PNU-282987對顳葉癲癇模型大鼠認(rèn)知功能的影響及機(jī)制Δ

李永格，周 舒，劉慶春，未小明，張 冬，馬鳳巧（.南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部，河南 南陽 473000；2.昆明醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程研究中心，昆明 650000）

癲癇是由腦神經(jīng)元突發(fā)異常放電導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的常見慢性腦部疾病。癲癇患者中有約30%～40%會發(fā)展成為藥物難治性癲癇，臨床上以顳葉癲癇（temporal lobe epilepsy，TLE）最為常見[1]。TLE 易反復(fù)發(fā)作，可引起海馬神經(jīng)元大量凋亡壞死，常伴隨認(rèn)知功能障礙，主要表現(xiàn)為患者學(xué)習(xí)記憶能力降低，嚴(yán)重威脅其身心健康[2]。研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)炎癥與癲癇的發(fā)生、發(fā)展以及認(rèn)知功能障礙密切相關(guān)[3]。小膠質(zhì)細(xì)胞作為神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)參與調(diào)節(jié)神經(jīng)炎癥的關(guān)鍵免疫細(xì)胞，其過度激活會導(dǎo)致炎癥因子的大量產(chǎn)生，引起中樞神經(jīng)元損傷，是導(dǎo)致TLE的病理因素之一[4]。因此，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化，減輕神經(jīng)炎癥導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷，可能成為TLE的治療新策略。

膽堿能抗炎通路（cholinergic anti-inflammatory pathway，CAP）可通過刺激迷走神經(jīng)釋放乙酰膽堿（acetylcholine，ACh），并與巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞上的α7 煙堿型乙酰膽堿受體（α7 nicotinic acetylcholine receptor，α7nAChR）相結(jié)合來減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，是體內(nèi)重要的神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)通路；其中，α7nAChR是CAP的核心信號受體，除分布在外周組織器官外，海馬小膠質(zhì)細(xì)胞上也有大量分布[5]，激活α7nAChR 能夠抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化[6]。核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是細(xì)胞內(nèi)的信號分子，α7nAChR 被激活后，能夠抑制NF-κB 的磷酸化和核遷移，降低促炎因子的表達(dá)[7]。由此可知，α7nAChR/NF-κB 信號通路具有調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞激活、抑制中樞炎癥反應(yīng)的作用。PNU-282987（分子式為C14H17ClN2O）是一種固態(tài)的、晶體狀的高選擇性α7nAChR激動劑，可作用于α7nAChR/NF-κB信號通路，減輕阿爾茨海默病[8]、膿毒癥腦病[9]等疾病的中樞炎癥反應(yīng)，保護(hù)神經(jīng)元[10]，但其能否在TLE 中發(fā)揮作用還未見相關(guān)報道?；诖?，本研究首先建立TLE模型大鼠，考察PNU-282987 對模型大鼠認(rèn)知功能的影響，并基于α7nAChR/NF-κB信號通路初探其作用機(jī)制，以期為TLE的治療提供新思路與新靶點(diǎn)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

本研究所用動物為SPF級SD雄性大鼠，共60只，體重290～310 g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2019-0008。所有大鼠均于晝夜節(jié)律自然變化、室溫23～25 ℃、相對濕度50%～60%的環(huán)境下飼養(yǎng)，自由攝食、飲水。本實(shí)驗(yàn)獲得南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校倫理委員會批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號為南陽醫(yī)專動倫[2022]第005號。

1.2 主要藥品與試劑

PNU-282987（批號M06398，純度99.37%）購自北京百奧萊博科技有限公司；甲基牛扁亭（methyllycaconitine，MLA）（α7nAChR 阻斷劑，批號M-168，純度99.03%）購自美國Sigma公司；氯化鋰（批號L511）購自湖北威德利化學(xué)試劑有限公司；東莨菪堿（批號H32022184）購自徐州萊恩藥業(yè)有限公司；毛果蕓香堿（批號YJ102834）購自上海一基實(shí)業(yè)有限公司；腫瘤壞死因子ɑ（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）和IL-1β 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（批號分別為ml102828、ml002859、ml037373）購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；RIPA 蛋白裂解液、BCA 蛋白定量試劑盒、ECL 顯影液（批號分別為89900、NCI3225、32209）購自英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司；兔源α7nAChR 多克隆抗體、小鼠源離子鈣接頭蛋白1（ionized calcium-binding adapter molecule-1，IBA-1）單克隆抗體（批號分別為ab10096、ab283319）購自英國Abcam 公司；兔源NF-κB p65 多克隆抗體、兔源磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）多克隆抗體（批號分別為8242、3033）購自美國Cell Signaling 公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗（批號BA1055）購自武漢博士德生物工程有限公司；Alexa Fluor 594標(biāo)記的羊抗小鼠IgG二抗（批號115-585-146）購自美國Jackson 公司；尼氏染色試劑盒（批號C0117）購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司等。

1.3 主要儀器

Morris 水迷宮購自成都泰盟儀器有限公司；RT-6100 型酶標(biāo)儀購自美國Rayto 公司；164-5070 型蛋白電泳儀、Chemi XRS+型凝膠成像系統(tǒng)購自美國BioRad 公司；EMUC7FC7型冷凍超薄切片機(jī)購自德國Leica公司；Axio Observe A1 型倒置相差熒光顯微鏡購自德國Zeiss公司等。

2 方法

2.1 分組、給藥與造模

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后開始實(shí)驗(yàn)。將大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、PNU-282987 組和MLA+PNU-282987組，每組15 只。除對照組外，其余各組大鼠均復(fù)制TLE模型，具體參考文獻(xiàn)[11]方法：先腹腔注射氯化鋰（127 mg/kg）24 h后，再腹腔注射東莨菪堿（1 mg/kg）以阻斷腹腔注射毛果蕓香堿的外周膽堿能效應(yīng)；注射東莨菪堿30 min 后，腹腔注射毛果蕓香堿（35 mg/kg）。觀察大鼠癲癇發(fā)作情況，按照Racine 標(biāo)準(zhǔn)判斷癲癇發(fā)作程度，當(dāng)其發(fā)生癲癇的級別超過Ⅳ級，持續(xù)時間超過1 h時，表明造模成功。隨即給藥，其中，PNU-282987組大鼠腹腔注射3 mg/kg PNU-282987[10]（臨用時以生理鹽水溶解）；MLA+PNU-282987組大鼠先腹腔注射6 mg/kg MLA（劑量根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置，臨用時以生理鹽水溶解）阻斷α7nAChR，30 min 后再腹腔注射3 mg/kg PNU-282987；對照組與模型組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。腹腔注射時間統(tǒng)一在每天上午9：00，每天1次，連續(xù)2周。

2.2 大鼠癲癇發(fā)作行為觀察

連續(xù)給藥2 周后，觀察大鼠癲癇發(fā)作行為并根據(jù)Racine標(biāo)準(zhǔn)對其進(jìn)行評分，記錄大鼠癲癇發(fā)作持續(xù)時間。

2.3 大鼠認(rèn)知功能檢測

末次給藥后的第2 天，采用Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測各組大鼠認(rèn)知水平，整個測試時間為6 d，每天測試2次。其中，第1～5 天為定位航行實(shí)驗(yàn)：將大鼠分別從4 個不同象限面向池壁放入水中，記錄其在60 s內(nèi)從入水到找到逃生平臺所需要的時間，即逃避潛伏期；若在60 s 內(nèi)沒有找到平臺，逃避潛伏期時間記為60 s。將大鼠放在逃生平臺上停留20 s，增加大鼠對逃生平臺的記憶力，然后進(jìn)行下一象限測試。實(shí)驗(yàn)第6天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)：將逃生平臺撤掉，將大鼠從逃生平臺所在對面象限放入水池，自由游泳60 s，記錄大鼠在平臺象限停留的時間以及穿越平臺的次數(shù)。

2.4 大鼠海馬組織CA1區(qū)神經(jīng)元病理學(xué)形態(tài)觀察

采用Nissl 染色法進(jìn)行觀察。Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)選擇5只大鼠麻醉并采用左心室灌流，斷頭取全腦，于4%多聚甲醛溶液中固定12 h；經(jīng)脫水、包埋、切片后，取部分切片（剩余部分進(jìn)行IBA-1陽性表達(dá)的檢測）進(jìn)行Nissl染色；以95%乙醇脫水，二甲苯透明5 min，封片；采用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠海馬組織CA1區(qū)神經(jīng)元的病理學(xué)形態(tài)。

2.5 大鼠海馬組織中TNF-α、IL-6、IL-1β水平的檢測

采用ELISA 法進(jìn)行檢測。每組隨機(jī)選擇5 只大鼠立即斷頭處死，快速取腦組織并分離兩側(cè)海馬，用冰生理鹽水沖洗表面，稱取海馬組織質(zhì)量；用剪刀將海馬組織剪碎，加入RIPA 裂解液，并使用超聲研磨機(jī)磨碎，以15 000 r/min離心15 min，吸取上清液。嚴(yán)格參照ELISA試劑盒說明書方法檢測大鼠海馬組織中TNF-α、IL-6和IL-1β水平。

2.6 大鼠海馬組織中IBA-1陽性表達(dá)細(xì)胞的檢測

采用免疫熒光染色法進(jìn)行檢測。選取“2.4”項(xiàng)下的冰凍切片，室溫下放置30 min，以PBS 緩沖液洗3 遍（每次5 min），滴加封閉液（5%BSA+0.3%TritonX-100），在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育1 h；甩去多余封閉液，滴加IBA-1 一抗（稀釋度為1∶500），于4 ℃孵育過夜；以PBS洗滌3次（每次5 min）并吸干液體，滴加Alexa Fluor 594標(biāo)記的二抗（稀釋度為1∶200），室溫下孵育1 h；以PBS避光沖洗3 次（每次5 min），滴加DAPI 復(fù)染細(xì)胞核后室溫下避光孵育10 min，沖洗后用抗熒光淬滅劑封片；采用倒置相差熒光顯微鏡觀察并采集圖像，通過圖像分析軟件計數(shù)每平方毫米中的IBA-1陽性細(xì)胞數(shù)量。

2.7 大鼠海馬組織中α7nAChR/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測

采用Western blot 法進(jìn)行檢測。每組隨機(jī)選擇5 只大鼠，按“2.5”項(xiàng)下方法收集大鼠海馬組織的上清液，按BCA法計算上清液中的蛋白濃度；在等量目標(biāo)蛋白中加入緩沖液，煮沸，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，加入封閉液在4 ℃下封閉過夜；加入α7nAChR、NF-κB p65、p-NF-κB p65 一抗（稀釋度分別為1∶500、1∶1 000、1∶500），于4 ℃下孵育過夜；以TBST 緩沖液洗膜，加入二抗（稀釋度為1∶5 000），常溫下孵育50 min；以TBST 緩沖液洗膜，ECL 發(fā)光液顯影，成像，使用Quantity One 軟件對目的蛋白的灰度值進(jìn)行分析，并計算目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白（GAPDH）灰度值的比值，以表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 PNU-282987對TLE模型大鼠癲癇發(fā)作行為的影響

對照組大鼠無癲癇發(fā)作。與對照組比較，模型組大鼠癲癇評分及發(fā)作持續(xù)時間均顯著增加（P＜0.05）；與模型組比較，PNU-282987 組大鼠上述指標(biāo)均顯著減少（P＜0.05）；與PNU-282987 組比較，MLA+PNU-282987組大鼠上述指標(biāo)均顯著增加（P＜0.05），且與模型組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠癲癇發(fā)作行為和空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝15）

表1 各組大鼠癲癇發(fā)作行為和空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝15）

a：與對照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與PNU-282987組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組PNU-282987組MLA+PNU-282987組癲癇評分/分0 4.25±0.48a 1.37±0.23b 4.02±0.41c癲癇發(fā)作持續(xù)時間/s 0 146.38±17.36a 80.19±10.12b 140.25±15.23c原平臺象限停留時間/s 48.76±5.14 25.19±3.12a 37.23±3.36b 29.33±2.82c穿過平臺次數(shù)/次7.26±0.74 1.96±0.13a 5.21±0.48b 2.26±0.32c

3.2 PNU-282987對TLE模型大鼠認(rèn)知功能的影響

與對照組比較，模型組大鼠逃避潛伏期顯著延長（P＜0.05），原平臺象限停留時間及穿越平臺次數(shù)均顯著減少（P＜0.05）；與模型組比較，PNU-282987 組大鼠逃避潛伏期時間顯著縮短（P＜0.05），原平臺象限停留時間及穿越平臺次數(shù)均顯著增加（P＜0.05）；與PNU-282987 組比較，MLA+PNU-282987 組大鼠逃避潛伏期時間顯著延長（P＜0.05），原平臺象限停留時間及穿越平臺次數(shù)均顯著減少（P＜0.05），且與模型組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1、表2。

表2 各組大鼠逃避潛伏期的檢測結(jié)果（±s，n＝15，s）

表2 各組大鼠逃避潛伏期的檢測結(jié)果（±s，n＝15，s）

a：與對照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與PNU-282987組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組PNU-282987組MLA+PNU-282987組第1天40.97±4.37 59.38±6.14a 50.28±4.89b 57.29±5.36c第2天35.74±3.84 52.03±6.68a 42.30±4.17b 51.68±5.01c第3天30.64±2.75 45.16±8.39a 36.13±3.29b 40.81±4.27c第4天21.68±3.11 36.09±6.57a 27.42±2.35b 33.28±3.16c第5天15.26±1.62 30.64±4.43a 20.22±2.71b 28.15±2.54c

3.3 PNU-282987 對TLE 模型大鼠海馬組織CA1 區(qū)神經(jīng)元病理學(xué)形態(tài)的影響

對照組大鼠海馬組織細(xì)胞質(zhì)中尼氏小體豐富且神經(jīng)元排列整齊，形態(tài)完整。模型組大鼠海馬組織細(xì)胞質(zhì)中尼氏小體明顯減少且神經(jīng)元排列紊亂，部分細(xì)胞水腫，呈現(xiàn)空泡變性壞死，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。經(jīng)PNU-282987處理后，大鼠海馬組織細(xì)胞質(zhì)中尼氏小體明顯增多，神經(jīng)元排列致密，空泡變性壞死減少，損傷程度明顯減輕。經(jīng)MLA 阻斷α7nAChR 后，PNU-282987 對癲癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用被逆轉(zhuǎn)。結(jié)果見圖1。

圖1 各組大鼠海馬組織CA1區(qū)神經(jīng)元的Nissl染色圖

3.4 PNU-282987 對TLE 模型大鼠海馬組織中炎癥因子水平的影響

與對照組比較，模型組大鼠海馬組織中TNF-α、IL-6和IL-1β 水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，PNU-282987 組大鼠海馬組織中上述指標(biāo)水平均顯著降低（P＜0.05）；與PNU-282987 組比較，MLA+PNU-282987組上述指標(biāo)水平均顯著升高（P＜0.05），且與模型組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠海馬組織中炎癥因子水平的檢測結(jié)果（±s，n＝5，pg/mL）

表3 各組大鼠海馬組織中炎癥因子水平的檢測結(jié)果（±s，n＝5，pg/mL）

a：與對照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與PNU-282987組比較，P＜0.05。

IL-1β 30.08±2.76 108.56±9.16a 61.74±5.48b 107.65±9.39c組別對照組模型組PNU-282987組MLA+PNU-282987組TNF-α 48.26±5.14 115.16±10.53a 79.58±6.89b 110.25±10.53c IL-6 40.13±4.21 84.35±7.99a 68.71±6.75b 80.11±7.84c

3.5 PNU-282987 對TLE 模型大鼠海馬組織中IBA-1陽性表達(dá)細(xì)胞的影響

與對照組[（10.36±2.97）個/mm2]比較，模型組大鼠海馬組織中IBA-1陽性細(xì)胞數(shù)量[（56.89±8.32）個/mm2]顯著增加（P＜0.05）；與模型組比較，PNU-282987組大鼠海馬組織中IBA-1陽性細(xì)胞數(shù)量[（23.18±1.97）個/mm2]顯著降低（P＜0.05）；與PNU-282987 組比較，MLA+PNU-282987 組大鼠海馬組織中IBA-1 陽性細(xì)胞數(shù)量[（52.12±7.14）個/mm2]顯著增加（P＜0.05），且與模型組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖2。

圖2 各組大鼠海馬組織中IBA-1陽性表達(dá)細(xì)胞的熒光圖

3.6 PNU-282987對TLE模型大鼠海馬組織中α7nAChR/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與對照組比較，模型組大鼠海馬組織中α7nAChR表達(dá)水平顯著降低，NF-κB p65、p-NF-κB p65 表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，PNU-282987 組大鼠海馬組織中上述指標(biāo)表達(dá)水平均顯著逆轉(zhuǎn)（P＜0.05）；與PNU-282987 組比較，MLA+PNU-282987 組大鼠海馬組織中上述指標(biāo)表達(dá)水平均顯著逆轉(zhuǎn)（P＜0.05），且與模型組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖3、圖4。

圖3 各組大鼠海馬組織中α7nAChR/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的電泳圖

圖4 各組大鼠海馬組織中α7nAChR/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果（±s，n＝5）

4 討論

TLE為成年人中發(fā)病率最高的一種癲癇，占難治性癲癇的一半以上[12]。TLE患者通常伴有嚴(yán)重的認(rèn)知功能障礙，臨床上首選抗癲癇藥物治療[13]。但傳統(tǒng)藥物只能控制癲癇發(fā)作癥狀，且伴有嚴(yán)重的副作用，因此，積極開發(fā)治療新藥非常重要。神經(jīng)炎癥反應(yīng)可能與癲癇的發(fā)病機(jī)制之間存在復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系[4]，尋找靶向神經(jīng)炎癥通路的藥物可為癲癇的治療提供新方法。

小膠質(zhì)細(xì)胞作為神經(jīng)系統(tǒng)的主要免疫效應(yīng)細(xì)胞，其介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)在癲癇的發(fā)展中起關(guān)鍵作用[14]。有文獻(xiàn)指出，繼發(fā)性癲癇患者中活化小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增加[15]，并且癲癇發(fā)作持續(xù)時間以及頻率與小膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度明顯相關(guān)[16]。激活的小膠質(zhì)細(xì)胞有M1和M2 兩種表型，其中M1 型小膠質(zhì)細(xì)胞主要分泌TNF-α、IL-6等促炎因子，促進(jìn)神經(jīng)炎癥反應(yīng)，加重神經(jīng)損傷；M2型小膠質(zhì)細(xì)胞主要分泌IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子β等抗炎因子，抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[17]。α7nAChR為煙堿受體中的一種亞型，是由5 個α7 亞基構(gòu)成的同源多聚體，在海馬小膠質(zhì)細(xì)胞上有大量分布[6]?；罨摩?nAChR 可減輕小膠質(zhì)細(xì)胞在腦組織中引起的炎癥反應(yīng)及神經(jīng)損傷[18]，因此，本研究以特異性α7nAChR 激動劑PNU-282987 干預(yù)TLE 模型大鼠，并通過觀察大鼠癲癇發(fā)作以及Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)對PNU-282987的藥效進(jìn)行評價。結(jié)果顯示，PNU-282987 可抑制模型大鼠癲癇發(fā)作并改善其學(xué)習(xí)記憶水平，但該作用能夠被MLA所逆轉(zhuǎn)，說明PNU-282987發(fā)揮作用的機(jī)制與α7nAChR有關(guān)。

海馬是研究癲癇伴隨學(xué)習(xí)記憶障礙最合適的腦區(qū)[19]。一方面，海馬與癲癇的發(fā)生、發(fā)展緊密聯(lián)系，尤其是CA1 區(qū)、CA3 區(qū)是癲癇研究的常見區(qū)域[20]。另一方面，海馬又是大腦中負(fù)責(zé)長期學(xué)習(xí)記憶能力、空間定位等認(rèn)知功能的區(qū)域[21]。反復(fù)的癲癇發(fā)作會導(dǎo)致海馬受損，降低海馬信息處理的突觸可塑性，引起長期記憶功能障礙[22]。本研究結(jié)果顯示，以PNU-282987干預(yù)后，大鼠海馬神經(jīng)元損傷程度明顯減輕，這說明PNU-282987對TLE 模型大鼠海馬神經(jīng)元具有保護(hù)作用。為進(jìn)一步分析PNU-282987是否通過逆轉(zhuǎn)小膠質(zhì)細(xì)胞激活來減輕中樞炎癥反應(yīng)，本研究還檢測了小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白IBA-1（其表達(dá)量直接反映小膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度[23]）以及炎癥因子的表達(dá)。結(jié)果顯示，經(jīng)PNU-282987干預(yù)后，TLE模型大鼠海馬組織中IBA1、TNF-α、IL-6和IL-1β的表達(dá)均降低，并且該作用被MLA 逆轉(zhuǎn)，這說明PNU-282987可通過激活α7nAChR，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活，進(jìn)而減輕TLE模型大鼠海馬組織內(nèi)的炎癥反應(yīng)。

α7nAChR 活化后的抗炎作用與NF-κB 密切相關(guān)，NF-κB作為一種細(xì)胞內(nèi)廣泛表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其激活是炎癥反應(yīng)復(fù)雜細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[24]。Lei等[25]研究發(fā)現(xiàn)α7nAChR介導(dǎo)的CAP分子機(jī)制主要?dú)w因于NF-κB 轉(zhuǎn)錄。因此，CAP 將通過α7nAChR 介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號通路抑制NF-κB 核移位，減少細(xì)胞因子的表達(dá)，達(dá)到抗炎作用[26]。本研究結(jié)果顯示，以PNU-282987 干預(yù)后，模型大鼠海馬組織中α7nAChR表達(dá)升高，NF-κB表達(dá)降低，且該作用可被MLA逆轉(zhuǎn)，這說明PNU-282987可通過激活海馬組織中小膠質(zhì)細(xì)胞上的α7nAChR，下調(diào)NF-κB表達(dá)。

綜上所述，PNU-282987 可改善TLE 模型大鼠的認(rèn)知功能障礙，其機(jī)制可能是通過激活α7nAChR/NF-κB信號通路，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而減輕海馬神經(jīng)元損傷。