血清G-17、PGRN、TFF3與Hp陽性胃潰瘍患者炎癥活動(dòng)度的關(guān)系及對(duì)治療后潰瘍愈合效果的預(yù)測(cè)價(jià)值*

劉海波,郭慶波,王曉蕾,何慶云,楊淑霞,孟凡杰

濰坊市益都中心醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東濰坊 262500

胃潰瘍是臨床常見的消化道慢性系統(tǒng)性疾病,幽門螺桿菌(Hp)感染為其主要病因,此外該病還受飲食、藥物、應(yīng)激精神及遺傳等因素影響,胃黏膜在胃酸及胃蛋白酶作用下消化自身最終形成潰瘍,可造成上腹部疼痛、出血甚至穿孔,嚴(yán)重影響患者身心健康[1-2]。胃潰瘍的病理變化為各種因素導(dǎo)致炎癥及氧化應(yīng)激增加,破壞胃壁的黏膜屏障,其中Hp感染后誘導(dǎo)的胃黏膜慢性炎癥是重要因素[3]。隨著質(zhì)子泵抑制劑的出現(xiàn),Hp陽性胃潰瘍的治愈率有所提高,但難治性潰瘍、潰瘍復(fù)發(fā)及潰瘍癌變等仍是臨床亟待解決的問題[4]。因此,有效地監(jiān)測(cè)Hp陽性胃潰瘍的病情變化并了解影響潰瘍愈合的相關(guān)因素,制訂針對(duì)性治療策略對(duì)于提高治療效果具有重要意義。胃酸分泌過多是造成胃潰瘍的直接原因,其分泌水平與胃泌素-17(G-17)水平相關(guān)[5],研究發(fā)現(xiàn),隨著潰瘍的愈合,患者的血清G-17水平下降,說明G-17與潰瘍的愈合有關(guān)[6]。顆粒蛋白前體(PGRN)是一種新型的生長(zhǎng)因子,參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、腫瘤發(fā)生、傷口愈合和炎癥反應(yīng)等機(jī)體多種病理、生理進(jìn)程,研究發(fā)現(xiàn),其水平變化與胃潰瘍的臨床病理特征及預(yù)后有關(guān)[7]。三葉因子3(TFF3)是特定表達(dá)于胃腸道中的結(jié)構(gòu)蛋白,其水平變化與胃腸黏膜的損傷、修復(fù)、增殖及惡變等病理、生理功能相關(guān)[8],研究認(rèn)為,TFF3表達(dá)上調(diào)能促進(jìn)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸黏膜的愈合,說明TFF3的表達(dá)變化與炎癥性胃潰瘍的腸黏膜功能有關(guān)[9]。G-17、PGRN、TFF3均參與消化道炎癥性疾病的發(fā)生,其與Hp陽性胃潰瘍的關(guān)系仍需進(jìn)一步明確。故本研究探討Hp陽性胃潰瘍患者血清G-17、PGRN、TFF3水平變化與炎癥活動(dòng)度的關(guān)系及對(duì)治療后潰瘍愈合效果的預(yù)測(cè)價(jià)值,旨在為該疾病的治療研究提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年9月1日至2021年8月30日本院收治的Hp陽性胃潰瘍患者145例,作為潰瘍組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡≥18歲;(2)符合《消化性潰瘍?cè)\斷與治療規(guī)范(2016年,西安)》[10]中胃潰瘍的診斷標(biāo)準(zhǔn);(3)經(jīng)胃鏡、病理學(xué)檢查確診為活動(dòng)性潰瘍(潰瘍數(shù)量≤2個(gè),直徑<20 mm);(4)入組前1個(gè)月內(nèi)未使用抗菌藥物、抑酸劑、胃黏膜保護(hù)劑等相關(guān)治療藥物;(5)14C-尿素呼吸實(shí)驗(yàn)(14C-UBT)≥100 dpm/mmoL CO2為Hp陽性;(6)有完整的臨床病歷資料;(7)對(duì)本次研究?jī)?nèi)容均知情同意,且簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)存在潰瘍性惡變、癌前病變、胃食管反流及其他器官或組織惡性病變;(2)存在免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病、其他急慢性或嚴(yán)重的器質(zhì)性疾病;(3)過敏體質(zhì)及無法正常溝通和交流。潰瘍組中,男79例,女66例;年齡18～75歲,平均(46.25±13.09)歲。另隨機(jī)納入本院同期體檢健康者40例為對(duì)照組,其中男23例,女17例;年齡20～74歲,平均(47.20±12.52)歲。兩組基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》的倫理道德準(zhǔn)則,且已獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1血清G-17、PGRN、TFF3水平檢測(cè) 于入院次日清晨獲取患者、體檢當(dāng)日獲取體檢健康者的外周空腹靜脈血標(biāo)本3 mL加入抗凝管中,3 500 r/min離心10 min(12 cm半徑)獲取血清,保存于-20 ℃待檢。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)G-17、PGRN水平,試劑盒購自武漢華美生物工程有限公司,將試劑盒取出后自然升至28 ℃,包被抗體,配制試劑和標(biāo)準(zhǔn)品,微孔板設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣本孔,分別添加標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣本,甩干微孔板中液體加入配制好的標(biāo)記抗體工作液,浸泡、沖洗、甩干,加入底物,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,測(cè)定波長(zhǎng)450 nm處的吸光度值,對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算G-17、PGRN水平。TFF3采用免疫比濁法檢測(cè),試劑盒購自寧波瑞源生物科技有限公司,提前30 min從4 ℃冰箱中取出試劑盒、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品恢復(fù)室溫備用,充分混勻復(fù)溶的質(zhì)控品,吸入樣品杯后放入質(zhì)控架檢測(cè),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度和相對(duì)應(yīng)的吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線,將樣本中的TFF3水平分別通過樣本的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。

1.2.2炎癥活動(dòng)度評(píng)價(jià) 于胃鏡檢查時(shí)取胃黏膜組織2～3塊送至病理活檢觀察炎癥反應(yīng)活動(dòng)度,輕度為炎癥細(xì)胞局限于黏膜淺層,不超過黏膜層的1/3(≤1/3),未侵及腺體上皮;中度為炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較嚴(yán)重,約達(dá)到黏膜層的2/3(>1/3且≤2/3),侵及腺體上皮;重度為黏膜層有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),覆蓋全部黏膜層(>2/3),且大量侵襲腺體上皮[11]。

1.2.3潰瘍愈合效果評(píng)價(jià)及分組 潰瘍組采取常規(guī)治療,于療程結(jié)束后行胃鏡檢查評(píng)價(jià)潰瘍愈合效果,參照《消化性潰瘍中醫(yī)診療專家共識(shí)意見(2017)》[12],分為活動(dòng)期(A期,A1、A2),愈合期(H期,H1、H2)和瘢痕期(S期,S1、S2)。痊愈為胃鏡下檢查潰瘍病灶瘢痕愈合或無痕跡愈合;顯效為潰瘍病灶達(dá)到愈合期或減輕2個(gè)級(jí)別;有效為潰瘍病灶達(dá)到愈合期或減輕1個(gè)級(jí)別;無效為內(nèi)鏡下檢查無好轉(zhuǎn)。將痊愈、顯效患者納入愈合組,有效和無效患者納入未愈合組。

1.2.4一般資料收集 收集所有受試者的一般資料包括性別,年齡,體質(zhì)量指數(shù)(BMI),病灶最大徑,吸煙,飲酒,精神壓力[壓力知覺量表(PSS-14)評(píng)分>43分[13]],發(fā)病部位(胃體、胃竇、胃角),不良飲食習(xí)慣(辛辣刺激或3餐無定時(shí)),睡眠不足[睡眠狀況自評(píng)量表(SRSS)評(píng)分>23分[14]]及血清G-17,PGRN,TFF3水平。

2 結(jié) 果

2.1潰瘍組與對(duì)照組血清G-17、PGRN、TFF3水平比較 與對(duì)照組比較,潰瘍組的血清G-17、PGRN、TFF3水平更高(P<0.05)。見表1。

表1 潰瘍組與對(duì)照組血清G-17、PGRN、TFF3水平比較

2.2潰瘍組不同炎癥活動(dòng)度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平比較 潰瘍組中炎癥活動(dòng)度輕度患者32例,中度患者65例,重度患者48例。炎癥活動(dòng)度重度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平高于中度和輕度患者(P<0.05),且炎癥活動(dòng)度中度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平高于輕度患者(P<0.05)。見表2。

表2 潰瘍組不同炎癥活動(dòng)度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平比較

2.3影響治療后潰瘍愈合效果的單因素分析 胃潰瘍患者中有102例治療后潰瘍愈合(愈合組),43例治療后潰瘍未愈合(未愈合組)。愈合組與未愈合組的性別、年齡、BMI、飲酒、發(fā)病部位、不良飲食習(xí)慣、病灶最大徑比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),愈合組與未愈合組吸煙、精神壓力、睡眠不足者占比及血清G-17、PGRN、TFF3水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 影響治療后潰瘍愈合效果的單因素分析[n(%)或

2.4影響治療后潰瘍愈合的多因素Logistic回歸分析 以本研究資料為樣本,以治療后潰瘍愈合情況為應(yīng)變量,以前述單因素分析(表3)中P<0.10的指標(biāo)/因素為自變量,共6個(gè)。各變量賦值參見表4。回歸過程采用逐步后退法,以進(jìn)行自變量的選擇和剔除,設(shè)定α剔除=0.10,α入選=0.05。共有4個(gè)變量被保留入回歸方程(P<0.05,OR>1)。血清G-17、PGRN、TFF3及精神壓力均為影響治療后潰瘍愈合效果的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表5。

表4 變量賦值表

表5 影響治療后潰瘍愈合的多因素Logistic回歸分析結(jié)果

2.5血清G-17、PGRN、TFF3預(yù)測(cè)治療后潰瘍愈合效果的價(jià)值分析 聯(lián)合檢測(cè)時(shí)以其Logit(P/1-P)=0.051×G-17+0.027×PGRN+0.062×TFF3+為聯(lián)合應(yīng)用的虛擬概率量指標(biāo)。分析結(jié)果顯示,G-17、PGRN、TFF3單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用時(shí),曲線下面積(AUC)分別為0.752(95%CI:0.581～0.921)、0.683(95%CI:0.415～0.957)、0.704(95%CI:0.425～0.979)、0.845(95%CI:0.741～0.939),其中聯(lián)合應(yīng)用診斷效能更高,AUC及靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均較各單獨(dú)應(yīng)用指標(biāo)有明顯提升。見表6、圖1。

圖1 血清G-17、PGRN、TFF3預(yù)測(cè)潰瘍愈合效果的ROC曲線

表6 血清G-17、PGRN、TFF3預(yù)測(cè)治療后潰瘍愈合效果的價(jià)值分析

3 討 論

Hp是被公認(rèn)的人類消化道致癌物質(zhì),感染后能引起胃及腸道的黏膜損傷,并促進(jìn)潰瘍的形成,最終導(dǎo)致癌變[15-17]。目前,臨床針對(duì)Hp感染引起的胃潰瘍主要從抑酸、抗Hp感染兩個(gè)方面進(jìn)行治療,隨著三聯(lián)及四聯(lián)療法的廣泛應(yīng)用,Hp陽性胃潰瘍的治療效果有所提高[18],但仍有部分患者發(fā)展為難治性潰瘍,愈合效果不佳。胃鏡檢查是目前評(píng)價(jià)胃潰瘍病情及愈合效果的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但屬于侵入性操作,多數(shù)需要麻醉處理,操作難度大。因此,需要尋找檢測(cè)方便、可重復(fù)性強(qiáng),能有效反映病情變化的血清標(biāo)志物以輔助臨床評(píng)估胃潰瘍病情及愈合效果。

本研究結(jié)果顯示,潰瘍組的血清G-17、PGRN、TFF3水平均高于對(duì)照組,且炎癥活動(dòng)度輕、中、重度者的血清G-17、PGRN、TFF3水平逐漸升高,說明其水平升高程度與Hp陽性胃潰瘍患者的炎癥活動(dòng)度有關(guān)。胃潰瘍主要發(fā)生于慢性胃炎患者中,膽汁、胃酸的反流侵蝕胃黏膜造成的炎癥反應(yīng)及Hp感染后引起的一系列炎癥病理反應(yīng)是潰瘍形成的重要條件[19]。G-17是由胃腸G細(xì)胞分泌的胃腸激素,其具有刺激胃酸和胃蛋白酶原的分泌、促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞的增殖、加強(qiáng)胃腸道的蠕動(dòng)等功能,高水平的G-17過度刺激胃酸和胃蛋白酶原,可消化自身黏膜,導(dǎo)致胃潰瘍的發(fā)生[20-21]。目前G-17水平已被證實(shí)與Hp感染密切相關(guān)[22]。PGRN是一種多效性生長(zhǎng)因子,在細(xì)胞周期、生長(zhǎng)、遷移、轉(zhuǎn)化及傷口愈合、腫瘤的發(fā)生等方面具有調(diào)節(jié)作用,其過表達(dá)可誘導(dǎo)包括白細(xì)胞介素(IL)-8、6、10及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在內(nèi)的多種炎癥細(xì)胞因子的分泌[23-24],AKSOY等[25]認(rèn)為,PGRN水平在健康者與胃潰瘍患者治療前后存在差異,并可作為胃潰瘍愈合的生物標(biāo)志物,提示PGRN水平的變化與胃潰瘍的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。TFF3是TFF家族成員,由大腸和小腸的杯狀黏液細(xì)胞分泌,具有保護(hù)胃腸道黏膜、抗凋亡、增加細(xì)胞遷移能力的作用[26]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在大鼠胃潰瘍模型中TFF3的表達(dá)升高,能通過激活NF-κB的負(fù)調(diào)節(jié)因子,發(fā)揮抗炎癥反應(yīng)的作用[27],且在慢性萎縮性胃炎癌前病變患者中亦存在TFF3水平升高的情況[28],提示TFF3水平的升高與病情的變化有關(guān)。

本研究通過多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),血清G-17、PGRN、TFF3水平和精神壓力是影響潰瘍愈合效果的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,且經(jīng)ROC曲線驗(yàn)證,血清G-17、PGRN、TFF3均對(duì)治療后潰瘍愈合有良好的預(yù)測(cè)作用,聯(lián)合預(yù)測(cè)的價(jià)值更高。存在精神壓力是影響潰瘍愈合效果的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,可能是因?yàn)榛颊咛幱诰駢毫顟B(tài)下,導(dǎo)致內(nèi)分泌功能紊亂,進(jìn)而削弱機(jī)體的免疫功能,影響潰瘍愈合。劉東濤等[29]研究證實(shí),G-17是導(dǎo)致Hp陽性消化性潰瘍發(fā)生的危險(xiǎn)因素,與本研究結(jié)果具有同質(zhì)性,說明G-17參與Hp陽性胃潰瘍的進(jìn)展。PGRN多作為炎癥性疾病的預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo),TFF3則是胃癌的預(yù)后和診斷生物標(biāo)志物[30]。以上結(jié)果說明,G-17、PGRN、TFF3具有胃腸道疾病生物標(biāo)志物的研究?jī)r(jià)值。而本研究發(fā)現(xiàn),在潰瘍組不同炎癥活動(dòng)度及愈合效果不同患者中存在G-17、PGRN、TFF3的水平差異,此結(jié)果證實(shí)了G-17、PGRN、TFF3水平與病情炎癥程度有關(guān),其水平越高,患者的炎癥反應(yīng)越嚴(yán)重,治療難度大,即預(yù)后更差,效果不佳。血清G-17、PGRN、TFF3分別反映了胃酸的分泌程度、炎癥程度及胃黏膜損傷程度3個(gè)方面,聯(lián)合預(yù)測(cè)能更全面地反映病情。

綜上所述,血清G-17、PGRN、TFF3水平在Hp陽性胃潰瘍患者中異常升高,且與炎癥活動(dòng)度有關(guān),是影響潰瘍愈合的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)治療后潰瘍愈合效果有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值,可作為臨床輔助判斷患者病情和預(yù)后的生物標(biāo)志物。