外源核黃素處理對(duì)上海青采后品質(zhì)及抗氧化活性的影響

劉雪松，李韞同，朱俊臻，安容慧，徐曉陽(yáng)，李鵬霞,3,,*

（1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)設(shè)施與裝備研究所，江蘇 南京 210014；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品冷鏈物流技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210014；3.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110866；4.江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；5.中華全國(guó)供銷合作總社濟(jì)南果品研究所，山東 濟(jì)南 250220）

上海青（Brassica rapasubsp.chinensis）是一種重要的綠葉蔬菜，在中國(guó)南方廣泛種植[1]，原產(chǎn)于中國(guó)，栽培歷史悠久，在西方國(guó)家和非洲也很常見[2-3]。上海青富含維生素、礦物質(zhì)和硫代葡萄糖苷，而硫代葡萄糖苷及其降解產(chǎn)物具有抗癌作用[4]。此外，上海青含高濃度的抗氧化成分，如抗壞血酸和多酚，對(duì)人體具有抗衰老、抗心血管疾病和抗癌作用[5]。上海青含水量高、組織清脆，然而在收獲后的呼吸和蒸騰作用過程中，水分迅速蒸發(fā)，使其容易受到機(jī)械損傷；且在采后貯存和運(yùn)輸過程中易發(fā)生枯萎和黃變，加劇采后損失[6-7]。

當(dāng)前，已有學(xué)者采用不同的方法對(duì)上海青進(jìn)行保鮮處理，Song Liuli等[1]研究發(fā)現(xiàn)，1-甲基環(huán)丙烯處理能顯著抑制上海青的呼吸速率和乙烯產(chǎn)生，從而延緩其采后衰老。An Ronghui等[8]采用真空預(yù)冷結(jié)合富氫水的方法處理上海青，結(jié)果表明上海青抗氧化性和葉綠素含量得到顯著提高，此外，該學(xué)者還發(fā)現(xiàn)花旗松素可以通過調(diào)節(jié)抗壞血酸-谷胱甘肽（ascorbate-glutathione，AsA-GSH）循環(huán)提高活性氧的清除率，從而降低膜脂氧化程度，最終減少上海青貯藏過程中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失和葉綠素降解[9]。

核黃素（V B2）是對(duì)人類健康有益的1 3 種必需維生素之一[10]，其推薦的每日攝入量相對(duì)較低（0.6～1.6 mg）。因?yàn)槿梭w本身不能合成核黃素，因此需要通過飲食攝入[11]。核黃素重要的天然食物來源包括綠色蔬菜、肉類和奶制品[10]。核黃素在植物代謝中的作用已得到充分研究，黃素單核苷酸和黃素腺嘌呤二核苷酸的分子中含有核黃素。黃素單核苷酸和黃素腺嘌呤二核苷酸都是克雷布斯循環(huán)及蛋白質(zhì)、脂肪和類固醇代謝的基本輔酶[12]。據(jù)報(bào)道，核黃素與植物對(duì)非生物脅迫的適應(yīng)有關(guān)[13]。在水果中，核黃素在病原菌控制[14]、品質(zhì)維持[15]和調(diào)控成熟[16]過程中發(fā)揮重要作用。除了這些中心代謝功能外，核黃素還在植物和微生物之間的相互作用中發(fā)揮作用[17]。在擬南芥和煙草中，Dong等[18]研究發(fā)現(xiàn)核黃素處理可以誘導(dǎo)植物對(duì)寄生霜霉病、丁香假單胞菌、煙草花葉病毒和交鏈格孢菌產(chǎn)生抗性。且核黃素是美國(guó)食藥局評(píng)價(jià)為一般認(rèn)為安全（generally recognized as safe，GRAS）的食品添加劑[19]。鮮有研究將核黃素作為防腐劑用于上海青保鮮，鑒于此，本實(shí)驗(yàn)以核黃素處理上海青，研究其對(duì)上海青貯藏過程中的品質(zhì)影響，以期為上海青的貯藏保鮮技術(shù)提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

上海青來源于中國(guó)江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)田。播種40 d后，挑選大小均勻（約100 g）且葉片無機(jī)械損傷的上海青進(jìn)行采摘，對(duì)樣品進(jìn)行冷處理去除田間熱并快速運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。

TRIzol試劑 寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司；HiScriptTM II cDNA Synthesis Kit 南京諾維贊生物科技有限公司；三氯乙酸、硫代巴比妥酸、草酸、抗壞血酸、磷酸二氫鉀 上海源葉生物科技有限公司；偏磷酸、鉬酸銨、愈創(chuàng)木酚、乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）、EDTA-Na2北京索萊寶生物科技有限公司；過氧化氫、乙醇、濃硫酸 南京化學(xué)試劑股份有限公司；乙酸 西隴科學(xué)股份有限公司；沒食子酸 上海瑞永生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

PL202-L型分析天平 梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司；A11 Basic液氮研磨器 廣州艾卡儀器設(shè)備有限公司；CR-400型色差儀 日本柯尼卡美能達(dá)公司；3K15高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；UV-1102型紫外-可見分光光度計(jì) 上海天美科學(xué)儀器有限公司；7500實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.3 方法

1.3.1 原料處理

隨機(jī)將大小均一的上海青分成5 組，每組12 棵，分別用濃度為200、400、600 μmol/L和800 μmol/L的核黃素均勻噴灑上海青，對(duì)照組噴灑蒸餾水。每組噴灑用量在20 mL左右，并在（20±1）℃條件下風(fēng)干。然后將處理的上海青放在多孔的聚乙烯食品袋中，每個(gè)袋子里裝4 顆上海青，每個(gè)處理3 個(gè)平行。并在溫度（20±1）℃、相對(duì)濕度80%、黑暗條件下貯存4 d。從每個(gè)處理組的12 棵菜中隨機(jī)選取除去主靜脈的葉片，迅速放入液氮中并研磨成粉末，于-80 ℃冷凍保存，用于葉片總?cè)~綠素含量的測(cè)定。根據(jù)上海青葉片的表型以及葉綠素總含量確定最適核黃素濃度。

從遠(yuǎn)處看，幾座大型蘇聯(lián)式三層筒子樓矗立在街角，與周圍的高層住宅樓極不協(xié)調(diào)。走近了，臨街布滿歲月痕跡的沾滿油漬的廚房窗戶半敞著，睜著黑洞洞的大眼睛，注視著街道上來往的行人。偶爾，幾家廚房窗戶飄出幾絲裊娜的飯菜香味，這時(shí)候，人們才發(fā)覺，原來這里也有人煙。

選取大小均勻且表面無破損的上海青，隨機(jī)分成兩組，每組60 顆。一組用120 mL的蒸餾水均勻噴灑（對(duì)照組），另一組用120 mL的核黃素溶液（最適濃度）均勻噴灑（處理組），在（20±1）℃條件下風(fēng)干。將上海青放在穿孔聚乙烯食品袋中，每袋裝4 顆上海青，將其置于溫度約20 ℃、相對(duì)濕度80%條件下貯存4 d，每天隨機(jī)選取處理組和對(duì)照組的除主靜脈的葉片，迅速于液氮中冷凍并研磨成粉末，于-80 ℃保存。

1.3.2 指標(biāo)測(cè)定

1.3.2.1 色澤測(cè)定參照盧瑞雪等[20]的方法，選取上海青外葉避開主葉脈在葉片兩側(cè)進(jìn)行色澤（L*、b*、h值）測(cè)定。

1.3.2.2 葉綠素含量測(cè)定

葉綠素含量測(cè)定參照紀(jì)淑娟等[21]的方法，并略有改動(dòng)。稱取0.2 g上海青樣品，加入10 mL體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇溶液，常溫避光浸提12 h，過濾后吸取濾液，以95%乙醇溶液為空白校零。測(cè)定上清液在642、665 nm波長(zhǎng)處的吸光度，重復(fù)測(cè)定3 次。葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量分別按公式（1）～（3）計(jì)算。

式中：V表示提取液總體積/mL；m表示樣品質(zhì)量/g。

1.3.2.3 菌落總數(shù)的測(cè)定

生理鹽水（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9%）分裝于三角瓶及試管中，用報(bào)紙包裹嚴(yán)密，實(shí)驗(yàn)槍頭及瓊脂培養(yǎng)皿放入高壓滅菌鍋（121 ℃、20 min）滅菌后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。稱取5 g新鮮樣品，搗碎后加入45 mL生理鹽水，溶液倒入袋中并排盡袋中空氣，無菌均質(zhì)振蕩5 min。吸取均質(zhì)好的樣液1 mL進(jìn)行梯度稀釋（稀釋梯度為10-1～10-7），稀釋后要渦旋，整個(gè)過程試管在使用前均要在酒精燈上滅菌。每個(gè)梯度吸取100 μL樣液滴在瓊脂平板中間，輕輕用涂布棒均勻涂布，完成后用保鮮膜包裹，于37 ℃倒置培養(yǎng)24 h，24 h后用肉眼觀察并記錄菌落數(shù)量，菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位表示。

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）清除率的測(cè)定參考Mohamed等[22]的方法，并略有改動(dòng)。稱取0.5 g樣品，加入5 mL 95%的乙醇溶液勻漿，浸提5 h，4 ℃、10 000×g離心20 min，取上清液，置于冰上待測(cè)。取上清液0.5 mL加入2.5 mL 0.1 mmol/L DPPH，反應(yīng)30 min，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。按公式（4）計(jì)算DPPH自由基清除率。

式中：A0為未加樣品時(shí)的DPPH溶液的吸光度；A樣品為加入樣品后DPPH溶液的吸光度。

1.3.2.5 丙二醛含量測(cè)定

丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量測(cè)定參照李合生[23]的方法，并略有改動(dòng)。稱取0.5 g樣品，加入5 mL體積分?jǐn)?shù)為5%的三氯乙酸溶液，冰上浸提10 min，4 ℃、10 000×g離心20 min，取上清液，置于冰上待測(cè)。取2 mL上清液，加入2 mL、體積分?jǐn)?shù)0.67%硫代巴比妥酸，混合后沸水煮20 min，冷卻后4 ℃、10 000×g離心20 min，于450、532、600 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。按公式（5）計(jì)算MDA含量。

式中：V1為反應(yīng)液總體積/mL；V2為反應(yīng)液中的提取液體積/mL；V為提取液總體積/mL；m為樣品質(zhì)量/g。

1.3.2.6 抗氧化酶活力測(cè)定

粗酶液的制備：稱取1 g樣品，加入4 mL 0.1 mol/L pH 7.2磷酸緩沖液，冰上勻漿，4 ℃、10 000×g離心15 min，取上清液，置于冰上待測(cè)。

過氧化物酶（peroxidase，POD）活力測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法。將0.2 mL粗酶液中加入2 mL 0.05 mol/L愈創(chuàng)木酚溶液，30 ℃水浴中平衡5 min，加入1 mL、0.2% H2O2溶液，混合均勻后測(cè)定470 nm波長(zhǎng)處的OD值，以每分鐘OD470nm變化1表示1 個(gè)POD活力單位。

過氧化氫酶（catalase，CAT）活力測(cè)定采用過氧化氫法。取0.05 mL粗酶液，加入2 mL 0.05 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.0），在25 ℃水浴下預(yù)熱5 min，然后加1 mL、0.2% H2O2，于240 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，以每分鐘OD240nm變化0.01表示1 個(gè)CAT活力單位。

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力測(cè)定按照趙世杰等[24]的方法，并略有改動(dòng)。取0.05 mL粗酶液，依次加入0.3 mL 130 mmol/L甲硫氨酸、750 μmol/L氮藍(lán)四唑、20 μmol/L核黃素和100 μmol/L EDTA-Na2溶液，在4 000 lx日光燈下反應(yīng)20 min后于560 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，以0.1 mol/L pH 7.2磷酸緩沖液替換粗酶液作為對(duì)照管，以每分鐘OD560nm變化1為表示1 個(gè)SOD活力單位。

1.3.2.7 抗壞血酸含量測(cè)定

稱取0.5 g樣品，加入4 mL草酸-EDTA溶液（含0.05 mol/L草酸、0.2 mol/L EDTA），冰上勻漿，4 ℃、10 000×g離心20 min，取1 mL上清液，依次加入4 mL草酸-EDTA溶液、0.5 mL 0.3 g/L偏磷酸-乙酸溶液、1 mL 5%硫酸、2 mL 0.5g/L鉬酸銨溶液，30 ℃水浴15 min，于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，采用系列質(zhì)量濃度梯度0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL抗壞血酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算抗壞血酸質(zhì)量濃度，進(jìn)而計(jì)算其含量。

1.3.2.8 總酚含量測(cè)定

稱取0.5 g樣品，加入5 mL 80%的乙醇溶液，冰上勻漿，4 ℃、10 000×g離心20 min。取0.1 mL上清液，依次加入0.9 mL蒸餾水、0.5 mL福林-酚溶液（在250 mL的圓底燒瓶?jī)?nèi)加入20 g鎢酸鈉、5 g鉬酸鈉、140 mL蒸餾水、10 mL 85%的濃磷酸及20 mL濃鹽酸，充分混勻，以小火回流10 h，再加入3 g硫酸鋰及15 mL雙氧水，開口繼續(xù)煮沸15 min），25 ℃水浴3 min，再加入1 mL飽和碳酸鈉溶液，25 ℃水浴1 h，于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以系列質(zhì)量濃度梯度0、4、8、12、16、20 μg/mL沒食子酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品沒食子酸質(zhì)量濃度，總酚含量以每克樣品所含沒食子酸質(zhì)量表示，單位為mg/g。

1.3.2.9 衰老及抗氧化相關(guān)基因表達(dá)量測(cè)定

使用TRIzol試劑從新鮮上海青組織中分離總RNA。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)R N A 樣品的質(zhì)量。使用HiScriptTM II cDNA Synthesis Kit，根據(jù)說明書從純化的總RNA中反轉(zhuǎn)錄cDNA作為模板。根據(jù)從Brassicaceae數(shù)據(jù)庫(kù)（http://brassicadb.org/brad/）獲得的序列信息，使用Primer 6軟件設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）引物，以BrActin作為內(nèi)參基因（表1）。PCR程序：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性10 s；60 ℃退火30 s，40 個(gè)循環(huán)，終止后于4 ℃保存。使用7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行PCR。使用2-ΔΔCT方法測(cè)定基因相對(duì)表達(dá)量。

表1 PCR的引物序列Table 1 Primer sequences used for polymerase chain reaction

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，處理組和對(duì)照組分別3 個(gè)重復(fù)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，采用Origin 2020軟件作圖，采用SPSS 22軟件進(jìn)行單因素方差分析，利用鄧肯檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的核黃素對(duì)上海青表型的影響

20 ℃黑暗貯存4 d后，對(duì)照組葉片開始變黃，400 μmol/L和600 μmol/L處理組葉片黃化程度較低（圖1A）。通過測(cè)定對(duì)照組和核黃素處理組總?cè)~綠素含量，發(fā)現(xiàn)400 μmol/L核黃素處理組總?cè)~綠素含量最高（圖1B）。本研究中篩選得到的核黃素最佳使用濃度與Guhr等[25]使用的濃度相同。因此，選擇400 μmol/L的核黃素對(duì)采后上海青進(jìn)行處理做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 不同濃度核黃素處理對(duì)采后上海青葉片表型（A）和總?cè)~綠素含量（B）的影響Fig.1 Effects of different concentrations of riboflavin on visual appearance (A)and total chlorophyll content (B) of postharvest pak choi leaves

2.2 核黃素處理對(duì)上海青外觀品質(zhì)的影響

葉片變黃是衰老的標(biāo)志，是影響上海青等葉類蔬菜品質(zhì)的主要因素[5]。如圖2所示，對(duì)照組上海青在20 ℃貯藏第3天時(shí)葉片開始變黃，第4天時(shí)黃化更為嚴(yán)重，已失去商品價(jià)值。而400 μmol/L核黃素處理的上海青僅在第4天時(shí)出現(xiàn)輕微黃化現(xiàn)象。結(jié)果表明外源核黃素可以延緩上海青葉片黃化。

圖2 核黃素處理對(duì)上海青外觀品質(zhì)的影響Fig.2 Effect of riboflavin treatment on appearance quality of pak choi

2.3 核黃素處理對(duì)上海青葉片色澤及葉綠素含量的影響

上海青葉綠素含量高，其葉子的顏色可反映上海青的商品質(zhì)量[1]。由于葉綠素降解引起上海青葉片快速變黃，采后上海青在室溫下的保質(zhì)期僅為2～3 d[26]。因此，保持葉綠素含量可以延長(zhǎng)上海青的貨架期。色澤指數(shù)L*值代表葉片亮度，b*值代表黃藍(lán)度，h值代表顏色飽和度。在貯存期間，對(duì)照組和核黃素處理組的L*值和b*值均增加。在貯存的第3、4天，核黃素處理組的L*值分別比對(duì)照組低約8.2%和11.3%（圖3A），而處理組的b*值分別比對(duì)照組低約8.3%和19.7%（圖3B）。對(duì)照組和處理組貯藏期間的h值逐漸下降，核黃素處理組貯藏第3、4天的h值分別比對(duì)照組高約1.9%和3.5%（圖3C）。此外，在貯存的第3、4天，核黃素處理組的葉綠素a含量分別比對(duì)照組高29.1%和65.0%（圖3D），葉綠素b含量分別比對(duì)照組高31.2%和69.5%（圖3E），總?cè)~綠素含量分別比對(duì)照組高32.2%和65.6%（圖3F）。由此，核黃素處理可有效保持上海青葉片的色澤和葉綠素含量。

圖3 核黃素處理對(duì)上海青葉片色澤和葉綠素含量的影響Fig.3 Effect of riboflavin treatment on color and chlorophyll content of pak choi leaves

2.4 核黃素處理對(duì)上海青葉綠素代謝基因表達(dá)的影響

葉綠素分解代謝基因及衰老相關(guān)基因影響葉綠素的降解途徑[27-29]。SAG12是一個(gè)與植物衰老相關(guān)的標(biāo)記基因，其表達(dá)量可以在很大程度上反映植物衰老的過程[30]，與植物葉綠素降解途徑有關(guān)的基因包括NYC1、PPH、PAO、SGR1和SGR2，它們負(fù)責(zé)編碼葉綠素分解代謝途徑中的各類酶或功能蛋白[27]。由圖4可知，核黃素處理不同程度地下調(diào)了BrSAG12、BrNYC1、BrPPH、BrPAO、BrSGR1和BrSGR2的表達(dá)，與Song Liuli等[1]的研究結(jié)果類似，這表明核黃素可以通過抑制上海青中衰老相關(guān)基因和葉綠素降解基因（BrNYC1、BrPPH、BrPAO和BrSGR1/2）的表達(dá)來延緩上海青葉片黃化。

圖4 核黃素處理對(duì)葉綠素降解基因表達(dá)的影響Fig.4 Effect of riboflavin treatment on the expression of genes related to chlorophyll degradation

2.5 核黃素處理對(duì)上海青葉表面菌落總數(shù)的影響

前人研究表明，外源施加核黃素可以誘導(dǎo)小麥和番茄幼苗對(duì)白粉病菌（Blumeria graminisf.sp.tritici）產(chǎn)生抗性[31-32]，但是鮮有關(guān)于核黃素對(duì)上海青葉表面菌落數(shù)影響方面的報(bào)道。葉類蔬菜表面菌落總數(shù)對(duì)葉片衰老有著重要的影響。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照組和核黃素處理組菌落總數(shù)持續(xù)增加，而在貯藏的第1、2、4天，核黃素處理組的葉表面菌落總數(shù)顯著低于對(duì)照組，分別低6.8%、2.5%和2.3%（圖5）。因此，核黃素可以通過有效降低采后上海青葉表面菌落總數(shù)來維持其品質(zhì)。

圖5 核黃素處理對(duì)上海青葉表面菌落總數(shù)的影響Fig.5 Effect of riboflavin treatment on total bacterial count on pak choi leaves

2.6 核黃素處理對(duì)上海青DPPH自由基清除率和MDA含量的影響

DPPH自由基是一種很穩(wěn)定的氮中心自由基，其清除能力是反映植物抗氧化能力的重要指標(biāo)之一[33]。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，DPPH自由基清除率持續(xù)降低。然而，在貯藏的第3、4天，核黃素處理組的DPPH自由基清除率顯著高于對(duì)照組，分別高5.4%和4.7%（圖6A）。MDA含量是表征植物抗氧化能力的重要參數(shù)，能有效反映植物機(jī)體脂質(zhì)過氧化速率和強(qiáng)度，也能間接反映植物組織過氧化損傷程度[34]。如圖6B所示，對(duì)照組MDA含量隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷增加，而核黃素處理組MDA含量幾乎沒有變化，第3、4天核黃素處理組MDA含量比對(duì)照組分別低14.7%和38.6%。

圖6 核黃素處理對(duì)上海青葉片DPPH自由基清除率（A）和MDA含量（B）的影響Fig.6 Effect of riboflavin treatment on DPPH radial scavenging capacity (A) and MDA content (B) of pak choi leaves

2.7 核黃素處理對(duì)上海青抗氧化酶活性和基因表達(dá)的影響

POD、SOD和CAT是植物抗氧化的重要酶。抵御植物抗活性氧入侵的第一道防線是SOD，它將O2-·轉(zhuǎn)化為H2O2[35]。此外，POD和CAT還積極參與將H2O2轉(zhuǎn)化為H2O和O2的過程[36]。上海青葉片POD活力在貯藏期間呈持續(xù)上升趨勢(shì)，在貯藏的第1、2天，核黃素處理組POD活力極顯著高于對(duì)照組，分別高出11.2%和9.3%（圖7A）；上海青葉片的SOD活力在貯藏前3 d呈先上升趨勢(shì)，第4天下降，在貯藏的第2、3天，核黃素處理組SOD活力極顯著高于對(duì)照組，分別高4.1%和8.1%（圖7B）；上海青葉片的CAT活力在貯藏期間呈持續(xù)下降趨勢(shì)，且在貯藏第3、4天時(shí)，核黃素處理組極顯著高于對(duì)照組，分別高22.4%和21.6%（圖7C）。綜上，核黃素處理總體上可有效保持上海青葉片中較高的POD、SOD和CAT活力。BrPOD、BrSOD和BrCAT基因表達(dá)量與抗氧化酶活力變化趨勢(shì)相似，核黃素處理可誘導(dǎo)提高BrPOD、BrSOD和BrCAT的表達(dá)（圖7D～F）。結(jié)果表明，核黃素可以通過上調(diào)相應(yīng)基因的表達(dá)水平來增強(qiáng)主要抗氧化酶的活力，從而有助于清除過量的ROS，保護(hù)上海青葉片在衰老過程中免受氧化損傷。

圖7 核黃素處理對(duì)上海青葉片抗氧化酶活力及相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.7 Effect of riboflavin treatment on antioxidant enzyme activity and related gene expression in pak choi leaves

2.8 核黃素處理對(duì)上海青抗壞血酸和總酚含量的影響

上海青體內(nèi)富含抗氧化物質(zhì)總酚和抗壞血酸[5]。如圖8A所示，在整個(gè)貯藏期間，葉片中抗壞血酸含量呈下降趨勢(shì)，且在貯藏第3天，核黃素處理組抗壞血酸含量比對(duì)照組高4.3%。如圖8B所示，上海青葉片總酚含量在貯藏期間呈波動(dòng)變化趨勢(shì)，核黃素處理組總酚含量在第3、4天顯著高于對(duì)照組，分別高13.7%和13.3%（圖8B）。綜上，核黃素處理能夠提高采后上海青葉片中抗壞血酸和總酚等抗氧化物質(zhì)的含量。

圖8 核黃素處理對(duì)上海青葉片抗壞血酸（A）和總酚（B）含量的影響Fig.8 Effect of riboflavin treatment on ascorbic acid (A) and total phenolic acid (B) contents in pak choi leaves

3 結(jié) 論

本研究表明，外源核黃素處理延緩了采后上海青葉片的衰老并維持了其品質(zhì)。核黃素處理可有效降低上海青葉綠素分解代謝相關(guān)基因（BrNYC1、BrPPH、BrPAO和BrSGR1/2）的表達(dá)，延緩葉綠素的降解；減少上海青葉表面的菌落總數(shù)，降低病原性腐敗的發(fā)生；通過上調(diào)抗氧化謝相關(guān)基因（BrPOD、BrSOD和BrCAT）的表達(dá)增強(qiáng)POD、SOD和CAT抗氧化酶活性，維持較高的抗氧化物質(zhì)（抗壞血酸和總酚）含量，從而提高DPPH清除率并降低MDA的生成量，最終有效保持上海青采后品質(zhì)。