生物囊泡分離鑒定方法及其在獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

賈萬欣，鄒 聰，段琦穎，屈春惠，肖楚寧，李 斌，王世民

（ 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052 ）

生物囊泡（biological vesicles）是細(xì)胞在質(zhì)膜出芽、起泡等過程分泌產(chǎn)生后被釋放的一種亞細(xì)胞組分，其實質(zhì)是納米顆粒。近年來，外泌體、凋亡小體及微囊泡等微粒均在生物囊泡研究范疇[1-2]。生物囊泡內(nèi)部含多種如核酸、蛋白、脂質(zhì)等生物活性分子，在機(jī)體各種體液中廣泛存在，是公認(rèn)的液體活檢類別中不斷發(fā)展的生物標(biāo)志物。最初，生物囊泡被認(rèn)為是細(xì)胞碎片和廢物顆粒，且不具有自我分裂與增殖能力。但隨著科學(xué)技術(shù)進(jìn)步，研究指出生物囊泡通過運(yùn)輸細(xì)胞間的信號分子而在細(xì)胞通信中發(fā)揮關(guān)鍵作用。越來越多研究表明，生物囊泡參與了機(jī)體各種生理及病理活動，在動物的疾病診斷及疫苗研制方面均有涉足。

截至目前，人們對生物囊泡的類型、分離及鑒定技術(shù)已有一定了解，國內(nèi)外關(guān)于囊泡的報道也較多。多項研究表明，生物囊泡在細(xì)胞存活與凋亡、疾病診療及疫苗方面具有廣闊的應(yīng)用與研究前景，在相關(guān)領(lǐng)域的研究中發(fā)揮了重要作用。生物囊泡基于動物應(yīng)用的研究體現(xiàn)在存在哺乳動物乳汁中，主要是對不同動物乳汁中外泌體miRNA異同點的研究。被外泌體包裹的miRNA經(jīng)過幼畜消化道乃至通過血液循環(huán)運(yùn)至免疫器官調(diào)控機(jī)體免疫機(jī)制，為幼畜提供免疫保護(hù)，該過程中囊泡的數(shù)量與質(zhì)量便關(guān)乎研究的成敗[3-4]。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，在沒有外界因素誘導(dǎo)下，機(jī)體單位時間內(nèi)產(chǎn)生的生物囊泡數(shù)量少且不純，導(dǎo)致生物囊泡的研究受到限制。于是在現(xiàn)有技術(shù)下對囊泡進(jìn)行特殊處理令其大量增值，之后進(jìn)行分離與純化成為解決該瓶頸的一種有效途徑。匯總相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)果顯示，僅通過單一方法分離所得囊泡的純度和產(chǎn)量通常難以滿足試驗要求，大多數(shù)情況下會同時聯(lián)用至少兩種方法處理，蛋如何高效、快速地提取囊泡，且保持形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的完整性從而使其得到更廣泛的應(yīng)用仍有待探究。本文就生物囊泡的類型、分離純化方法、鑒定技術(shù)及其在獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用等方面進(jìn)行綜述，以期為生物囊泡應(yīng)用于獸醫(yī)臨床診療提供參考。

1 生物囊泡的概述

1.1 生物囊泡的發(fā)展

生物囊泡是指某些兩親性的小分子，在水中分散時形成的一類在結(jié)構(gòu)上具有磷脂封閉雙層的有序簇體，一般也被稱作脂質(zhì)體。研究者1946 年首次于血漿中發(fā)現(xiàn)囊泡的存在，起初它被定義為一種“因子”物質(zhì)，具有加速血栓形成的作用[5]。之后Wolf[6]研究血小板在血漿中的作用時發(fā)現(xiàn)了一種能夠活化血小板的微粒，命名為“血小板塵?！薄?983年，Pan等[7]在研究中發(fā)現(xiàn)，綿羊紅細(xì)胞內(nèi)的代謝物通過一些小囊泡被釋放至細(xì)胞外，隨即將其命名為外泌體。生物囊泡在機(jī)體體液中廣泛存在，其作為異質(zhì)性較大的群體，來源眾多，命名也各有不同，且與多種生理病理反應(yīng)密切相關(guān)，在生物應(yīng)用中存在巨大潛力。

1.2 生物囊泡的分類

1.2.1 外泌體

外泌體是由細(xì)胞分泌且具有磷脂雙分子層的生物囊泡，通過出芽的方式與質(zhì)膜融合從而釋放至細(xì)胞外，直徑約為30～100 nm，廣泛分布于血液、唾液、母乳和脂肪組織等在內(nèi)的體液和組織中，內(nèi)含DNA、mRNA、miRNA 和胞質(zhì)蛋白等多種物質(zhì)[8]。外泌體通常通過融合受體細(xì)胞膜或結(jié)合靶細(xì)胞膜表面受體的方式完成細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)，從而調(diào)節(jié)機(jī)體生理及病理活動。此外，外泌體在腫瘤疾病研究及免疫反應(yīng)中亦扮演重要角色。

1.2.2 微囊泡

微囊泡是由細(xì)胞膜出芽形成的膜性細(xì)胞器，尺寸大小不均一，直徑一般為100～1 000 nm，內(nèi)部含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及核酸等物質(zhì)，其表面雖具有多種蛋白質(zhì)的附著卻沒有特定的表面分子標(biāo)記，且不同來源的微囊泡發(fā)揮的生物學(xué)功能也不盡相同[9]。已有文獻(xiàn)表明，微囊泡參與多種疾病的研究及診療，如治療骨質(zhì)疏松、腫瘤細(xì)胞的相關(guān)研究及預(yù)后等方面均發(fā)揮良好作用，與其他類型的囊泡一樣可作為細(xì)胞間通訊的介質(zhì)，成為新型天然藥物傳遞載體[10]。因微囊泡最終是由質(zhì)膜脫落而成，故也稱為“脫落囊泡”。

1.2.3 凋亡小體

凋亡小體是從細(xì)胞質(zhì)膜脫落或萌芽釋放形成的生物囊泡，其形成過程較簡易，整個細(xì)胞通過發(fā)芽、起泡在質(zhì)膜出形成泡體，最終自發(fā)脫落形成大小不一的凋亡小體，其內(nèi)部含有含胞質(zhì)、細(xì)胞器和核碎片等物質(zhì)，可通過運(yùn)輸生物分子幫助完成細(xì)胞清除以及細(xì)胞間通信等工作[11-13]。有研究表明，凋亡小體中也含有DNA 且能夠水平傳遞DNA如致癌基因，發(fā)揮免疫抑制作用。與外泌體和微囊泡相比，凋亡小體是較大的囊泡，一般直徑為800～5 000 nm。凋亡小體不僅具有轉(zhuǎn)移致癌因子促進(jìn)腫瘤形成的作用，還具有促進(jìn)免疫系統(tǒng)的激活、垂死細(xì)胞的募集以及受損組織的再生等功能。

2 生物囊泡的分離純化技術(shù)

生物囊泡分離與純化技術(shù)不完善是制約相關(guān)研究和臨床診療發(fā)展的瓶頸問題之一。使用不同分離方法分離直接影響生物囊泡的純度和濃度，因此，多種方法間可互相結(jié)合，各取優(yōu)勢，從而提高生物囊泡的產(chǎn)量與質(zhì)量。目前，常見的生物囊泡分離技術(shù)主要有差速離心、親和層析、密度梯度、超濾和尺寸排阻色譜等，可根據(jù)研究目的的需要選擇最優(yōu)的技術(shù)進(jìn)行分離純化[14-15]。

2.1 差速離心

差速離心技術(shù)是最常見且使用最廣的生物囊泡分離純化方法，被視為生物囊泡提取的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是基于生物囊泡大小、密度不同從而達(dá)到分離的目的。在前人不斷進(jìn)行技術(shù)優(yōu)化的過程中發(fā)現(xiàn)，差速離心技術(shù)的關(guān)鍵在于由低到高、循序漸進(jìn)提高離心力，分步去除死細(xì)胞、細(xì)胞碎片等雜質(zhì)，最終通過100 000×g的離心以實現(xiàn)生物囊泡與其他更小的顆粒及可溶性物質(zhì)的分離[16-17]。研究發(fā)現(xiàn)，使用差速離心技術(shù)純化生物囊泡的過程中，離心機(jī)配置、向心力、離心時間、轉(zhuǎn)子類型及各種參數(shù)均對囊泡的產(chǎn)量和純度具有直接影響。迄今為止，差速離心技術(shù)較為成熟，不需要進(jìn)行額外標(biāo)記，能夠有效避免操作過程中交叉污染的發(fā)生。通過此法能夠有效去除大部分雜質(zhì)，但分離過程較為耗時且操作煩瑣，分離到的生物囊泡常出現(xiàn)形態(tài)不完整、聚集成塊等不利于后續(xù)組分分析的現(xiàn)象。Kontopoulou等[18]和Campoy等[19]通過該技術(shù)分別在血漿和子宮內(nèi)含物中成功分離出生物囊泡。

2.2 密度梯度離心

由于不同類型囊泡的粒徑大小和密度皆存在差異，密度梯度離心技術(shù)以此為依據(jù)對生物囊泡進(jìn)行分離，一般情況下使用蔗糖或碘克沙醇作為介質(zhì)進(jìn)行處理。密度梯度離心技術(shù)通常與差速離心技術(shù)聯(lián)用從而提高生物囊泡的純度，先使用差速離心去除大顆粒物質(zhì)，之后使用密度梯度離心去除蛋白質(zhì)的污染，達(dá)到進(jìn)一步純化生物囊泡的效果[20]。Iwai等[21]通過使用密度梯度離心技術(shù)從人唾液中分離得到形態(tài)完整的囊泡。與差速離心技術(shù)相比，密度梯度離心技術(shù)更具優(yōu)勢，回收率約10%～50%，能夠有效減少蛋白質(zhì)及其他顆粒的污染；但由于該方法使用的介質(zhì)黏度較高，會降低生物囊泡的沉降速率，導(dǎo)致分離純化過程存在耗時長、操作復(fù)雜、不適用于臨床應(yīng)用等缺點。研究人員可根據(jù)試驗所需，選擇一種或多種方法組合進(jìn)行生物囊泡的分離純化[22-24]。

2.3 親和層析

生物囊泡的膜表面存在豐富的蛋白質(zhì)，利用抗原和抗體之間的免疫親和作用以及受體和配體之間的特異性反應(yīng)，為囊泡的分離提供了一種新的途徑[25]。親和層析是基于柱子（Beads）或芯片等單克隆抗體作為載體，從而捕獲表面具有特異性蛋白的囊泡。Beads 的質(zhì)量、洗脫條件以及操作人員的熟練程度均與最終獲取囊泡的純度與產(chǎn)量密切相關(guān)。與前兩種分離方法相比，親和層析技術(shù)改進(jìn)了耗費(fèi)大量樣品卻分離效率低的缺陷，可精確地從更少的樣品中分離出囊泡，還可應(yīng)用于后續(xù)囊泡的定性及定量分析[26]。研究表明，利用抗體包被的磁珠對特異性抗原進(jìn)行囊泡分離，所獲取的囊泡純度較高且結(jié)構(gòu)形態(tài)完整，但該技術(shù)不適用于大量囊泡分離，且由于磁珠、抗體價格較為昂貴，令不少研究人員望而止步[27-28]。

2.4 超濾

超濾是利用多孔膜分離溶液中大小不同的物質(zhì)顆粒，研究人員可通過調(diào)節(jié)濾膜孔徑大小篩選出囊泡的不同子集[29]。使用該技術(shù)分離囊泡時，需另外施加外力或離心力，但施加外力易改變囊泡形態(tài)，使體積比濾孔膜徑大的囊泡透過濾膜，引起污染。其次，與囊泡大小相似的納米顆粒也可透過濾膜是超濾技術(shù)的一大缺陷，因此可結(jié)合超濾技術(shù)與其他分離技術(shù)以減少污染[30-31]。超濾技術(shù)在分離時間上具有優(yōu)勢，并且處理樣本體積大，回收率可觀，適用于臨床上分離和濃縮囊泡。

2.5 尺寸排阻色譜

尺寸排阻色譜是基于分離物質(zhì)的大小或分子量大小，使用特定柱料進(jìn)行分離的色譜方法[32]。利用尺寸排阻色譜進(jìn)行囊泡分離，其優(yōu)勢在于可保護(hù)囊泡形態(tài)和生物學(xué)結(jié)構(gòu)不受破壞，囊泡回收率較高，操作便捷且價格較為低廉；但由于柱料的選擇較少，仍會存在如蛋白質(zhì)等大顆粒的污染，降低囊泡的純度。有研究表明，聯(lián)合使用多種分離技術(shù)較單一使用某種分離技術(shù)所獲取的囊泡更多，純度更高。Benedikter 等[33]研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)合超濾與尺寸排阻色譜兩種方法可提高生物囊泡的產(chǎn)量及純度。

2.6 試劑盒法

試劑盒法即利用商用試劑盒按照操作流程完成囊泡分離的技術(shù)。目前市場上已有多種基于上述傳統(tǒng)分離技術(shù)的試劑盒，如exoEasy Max 試劑盒、MagCapture?試劑盒、Minute?、ExoQuick?試劑盒等，不同試劑盒依據(jù)不同的分離原理，所能達(dá)到的分離效率及質(zhì)量也各有差異[34-35]。經(jīng)綜合分析表明，使用商品化試劑盒進(jìn)行囊泡提純具有操作簡便、省時、囊泡完整性高等優(yōu)勢，但由于市面上已授權(quán)的商用試劑盒質(zhì)量不均，導(dǎo)致生物囊泡提取的產(chǎn)量及純度參差不齊。迄今為止，尚無任何一款應(yīng)用于囊泡分離純化的試劑盒兼顧多項優(yōu)點，均存在價格昂貴、分離效率低下等不足。

3 生物囊泡的鑒定及分析技術(shù)

3.1 顯微成像技術(shù)

顯微成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于生物囊泡的鑒定研究中，是鑒定生物囊泡形成的有力工具，不同的顯微成像系統(tǒng)由于分辨率的受限所獲得的成像效果參差不一。通過顯微成像可快速展示囊泡的形態(tài)、大小、粒子直徑和濃度等物理特性，然而該技術(shù)對樣品的制備要求嚴(yán)苛，樣品濃度高，并且存在視野范圍有限、檢測通量較低等不足，僅能夠滿足囊泡的初步表征需求[36]。

掃描電鏡、透射電鏡、冷凍電鏡及原子力電鏡是常用于囊泡顯微成像的設(shè)備。掃描電子顯微鏡作為最廣泛的細(xì)胞表面形貌成像工具，常用于囊泡的表面結(jié)構(gòu)成像信息的采集，由于該設(shè)備采集時需保持嚴(yán)格的真空條件，囊泡樣品處于脫水的狀態(tài)，因此在掃描電鏡下呈蝶形或杯狀。與掃描電鏡相比，透射電鏡具有更高的分辨率，在獲取囊泡基本形貌特征的基礎(chǔ)上結(jié)合免疫膠體金技術(shù)可進(jìn)一步分析囊泡表面的蛋白質(zhì)[37]。冷凍電鏡是將樣品通過快速冷凍技術(shù)進(jìn)行固定，在低溫條件下進(jìn)行高分辨率的觀察。與前兩種技術(shù)相比，該技術(shù)無須對囊泡樣品進(jìn)行前期染色、固定及干燥等可能會引起囊泡結(jié)構(gòu)變化的操作，使囊泡維持原始結(jié)構(gòu)[38]。原子力顯微鏡是一種通過探針與樣品接觸反饋信號成像的原子級成像分辨率的成像技術(shù)，不僅可展現(xiàn)囊泡的外觀形態(tài)，更能夠揭示囊泡的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等精細(xì)的結(jié)構(gòu)[39]。

3.2 納米顆粒跟蹤分析

納米顆粒跟蹤分析（nanoparticle tracking analysis，NTA）是一種較為先進(jìn)的、可用于測定樣本中顆粒的粒徑大小與濃度高低的技術(shù)，該技術(shù)可精準(zhǔn)測定直徑低于30 nm 的小型囊泡并對其進(jìn)行表征分析，操作過程簡便快速，樣品不需要固定、干燥等前期處理步驟，直接在液相中進(jìn)行檢測，可在不破壞囊泡本身結(jié)構(gòu)的前提下完成鑒定。目前，NTA 不僅可在散射模式下進(jìn)行檢測，還能夠通過染料及熒光標(biāo)記抗體的方法實現(xiàn)囊泡的表征分析[40]。但在使用NTA檢測分析過程中，儀器僅在二維平面對顆粒進(jìn)行追蹤分析，但實際上顆粒的布朗運(yùn)動是在三維空間發(fā)生，在二維的平面進(jìn)行三維運(yùn)動的分析會導(dǎo)致測量結(jié)果不準(zhǔn)確。因此，通常使用NTA測得的囊泡粒徑大小相比電鏡測得的結(jié)果偏大[41]。

3.3 流式細(xì)胞術(shù)

生物囊泡的直徑較小且成分多樣，現(xiàn)有的鑒定技術(shù)難以實現(xiàn)單個囊泡的多種生物化學(xué)性狀的分析，有礙囊泡的研究和發(fā)展。流式細(xì)胞術(shù)是一種高通量、多參數(shù)，應(yīng)用于懸液中微小顆?？焖俣糠治龅南冗M(jìn)技術(shù)，可根據(jù)囊泡的大小或所攜帶的熒光信號對粒子進(jìn)行分選[42-43]。流式細(xì)胞儀的靈敏度較低，粒徑小或熒光亮信號低的囊泡難以檢測且會引入背景干擾。因此，研究人員常使用脂膜染色或熒光標(biāo)記的手段以區(qū)分背景信號。光散射是對無標(biāo)記囊泡檢測最高效的手段，囊泡的粒徑大小及疏密程度主要通過其散射光進(jìn)行分析，而單個囊泡的散射光強(qiáng)度極其微弱，常低于背景信號，不利于檢測。目前，找到一種通用的熒光染料對囊泡進(jìn)行標(biāo)記以削弱背景噪聲的干擾成為提高流式細(xì)胞術(shù)檢測限的重要突破點[44]。

3.4 蛋白質(zhì)鑒定

生物囊泡內(nèi)含有蛋白質(zhì)、活性核酸和脂質(zhì)等物質(zhì)，而蛋白質(zhì)作為生物學(xué)功能的執(zhí)行者，對其進(jìn)行研究及分析利于深入了解囊泡的分泌和分選機(jī)制。囊泡的蛋白質(zhì)分為非特異性蛋白質(zhì)和特異性蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)主要來自細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞器等[45]。囊泡的蛋白質(zhì)組成與細(xì)胞和疾病的種類相關(guān)，不同的蛋白質(zhì)組成使囊泡具有不同的生物學(xué)特性，鑒定囊泡蛋白的組成有助于研究相關(guān)蛋白質(zhì)在疾病發(fā)展進(jìn)程中的作用，并可將其作為疾病早期診斷和預(yù)后評估的生物標(biāo)志物。蛋白免疫印跡法（western blot，WB）和酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是囊泡蛋白質(zhì)傳統(tǒng)的鑒定方法，均為生物科學(xué)中較為成熟的蛋白質(zhì)分析技術(shù)。目前，絕大多數(shù)的文章中均采用WB 進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量分析與鑒定，CD9、CD63、CD81、Alix等蛋白常作為囊泡標(biāo)志性蛋白，該法操作復(fù)雜煩瑣，但可鑒定多種蛋白質(zhì)[46-48]。ELISA是使用“雙抗體夾心”法進(jìn)行囊泡蛋白質(zhì)的鑒定，因該方法需要一對抗體進(jìn)行檢測，很大程度上提高了檢測的特異性，但同時也增加了鑒定的成本。因此，該方法不作為囊泡蛋白質(zhì)分析的最優(yōu)選擇。

除上述傳統(tǒng)蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)外，越來越多基于新型生物傳感技術(shù)且具有高度特異性、敏感性的生物傳感器被用于囊泡的蛋白質(zhì)分析與檢測工作，這些技術(shù)擁有檢測高通量、方便快速、靈敏性強(qiáng)等優(yōu)點，因而比傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)檢測方法更具優(yōu)勢，適用于臨床檢驗。近年來，基于微流控技術(shù)檢測囊泡蛋白質(zhì)的方法不斷興起，因其操作簡便且可在微尺度對流體進(jìn)行檢測，成為新型檢測技術(shù)的新起之秀。

3.5 核酸鑒定

在囊泡的組成中，核酸是除蛋白質(zhì)外的另一種重要的組成物質(zhì)，因此也成為目前學(xué)術(shù)界的研究熱點之一。囊泡中的核酸物質(zhì)以RNA 為主，包括miRNA、tRNA、rRNA 等非編碼RNA，且大部分被包裹在囊泡內(nèi)部。已有研究證明了囊泡中的核酸物質(zhì)在機(jī)體生理病理活動中的作用，如囊泡中的miRNA 參與各類癌癥的形成與發(fā)展[49-50]。囊泡中核酸的含量較低，因此，開發(fā)高效的核酸提取方法可推進(jìn)相關(guān)方面的研究進(jìn)展。沉淀法和離心柱法作為囊泡核酸提取的方法，既有相似性又有相異性，均是基于苯酚/氯仿的方法通過萃取使水相和酚相分離。由于核酸物質(zhì)易溶于水的特性而存在于水相中，沉淀法是在萃取基礎(chǔ)上通過乙醇沉淀回收核酸物質(zhì)，離心柱則是通過固相萃取的方法完成核酸物質(zhì)提取后的純化步驟[51]。

目前，隨著高通量檢測技術(shù)發(fā)展，測序成為囊泡核酸物質(zhì)檢測常用的途徑，具有良好的檢測深度和覆蓋范圍，有助于囊泡新生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)。長期的測序發(fā)展中，二代測序技術(shù)的出現(xiàn)對囊泡核酸物質(zhì)的檢測起到了很強(qiáng)的推動性，在測序市場中占有主導(dǎo)地位[52]。

4 生物囊泡在獸醫(yī)領(lǐng)域中的應(yīng)用

科學(xué)技術(shù)進(jìn)步策動人類對生物囊泡的認(rèn)識和研究不斷加深，不僅使其在醫(yī)學(xué)化工應(yīng)用中嶄露頭角，也帶動了其在獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究與應(yīng)用[53-55]。研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)動物乳液中存在囊泡，其內(nèi)部含有具有免疫調(diào)節(jié)功能的miRNA。囊泡可隨著乳液進(jìn)入幼畜的消化道被機(jī)體消化吸收，進(jìn)而調(diào)節(jié)幼畜消化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的發(fā)育。不僅如此，乳液中的囊泡可作為藥物載體，將親水、親脂性和化學(xué)類藥物包裹并遞送至特定部位發(fā)揮作用，這一發(fā)現(xiàn)大幅度提高了藥物的利用率[56]。此外，囊泡對細(xì)胞間信息傳遞也具有促進(jìn)作用。Regev-Rudzki等[57]通過試驗表明，轉(zhuǎn)基因瘧原蟲紅細(xì)胞分泌的生物囊泡可以促進(jìn)耐藥基因的傳遞。Hugel 等[58]發(fā)現(xiàn)，某些蟲源性細(xì)胞外囊泡能夠轉(zhuǎn)移毒力因子，可增強(qiáng)寄生蟲的寄生能力，最終導(dǎo)致機(jī)體致病。陳曉琳等[59]研究指出，灌喂10 μL牛乳外泌體（1 g/L）對DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的小鼠影響有限，可能受到了灌喂劑量較低的影響。這些信息有望給抗寄生蟲藥物新靶標(biāo)研究帶來新的啟示。當(dāng)前，生物囊泡在獸醫(yī)學(xué)中的相關(guān)研究日益細(xì)節(jié)化，尤其是囊泡表面一些重要的膜蛋白對營養(yǎng)物質(zhì)攝取具有促進(jìn)作用，提示其若作為候選抗原可對疫苗研究發(fā)揮一定作用，對藥物靶標(biāo)研制也具有新的啟發(fā)[60]。生物囊泡廣泛存在機(jī)體的各種體液中，因而有望成為標(biāo)志物質(zhì)，在動物疾病診斷預(yù)防及疫苗研發(fā)等方面發(fā)揮重要作用。

5 結(jié)論

本文就生物囊泡的類型、分離與純化技術(shù)、常用的鑒定技術(shù)及其在獸醫(yī)領(lǐng)域的應(yīng)用等4個方面總結(jié)了近年來生物囊泡的相關(guān)內(nèi)容，指出生物囊泡作為可傳遞生物分子信息、參與機(jī)體生理病理活動的小泡體，涉及細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、臨床診斷等領(lǐng)域，在獸醫(yī)領(lǐng)域也有所應(yīng)用與研究。綜上所述，生物囊泡的分離、純化與鑒定標(biāo)準(zhǔn)化還存在諸多挑戰(zhàn)，在獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中亦需進(jìn)一步探索，以促進(jìn)囊泡在獸醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的進(jìn)一步發(fā)展。