長春地區(qū)7716例女性患者HPV基因型分布特征分析

陳媛媛,李 鋌,田春迎,張曉偉,孫洪帥,朱 華

(吉林省腫瘤醫(yī)院 檢驗科,吉林 長春130012)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一種雙鏈、環(huán)狀 DNA 病毒[1],人是其唯一宿主。HPV主要通過性傳播感染,有性生活的女性在其一生中大約75%～80%概率會感染HPV[2]。雖然大多數(shù)HPV感染(70%～90%)無癥狀,并會在1～2年內(nèi)自愈,但持續(xù)感染(或多次再感染)會導(dǎo)致發(fā)病甚至死亡[3]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的HPV基因型大約有200種不同分型,其中20多種是已知或可能會致癌的分型[3],根據(jù)其致病性分為高危型HPV(High risk-Human papilloma virus,HR-HPV)和低危型HPV(Low risk-Human papillomavirus,LR-HPV)兩大類。有研究[4]顯示,低危型(主要是HPV6/11)感染主要導(dǎo)致外生殖器疣;而高危型(主要是HPV 16/18)感染可發(fā)生癌前病變甚至癌變,除了宮頸癌外,還可導(dǎo)致口咽癌、陰道癌、外陰癌和肛門癌等[5]。疫苗接種可以有效預(yù)防宮頸癌,但全球HPV疫苗接種覆蓋率沒有達到預(yù)期目標,這給宮頸癌預(yù)防帶來巨大挑戰(zhàn)[6]。有報道[7]指出HPV感染相關(guān)疾病每年給中國內(nèi)地造成的經(jīng)濟負擔(dān)不容忽視。我國目前已有3類疫苗上市:二價疫苗(HPV16、18)、四價疫苗(HPV16、18、6、11)、九價疫苗(HPV16、18、6、11、31、33、45、52、58)[8]。根據(jù)本地區(qū)HPV感染情況選擇合適的疫苗接種尤為重要,本研究回顧性分析了2019年7月至2023年2月于本院就診女性患者HPV感染情況,以期為長春地區(qū)制定相應(yīng)的區(qū)域篩查方案和疫苗接種措施提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2019年7月至2023年2月于吉林省腫瘤醫(yī)院就診且行HPV檢查女性患者7716例,其中門診患者4522例,住院患者3194例,年齡18～87歲,中位年齡47歲。納入標準:(1)3天內(nèi)未對陰道進行沖洗;(2)24小時內(nèi)無性行為且處于非月經(jīng)期;(3)自愿且首次在本院行HPV DNA分型檢測的女性。排除標準:(1)檢測處于妊娠期內(nèi);(2)3天內(nèi)對陰道使用藥物影響檢測結(jié)果;(3)有宮頸或生殖道畸形者;(4)凝血功能障礙嚴重,檢查不耐受者。

1.2 試劑與儀器

HPV分型檢測試劑盒(潮州凱普生物化學(xué)有限公司),檢測HPV分型為21種,其中15種高危型別:HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68;6種 低危型別:HPV6、11、42、43、 44、81(CP8304)。ABI7500熒光定量PCR儀(美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司),HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)。

1.3 方法

1.3.1標本采集 HPV DNA分型檢測的標本為宮頸脫落細胞,由婦科專業(yè)醫(yī)生用宮頸刷于宮頸口取得宮頸脫落細胞,將宮頸刷放入專用細胞保存管,貼好條碼送檢驗科檢測。送檢標本4℃保存,1周內(nèi)進行檢測。

1.3.2標本檢測 宮頸脫落細胞標本HPV DNA提取、擴增和擴增產(chǎn)物導(dǎo)流雜交步驟嚴格按照凱普試劑盒說明進行操作。提取的DNA如不能及時用于擴增可于-20℃保存。

1.4 統(tǒng)計方法

使用SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析;計數(shù)資料以頻數(shù)(百分比)表示,組間比較采用χ2檢驗分析;以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 7716例患者HPV感染檢出情況

7716例女性患者中HPV陽性檢出例數(shù)為1847例,陽性率為23.94%,其中單一感染1477例,陽性率為19.14%;二重及以上感染例數(shù)為370例,陽性率為4.80%。單一感染陽性率明顯高于多重感染陽性率,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=753.687,P<0.001)。

2.2 不同年齡組HPV感染分布

按年齡分為≤20歲、>20～30歲、>30～40歲、>40～50歲、>50～60歲、>60～70歲、>70～80歲、>80歲八個年齡段。其中>30～40歲、>40～50歲、>50～60歲年齡段人數(shù)較多,≤20歲和>80歲年齡段人數(shù)較少。HPV感染呈雙峰,首峰出現(xiàn)在>20～30歲年齡段,次峰出現(xiàn)在>60～70歲年齡段,其中>60～70歲年齡段HPV感染陽性率最高為32.12%(239/744),>80歲年齡段HPV感染陽性率最低為14.29%(2/14)。不同年齡段的HPV感染陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=67.199,P<0.01)。各年齡段主要以單一感染為主,單一感染中>60～70歲年齡段HPV感染陽性率最高為23.25%(173/744),>80歲年齡段HPV感染陽性率最低為14.29%(2/14);多重感染中≤20歲年齡段HPV感染陽性率最高為12.50(2/16),其次為>60～70歲年齡段率陽性率為8.87%(66/744),>80歲年齡段多重感染未檢出。

2.3 1847例HPV感染患者各亞型分布情況

HPV陽性患者中,低危型檢出率最高的是HPV81(CP8304)型(6.12%),其次為HPV42型(2.11%),檢出率最低的是HPV11型(0.76%);高危型檢出率最高的是HPV16型(24.04%),檢出率最低的是HPV35型(1.62%),檢出率前五分型依次為HPV16型(24.04%)、HPV52型(15.38%)、HPV58型(12.83%)、HPV53型(9.75%)和HPV51型(8.93%)。在單一感染和多重感染患者中,低危型檢出率最高的均為HPV81(CP8304)型,檢出率分別為3.19%、2.92%,高危型檢出率最高的均為HPV16型,檢出率分別為17.98%、6.06%。見表1。

表1 1847例HPV感染患者各亞型分布情況[n(%)]

2.4 HPV單一感染和多重感染分布情況

1847例HPV陽性患者中,低危型HPV感染患者125例,占比6.77%,高危型HPV感染患者1609例,占比87.11%,高低?；旌闲虷PV感染患者113例,占比6.12%,高危型HPV感染占比明顯高于低危型和混合型HPV感染占比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2393.644,2434.557,P<0.01)。高危型和低危型HPV感染中,單一型HPV感染占比(73.42%,6.55%)均高于多重HPV感染占比(13.70%,0.22%)。三組HPV感染型別中,多重感染中的二重感染占比均高于二重以上感染占比,低危型HPV感染二重感染以上患者未檢出。見表2。

表2 HPV單一感染和多重感染分布情況[n(%)]

3 討論

HPV感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要因素,據(jù)統(tǒng)計每年大概有60多萬個新增病例和30多萬人死于宮頸癌,它是全世界婦女最常見的癌癥之一[9]。截至2022年3月,大多數(shù)高收入和中高收入國家已將人類乳頭瘤病毒疫苗納入其國家免疫計劃,而一些人口較多的國家還沒有將HPV疫苗引入其免疫計劃,導(dǎo)致全球HPV疫苗的覆蓋率仍然很低,女性兩劑疫苗的覆蓋率為12%[10]。感染皮膚的HPV類型包括皮膚型(1、2、3、4、7、10、27、57、60、63、65等)、疣狀表皮增生癥型(5、8、20、21、47等)、黏膜高危型(16、18、31、33、35、45、52、56、58等)以及黏膜低危型(6、11等)[11]。有研究表明,不同區(qū)域HPV感染類型不同,不同年齡段HPV感染率也存在差異[12-13]。

本研究中7716例女性患者中HPV陽性率為23.94%,以單一感染為主。國內(nèi)一數(shù)據(jù)庫涵蓋29個省2458227例的大數(shù)據(jù)研究[14]顯示:各地域高危型HPV感染率范圍為15.3%～24.4%;HPV感染的兩個高峰出現(xiàn)在小于30歲和大于等于50歲年齡段;感染率排名前五的高危HPV基因型依次是HPV52、HPV16、HPV53、HPV58和HPV51。本研究HPV感染率處在大數(shù)據(jù)報道的范圍之內(nèi);本研究也發(fā)現(xiàn)HPV感染在不同年齡段呈現(xiàn)雙峰,首峰出現(xiàn)在20～30歲年齡段,次峰出現(xiàn)在>60～70歲年齡段,與大數(shù)據(jù)報道相符。本研究低危型HPV檢出率最高的是HPV81(CP8304)型,其次為HPV42型;檢出率排名前五的高危HPV基因型依次是HPV16、HPV52、HPV58、HPV53和HPV51,與大數(shù)據(jù)報道的基因型一致,排名先后有差異;前四位與長春地區(qū)一報道[15]一致。東北地區(qū)一項納入110927例患者的研究[16]顯示:HPV感染首峰出現(xiàn)在小于30歲年齡段,次峰出現(xiàn)在50～60歲年齡段;低危型HPV檢出率排名為HPV81(CP8304)、HPV11和HPV6;高危型HPV檢出率排名為HPV16、HPV58、HPV52、HPV33、HPV53和HPV18。西北地區(qū)一項納入145918例患者的研究[17]顯示:HPV感染率為22.97%,HPV感染首峰出現(xiàn)在小于20歲年齡段,次峰出現(xiàn)在61～65歲年齡段;小于20歲和21～25歲年齡段常見低危型HPV為HPV11和HPV6,其他年齡段為HPV61;高危型HPV最常見五個分型為HPV16、HPV58、HPV52、HPV18和HPV56。上海[18]HPV感染首峰出現(xiàn)在15～24歲年齡段,次峰出現(xiàn)在55～64歲年齡段,最常見低危型為HPV61、HPV6和HPV81,最常見高危型為HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV39。北京[19]HPV感染首峰出現(xiàn)在≤25歲年齡段,次峰出現(xiàn)在61～65歲年齡段,最常見高危型為HPV52、HPV16、HPV58、HPV51和HPV39。通過本研究數(shù)據(jù)和以上相關(guān)報道數(shù)據(jù)可以看出:中國根據(jù)地域的不同,HPV感染出現(xiàn)峰值的年齡段和常見的高、低危分型存在差異;感染峰值年齡段在20～30歲和50～70歲之間,青年和老年屬于高發(fā)期。有研究[20-21]顯示:初次性生活年齡、性伴侶個數(shù)、流產(chǎn)次數(shù)及吸煙史是HPV感染的獨立危險因素。本研究HPV感染首峰出現(xiàn)在>20～30歲年齡段,可能與此年齡段女性自我保護意識差,性伴侶多和性生活活躍有關(guān),因此年輕女性應(yīng)在有性生活前盡量接種HPV疫苗,可作為免疫屏障;次峰出現(xiàn)在>60～70歲年齡段,且此年齡段HPV感染陽性率最高為32.12%,此年齡段的女性為60～70年代出生的,教育水平明顯低于年輕女性,可能對HPV感染的了解不夠,隨著年齡的增長,激素水平發(fā)生改變和自身免疫力下降,可能與此年齡段HPV感染高發(fā)有關(guān)[22]。不同年齡段的HPV感染陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。各年齡段主要以單一感染為主,單一感染中>60～70歲年齡段HPV感染陽性率最高;多重感染中≤20歲年齡段HPV感染陽性率最高,納入研究的此年齡段人數(shù)為16人,可能與人數(shù)較少有關(guān),還需增加樣本量進一步分析。

本研究還發(fā)現(xiàn)1847例HPV陽性患者中,高危型占比明顯高于低危型和高低?；旌闲?差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);多重感染中以二重感染為主。高危HPV感染的持續(xù)時間較長,會增強受感染細胞惡性轉(zhuǎn)化的風(fēng)險;然而,造成感染持續(xù)存在的機制尚未被充分了解,可能與細胞外囊泡(EVs)在重塑宮頸癌微環(huán)境中的潛在作用和作為細胞間信息傳播的媒介有關(guān)[23]。女生生殖道菌群失調(diào)導(dǎo)致促炎癥環(huán)境,從而增加惡性細胞的增殖和HPV E6和E7的癌基因表達[24]。陰道微生物群的改變可能在HPV宮頸感染、進展和清除中起著功能性作用,感染和微生物群之間的關(guān)系可能會刺激新的益生菌的發(fā)展[25]。

綜上所述,長春地區(qū)女性HPV感染以單一、高危型感染為主,20～30歲和>60～70歲年齡段為HPV感染高發(fā)期,應(yīng)采取有效措施進行干預(yù);高危型檢出率最高的前五個型別依次是HPV16型、HPV52型、HPV58型、HPV53型和HPV51型。應(yīng)加強疫苗早期接種和宮頸癌早篩工作。因本研究是一個單中心研究,樣本量較小,可以為國家HPV數(shù)據(jù)庫累積數(shù)據(jù),為疫苗研發(fā)和接種提供更全面準確的數(shù)據(jù)。