藥品企業(yè)微生物實驗室質(zhì)量管理探究

胡 林

（華潤江中藥業(yè)股份有限公司，江西 南昌 330041）

近年來，人們對藥品安全問題越來越關(guān)注，為保障藥品質(zhì)量安全，企業(yè)越來越注重產(chǎn)品質(zhì)量檢查，因此，對藥品檢驗實驗室的能力也就有更高要求。藥品檢驗實驗室通常包括理化實驗室和微生物實驗室兩部分。經(jīng)過多年的發(fā)展，理化實驗室具備較高水平，已經(jīng)逐步形成現(xiàn)代化理化檢驗分析能力，擁有現(xiàn)代化檢驗分析儀器，同時，理化檢驗員具備高學(xué)歷及專業(yè)技能，基本能滿足高質(zhì)量發(fā)展要求。而微生物實驗室沒能得到很好的發(fā)展。直到現(xiàn)在微生物檢測設(shè)備儀器發(fā)展緩慢，檢驗員大都是其他崗位調(diào)配，缺乏微生物專業(yè)知識，實驗室標準化程度不高，質(zhì)量管理體系文件落后。隨著藥品行業(yè)的發(fā)展，生產(chǎn)部門要求微生物檢驗?zāi)軌蚣皶r有效地提供準確產(chǎn)品數(shù)據(jù)，為中間體的后續(xù)生產(chǎn)和成品的及時放行提供質(zhì)量依據(jù)，因此，提高微生物實驗室質(zhì)量管理水平勢在必行。

1 微生物的特點

微生物是一大類個體微小的生物群體，其生物特性就決定其檢驗的特殊性。首先，樣品中微生物污染程度。在檢驗前，對所檢樣品的微生物污染程度是未知，因此，所選取的方法和稀釋梯度都只能在檢測結(jié)果中進行推斷。其次，樣品中微生物污染種類。微生物種類繁多，且同一種微生物的生理結(jié)構(gòu)和形態(tài)也隨時間不同而不同，樣品受污染的影響就復(fù)雜。受時間及空間的影響，同一批次產(chǎn)品可能被不同特性的微生物污染，需要采取不同的檢測方法才能更好地檢測出樣品微生物的污染情況。再次，樣品中微生物污染分布。由于樣品受微生物污染的不確定性，因此，在分布中呈現(xiàn)不均勻。不同部位的微生物檢測結(jié)果完全不同，即使同一部位多次取樣，最后的結(jié)果也不會相同。不同于化學(xué)物質(zhì)，微生物生長和分布具有復(fù)雜和多樣的特點。因此，在判斷微生物檢驗結(jié)果的時候，檢驗員的微生物專業(yè)知識水平就尤為重要。除此之外，檢驗過程中，任何一個步驟過程都有可能出現(xiàn)微生物污染，這都直接影響檢驗結(jié)果，所以對微生物檢驗整體控制的必要性也尤為突出。

2 微生物檢驗的特點

《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）是國家監(jiān)督管理藥品的法定標準，制藥企業(yè)在進行微生物檢驗的時候，均參照《中國藥典》里的微生物限度法進行檢驗。微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項目包括需氧菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)總數(shù)及控制菌檢查。與理化檢驗具有明確的檢驗方法不同，微生物檢驗只有指導(dǎo)原則，針對不同產(chǎn)品并無檢驗方法，需要根據(jù)實驗室的實際情況進行各自的方法學(xué)，因此可能出現(xiàn)同樣的樣品，在不同的實驗室會有不同的微生物檢驗方法。根據(jù)樣品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液，這就需要檢驗員具有足夠的檢驗經(jīng)驗和微生物知識，才能對樣品采取合理的處理方法。雖然，藥典有供試液的制備方法，但很多情況下企業(yè)的樣品依然需要根據(jù)自己的實際情況進行供試液的制備。

2.1 計數(shù)適用性檢查

計數(shù)適用性檢查需要使用到大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉這五種菌株進行檢驗。其中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌為細菌，白色念珠菌為真菌，黑曲霉為霉菌，他們代表不同類型的微生物，在做方法學(xué)的時候能夠具有代表性。微生物檢驗方法學(xué)的需求在于試驗條件的影響，特別是樣品中的物質(zhì)對微生物生長是否具有抑制或者促進作用。每個實驗室就需要根據(jù)自身的情況設(shè)計方法學(xué)，就會出現(xiàn)同樣的樣品可采取不同的檢驗方法。計數(shù)方法主要包括平皿法和薄膜過濾法。中成藥和中藥提取物，由于含有大量不溶性物質(zhì)，不能完全通過薄膜過濾，會有沉淀在薄膜上，因此大部分會采用平皿法對樣品進行微生物方法學(xué)驗證。固體制劑的樣品進行處理的時候，都需要加入緩沖液制備成液體供試品，然后根據(jù)樣品的污染情況稀釋成一定比例，再加入菌種進行方法學(xué)驗證。然而，部分中藥具有抑菌效果，可采取加抑菌劑或者增加稀釋劑的方法來處理樣品。非無菌藥品的微生物限度標準表明，需氧菌總數(shù)與霉菌和酵母菌總數(shù)的限度是不一致的，那在供試品稀釋的時候就會出現(xiàn)，稀釋程度越高有利于微生物的生長并且方便計數(shù)，能夠得到較好的檢驗數(shù)據(jù)?？墒亲詈蟮慕Y(jié)論，就會出現(xiàn)在限度范圍內(nèi)需氧菌總數(shù)能夠進行檢測，而霉菌和酵母菌總數(shù)的檢驗數(shù)據(jù)就不靈敏，不能有效對樣品的進行監(jiān)控。因此，在選擇適宜稀釋級進行微生物檢驗方法學(xué)的時候，需要根據(jù)樣品的微生物限度標準來制定方案，才能保證計數(shù)方法學(xué)通過后的順利實行。

2.2 控制菌適用性檢查

控制菌檢查是依據(jù)《中國藥典》的要求，基于藥品的給藥途徑和對患者健康潛在的危害以及中藥的特殊性而制訂的。因此不同的樣品其控制菌檢查項目是不同的。相比于計數(shù)方法學(xué)，控制菌檢查具有明確的檢驗方法，各企業(yè)可依據(jù)法規(guī)要求進行樣品的方法學(xué)驗證?？刂凭谴_定菌種，在判斷的時候，都在相應(yīng)鑒定培養(yǎng)基上出現(xiàn)陽性生化反應(yīng)作為判斷依據(jù)。如果在相應(yīng)培養(yǎng)基上有類似的微生物生長，并且想繼續(xù)驗證該微生物是否是相應(yīng)種屬的控制菌，那就要開展各類生化鑒別實驗，包括：細菌生化試驗、糖發(fā)酵試驗、賴氨酸脫酶試驗等等，同時還可以開展基因方面的分子鑒別，通過特定基因序列的比對來確定試驗中出現(xiàn)微生物的種屬。因此控制菌試驗對檢驗員的生物學(xué)水平具有較高的要求，這樣檢驗員才能順利開展相應(yīng)試驗。

3 微生物實驗室的管理

3.1 人員

微生物實驗室的人員，需要具備非常強的微生物專業(yè)知識，熟悉相關(guān)法律法規(guī)及綜合素質(zhì)較高的人員。目前，微生物實驗室人員大都由理化檢驗及其他部門調(diào)崗而來，所以工作人員也就缺乏微生物相關(guān)專業(yè)知識及工作經(jīng)驗。微生物檢驗方法不同于其他檢驗，樣品的檢驗結(jié)果，要檢驗員憑自身的專業(yè)水平進行統(tǒng)計和分析，具有非常強的主觀性。因此，對于微生物檢驗人員需制定相應(yīng)的管理措施，保證檢驗員具有相應(yīng)的專業(yè)知識。首先，優(yōu)化微生物實驗室人員架構(gòu)，實驗室必須至少有一名具有微生物專業(yè)背景的人員。實驗室的培訓(xùn)工作和文件起草等工作，由具有微生物專業(yè)知識的人完成。并且，開展理論知識的培訓(xùn)，讓崗位上的每個檢驗員都具備一定的專業(yè)知識，能隨時開展微生物檢驗。其次，完善考核制度，定期對檢驗員進行微生物實驗各項操作考核，增強檢驗員對微生物生長特性的敏感性，進而保證檢驗結(jié)果的準確性。再次，對員工的培訓(xùn)效果進行評估和總結(jié)，可通過內(nèi)外部能力比對的方式，考察其是否達到相應(yīng)的效果。每年都對檢驗人員的微生物知識和操作技能進行培訓(xùn)和考核，才能保障其微生物專業(yè)知識及高水平的檢驗?zāi)芰?，進而對微生物檢驗結(jié)果準確性達到有效保障。

3.2 設(shè)備

微生物檢驗是無菌操作，要達到這條件，就需要穩(wěn)定的實驗設(shè)備。微生物檢驗最重要的設(shè)備是滅菌器，其性能效果直接決定檢驗結(jié)果，因此滅菌設(shè)備的管理就是重中之重。滅菌設(shè)備作為特種設(shè)備，其操作人員必須具備上崗資格，還要有輪換人員，保障每次使用的安全性。操作滅菌器的時候，要進行滅菌溫度曲線的日常管理，對每次滅菌過程中溫度的上升、保溫的時間、腔體內(nèi)的壓力等都應(yīng)進行監(jiān)控。而且，設(shè)備每年都要進行滅菌運行和性能確認，確保設(shè)備的各項數(shù)據(jù)指標都達到規(guī)范需求，滅菌程序符合設(shè)計及認證標準，進而保證滅菌的有效性。微生物檢驗的環(huán)境也必須得到有效保障，潔凈區(qū)每年都應(yīng)進行過濾效果及風(fēng)速等檢定，并對效果進行評估，形成靜態(tài)和動態(tài)的空氣環(huán)境檢測流程，進而控制微生物操作中的微生物污染。生物安全柜和超凈工作臺是兩種不同類型的設(shè)備，在使用過程中，需要根據(jù)設(shè)備的特定進行日常維護，并制定性能驗證方案。同時，其他檢驗相關(guān)設(shè)備包括：細菌培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電子天平等都需要進行日常監(jiān)控，完善設(shè)備使用日志，這樣就可追溯影響微生物檢測結(jié)果的因素。

3.3 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基，是供給微生物生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)?，F(xiàn)在技術(shù)水平的發(fā)展，都使用商業(yè)化培養(yǎng)基，使用方便，種類繁多。但不同公司之間的產(chǎn)品存在差異，需要制定完善的驗收制度。首先，確認廠家資質(zhì)，并要求提供生產(chǎn)培養(yǎng)基的質(zhì)量證書和報告單。其次，接收到的培養(yǎng)基按照規(guī)定進行適應(yīng)性實驗，檢定是否滿足本實驗室的檢驗要求。再次，對不同廠家培養(yǎng)基之間的性能差異進行登記，以便選擇更適用于本實驗室培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的使用和存放，可根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書的要求來進行。由于培養(yǎng)基非常容易吸潮，因此使用和存放的濕度也是考慮的因素。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì)，非常適合微生物生長，在使用后，無法判斷是否有微生物在培養(yǎng)基中進行生長繁殖。因為，平皿上是否有菌是通過肉眼可見菌落進行判斷，但經(jīng)過培養(yǎng)后的培養(yǎng)基，可能存在肉眼不可見的微生物。因此，使用后的培養(yǎng)基必須經(jīng)過滅菌處理，這不僅可以殺死里面可能存在的微生物，而且破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)，減少培養(yǎng)基的效果。建立健全培養(yǎng)基的整個使用流程體系，從購買到配制再到銷毀，完善培養(yǎng)基管理體系，這樣就能有效保障微生物實驗室的順利運行。

3.4 菌種

實驗室的菌種均是從官方菌種保藏機構(gòu)獲得的標準菌株，轉(zhuǎn)接一代后開始在本實驗室進行保藏。按照管理文件的要求，建立完善的管理記錄及保藏條件。菌種必須具有詳實的標識，含各項信息，包括：菌種名稱、來源、編號、特征、傳代時間、培養(yǎng)基名稱、培養(yǎng)條件、保藏方法、保藏位置等，并采用雙人復(fù)核的方法。菌種從領(lǐng)取到使用，再到銷毀應(yīng)建立全監(jiān)控臺賬，由實驗室負責(zé)人對過程進行監(jiān)督。同時，微生物檢驗員應(yīng)輪換進行菌種的傳代及活化，并開展相應(yīng)的鑒別工作，其包括：形態(tài)鑒別、生化反應(yīng)等，如有條件還可進行基因鑒別。這樣使得檢驗員能夠熟悉各菌種的特性特點，也可提高檢驗結(jié)果的準確性。

3.5 生物安全

微生物實驗室的生物安全是保障實驗室安全的重要工作。環(huán)境中存在各式各樣的微生物，特別是耐受性強的芽孢菌，很容易引起培養(yǎng)物的污染，進而影響檢驗結(jié)果的判斷。此外，外來檢品中還可能存在各種病原性微生物，這就需要微生物檢驗人員具有敏銳的生物安全防護意識，做好自身及周邊的保護。因此，實驗室制定各項生物安全制度，就是為了保障檢驗的準確性和實驗室人員的安全。微生物實驗室應(yīng)建立廢棄物與泄漏物的應(yīng)急處理方案，并將方案以圖片的形式貼在顯眼處，保證任何人在遇到緊急情況的時候，能夠按照方案進行緊急處理。定期開展全面的消毒效果驗證，包括：紫外燈、臭氧發(fā)生器、消毒液等嚴格控制消毒過程，確保消毒的有效性。針對實驗室可能出現(xiàn)的微生物污染源，包括：外來樣品攜帶的微生物、人員進入實驗室攜帶的微生物、空氣流動帶來的微生物等，建立可追溯文件，即可以找到檢驗過程中，可能出現(xiàn)的偏差，也可以有效加強實驗室的風(fēng)險控制。對于可能出現(xiàn)的污染微生物，檢驗員必須具備較強的專業(yè)能力，能夠區(qū)分污染對微生物檢驗結(jié)果的影響，并熟練使用專業(yè)技術(shù)手段來進行生物安全方面的控制。同時，防止交叉污染也是生物安全防護的重點之一。為防止交叉污染，微生物檢驗室區(qū)域應(yīng)該獨立于其他實驗室區(qū)域，嚴格控制檢驗人員數(shù)量。

4 實驗室體系文件的管理

文件體系是微生物實驗室管理的重要環(huán)節(jié)。實驗室需要根據(jù)實際情況制定質(zhì)量管理體系文件。體系文件要能反映實驗室的檢測能力和范圍，保證檢驗結(jié)果的公正性，充分體現(xiàn)影響質(zhì)量活動的各種要素，并且人員能夠按照體系文件將實際工作落到實處，進而有效控制質(zhì)量活動的開展。實驗室嚴格按照各項條款編寫文件，明確分工并責(zé)任到人，確保質(zhì)量管理體系有效運行。質(zhì)量管理體系文件建立后，各種質(zhì)量活動都如實進行填寫，真實地反映實驗室的運行情況。實驗室還配備監(jiān)督員，在負責(zé)人的指導(dǎo)下，監(jiān)督各項質(zhì)量活動，使所有工作都在體系受控中運行。實驗室人員是文件系統(tǒng)的重要因素，其對管理體系的理解和執(zhí)行等都直接影響各項質(zhì)量活動的正常運行。由于微生物檢驗的特殊性，檢驗員的專業(yè)水平直接影響檢驗結(jié)果的準確性，所以更需要運用質(zhì)量體系來管理微生物檢驗員。比如：開展經(jīng)常性的培訓(xùn)與監(jiān)督，并將結(jié)果形成考核機制，提升員工的技能水平，不斷完善其微生物檢驗?zāi)芰Α?/p>

5 總結(jié)

藥品企業(yè)微生物實驗室管理是一項特殊且系統(tǒng)的工作，直接影響到企業(yè)的發(fā)展，尤其是現(xiàn)在制藥企業(yè)對于產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)注程度越來越高，產(chǎn)品的好壞直接影響客戶對企業(yè)的滿意度。隨著大眾對生物風(fēng)險管理意識的增強，監(jiān)管部門對環(huán)境監(jiān)控的力度增大，提高藥品微生物控制水平也是現(xiàn)代質(zhì)量管理理念的要求。只有不斷提升微生物檢驗?zāi)芰?，完善實驗室管理能力，嚴格做到質(zhì)量控制，藥品企業(yè)微生物檢驗行業(yè)就會有很好的發(fā)展。