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    淺析蛋白質(zhì)沉淀劑對乳制品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量的測定影響

    2023-10-08 07:45:20高元元
    現(xiàn)代食品 2023年14期
    關(guān)鍵詞:標準

    ◎ 高元元

    (云南省食品藥品審核查驗中心(云南省疫苗檢查中心), 云南 昆明 650031)

    環(huán)己基氨基磺酸鈉為非營養(yǎng)型甜味劑,又名甜蜜素,過量攝入會損害人體肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)[1]。甜蜜素的致癌作用一直為人們所爭議[2]。根據(jù)GB2760—2014《食品安全標準 食品添加劑使用標準》,甜蜜素可在冷凍飲品、果醬、蜜餞涼果、復(fù)合調(diào)味料、面包、糕點以及配制酒等19類食品中限量范圍使用[3-5]。由于甜蜜素禁止在美、日、英以及加拿大等40多個國家使用,而我國又是全球最大的甜蜜素出口國,因此,甜蜜素超標問題將影響我國食品出口質(zhì)量[6]。高效檢測食品中的甜蜜素含量,確保食品中甜蜜素含量符合國家標準的意義重大。對于蛋白質(zhì)含量較高的乳制品,為了解決樣品前處理中過濾速度慢等問題,試驗過程中使用蛋白質(zhì)沉淀劑(即亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液1∶1),生成的亞鐵氰化鋅沉淀吸附干擾物質(zhì),可以有效去除蛋白質(zhì)。同時,環(huán)己基氨基磺酸鈉與亞硝酸鈉在硫酸介質(zhì)中反應(yīng)生成環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇。隨著時間延長,環(huán)己醇亞硝酸酯會逐漸轉(zhuǎn)化成環(huán)己醇[7]。亞鐵氰化鉀及乙酸鋅蛋白沉淀劑的加入可能會對上述衍生化反應(yīng)產(chǎn)生影響,也有可能對產(chǎn)物的穩(wěn)定性造成影響。因此,本試驗測定蛋白質(zhì)沉淀劑的加入,對樣品中甜蜜素含量測定造成的影響以及兩者間回收率的差異。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    安捷倫Agilent GC-7890B(FID)、環(huán)己基氨基磺酸鈉標準品:Dr.Ehrenstorfer GmbH(99.1%)、正庚烷、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、亞硝酸鈉、硫酸。

    1.2 樣品

    乳粉、風(fēng)味酸奶、酸奶(市售)。

    1.3 試驗方法

    1.3.1 環(huán)己基氨基磺酸鈉衍生物定性及標準曲線繪制0.050 13、0.100 26、0.200 52、0.300 78、0.401 04 、0.501 3 mg/mL系列濃度的標準溶液,移取標準溶液10 mL于50 mL帶蓋離心管中,冰浴5 min。準確加入5.00 mL正庚烷,2.5 mL亞硝酸鈉溶液,2.5 mL硫酸溶液,蓋緊離心管后搖勻,盡快置于冰浴30 min。加入2.5 g氯化鈉,混合1 min,4 ℃離心(3 000 r/min)10 min,吸取1 μL上清液上機測定。對比研究確定衍生物目標峰,并繪制標準曲線。

    1.3.2 不同類別樣品添加回收試驗

    分別稱取2份乳粉、酸奶、風(fēng)味酸奶樣品置于50 mL帶蓋離心管中。其中,樣品乳粉、酸奶樣品添加0.50 mg標準溶液,風(fēng)味酸奶樣品中添加0.30 mg標準溶液;一份樣品中再添加3 mL蛋白質(zhì)沉淀劑,另一份樣品作為對照組不添加蛋白質(zhì)沉淀劑。加20 mL水,搖勻,超聲提取20 min,4 ℃離心(3 000 r/min)10 min,過濾,收集濾液并定容至50 mL。準確移取試樣溶液10 mL ,按1.3.1操作,計算回收率。

    1.3.3 氣相色譜條件

    色譜柱:TG-5MS毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)。程序升溫:初溫55 ℃保持3 min,10 ℃/min升溫至90 ℃保持0.5 min,20 ℃/min升溫至200 ℃保持3 min。進樣口、檢測器溫度:230 、260 ℃。進樣方式:分流進樣,分流比為2∶1。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 環(huán)己基氨基磺酸鈉衍生物定性及繪制標準曲線

    以甜蜜素濃度為縱坐標,以峰面積為橫坐標,建立標準曲線。甜蜜素衍生產(chǎn)物有2個色譜峰,甜蜜素(環(huán)己基氨基磺酸鈉)和亞硝酸鈉在硫酸酸性條件下反應(yīng)生成環(huán)己醇,環(huán)己醇在酸性條件下又繼續(xù)與亞硝酸鈉發(fā)生酯化反應(yīng)生成環(huán)己醇亞硝酸酯。因為成酯反應(yīng)在一定反應(yīng)條件下是動態(tài)平衡,所以正己烷提取物中會同時有環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇存在,并且在放置過程中,環(huán)己醇亞硝酸酯與環(huán)己醇的平衡會移動。因此,主產(chǎn)物峰會隨著時間和反應(yīng)條件變化逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楦碑a(chǎn)物峰,但是主副產(chǎn)物的峰面積之和基本保持不變,主產(chǎn)物和副產(chǎn)物的峰也有一定的線性關(guān)系,用組校準的方法做出的標準曲線1使檢測結(jié)果更為準確(如圖1所示)。

    圖1 甜蜜素標準曲線圖

    2.2 氣相色譜圖比較

    圖2為樣品色譜圖,顯示甜蜜素含量為0;圖3是空白對照色譜圖;圖4為標準品色譜圖,甜蜜素保留時間為4.393 min;圖5為加入標準品和3 mL蛋白質(zhì)沉淀劑的氣相色譜圖,甜蜜素的保留時間為4.394 min。結(jié)果顯示,加入蛋白質(zhì)添加劑的保留時間仍停留在4.3 min以內(nèi),表明對甜蜜素的測量不會造成影響。

    圖2 樣品氣相色譜圖

    圖3 空白氣相色譜圖

    圖4 加入標準品氣相色譜圖

    圖5 加入標準品和3 mL蛋白質(zhì)沉淀劑氣相色譜圖

    2.3 蛋白質(zhì)沉淀劑對測定乳制品中甜蜜素回收率的影響

    市售乳粉、風(fēng)味酸奶、酸奶加入不同量的甜蜜素與蛋白沉淀劑,回收率結(jié)果見表1;精密度試驗結(jié)果見表2。

    表1 甜蜜素回收率試驗結(jié)果表

    表2 精密度試驗(n=6)結(jié)果表

    如表1、表2所示,未加入蛋白質(zhì)沉淀劑時,乳粉、風(fēng)味酸奶、酸奶樣品回收率分別為96%、94%、96%,加入蛋白質(zhì)沉淀劑后,對應(yīng)回收率分別為99%、100%、100%,由此可見,蛋白質(zhì)沉淀劑的加入,提高了樣品回收率。此外,在樣品處理過程中添加蛋白質(zhì)沉淀劑亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液,可使試樣澄清,有效消除溶液渾濁現(xiàn)象,提高處理效率;相對標準偏差(變異系數(shù))均<10%,證明該方法準確度高,精密度和重復(fù)性良好,滿足試驗要求。

    3 結(jié)語

    本研究表明,加入蛋白質(zhì)沉淀劑可以有效提高樣品回收率,回收率可達100%,使檢測結(jié)果更為準確。同時,亞鐵氰化鉀和乙酸鋅合成的沉淀劑除蛋白能力較強,可有效減少測試樣品對色譜柱的損壞。

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