血清LPE、LPC對急性冠脈綜合征的早期診斷及預(yù)后評估價值*

呂園園,陳 娟,盧維娜,李 瀟

中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院第一派駐門診部,湖北武漢 430014

急性冠狀動脈綜合征(ACS)是冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂、冠脈痙攣、完全性或不完全性閉塞性血栓形成為病理基礎(chǔ)的心肌損傷綜合征[1]。臨床上根據(jù)ACS患者心肌損傷的類型可分為不穩(wěn)定型心絞痛、急性ST段抬高型和急性非ST段抬高型心肌梗死[2]。目前用于心肌損傷診斷的血清標(biāo)志物包括心臟肌鈣蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)等,但臨床上對ACS的早期診斷的靈敏度不高,在評估冠狀動脈病變嚴(yán)重程度及預(yù)后方面價值有限[3]。心臟是能量代謝旺盛的器官,ACS發(fā)生后會導(dǎo)致嚴(yán)重的心臟能量代謝障礙。近年來,隨著代謝組學(xué)技術(shù)如高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的發(fā)展,對低相對分子量的代謝物質(zhì)進(jìn)行分析成為可能,這將有助于ACS的早期診斷及疾病嚴(yán)重程度判斷[4]。研究表明,溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)及溶血磷脂酰膽堿(LPC)是重要的代謝標(biāo)志物,二者均參與細(xì)胞脂肪酸代謝、卵磷脂代謝等代謝過程,在非酒精性脂肪肝[5]、阿爾茨海默病[6]、動脈粥樣硬化[7]等多種疾病中均發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,參與疾病的發(fā)生發(fā)展過程,可能是新的血清物標(biāo)志物。本研究通過檢測ACS患者血清中LPE、LPC的水平,初步分析二者在ACS早期診斷及預(yù)后評估中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年1月至2022年6月本院收治的108例ACS患者為ACS組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)ACS診斷符合2019年美國心臟病學(xué)會/美國心臟協(xié)會(ACC/AHA)制訂的ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)[8];(2)臨床及實驗室檢查等資料完整;(3)胸痛發(fā)作至入院間隔<4 h。(4)年齡18～85歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并嚴(yán)重的肝腎功能障礙;(2)合并心力衰竭、心肌病或嚴(yán)重心瓣膜疾病;(3)合并嚴(yán)重感染性疾病或惡性腫瘤。ACS組中男68例,女40例;年齡36～78歲,平均(60.82±6.32)歲;平均體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(26.01±3.82)kg/m2。選取同期本院60例穩(wěn)定型心絞痛(SAP)患者作為SAP組,其中男37例,女23例;年齡33～79歲,平均(60.41±6.58)歲;平均BMI(25.68±3.31)kg/m2。另外,選取50例健康查體的健康志愿者作為對照組,其中男30例,女20例;年齡35～79歲,平均(59.82±7.12)歲;平均BMI(25.89±3.01)kg/m2。所有受試者及家屬對本研究知情同意,并簽署知情同意書,本研究經(jīng)本院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1血清LPE、LPC水平檢測 采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測各組血清LPE、LPC水平。留取ACS組和SAP組入院即刻,對照組清晨空腹靜脈血5 mL,3 000 r/min離心10 min,分離上層血清。取30 μL血清,同時加入3倍體積的去蛋白液,12 000 r/min離心15 min,取上清至離心柱,4 000 r/min離心5 min,將濾過的上清用移液器轉(zhuǎn)移到密封的EP管中。色譜條件:固定相為superlcosil LC-SCX;流動相為乙腈及水以10∶90的比例配制,等度洗脫,流速0.8 mL/min,柱溫40 ℃,進(jìn)樣量5 μL,梯度洗脫程序15 min,分離LPE、LPC。檢測LPE、LPC水平,每個標(biāo)本重復(fù)檢測5次,結(jié)果取平均值。

1.2.2觀察指標(biāo) 收集并記錄所有受試者性別、年齡、BMI、糖尿病史、高血壓史等一般資料,ACS組和SAP組入院即刻及對照組體檢時靜脈血生化指標(biāo),如總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、cTnT、CK-MB及血肌酐,完善各組心臟彩超檢查,記錄左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)。

1.2.3ACS患者全球急性冠脈事件注冊(GRACE)危險評分 根據(jù)ACS患者年齡、心率、動脈收縮壓、血肌酐、入院時心臟驟停、心電圖變化及心肌標(biāo)志物等參數(shù)進(jìn)行GRACE危險評分[9],用于對ACS患者危險分層。根據(jù)GRACE評分結(jié)果,將ACS患者分為高危組(GRACE評分>140分)34例、中危組(109分

1.2.4ACS患者隨訪及預(yù)后 ACS患者出院后以門診或電話方式進(jìn)行隨訪,所有患者隨訪6個月,隨訪內(nèi)容為心臟不良事件(MACE)發(fā)生情況。MACE定義為全因死亡、非致命性的AMI、非預(yù)期的冠脈血運(yùn)重建。根據(jù)是否發(fā)生MACE,將ACS組分為MACE組、非MACE組。

2 結(jié) 果

2.13組一般資料及血清LPE、LPC水平比較 ACS組、SAP組及對照組高血壓史比例及血清LPE、LPC、cTnT、CK-MB水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而各組性別、年齡、BMI、糖尿病史比例及TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。進(jìn)一步兩兩比較顯示,相比于對照組和SAP組,ACS組LPE、LPC、cTnT、CK-MB水平明顯升高(P<0.05)。見表1。

表1 各組一般資料及血清LPE、LPC水平比較或n/n)

2.2ACS患者血清LPE、LPC與心cTnT、CK-MB水平的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,ACS患者血清LPE、LPC水平與血清cTnT水平呈正相關(guān)(r=0.612、0.568,均P<0.001),與CK-MB呈正相關(guān)(r=0.408、0.426,均P<0.001)。

2.3ACS患者血清LPE、LPC水平與GRACE危險評分的關(guān)系 高危組、中危組及低危組患者血清LPE、LPC水平比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),進(jìn)一步兩兩比較顯示,高危組血清LPE、LPC水平明顯高于中危組和低危組(P<0.05),中危組明顯高于低危組(P<0.05)。見表2。

表2 ACS患者血清LPE、LPC水平與GRACE危險評分的關(guān)系

2.4血清LPE、LPC及cTnT對ACS的診斷效能 以約登指數(shù)最大時作為血清LPE、LPC、cTnT的最佳截斷值,ACS診斷的曲線下面積(AUC)分別為0.698、0.780、0.798,血清LPE、LPC、cTnT聯(lián)合檢測的AUC為0.877(95%CI:0.834～0.897);相比于單項檢測,三者聯(lián)合檢測的診斷價值明顯較高(P<0.001)。見表3、圖1。

圖1 血清LPE、LPC及cTnT對ACS的診斷效能

表3 血清LPE、LPC與cTnT對ACS的診斷效能

2.5影響ACS患者預(yù)后的因素分析 MACE組患者血清LPE、LPC、cTnT、LVEF顯著高于非 MACE組(P<0.05);MACE組與非MACE組性別、年齡、BMI、糖尿病史比例、高血壓史比例及CK-MB、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。以是否發(fā)生MACE(賦值:否=0,是=1)為因變量,以LPE、LPC、cTnT、LVEF(賦值:實際值)為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,血清LPE、LPC、cTnT水平升高及LVEF降低是影響MACE發(fā)生的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。見表5。

表4 影響ACS患者預(yù)后的單因素Logistic分析或n/n)

表5 影響ACS患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

冠心病是常見的心血管系統(tǒng)疾病,我國冠心病患病人數(shù)達(dá)1 100萬例,近年來其患病率和死亡率呈不斷升高的趨勢[10]。ACS是冠心病的一種嚴(yán)重類型,具有發(fā)病急、病情重、預(yù)后差的特點(diǎn),是心血管疾病患者死亡的主要原因,但如及時發(fā)現(xiàn)并治療,有助于降低患者病死率,改善患者預(yù)后[1]。目前,臨床上ACS相關(guān)的生物標(biāo)志物有cTnT、CK-MB等,但其他疾病如敗血癥、腦血管疾病及心臟毒性藥物反應(yīng)等也可引起這些標(biāo)志物水平的升高,因而對診斷ACS的特異度較低[11]。代謝是細(xì)胞生命活動的基礎(chǔ),代謝物質(zhì)廣泛參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)、能量轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程。代謝組學(xué)是尋找代謝物與疾病病理生理學(xué)變化的研究方法,可以對低相對分子質(zhì)量代謝物進(jìn)行定性和定量分析。研究發(fā)現(xiàn),代謝物質(zhì)在動脈粥樣硬化、高血壓等心血管疾病中均具有不同的特點(diǎn),如ACS患者磷脂酰膽堿通路的代謝異常能夠加重血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,加重炎癥反應(yīng),導(dǎo)致斑塊破裂等病理過程[12]。因此,對ACS患者血清中代謝物質(zhì)進(jìn)行分析,尋找可能作為ACS早期診斷、風(fēng)險分層及預(yù)后判斷的代謝標(biāo)志物,是近年來的研究熱點(diǎn)。

LPE是磷脂酶A1/A2催化磷脂酰乙醇胺的脫酰基產(chǎn)物,是參與構(gòu)成細(xì)胞膜的一種重要成分。近年來研究發(fā)現(xiàn),LPE通過下調(diào)肝細(xì)胞中TG水解酶基因的表達(dá),并降低膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1的表達(dá),抑制脂肪分解,促進(jìn)細(xì)胞中脂滴的形成[13]。ACS作為一種脂代謝異常的疾病,LPE可能在ACS中發(fā)揮重要的作用。本研究結(jié)果顯示,ACS患者血清LPE水平升高,并且LPE的表達(dá)與ACS危險程度及心肌損傷標(biāo)志物cTnT、CK-MB有關(guān),表明LPE可能參與促進(jìn)ACS的發(fā)生發(fā)展。ACS患者血清LPE水平升高機(jī)制可能與血管內(nèi)皮細(xì)胞中磷脂酶A2活性升高有關(guān)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),血管內(nèi)皮細(xì)胞中的氧化物二氧化氮能夠與細(xì)胞膜結(jié)合并顯著激活磷脂酶A2的活性,導(dǎo)致細(xì)胞中磷脂酰乙醇胺水平降低,而LPE及磷脂酰絲氨酸水平顯著升高[14]。此外,LPE能夠通過誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M1極化及泡沫細(xì)胞形成[15],M1巨噬細(xì)胞通過分泌產(chǎn)生大量白細(xì)胞介素1β等促炎性細(xì)胞因子,引起血流動力學(xué)變化,導(dǎo)致動脈硬化斑塊破裂等急性冠狀動脈事件的發(fā)生[16]。本研究中,血清LPE水平升高是影響ACS不良預(yù)后的獨(dú)立危險因素,提示檢測血清LPE水平可能有助于判斷ACS患者的臨床預(yù)后。分析其原因,可能是血清LPE水平影響動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性。研究表明,LPE的代謝產(chǎn)物溶血磷脂酸能夠嵌入冠狀動脈斑塊/泡沫細(xì)胞中,增加斑塊破裂的風(fēng)險[17]。

LPC是卵磷脂代謝的中間產(chǎn)物,是一種具有生物活性的促炎癥脂質(zhì),是構(gòu)成氧化型低密度脂蛋白的主要磷脂成分。近年來發(fā)現(xiàn),LPC通過激活蛋白激酶C、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶第二信使,破壞內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞的功能,促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[7]。本研究中,ACS患者血清LPC水平明顯較高,并且LPC的水平與ACS患者危險程度及心肌損傷標(biāo)志物cTnT、CK-MB有關(guān),表明LPC參與促進(jìn)ACS的發(fā)生發(fā)展。LPC是在卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶催化下,由血清中卵磷脂轉(zhuǎn)化而成。研究表明,ACS患者卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶活性顯著升高導(dǎo)致LPC水平較高,進(jìn)而加重血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷,促進(jìn)動脈粥樣硬化的形成[18-19]。此外,LPC還能夠通過上調(diào)細(xì)胞間黏附分子的表達(dá),促進(jìn)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附,導(dǎo)致循環(huán)中單核細(xì)胞的聚集浸潤及泡沫細(xì)胞的形成,加重斑塊的不穩(wěn)定性[20]。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),血清LPC水平升高是ACS患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險因素,表明檢測血清LPC水平有助于判斷ACS患者的臨床預(yù)后。其原因可能是,LPC水平升高導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能障礙。研究表明,血清LPC水平升高通過抑制細(xì)胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流,抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮,引起冠狀動脈血管過度收縮[21]。此外,LPC能夠通過微泡的運(yùn)輸下,結(jié)合血小板表面的G2AR受體,激活血小板,促進(jìn)血小板聚集,降低動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性[22]。因此,臨床醫(yī)生可根據(jù)血清LPC水平對ACS患者的危險進(jìn)行分層,以及評估患者的預(yù)后,進(jìn)而采取有效的針對性治療措施,降低病死率,改善患者臨床預(yù)后。本研究中,ACS患者入院即刻(胸痛發(fā)作至入院間隔短于4 h)血清LPE、LPC水平明顯升高,提示血清LPE、LPC能夠較早反映心肌損傷的發(fā)生。ROC曲線分析結(jié)果證實,血清LPE、LPC與cTnT聯(lián)合檢測對ACS具有較高的診斷價值,提示血清LPE、LPC與cTnT聯(lián)合檢測有助于ACS的早期診斷。

綜上所述,ACS患者血清LPE、LPC水平升高,血清LPE、LPC水平與ACS患者危險分層有關(guān),血清LPE、LPC與cTnT聯(lián)合檢測對ACS具有較高的診斷效能,可為ACS的早期診斷、預(yù)防和治療提供參考依據(jù)。血清LPE、LPC、cTnT水平升高及LVEF降低是影響MACE發(fā)生的獨(dú)立危險因素。本研究尚存在一定的不足之處,一方面是本研究樣本量有限,未對進(jìn)一步進(jìn)行分層分析,有待今后開展多中心臨床研究深入探索;另一方面,不同研究檢測血清代謝物質(zhì)的方法及實驗參數(shù)有所不同,有待今后采用標(biāo)準(zhǔn)化統(tǒng)一的檢測方法進(jìn)一步驗證本研究結(jié)論。