薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能和雞蛋營(yíng)養(yǎng)成分的影響

張翊慧 白苗苗 劉紅南 崔亞?wèn)| 蘭 偉 萬(wàn)發(fā)春 孔祥峰,*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長(zhǎng)沙 410128;2.中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所,亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理與代謝過(guò)程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,長(zhǎng)沙 410125;3.阜陽(yáng)師范大學(xué)生物與食品工程學(xué)院,阜陽(yáng) 236037)

蛋雞在產(chǎn)蛋后期對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝效率下降導(dǎo)致雞只肥胖、死淘率升高。同時(shí),機(jī)體中抗體水平減少,蛋雞對(duì)疾病的抵抗力減弱,生產(chǎn)性能下降,所產(chǎn)雞蛋破損率逐漸增加,蛋殼逐漸變薄,雞蛋品質(zhì)下降和雞蛋中營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)改變。而這些無(wú)疑會(huì)給蛋雞養(yǎng)殖者帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此,尋找一種可維持產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能同時(shí)提高雞蛋品質(zhì)的新型飼料添加劑成為許多相關(guān)從業(yè)者的研究熱點(diǎn)之一。

薄荷是一種種植范圍廣、適應(yīng)能力強(qiáng)的多年生草本植物,現(xiàn)已報(bào)道的薄荷屬種已有30多種,因其具有極高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值而廣受人們的歡迎[1]。尤其是薄荷精油和薄荷提取物可以作為一些化妝品和藥制劑的天然成分[2-3]。據(jù)報(bào)道,薄荷精油和薄荷提取物具有多種生物活性,包括抗氧化、抗菌、抗炎、抗高血壓、抗病毒和抗過(guò)敏等作用,這可能與萜類化合物(醛、醇、酚和甲氧基衍生物)和芳香物質(zhì)等生物活性物質(zhì)的存在有關(guān)[4-6]。同時(shí),這些活性物質(zhì)也會(huì)對(duì)家禽的健康和生產(chǎn)性能產(chǎn)生促進(jìn)作用[7]。研究表明,在飼糧中添加薄荷可改善育成期鵪鶉的肉品質(zhì),降低血清中膽固醇含量,改善腸道形態(tài)和腸道中的微生物結(jié)構(gòu)[8-9]。在產(chǎn)蛋后期蛋雞的飼糧中添加干薄荷葉可顯著提高海蘭褐蛋雞的生產(chǎn)性能,降低血清中膽固醇含量[10]。在冷應(yīng)激下,飼糧中添加薄荷精油可顯著增加蛋雞采食量和蛋重[11]。然而,薄荷葉干粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能和雞蛋營(yíng)養(yǎng)成分影響的研究還相對(duì)較少。因此,本試驗(yàn)以產(chǎn)蛋后期的新楊黑羽蛋雞為研究對(duì)象,探究飼糧添加不同水平薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞的生產(chǎn)性能和雞蛋營(yíng)養(yǎng)成分的影響,為薄荷能在畜禽養(yǎng)殖中得到充分的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選取健康的50周齡產(chǎn)蛋后期新楊黑羽蛋雞216只,隨機(jī)分為4組,每組9個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)6只雞。對(duì)照組飼喂玉米-豆粕基礎(chǔ)飼糧,基礎(chǔ)飼糧參考NRC(1994)和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)配制。3個(gè)試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.1%、0.2%和0.4%的薄荷葉粉。基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。以干物質(zhì)為基礎(chǔ)的薄荷葉營(yíng)養(yǎng)成分含量如下:粗灰分14.9%,總能12.8 MJ/kg,粗蛋白質(zhì)16.2%,中性洗滌纖維28.2%,鈣1.97%,磷0.31%[10]。試驗(yàn)在安徽田園居家禽養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行,整個(gè)試驗(yàn)期為35 d,其中預(yù)試期為7 d,正試期為28 d。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞舍全程采用人工光照,每天的光照時(shí)間為16 h,黑暗時(shí)間為8 h,并保持恒定。通風(fēng)方向?yàn)榭v向機(jī)械通風(fēng)。試驗(yàn)蛋雞在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)自由采食,每天07:30和16:00各飼喂1次,并觀察雞只的精神狀態(tài)和健康狀況;乳頭式飲水器自由飲水。采用機(jī)械清糞,每天16:30清糞1次。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目 Items含量 Content鈣 Ca3.27有效磷 AP0.31賴氨酸 Lys0.76蛋氨酸 Met0.24半胱氨酸 Cys0.26蘇氨酸 Thr0.57色氨酸 Try0.17

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束時(shí),隨機(jī)從每組中選擇9只蛋雞(每個(gè)重復(fù)1只)禁飼12 h后進(jìn)行靜脈采血,血液靜置一段時(shí)間后在4 ℃條件下3 500 r/min離心15 min,分裝血清于1.5 mL離心管中于-20 ℃冰箱中保存,用于血清生化指標(biāo)檢測(cè);雞只采血后立即剖殺,并分離輸卵管,從卵巢中取出卵泡用于后續(xù)輸卵管形態(tài)指標(biāo)的檢測(cè);同時(shí),隨機(jī)從每組中挑選9個(gè)雞蛋(每個(gè)重復(fù)1個(gè))進(jìn)行蛋品質(zhì)、蛋清氨基酸含量和蛋黃脂肪酸含量的檢測(cè)。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 生產(chǎn)性能測(cè)定

試驗(yàn)期間,每天17:00收集雞蛋并記錄每天的剩料量、產(chǎn)蛋數(shù)和蛋重,用于計(jì)算全期的采食量、平均蛋重、料蛋比、總產(chǎn)蛋數(shù)和產(chǎn)蛋率。

1.4.2 血清生化指標(biāo)

使用全自動(dòng)血清生化儀(Beckman CX4)檢測(cè)血清中總蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、尿素氮(UN)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量。

1.4.3 蛋雞輸卵管形態(tài)檢測(cè)

使用電子天平稱取輸卵管重(精確至0.01 g)后,使用卷尺測(cè)量輸卵管膨大部長(zhǎng)度和狹部長(zhǎng)度(精確至0.01 cm);使用計(jì)數(shù)器對(duì)大黃卵泡、小黃卵泡和大白卵泡計(jì)數(shù),并計(jì)算卵泡總數(shù)。

1.4.4 蛋品質(zhì)檢測(cè)

每個(gè)雞蛋單獨(dú)稱重后,使用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量雞蛋的最大縱徑和橫徑(精確到0.02 mm)并計(jì)算蛋形指數(shù),蛋形指數(shù)=最大縱徑/最大橫徑;使用多功能雞蛋分析儀檢測(cè)雞蛋的白蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位;使用蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀測(cè)定蛋殼硬度;使用蛋殼測(cè)厚儀檢測(cè)蛋殼厚度。

1.4.5 蛋清氨基酸含量的檢測(cè)

取200 μL蛋清樣品置于10 mL玻璃安倍瓶?jī)?nèi),加入8 mL 6 mol/L鹽酸溶液,充分振蕩1 min,4 ℃超聲30 min,-60 ℃靜置10 min,接入真空泵,抽取真空,封口,放入110 ℃干燥冰箱內(nèi)水解22 h;將水解后的樣本取出1 mL放入1.5 mL離心管內(nèi)冷凍60 min;冷凍后將樣本置于凍干機(jī)內(nèi)凍干;用0.200 mL 50%乙腈水(含色氨酸d5內(nèi)標(biāo)100 ng/mL)復(fù)溶,充分振蕩1 min,4 ℃超聲10 min,12 000 r/min離心10 min;取上清液過(guò)0.22 μm濾膜上機(jī)進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析。

1.4.6 蛋黃脂肪酸含量的檢測(cè)

稱取0.1 g蛋黃凍干樣品,用800 μL 50%乙腈/水(v∶v)在室溫下均質(zhì)1 min。在4 ℃下以12 000 r/min離心15 min后,將400 μL上清液分別與200 μL 3-NPH(200 mmol/L)和200 μL EDC(120 mmol/L;含6%吡啶和400 ng/mL乙酸-D3)充分混合。混合物均質(zhì)化1 min,在40 ℃下反應(yīng)1 h,并每5 min搖動(dòng)1次。反應(yīng)完成后,在4 ℃下以12 000 r/min離心15 min,上清液通過(guò)0.22 μm濾膜,用50%乙腈水(含100 ng/mL內(nèi)標(biāo))稀釋10倍,進(jìn)行LC-MS/MS分析,測(cè)定飽和脂肪酸(SFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)和多不飽和脂肪酸(PUFA)的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2019進(jìn)行初步處理,采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,用多項(xiàng)式對(duì)比進(jìn)行線性和二次效應(yīng)分析,試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以P≤0.05表示差異顯著,0.05

2 結(jié)果與分析

2.1 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞的平均日采食量(ADFI)、產(chǎn)蛋率、蛋數(shù)和平均蛋重均沒(méi)有顯著影響(P>0.05)。

表2 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加薄荷葉粉顯著增加血清IgG含量(P<0.05),添加0.1%和0.2%的薄荷葉粉組血清中TP的含量呈二次曲線變化(P<0.05),而對(duì)血清中的TG、UN和IgM含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表3 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

2.3 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞輸卵管形態(tài)的影響

由表4可知,與對(duì)照組相比,在產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加薄荷葉粉顯著降低了蛋雞輸卵管重(P<0.05);添加0.1%和0.4%的薄荷葉粉對(duì)蛋雞輸卵管膨大部長(zhǎng)度無(wú)顯著影響(P>0.05),而添加0.2%的薄荷葉粉則會(huì)顯著減少膨大部長(zhǎng)度(P<0.05);同樣,除0.2%組與對(duì)照組相比顯著降低各卵泡數(shù)和卵泡總數(shù)(P<0.05)外,其余2個(gè)試驗(yàn)組大黃卵泡數(shù)、小黃卵泡數(shù)和卵泡總數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05),而0.1%組與對(duì)照組相比,顯著增加大白卵泡數(shù)(P<0.05)。

表4 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞輸卵管形態(tài)的影響

2.4 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞雞蛋品質(zhì)的影響

由5表可知,與對(duì)照組相比,隨著飼糧中薄荷葉粉添加水平的增加,雞蛋的蛋殼強(qiáng)度顯著增加(P<0.05);同時(shí),薄荷葉粉可顯著改善雞蛋的蛋形指數(shù)(P=0.05),并隨薄荷葉粉添加水平增加呈二次曲線變化(P<0.05),對(duì)蛋重、蛋白高度和哈氏單位未產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)。

表5 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞雞蛋品質(zhì)的影響

2.5 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期雞蛋蛋清氨基酸含量的影響

由表6可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加0.1%和0.4%薄荷葉粉顯著降低蛋清L-賴氨酸含量(P<0.05),0.1%組L-蛋氨酸含量呈二次曲線變化(P<0.05),3個(gè)試驗(yàn)組蛋清L-苯丙氨酸、L-色氨酸、L-異亮氨酸和總必需氨基酸含量呈二次曲線變化(0.050.05)。

續(xù)表6項(xiàng)目Items薄荷葉粉添加量Peppermint leaf powder addition/%0(對(duì)照 Control)0.10.20.4P值 P-value處理Treatment線性Linear二次Quadratic總氨基酸Total amino acid20 461.12±1 359.8720 534.94±858.0918 727.50±1 727.2818 312.77±751.350.470.150.84

2.6 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋黃脂肪酸含量的影響

由表7可知,與其他3組比,產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加0.2%薄荷葉粉可顯著增加雞蛋蛋黃中庚酸含量(P<0.05);同時(shí),與其他2組相比,0.2%組顯著增加蛋黃中10-反-十七碳烯酸含量(P<0.05),而飼糧中添加0.1%和0.4%的薄荷葉粉對(duì)蛋黃SFA、MUFA、PUFA含量以及n-6PUFA/n-3PUFA均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表7 薄荷葉粉對(duì)產(chǎn)蛋后期雞蛋蛋黃脂肪酸含量的影響

續(xù)表7項(xiàng)目Items薄荷葉粉添加量Peppermint leaf powder addition level/%0(對(duì)照 Control)0.10.20.4P值 P-value處理Treatment線性Linear二次Quadratic反-7-十九碳烯酸 C19∶1n-7t0.37±0.030.36±0.050.37±0.080.40±0.070.980.780.78順-11-二十烯酸 C20∶1n-11c0.47±0.040.49±0.080.41±0.070.46±0.050.800.730.77反-11-二十烯酸 C20∶1n-11t0.47±0.040.49±0.070.36±0.070.45±0.040.330.410.58芥酸 C22∶1n-13c0.87±0.080.89±0.040.78±0.050.82±0.060.620.360.94巴惟酸 C22∶1n-13t0.08±0.020.06±0.020.07±0.010.11±0.020.160.150.08神經(jīng)酸 C24∶1n-158.81±0.258.83±0.108.90±0.159.39±0.210.120.050.20反亞油酸 C18∶2n-6t0.16±0.010.19±0.010.18±0.010.16±0.020.560.870.19亞油酸 C18∶2n-6c17.15±1.0821.34±1.7919.06±1.4717.41±2.200.290.840.09α-亞麻酸 C18∶3n-30.16±0.020.19±0.020.20±0.020.17±0.040.660.690.25γ-亞麻酸 C18∶3n-60.15±0.020.21±0.030.21±0.020.17±0.050.500.690.15順-11,14-二十碳二烯酸 C20∶2n-11,140.36±0.020.50±0.040.44±0.060.40±0.050.180.820.06HOMO-γ-亞麻酸 C20∶3n-30.40±0.040.51±0.100.55±0.090.49±0.080.650.410.34二十碳三烯酸 C20∶30.57±0.030.70±0.080.70±0.100.55±0.110.480.870.13花生四烯酸 C20∶4n-625.58±1.6021.82±2.2223.62±2.1820.96±2.340.430.220.78二十碳五烯酸 C20∶5n-30.11±0.020.14±0.040.16±0.040.11±0.030.650.780.24二十二碳二烯酸 C22∶20.15±0.020.19±0.010.21±0.020.23±0.040.140.020.74二十二碳三烯酸 C22∶32.06±0.162.87±0.371.78±0.272.40±0.400.120.930.81二十二碳四烯酸 C22∶41.07±0.091.09±0.040.96±0.051.06±0.070.530.630.55二十二碳五烯酸 C22∶5n-60.62±0.110.55±0.090.62±0.090.67±0.090.830.630.49二十二碳五烯酸 C22∶5n-311.62±0.9810.04±0.979.92±0.879.31±0.970.380.110.61單不飽和脂肪酸 MUFA30.91±1.4532.82±1.0331.61±1.3430.39±3.240.840.750.43多不飽和脂肪酸 PUFA57.93±2.8758.38±4.5755.74±3.8450.39±7.400.660.270.56n-6多不飽和脂肪酸 n-6PUFA44.72±2.7441.28±4.0941.80±3.2340.46±3.930.170.600.52n-3多不飽和脂肪酸 n-3PUFA12.34±1.0311.13±1.0810.93±0.9410.51±1.200.080.530.16n-6多不飽和脂肪酸/n-3多不飽和脂肪酸 n-6PUFA/n-3PUFA3.71±0.194.20±0.174.08±0.124.39±0.260.400.610.04

3 討 論

隨著全面禁抗時(shí)代的到來(lái),薄荷作為一種綠色的草本植物,因其具有多種生物活性,將其作為家禽飼糧添加劑已成為人們的研究熱點(diǎn)之一。Akbari等[12]研究表明,在飼糧中單獨(dú)添加薄荷精油對(duì)熱應(yīng)激下肉雞的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響,而同時(shí)添加吡啶甲酸鉻和薄荷精油則可降低肉雞血清中TG和葡萄糖的含量,并增加血清中白蛋白含量;而在冷應(yīng)激下蛋雞飼糧中添加薄荷精油可顯著增加蛋雞采食量和蛋重。Gharetappe等[13]研究同樣發(fā)現(xiàn)在幼齡肉雞飼糧中添加薄荷葉對(duì)肉雞的生長(zhǎng)性能和健康狀況無(wú)顯著影響。這可能是由于植物中的活性萜類化合物被困在分泌腺結(jié)構(gòu)中,使其不能充分發(fā)揮作用,同時(shí)由于家禽消化液的運(yùn)輸時(shí)間相對(duì)較短,所以這一問(wèn)題更為突出[14]。但Toghyani等[15]研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加薄荷可增加28日齡肉雞體重,但對(duì)42日齡終體重?zé)o顯著影響,并且對(duì)血清中的TG和總膽固醇含量也均無(wú)顯著影響,這與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。Abdel-Wareth等[16]研究表明,隨著蛋雞飼糧中薄荷精油水平的增加,蛋雞的產(chǎn)蛋量、蛋重和飼料轉(zhuǎn)化率都呈線性提高。Hussein等[17-18]研究表明,在感染球蟲(chóng)病的肉雞飼糧中單獨(dú)添加薄荷粉或配合洋甘菊和酵母益生菌可有效預(yù)防或減少球蟲(chóng)病對(duì)肉雞的影響,同時(shí)恢復(fù)肉雞采食量并提高飼料轉(zhuǎn)化率,增加腸絨毛高度,降低隱窩深度。本試驗(yàn)結(jié)果表明,飼糧中添加薄荷葉粉在不影響生產(chǎn)性能的前提下,可顯著增加血清中IgG和TP含量,可能對(duì)提高機(jī)體免疫具有促進(jìn)作用,還需進(jìn)一步研究。同時(shí),有增加蛋清中氨基酸含量的趨勢(shì),但對(duì)血清中TG含量無(wú)顯著影響。阮棟等[19]研究發(fā)現(xiàn),禽類血液中TP含量與飼糧代謝能和粗蛋白質(zhì)水平密切相關(guān)。因此,我們推測(cè)在產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加薄荷葉粉可能通過(guò)改變飼糧的代謝能和粗蛋白質(zhì)水平,從而影響血清中TP含量,而其作用機(jī)制還需進(jìn)一步的試驗(yàn)證明。本試驗(yàn)結(jié)果與前人使用薄荷精油或薄荷葉的試驗(yàn)結(jié)果在蛋雞生產(chǎn)性能方面存在差異,可能是由于單位體積內(nèi)薄荷葉粉中薄荷醇和薄荷酮等有效成分含量相對(duì)較低,試驗(yàn)周期較短,對(duì)蛋雞的產(chǎn)蛋性能未產(chǎn)生顯著影響。但也表明在產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加薄荷葉粉在可能提高機(jī)體免疫力的同時(shí)不影響其正常生產(chǎn)性能。

蛋雞的輸卵管包括漏斗部、膨大部、狹部、子宮部和陰道部,其中膨大部是輸卵管中最長(zhǎng)的部分,也是蛋清形成的部分。蛋清中的蛋白是氨基酸組成最接近人類需要且廉價(jià)的優(yōu)質(zhì)動(dòng)物源性蛋白質(zhì)[31-33]。與對(duì)照組相比,飼糧中添加薄荷葉粉對(duì)蛋雞的膨大部和狹部無(wú)顯著影響,因此對(duì)雞蛋的蛋重、蛋白高度和哈氏單等指標(biāo)也不產(chǎn)生顯著影響;但有增加蛋清中多種氨基酸和必需氨基酸含量,提高雞蛋中營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的趨勢(shì),薄荷葉粉可能是通過(guò)增加血清中TP含量調(diào)控膨大部黏膜內(nèi)腺體的分泌或功能從而影響蛋清中氨基酸的組成,改變其營(yíng)養(yǎng)成分,但作用機(jī)制還需進(jìn)一步的研究。同時(shí),由于本試驗(yàn)周期較短,如延長(zhǎng)試驗(yàn)周期,增加薄荷葉粉在產(chǎn)蛋后期蛋雞機(jī)體中的作用時(shí)間,可能對(duì)蛋清中氨基酸含量的影響更為顯著。雞蛋在子宮部的停留時(shí)間最長(zhǎng),薄荷葉粉的添加可能通過(guò)促進(jìn)子宮部黏膜中蛋殼腺體分泌物的積累,增加蛋殼強(qiáng)度,改善蛋形指數(shù)同時(shí)降低輸卵管重,而Abdel-Wareth等[16]研究表明,在海蘭褐蛋雞產(chǎn)蛋后期飼糧中添加干薄荷葉可顯著增加蛋殼厚度,對(duì)蛋白高度無(wú)顯著影響,與本試驗(yàn)在蛋殼厚度上的結(jié)果存在差異可能是由于所選蛋雞品種和試驗(yàn)周期不同導(dǎo)致。

4 結(jié) 論

在產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加0.1%或0.4%薄荷葉粉可在保證蛋雞生產(chǎn)性能的同時(shí)改善蛋品質(zhì)并有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的潛力。