（8-iso-PGF2ɑ）與機體過氧化損傷關系密切，能夠反映氧化應激后的脂質過氧化，是最理想的評價氧化應激程度的生化指標[3]。血栓烷是血小板微粒體合成并釋放的生物活性物質，具有促進血管收縮和血小板聚集的作用。其代謝產物血栓烷B2（TXB2）可間接反映組織器官的血供情況[4]。本文對廣西醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院心血管外科收治的40 例經(jīng)介入治療重新開通動脈恢復血供后出現(xiàn)IRI 的下肢動脈硬化閉塞患者進行研究，旨在探討下肢IRI 患者檢測8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廣西醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院心血管外科收治的40 例經(jīng)介入治療重新開通動脈恢復血供后出現(xiàn)IRI的下肢動脈硬化閉塞患者為研究對象。納入標準：（1）臨床確診為IRI[5]；（2）年齡55 ～75 歲；（3）接受手術治療（介入手術）。排除標準：（1）存在靜脈栓塞性疾病；（2）存在血液系統(tǒng)疾?。唬?）存在抗凝藥物使用禁忌者；（4）存在高危致死性疾病，如心肺肝腎功能衰竭等[6]。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，研究對象已簽署知情同意書。

1.2 試劑與器材

ELISA 試劑盒、抗原、抗體、酶標記抗體、陽性對照血清由美國Cayman Chemical 公司提供。聚苯乙烯塑料板( 酶標板) 為96 孔，ELISA 檢測儀由美國Cayman Chemical 公司生產。

1.3 方法

1.3.1 血液標本收集

分別于術前、術后1 天、術后3 天抽取患者的靜脈血5 mL。血液標本立即放入無菌的乙二胺四乙酸試管中，并在4℃下以3500 r/min 的速度離心15 min,收集血清儲存于-80℃的冰箱中。

1.3.2 檢測方法

1.3.2.1 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 檢測8-iso-PGF2ɑ嚴格按照試劑盒提供的檢測方法及步驟進行檢測，其中標準品的配置按標準品: 稀釋液=1:1 進行稀釋，依次進行5 次；標準品和樣品均做3 孔，每孔加量為50 μL；所有反應孔均加入鏈霉親和素-HRP 50 μL；用蒸餾水30 倍稀釋原液配制洗滌液進行洗滌；洗滌后先后加入顯色劑A、顯色劑B 各50 μL進行顯色；終止效果確認：藍色轉為黃色。以450 nm波長依次測量各孔的吸光度，數(shù)據(jù)分類保存，最后收集整理數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析結果。

1.3.2.2 TXB2測定 采用放射免疫分析法(RAI)進行測定（按試劑盒標準流程進行測定）。

1.4 統(tǒng)計學方法

用統(tǒng)計軟件 SPSS 22.0 對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)± 標準差（±s）表示，兩兩比較采用兩獨立樣本均數(shù)t檢驗或配對t檢驗；計數(shù)資料采用卡方檢驗；結果相關性分析采用 Pearson 相關性分析和多元逐步回歸分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同時間血清8-iso-PGF2ɑ 樣本、TXB2 樣本相關性的分析

術前- 術后1 天和術前- 術后3 天的8-iso-PGF2ɑ 相關性分別為0.024、-0.048，相關性均不強；術前- 術后1 天和術前- 術后3 天的TXB2相關性分別為0.031、-0.050，相關性均不強。術后1 天- 術后3 天的8-iso-PGF2ɑ 相關性為0.634，相關性較強；術后1 天- 術后3 天的TXB2相關性為0.715，相關性較強。詳見表1、2。

表1 不同時間血清8-iso-PGF2ɑ 樣本相關性的分析

表2 不同時間血清TXB2 樣本相關性的分析

2.2 不同時間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 水平相關性的分析

術前- 術后1 天、術前- 術后3 天、術后1 天-術后3 天血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平均呈正相關，P＜0.05，詳見表3。

表3 不同時間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 水平相關性的分析

2.3 不同時間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比較

與術前相比， 術后1 天和術后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與術后1 天相比，術后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳見表4、5、6。

表4 不同時間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比較（ng/L，± s）

表4 不同時間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比較（ng/L，± s）

項目（n=40） 術前 術后1 天 術后3 天8-iso-PGF2ɑ TXB2 49.17±5.73 19.81±18.34 31.31±2.92 11.25±1.22 57.73±4.81 24.25±2.40

表5 血清中8-iso-PGF2ɑ 兩樣本比較t 檢驗

表6 血清中TXB2 兩樣本比較t 檢驗

3 討論

下肢IRI 分為缺血期、再灌注期兩個周期，隨著患者機體缺血導致組織缺血時間過長，受損組織內三磷酸腺苷被消耗殆盡，并產生大量氧自由基及脂質過氧化產物，機體所產生的大量氧自由基不能被靜脈回流作用清除，微血管內皮細胞被破壞，不但可引起局部肢體骨骼肌缺血、腫脹和壞死，而且還可影響機體各大系統(tǒng)，嚴重者甚至會發(fā)生多器官功能衰竭，危及生命[7]。通過介入治療讓患者進入再灌注期，產生的細胞激肽會促使血管內皮產生氧自由基，氧自由基則會通過脂質過氧化酶的序貫反應損傷細胞膜，致鈉泵功能不全，加重肢體腫脹和缺血，氧自由基介導的細胞膜脂質分子過氧化是IRI 的重要原因之一。研究[8]證實，在心肌缺血再灌注過程中, 氧化應激可通過相關途徑生成大量血栓烷。血栓烷是血小板微粒體合成并釋放的生物活性物質, 具有促進血管收縮和血小板聚集的作用。其代謝產物TXB2可間接反映組織器官的血供情況。血管內皮損傷可導致前列環(huán)素合成酶生成減少,活性下降,此時TXB2增多可造成血小板聚集、血管收縮和血栓形成，從而導致組織器官缺血缺氧，造成損傷。8-iso-PGF2α 是細胞生物膜上花生四烯酸經(jīng)體內自由基超氧化作用、非酶途徑經(jīng)β 裂解重組產生的前列腺素的衍生物，其從生成到代謝的整個過程不易受到藥物或其他因素的影響[9]。有研究指出，8-iso-PGF2α 作為脂質過氧化產物異前列腺素F2α的一種亞型，其水平反映了肢體IRI 脂質過氧化反應的嚴重程度，能準確地反映機體脂質過氧化的狀態(tài)，可以作為判斷下肢IRI 的指標，并可用于推測損傷程度。肢體出現(xiàn)血液再灌注后，導致氧自由基被大量釋放進入血液，可能會引起8-iso-PGF2α 水平的改變。有研究[10]指出8-iso-PGF2α 的水平與血液高凝狀態(tài)有關。大量的研究證實，血清8-iso-PGF2α 水平可作為IRI 發(fā)生、發(fā)展及相關靶器官損傷的評價指標，檢測8-iso-PGF2α 水平對IRI 的預防、診斷、治療、預后及病情評估有重要意義[10]。有研究指出，8-iso-PGF2α 是最理想的評價氧化應激程度的生化指標之一。自由基介導的細胞膜脂質大分子過氧化是IRI 的重要原因之一。大量的研究[8-12]證實，血清中8-iso-PGF2α 的水平可作為IRI 相關靶器官損傷程度的評價指標。因此，聯(lián)合檢測血清中IRI8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平對IRI 的診治和預防具有重要的臨床意義。麻京豫等[8]對急性冠脈綜合征相關IRI 患者進行了8-iso-PGF2ɑ 和TXB2檢測，結果顯示與正常對照組相比，患者組8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平均較高，且其8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平與病情嚴重程度呈正相關，這與本研究的結論一致。本研究的結果顯示，與術前相比，術后1 天和術后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與術后1 天相比，術后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。術后出現(xiàn)IRI 時（術后1 天）患者的血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平明顯升高，隨后（術后3 天）患者的血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平又有所下降，提示血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平可能與IRI 的嚴重程度有關。

綜上所述，血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平呈正相關，二者均為評估IRI 的潛在生物學指標。從IRI 患者術后血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平的變化情況來看，其血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平可能與IRI 的嚴重程度有關。需要注意的是，本研究的樣本數(shù)量不夠大、樣本代表性欠佳，且未設置正常對照組，故血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平與下肢IRI 的具體關系還有待進一步研究。