九里香主要化學(xué)成分、藥理作用和保育學(xué)研究進(jìn)展△

廖振鋒，劉寒，林楊，陸恒，馬慶，謝文波，梁瑩*，韋坤華*

1.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西壯族自治區(qū)中藥資源智慧創(chuàng)制工程研究中心，廣西 南寧 530023；

2.中國(guó)藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198；

3.華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東 深圳 518110

中藥九里香（Murrayae Folium et Cacumen）基原植物為九里香Murraya exoticaL.和千里香M.paniculata（L.）Jack，入藥部位為其干燥葉和帶葉嫩枝[1]。九里香之名最早出現(xiàn)于明代，因其花氣味芳香而被嶺南地區(qū)民間稱“九里香”，植物分類學(xué)家將九里香與千里香均劃分為蕓香科九里香屬九里香組[2]。九里香性溫，味辛、微苦，具有行氣止痛、活血散瘀等功效，富含香豆素、黃酮、生物堿、揮發(fā)油等化學(xué)成分，現(xiàn)代藥理研究顯示九里香具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降血糖、抗蟲抑菌、預(yù)防骨質(zhì)疏松、抗生育、抗氧化等作用，臨床上多用于治療慢性胃炎等炎癥疾病，目前已上市的多種中成藥如三九胃泰顆粒、九龍胃藥、膚陰潔復(fù)方黃松洗液等均含有九里香[3]。目前，九里香和千里香主要采用種子進(jìn)行育苗，因其雄蕊退化嚴(yán)重，產(chǎn)生種子有限，這給其高效快速的大規(guī)模化種植栽培造成難題。此外，中藥九里香活性成分的檢測(cè)指標(biāo)尚缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，其在市場(chǎng)上的質(zhì)量難以控制。故本文對(duì)中藥九里香的主要化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)行系統(tǒng)的整理總結(jié)，同時(shí)對(duì)中藥九里香基原植物九里香和千里香進(jìn)行保育學(xué)的相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

1 化學(xué)成分

目前，關(guān)于中藥九里香的化學(xué)成分研究已有較多的報(bào)道。中藥九里香中的化學(xué)成分類型主要有香豆素類、黃酮類、生物堿類、揮發(fā)油等。

1.1 香豆素類

香豆素類是中藥九里香的主要化學(xué)成分類型之一。目前，從九里香和千里香中分離和鑒定出的香豆素主要特征是在C-8 上連有異戊二烯及其衍生物基團(tuán)，而且在C-5 和（或）C-7 位上經(jīng)常有甲氧基取代。1983 年，楊峻山等[4]從千里香葉三氯甲烷提取物中分離得到3個(gè)新香豆素類化合物，分別是九里香甲素（isomexoticin）、九里香乙素（murpanidin）、九里香丙素（murpanicin），同時(shí)還分離出新九里香素（murragatin），九里香醛（murralongin）和5,7-二甲氧基-8-(3'-甲基-2'-酮基丁基)香豆精（isosibiricin）。近年來，還從九里香中發(fā)現(xiàn)香豆素二聚體類成分及新骨架化合物，如Negi 等[5]從九里香丙酮提取物中分離出的bismurrangatin 和murramarin A，后者是一種以原酸酯結(jié)構(gòu)連接2 個(gè)香豆素基團(tuán)的罕見香豆素類化合物。Liu 等[6]從九里香根中分離出2 個(gè)由新型七元環(huán)連接香豆素和吲哚的異二聚體，分別為exotines A 和exotines B。此外，九里香中還含有蛇床子素（osthole）、脫水長(zhǎng)葉九里香內(nèi)酯（phebalosin）、橙皮內(nèi)酯（meranzin）、傘形花內(nèi)酯（umbelliferone）、東莨菪素（scopoletin）等常見的香豆素[7]。到目前為止，從九里香和千里香中分離和鑒定了156個(gè)香豆類化合物，見表1。

表1 九里香和千里香中的香豆素類化合物

1.2 黃酮類

黃酮類成分是中藥九里香中另一大類主要成分，其多為甲氧基取代的黃酮，也有查耳酮、二氫黃酮等類型。單晶等[38]從千里香葉85%乙醇提取物中分離出8 個(gè)黃酮類化合物，分別是甜橙黃酮（sinensetin）、異橙黃酮（isosinensetin）、5-羥基-6,7,8,3',4'-五甲氧基黃酮（5-hydroxy-6,7,8,3',4'-pentamethoxyflavone）、pilloin、7-羥基-5,3',4'-三甲氧基黃酮（7-hydroxy-5,3',4'-trimethoxyflavone），以及3個(gè)已知的黃酮類化合物。楊旭等[39]用高速逆流色譜法從九里香乙醇回流提取物中分離到5,7,3',4'-四甲氧基黃酮（5,7,3',4'-tetramethoxyflavone）、5,7,8,3',4',5'-六甲氧基黃酮（5,7,8,3',4',5'-hexamethoxyflavone）、5,7,3',4',5'-五甲氧基二氫黃酮（5,7,3',4',5'-pentamethoxyflavanone）、5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮（5,7,3',4',5'-pentamethoxyflavone）、5-羥基-6,7,3',4'-四甲氧基黃酮（5-hydroxy-6,7,3',4'-tetramethoxyflavone）共5 種多甲基黃酮。Zhang 等[40]從千里香葉中分離鑒定出5,8,3′-三羥基-6,7,4′-三甲氧基黃酮-8-O-β-吡喃葡糖苷（5,8,3′-trihydroxy-6,7,4′-trimethoxyflavone-8-O-β-glucopyranoside)和5,8-二羥基-6,7,3′,4′-四甲氧基黃酮-O-β-吡喃葡糖苷（5,8-dihydroxy-6,7,3′,4′-tetramethoxy flavone 8-O-β-glucopyranoside）兩種新黃酮甲基醚新葡萄糖苷結(jié)構(gòu)。千里香中還含有6'-羥基-3,4,5,2',4'-五甲氧基查耳酮（6′-hydroxy-3,4,5,2′,4′-pentamethoxychalcone）、2′-羥基-3,4,5,3',4',6'-六甲氧基查耳酮（2'-hydroxy-3,4,5,3',4',6'-hexamethoxychalcone）、2'-羥基-3,4,4',6'-四甲氧基查耳酮（2'-hydroxy-3,4,4',6'-tetramethoxychalcone）等[41]。到目前為止，從九里香和千里香中分離出73個(gè)黃酮類化合物，見表2。

1.3 生物堿類

有關(guān)九里香和千里香中的生物堿研究相對(duì)較少，主要從根和莖分離得到，其類型主要是吲哚類生物堿。Wang等[58]從千里香根中首次分離的千里香利定堿D（paniculidine D）、千里香利定堿E（paniculidine E）、千里香利定堿F（paniculidine F），以及月橘堿（yuehchukene）、tanakine、吲哚-3-甲醛（indole-3-carboxaldehyde）、千里香利定堿A（paniculidine A）、千里香利定堿B（paniculidine B）、千里香利定堿C（paniculidine C）等已知的類似物。中藥九里香也含咔唑類生物堿，如小葉九里香咔唑堿（exozoline）[59]、九里香咔唑醇?jí)A（murrayazolinol）[60]、馬漢九里香堿（mahanimbine）和九里香咔唑堿（murrayazoline）[61]等。迄今為止，從九里香和千里香中分離鑒定出的生物堿約有27個(gè)，見表3。

表3 九里香和千里香中的生物堿類化合物

1.4 揮發(fā)油

中藥九里香味辛，具有芳香味，揮發(fā)油也是其有效成分之一，主要以倍半萜和單萜為主，也有脂肪酸、含氮雜環(huán)化合物等。姜平川等[70]采用氣相色譜質(zhì)譜法（GS-MS）分析水蒸氣蒸餾法提取所得九里香葉和嫩枝中的揮發(fā)油，其主要成分為雙環(huán)大香葉烯（bicyclogermacrene）、β-石竹烯（β-caryophyllene）、α-石竹烯（α-caryophyllene）、匙葉桉油烯醇（spathulenol）等。黃晶玲等[71]通過頂空固相微萃取-氣相色譜質(zhì)譜法（HS-SPME-GS-MS）對(duì)九里香的根、莖、葉的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，共鑒定出74 種成分，其中有3-甲基-3,4-二乙烯基環(huán)己烯（3-methyl-3,4-divinylcyclohexene）、1-石竹烯（l-caryophyllene）、β-倍半水芹烯（β-sesquiphellandrene）、α-姜黃烯（αcurcumene）、α-姜烯（α-zingiberene）、δ-欖香烯（δelemene）、3-甲基-2-丁烯酸壬酯（3-methyl-2-butenoic acid，nonyl ester）、3-甲基-2-丁烯酸十一酯（3-methyl-2-butenoic acid,undecyl ester）共8 個(gè)共有成分，根、莖、葉中的特有成分分別有23、27 和32個(gè)，表明九里香根、莖、葉的揮發(fā)性成分具有一定的差異性，葉具有較豐富的揮發(fā)性成分，根、莖、葉中特有成分的藥用價(jià)值有待進(jìn)一步發(fā)掘。Saikia等[72]從生長(zhǎng)在印度的千里香葉鑒定出29 個(gè)揮發(fā)油成分，除石竹烯（caryophyllene）含量最高，δ-欖香烯（δ-elemene）、β-欖香烯（β-elemene）、α-石竹烯（αcaryophyllene）、β-蓽澄茄油烯（β-cubebene）、elixene 和δ-杜松烯（δ-cadinene）等是揮發(fā)油中主要成分，這與之前報(bào)道九里香揮發(fā)油主要成分有所差異[73]，這些差異可能與采收時(shí)間、地域、氣候、季節(jié)及藥材貯藏時(shí)間等因素有關(guān)。

1.5 其他

從九里香或千里香中還分離出螺環(huán)戊烯酮衍生物、三萜、甾醇、苯丙素類等化合物。Liang 等[26]從千里香的莖、葉分離出(+)-murrayaspiroketone、(-)-murrayaspiroketone 2個(gè)螺環(huán)戊烯酮衍生物。Mesquita等[74]用色譜分離法從千里香葉乙醇提取物中用CH2Cl2分離出香豆素類化合物外，還分離出1 個(gè)三萜類化合物（24-methylene-cycloartan-3β-ol）和1 個(gè)苯丙素類化合物（methyl caffeate）。Sukari 等[75]從千里香的莖中分離出羽扇豆烷型三萜類化物lupenone和epilupeol。Desoky 等[76]從九里香環(huán)己烷提取物中分離鑒定出5 個(gè)新的植物甾醇：(23S)-23-ethyl-24-methyl-cycloart-24(241)-en-3β-ol、3β-methoxy-(23S)-23-ethyl-24-methyl-cycloart-24(241)-en-3β-ol、(23S)-23-ethyl-24-methyl-cycloart-24(241)-3β-yl-acetate,(23ζ)-23-isopropyl-24-methyl-cycloart-25-en-3β-ol 和(23ζ)-23-isopropyl-24-ethyl-cycloart-25-en-3β-ylacetate。Liu 等[8]在九里香根中分離出exotiacetal A、exotiacetal B和exotiacetal C 3個(gè)新的異戊二烯基苯基丙烯醇。

2 藥理作用

現(xiàn)代藥理研究表明中藥九里香具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降血糖、抗蟲抑菌、預(yù)防骨質(zhì)疏松、抗生育、抗氧化等多種作用。

2.1 抗炎鎮(zhèn)痛

Wu 等[55]研究從千里香中提取分離出的5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮、5,7,3',4'-四甲氧基黃酮、5-羥基-6,7,8,3',4'-五甲氧基黃酮對(duì)脂多糖（LSP）激活的小鼠巨噬細(xì)胞和乙醇對(duì)胃上皮細(xì)胞GES-1 損傷的抗炎作用。結(jié)果顯示，3 個(gè)黃酮類化合物在0～10 mmol·L-1劑量下對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和GES-1 細(xì)胞無細(xì)胞毒性作用，3 個(gè)黃酮類化合物在3 mmol·L-1劑量均能抑制LPS 誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞和RAW 264.7 細(xì)胞炎癥模型中一氧化氮（NO）和白細(xì)胞介素（IL）-6 的產(chǎn)生，且呈劑量依賴性，其中5,7,3',4'-四甲氧基黃酮對(duì)NO 和IL-6 的抑制作用最強(qiáng)，在相同劑量下，黃酮類化合物對(duì)IL-6 釋放的抑制作用大于NO 的產(chǎn)生。在RAW264.7 細(xì)胞和LPS 激活的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中，NO 含量升高，但在乙醇誘導(dǎo)的GES-1 細(xì)胞中，其含量降低。兩種細(xì)胞系不同的炎癥誘導(dǎo)方式所引起的NO 含量差異，可能是其調(diào)控途徑不同所致。添加LPS 后，腹腔巨噬細(xì)胞中NO 含量增加，而乙醇刺激的GES-1 細(xì)胞中NO 含量降低。從千里香中分離得到的3 個(gè)黃酮類化合物可通過調(diào)節(jié)不同的一氧化氮合酶（NOS）使NO 的生成恢復(fù)到正常水平。單體化合物的調(diào)節(jié)機(jī)制可能與LPS 激活巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的抑制和乙醇誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞中結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶（cNOS）的增強(qiáng)有關(guān)。另外，構(gòu)效關(guān)系分析表明，C2-C3上的雙鍵和C2/C3位置上的B環(huán)是抗炎活性的重要基團(tuán)。

Wu等[77]對(duì)從九里香葉中提取的70%乙醇提取物及分離出的6 個(gè)香豆素類化合物的體內(nèi)抗炎鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)九里香70%乙醇提取物顯著降低了乙酸誘導(dǎo)的小鼠扭體反應(yīng)，增加小鼠熱板反應(yīng)潛伏期，表明九里香70%乙醇提取物和分離的化合物具有中樞介導(dǎo)和外周介導(dǎo)的鎮(zhèn)痛效果。另外，還有效減輕二甲苯所致的小鼠耳腫脹和角叉菜膠所致的大鼠足腫脹。在分離的化合物中，murracarpin 表現(xiàn)出最強(qiáng)的抗傷害和抗炎作用。在大鼠膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎模型中，70%乙醇提取物可顯著提高大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性，抑制iNOS 活性，降低大鼠血清IL-1β和腫瘤壞死因子（TNF）-α含量。對(duì)乙醇提取物和分離化合物的2 種抗炎活性評(píng)價(jià)模型的研究表明，其抗炎作用可能與多種抗炎因子和介質(zhì)有關(guān)。組織學(xué)觀察還表明，乙醇提取物能有效維持股骨髁軟骨的正常功能及不同層軟骨細(xì)胞的排列。

Xu 等[78]對(duì)九里香中提取的香豆素類成分進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)異橙皮內(nèi)酯具有低細(xì)胞毒性和較強(qiáng)的抗炎作用，在體外和體內(nèi)均表現(xiàn)出抑制M1 巨噬細(xì)胞極化，其機(jī)制是下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子（NF）-κB 和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）信號(hào)通路特異性降低M1巨噬細(xì)胞促炎癥細(xì)胞因子水平，發(fā)揮抗炎作用。Liang等[31]從九里香中分離鑒定出15個(gè)新香豆素類化合物和6 個(gè)已知香豆素類化合物，并研究其對(duì)LSP誘導(dǎo)RAW 264.7 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO 的抑制作用，發(fā)現(xiàn)其中5個(gè)化合物對(duì)NO具有一定的抑制作用；MTT法表明在100 μmol·L-1濃度下均無明顯的細(xì)胞毒性。同時(shí)，通過分子對(duì)接發(fā)現(xiàn)其中3 個(gè)新香豆素類化合物可能是通過抑制iNOS蛋白而抑制NO的釋放。

Lu等[3]通過藥效學(xué)和代謝組學(xué)比較九里香和千里香乙醇提取物對(duì)70%乙醇誘導(dǎo)大鼠胃黏膜損傷的作用及機(jī)制，發(fā)現(xiàn)兩者通過降低炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及胃動(dòng)素（MTL）和胃泌素（GAS）水平，抑制了炎癥的發(fā)生和發(fā)展，從而對(duì)乙醇誘導(dǎo)的胃損傷具有良好的保護(hù)作用，另外，還證明了磷脂酶A2（PLA2）途徑是九里香和千里香調(diào)節(jié)胃損傷甘油磷脂代謝的重要途徑，九里香和千里香在用于治療胃損傷中具有相似的藥效學(xué)和代謝調(diào)節(jié)能力，將它們同時(shí)作為中藥九里香的基原植物具有一定合理性。

綜上所述，香豆素和黃酮類化合物是中藥九里香中2 種主要類型的成分，也是其抗炎鎮(zhèn)痛的活性化合物。

2.2 抗腫瘤

Jiang 等[79]研究九里香根、葉、枝和莖皮的80%酸性乙醇提取物對(duì)離體人結(jié)腸癌HT-29 細(xì)胞活性和遷移的抑制作用，驗(yàn)結(jié)果表明50 μg·mL-1的九里香根和葉提取物作用24 h 后，均能顯著降低HT-29 細(xì)胞的遷移能力，抑制率分別為（48.9±11.4）%、（43.9±18.4）%，九里香的根提取物具有更高的抗細(xì)胞遷移活性。超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-電噴霧質(zhì)譜法（UPLC-DAD-ESI-MS）結(jié)果表明九里香葉和根提取物中主要為香豆素類成分，從根提取物中分離鑒定出的特征性成分methoxy-8-[5-(prop-1-en-2-yloxy) penta-1,3-dien-1-yl]-coumarin具有潛在的抑癌活性。

Selestino等[80]對(duì)β-石竹烯和千里香揮發(fā)油對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞，細(xì)菌、真菌24 h殺菌曲線進(jìn)行了研究。用MTT法測(cè)定九里香揮發(fā)油和β-石竹烯（7.8～500 μg·mL-1）對(duì)小鼠正常3T3成纖維細(xì)胞和肝癌細(xì)胞Hepa1c1c7的細(xì)胞毒活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，千里香揮發(fā)油在24 h 對(duì)肝癌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為63.73、195.3 μg·mL-1，選擇性指數(shù)為3，千里香揮發(fā)油對(duì)肝癌細(xì)胞具有明顯的選擇性；在500 μg·mL-1，β-石竹烯表現(xiàn)出低細(xì)胞毒性，約20%的成纖維細(xì)胞和18%的肝癌細(xì)胞死亡，說明千里香揮發(fā)油的抗癌活性不是其主要成分β-石竹烯發(fā)揮主要作用，而是揮發(fā)油中各成分的協(xié)同作用所致。

龐雅瓊[81]對(duì)千里香黃酮類化合物（FMs）抗腫瘤轉(zhuǎn)移和機(jī)制進(jìn)行研究，結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29 的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)Ms 質(zhì)量濃度<30 μg·mL-1時(shí)細(xì)胞毒性低，并能顯著抑制HT-29 的黏附、遷移和侵襲；FMs 可劑量依賴性下調(diào)HT-29 表面整合素β1 和α6、CD44，以及HUVECs 細(xì)胞表面E-selection 的表達(dá)。小鼠體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)Ms 顯著抑制C57BL/6小鼠體內(nèi)黑色素瘤B16-F10的肺轉(zhuǎn)移。

由此可見，中藥九里香中的香豆素類、揮發(fā)油、黃酮類成分均具有一定的抗癌作用。

2.3 降血糖

Menezes 等[82]研究了千里香葉50%乙醇提取物（MPE）對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的降糖作用，發(fā)現(xiàn)100、200、400 mg·kg-1的MPE治療1周后降低糖尿病大鼠的血糖、膽固醇和三酰甘油水平，大鼠血糖值趨于正常值，降低果糖胺和糖化血紅蛋白值；此外，MPE 還能減輕糖尿病引起腎臟、胰腺和肝臟的形態(tài)學(xué)改變，降糖作用機(jī)制與格列本脲和二甲雙胍類似，抑制腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）敏感性鉀（ATP-sensitive K+）通道。

Zou 等[83]評(píng)估千里香葉總黃酮（TFMP）治療糖尿病腎病的效果。結(jié)果顯示，TFMP 顯著降低糖尿病大鼠血清尿素氮、血清肌酐、肌酐清除率、尿白蛋白、空腹血糖等糖尿病腎病臨床指標(biāo)的水平；TFMP 治療組糖尿病大鼠的三酰甘油、總膽固醇和低密度脂蛋白固醇水平降低，高密度脂蛋白膽固醇水平升高，同時(shí)TFMP 可提高糖尿病大鼠SOD 和谷胱甘肽過氧化物酶活性和降低丙二醛水平，降低轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子b1（TGF-b1）和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）蛋白的表達(dá)，減少糖尿病引起的腎臟形態(tài)學(xué)改變，表明TFMP 對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)糖脂代謝、氧化應(yīng)激及炎癥細(xì)胞因子。

2.4 抗蟲抗菌

Dosoky 等[73]對(duì)千里香葉的揮發(fā)油成分和抗菌活性進(jìn)行了分析研究，鑒定出棕櫚酸酯、異桉油烯醇、（E,E）-香葉芳樟醇、β-石竹烯等76 種揮發(fā)油成分；抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，千里香葉中揮發(fā)油對(duì)秀麗隱桿線蟲Caenorhabditis elegans具有良好的殺線蟲活性[半數(shù)致死濃度（LC50）=37 μg·mL-1]，對(duì)鹵蟲Artemia salina有中等抑制作用（LC50=41 μg·mL-1）和對(duì)黑曲霉Aspergillus niger有較弱抗真菌作用[最小抑菌濃度（MIC）=313 μg·mL-1]，對(duì)蠟樣芽孢桿菌Bacillus cereus和白色念珠菌Candida albicans細(xì)菌無抑制作用（MIC=2500 μg·mL-1）。Sonter等[35]在對(duì)千里香不同提取物抗菌活性的研究中發(fā)現(xiàn)千里香葉正己烷提取物對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌均表現(xiàn)出抑制作用，其中對(duì)枯草芽孢桿菌的MIC 為50 μg·mL-1，GC-MS 分析表明，正己烷提取物中主要成分是環(huán)己烷和3-(6-甲氧基-3-甲基-2-苯并呋喃基)環(huán)己酮，兩者可能是正己烷提取物發(fā)揮抑菌作用的活性成分，具有較大開發(fā)抗微生物制劑的開發(fā)前景。

2.5 預(yù)防骨質(zhì)疏松

文娛等[84]研究發(fā)現(xiàn)九里香葉高劑量給藥明顯提高去卵巢大鼠體積骨密度、去勢(shì)后小鼠骨小梁平均寬度和骨小梁面積分率，血清鈣含量增加，表明九里香葉具有預(yù)防骨質(zhì)疏松作用。Wu 等[85]研究九里香對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的軟骨保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)九里香降低了膝關(guān)節(jié)炎大鼠滑液的TNF-α、IL-1β含量及減少了軟骨細(xì)胞的凋亡，且呈劑量依賴性，進(jìn)一步的實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）結(jié)果表明，九里香顯著下調(diào)β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、環(huán)氧化酶-2（COX-2）的信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表達(dá)，推測(cè)九里香可能抑制β-catenin信號(hào)發(fā)揮抗凋亡和軟骨保護(hù)作用。

2.6 抗氧化活性

Kaur等[86]研究了九里香葉乙醇、正丁烷、氯仿、乙酸乙酯和水萃取物的抗氧化和抗誘變活性，并用分光光度法對(duì)萃取部位的總酚和總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在不同萃取物中，乙酸乙酯萃取物的總酚含量最高，三氯甲烷萃取物的總黃酮含量最高。1,1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）自由基清除實(shí)驗(yàn)、2,2'-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基陽(yáng)離子脫色試驗(yàn)和抗誘變性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明乙酸乙酯萃取物抗氧化活性和抗誘變活性最強(qiáng)，這與九里香葉中富含酚酸和黃酮類成分有關(guān)。Sonter等[35]研究發(fā)現(xiàn)千里香丙酮提取物中總黃酮和酚類成分含量較高，丙酮提取物具有較強(qiáng)的ABTS抑制活性（IC50=555.18±1.68 μg·mL-1），正己烷提取物具有較強(qiáng)的H2O2自由基清除活性（IC50=509.84±3.03 μg·mL-1），提取物的抗氧化活性與其含有的酚類和黃酮的含量有關(guān)。

2.7 其他作用

有研究表明千里香總黃酮具有保護(hù)糖尿病心肌病作用，通過增加Nrf2 和HO-1 基因表達(dá)并抑制氧化應(yīng)激、炎癥和細(xì)胞凋亡等減輕2 型糖尿病大鼠心肌病的發(fā)展[87]。月橘烯堿、蛋白多糖被認(rèn)為是千里香發(fā)揮抗生育作用的活性物質(zhì)。月橘烯堿的抗著床作用與其激素活性有關(guān)，蛋白多糖則可能是通過前列腺素或其生物合成前體花生四烯酸的大量釋放而實(shí)現(xiàn)引產(chǎn)作用[88-89]。

3 保育研究

3.1 資源現(xiàn)狀

九里香和千里香分布在亞洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)，主要分布在我國(guó)廣東、廣西、海南、臺(tái)灣、福建等省份，以及印度、緬甸等東南亞國(guó)家，廣東、廣西則是其在我國(guó)的歷史道地產(chǎn)區(qū)[90]。九里香植株常分布在較濕潤(rùn)的平地、緩坡、小丘陵的灌木叢中，喜砂質(zhì)土壤、向陽(yáng)的地方，自然分布地區(qū)更靠南，其耐干熱，植株較矮小，廣東等地多用作城市景觀綠化，人工栽培比例大。千里香常分布在內(nèi)陸地區(qū)的低丘陵或海拔較高的山地林中，立地較濕潤(rùn)，比較耐陰，石灰?guī)r山地、花崗巖地區(qū)較常見，以野生為主，栽培占比小，自然分布地區(qū)偏北，產(chǎn)區(qū)主要分布在廣東（云浮、茂名、清遠(yuǎn)等地）、廣西（河池、崇左、百色等地）及其周邊地區(qū)[2,91-92]。

3.2 植物學(xué)特征

九里香和千里香均為小喬木，樹干和枝條白灰或淡黃色，當(dāng)年生枝條綠色；葉有小葉3～5片，也有7片；圓錐狀聚傘花序頂生或腋生，花白色，花瓣長(zhǎng)橢圓形，具雄蕊10 枚，花有芳香味，花期為4—9 月；漿果成熟后橙黃色至朱紅色，橢圓形或卵形，果肉有黏膠質(zhì)液，種子具棉質(zhì)毛，果期在9—12月[93]。

九里香和千里香在器官形態(tài)上的差異主要在于小葉和果實(shí)，九里香的小葉倒卵圓形或近菱形，中部以上最寬，頂端鈍，急尖或近于圓，成熟的果長(zhǎng)與寬約略相等，頂急尖或鈍；千里香小葉卵形或橢圓形，最寬處一般位于中部以下，頂端長(zhǎng)漸尖，成熟的果長(zhǎng)遠(yuǎn)過于寬，多呈狹長(zhǎng)橢圓形，頂端錐尖[2,92-93]。

3.3 種苗繁育

九里香和千里香的種苗繁育方式主要有種子繁育、扦插繁育和組織培養(yǎng)繁育3種方式。

3.3.1 種子繁育 種子繁育是九里香和千里香的最常用的繁育方式。繁育過程需要種子具有一定的萌發(fā)能力，種植者掌握一定的萌發(fā)特性及育苗技術(shù)。九里香種子是一種正常型種子，含水量為9%的種子在4 ℃和-20 ℃的低溫條件貯存30 d 和42 d，多數(shù)種子仍能萌發(fā)；種子在光照和黑暗下的適應(yīng)溫度不同，光照下在25、30 ℃和室溫，黑暗條件下20 ℃和室溫，九里香種子萌發(fā)較好，且光照能促進(jìn)種子的萌發(fā)[94]。九里香喜濕潤(rùn)環(huán)境，對(duì)土壤水分有一定的要求。劉燦等[95]研究表明九里香在相對(duì)含水量64.53%～89.40%的土壤里生長(zhǎng)較好，具有較高的光合速率和水分利用效率，低于32.11%時(shí)造成水分脅迫，九里香永久萎蔫。在九里香幼苗生長(zhǎng)階段，施以適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)液可促進(jìn)幼苗的生長(zhǎng)。崔婧等[96]分析了不同濃度霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液對(duì)九里香生長(zhǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)低濃度和高濃度的霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液都會(huì)抑制九里香的生長(zhǎng)，5.0～10.0 倍的霍蘭格營(yíng)養(yǎng)液最有利于其生長(zhǎng)。

3.3.2 扦插繁育 一般剪取長(zhǎng)勢(shì)良好、中等成熟的1 年生以上的枝條在春季或雨季7—8 月進(jìn)行扦插，溫度在18～25 ℃時(shí)，35～40 d 后扦插枝條開始生根，也可以使用生根劑加速枝條的生根，插后20～25 d可發(fā)根[97]。千里香的扦插培育過程簡(jiǎn)單，剪取長(zhǎng)為8～15 cm、留有至少2 個(gè)節(jié)的插穗，然后將插穗切口依次置于水和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑中浸泡0.5～1.5 h 和1～3 h，再將處理后的插穗扦插于土壤中，保持其生長(zhǎng)環(huán)境相對(duì)空氣濕度為75%～85%、遮光率為70%～80%、溫度15～30 ℃，生根后移植苗床，苗高達(dá)35 cm 以上時(shí)即可出圃進(jìn)行大田種植[98]。

3.3.3 組織培養(yǎng)繁育 千里香的組織培養(yǎng)研究中，一般帶芽莖段或種子為外植體誘導(dǎo)叢生芽，經(jīng)壯苗培養(yǎng)后誘導(dǎo)生根，常用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)有6-芐氨基嘌呤（6-BA）、噻苯?。═DZ）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）及其鉀鹽（IBAK）。覃國(guó)樂等[99]發(fā)明了一種適用于千里香種苗的組織培養(yǎng)方法，該法以千里香頂芽或腋芽為材料，經(jīng)消毒后接種在MS+2.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA培養(yǎng)基中，在25 ℃，光照時(shí)間12 h·d-1，光照強(qiáng)度1500 1x條件下培養(yǎng)5周，獲得萌發(fā)小芽；然后將萌發(fā)小芽接種在MS+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1TDZ 中，在25 ℃，光照時(shí)間14 h·d-1，光照強(qiáng)度2000 1x 下誘導(dǎo)叢生芽；再將無根苗轉(zhuǎn)入1/2MS+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1IBAK，在25 ℃，光照時(shí)間10 h·d-1，光照強(qiáng)度2000 1x，培養(yǎng)6 周誘導(dǎo)生根；最后將誘導(dǎo)出的根長(zhǎng)1.5 cm 的種苗經(jīng)煉苗后移栽到泥炭、珍珠巖混合基質(zhì)中，在25 ℃，相對(duì)濕度60 %，自然光照的條件下培養(yǎng)5 周，植株成活率可達(dá)95%，植株長(zhǎng)出5 張完整的葉后，即可移栽至大田。該方法建立了千里香組織培養(yǎng)育苗的體系，繁殖系數(shù)達(dá)6～7 倍，在短期內(nèi)提供大量的優(yōu)質(zhì)種苗。黎瑩等[100]則以千里香種子為外植體，接種在MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1IBA+0.5 g·L-1活性炭培養(yǎng)基中萌發(fā)；7～10 d 后將萌發(fā)的芽先接種于MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1IBA，在溫度為25～30 ℃，光照強(qiáng)度為2000～3000 lx，光照時(shí)間10～12 h·d-1中培養(yǎng)40～50 d（2 代），然后接種于MS+1.5 mg·L-16-BA +0.05 mg·L-1IBA，在溫度為25～30 ℃，光照強(qiáng)度為2000～3000 lx，光照時(shí)間10～12 h·d-1下培養(yǎng)180～200 d（9～10代），進(jìn)行叢生芽的誘導(dǎo)；再將叢生芽轉(zhuǎn)入MS壯苗培養(yǎng)基中，獲得壯苗；然后將壯苗的叢生芽切成單株接種到1/2MS+1.0 mg·L-1IBA+1.5 g·L-1活性炭培養(yǎng)基上，在光照強(qiáng)度為3000～3500 lx，光照時(shí)間為12 h·d-1，培養(yǎng)25 d；最后將生根組培苗置于溫室中煉苗10～15 d，然后開蓋取苗，再將生根組培苗洗凈培養(yǎng)基，接著用1000 倍多菌靈或甲基托布津處理10～15 min，然后放入泥炭土-珍珠巖（2∶1）混合基質(zhì)中栽培。該方法先后接種于激素濃度高和低的增殖培養(yǎng)基中，有效解決了芽的玻璃化問題，既提高增殖率又保證了植株正常生長(zhǎng)，獲得組培苗生根率可達(dá)98.6%，有效解決了千里香扦插和嫁接苗繁殖率低的問題，適用于千里香組培苗的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

3.4 種質(zhì)資源保存

超低溫保存是藥用植物種質(zhì)資源常用的離體保存手段，顧雅坤等[101]研究表明九里香種子可用液氮超低溫保存技術(shù)實(shí)現(xiàn)其種質(zhì)資源的長(zhǎng)期保存，含水量為7%的種子經(jīng)分步冷凍處理后，種子的活力比玻璃化冷凍和直接冷凍法的要高。

4 結(jié)語(yǔ)

目前，從九里香和千里香中已經(jīng)分離和鑒定出280 多個(gè)化合物，含香豆素類、黃酮類、生物堿類及揮發(fā)油等類型的活性成分，體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)表明其提取物和單體成分具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤轉(zhuǎn)移、降血糖、殺蟲抑菌、抗生育等作用。中藥九里香雖已被收錄在《中華人民共和國(guó)藥典》2020 年版[1]，但是其和《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2008 年版[102]中僅對(duì)其性狀、粉末鑒定進(jìn)行規(guī)定，缺少活性成分含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，基于中藥九里香傳統(tǒng)功效和現(xiàn)代藥理作用，分析其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、制定和完善中藥九里香科學(xué)的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法迫在眉睫。中藥九里香抗炎鎮(zhèn)痛、殺蟲等療效確切，已有三九胃泰顆粒、九龍胃藥、膚陰潔復(fù)方黃松洗液等多種中成藥上市，但抑菌、抗生育等其他活性作用機(jī)制尚不清晰。在倡導(dǎo)“減抗替抗”的趨勢(shì)下，研究中藥九里香抑菌成分及作用機(jī)制，從中藥九里香中研發(fā)新抑菌藥物具有良好的前景。此外，中藥九里香中富含甲氧基黃酮類的活性成分，此類黃酮衍生物能顯著提高肝臟代謝穩(wěn)定性，并能改善腸道吸收，這將大大提高其口服生物利用度[103-104]，此類黃酮化合物具有巨大研發(fā)潛力。

九里香、千里香是廣東、廣西的特色藥用植物，嶺南地區(qū)溫暖、濕潤(rùn)氣候和獨(dú)特的地理環(huán)境特別適宜其生長(zhǎng)。但是，因其結(jié)實(shí)率低、扦插周期長(zhǎng)、生根率不高，限制了其人工培育，導(dǎo)致國(guó)內(nèi)中藥九里香在市場(chǎng)上的短缺，給三九胃泰顆粒等以中藥九里香為原料的中成藥帶來一定的生產(chǎn)壓力。隨著植物組織培養(yǎng)技術(shù)在藥用植物種質(zhì)資源保存和栽培的廣泛應(yīng)用，有助于實(shí)現(xiàn)九里香和千里香的大規(guī)?？焖俜庇?。