平菇多糖對鸚鵡魚非特異性免疫與抗氧化指標(biāo)的影響

張震　初宇軒　仇鈞儀　張春艷　方珍珍　陳成勛

摘? ? 要：以平菇多糖為飼料添加劑，以鸚鵡魚為研究對象，探究不同水平的平菇多糖對鸚鵡魚（Amphilophus）免疫能力的影響。選用規(guī)格一致、健康活潑的鸚鵡魚375尾，隨機分為5個試驗組（其中2、3、4、5組為試驗組，1組為對照組），每組3個重復(fù)，每個重復(fù)25尾魚；平菇多糖添加量5個梯度為0‰、5‰、10‰、15‰、20‰，分別在 0、7、14、21、28 d取血液和組織等樣本，檢測相應(yīng)指標(biāo)。結(jié)果表明：14、21 d 時15‰、20‰添加量AKP活力顯著高于其他添加量（P<0.05）；14 d時5‰、10‰、15‰濃度組ACP活力顯著高于對照組（P<0.05）；20‰濃度組ACP活力顯著高于其他組（P<0.05）；14 d 時15‰濃度組溶菌酶活力顯著高于對照組（P<0.05）；14 d采樣中10‰濃度組NO含量顯著提高（P<0.05）；21 d時，5‰濃度組CAT、GSH-PX、T-AOC的活性顯著高于對照組，MDA含量顯著低于對照組。綜上所述，在鸚鵡魚所攝入的食物中添加適量的平菇多糖可以起到提高免疫力的作用。

關(guān)鍵詞：鸚鵡魚；平菇多糖；非特異性免疫

中圖分類號：S963? ? ? ?文獻標(biāo)識碼：A? ? ? DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2023.S.011

Effects of Pleurotus Ostreatus Polysaccharides on Non-specific Immune and Antioxidant Indicators of Parrotfish

ZHANG Zhen1，2， CHU Yuxuan1， QIU Junyi1， ZHANG Chunyan1， FANG Zhenzhen1， CHEN Chengxun1

（1.Tianjin Key Laboratory of Aquatic Ecology and Aquaculture/School of Fisheries， Tianjin Agricultural College， Tianjin 300384， China; 2.Tianjin Muchen Aquatic Technology Company Limited， Tianjin 300450， China）

Abstract：This experiment took oyster mushroom polysaccharide as feed additive and parrot fish as the research object to explore the effect of different levels of oyster mushroom polysaccharide on the immunity of parrot fish （Amphilophus）. 375 parrot fish with consistent specifications and healthy and lively were selected and randomly divided into 5 experimental groups （groups 2， 3， 4 and 5 were the experimental group， and group 1 was the control group）. Tail fish and oyster mushroom polysaccharide added in five gradients： 0‰， 5‰， 10‰， 15‰ and 20‰. Blood and tissue samples were taken at 0， 7， 14， 21 and 28 days， respectively. The results showed that the 15‰， 20‰ groups AKP activity on 14 and 21 days were significantly higher than other supplement groups （P<0.05）; On the 14 day，the 5‰， 10‰， 15‰ concentration groups ACP were significantly higher than the control group （P<0.05）; The ACP activity of the 20‰ concentration group was significantly higher than that of other groups （P<0.05）; The lysozyme activity of the 15‰ concentration group on 14 day was significantly higher than that of the control group （P<0.05）; The NO content in the 10‰ concentration group was significantly increased in the 14 day sampling （P<0.05）; Add 5‰ oyster mushroom polysaccharide， the activities of CAT， GSH-PX and T-AOC in the 5‰ concentration group were significantly higher than the control group， while the content of MDA in the 5‰ concentration group was significantly lower than the control group on the 21st day. To sum up， adding an appropriate amount of oyster mushroom polysaccharide to the food ingested by parrot fish can play a role in improving immunity polysaccharide to the food ingested by parrot fish can play a role in promoting immunity.

Key words： parrot fish; pleurotus ostreatus polysaccharides; non-specific immune

多糖，在植物動物體中普遍存在，有抗腫瘤功效，且副作用較小[1]。其中黃芪多糖[2]、香菇多糖[3]等生物特性研究報道較多。平菇，又名側(cè)耳和白平菇，營養(yǎng)價值極高，每千克平菇中約含有576～818 g的糖類。研究顯示，從真菌中提取的多糖可以提高機體免疫能力、提高抗腫瘤能力并可以抗氧化[4-5]，但其很少應(yīng)用于水生動物研究中[6]。

鸚鵡魚因色彩極其絢麗，嘴型非常像鸚鵡的嘴型而得名，深受廣大水族愛好者的歡迎[7]。鸚鵡魚占我國觀賞魚類市場份額巨大，而且增長速度較快，國際觀賞魚市場需求也不斷增大[8]。本研究擬探究不同水平的平菇多糖對鸚鵡魚免疫能力的影響，為平菇多糖在鸚鵡魚中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗魚與養(yǎng)殖管理

由天津某熱帶觀賞魚養(yǎng)殖公司提供375尾健康、大小均勻的鸚鵡魚，并運送到天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)實驗室。將試驗魚隨機平均分配到15個容積為1.1 m3水族缸中馴養(yǎng)1周，馴養(yǎng)期間投喂基礎(chǔ)飼料。馴養(yǎng)結(jié)束后，將其隨機分為5個試驗組（每組3個重復(fù)，每個重復(fù)25尾），分別用添加0‰、5‰、10‰、15‰、20‰的平菇多糖的飼料進行飽食投喂，每天2次（9：00和18：00）。養(yǎng)殖周期為28 d，試驗水溫為26～28 ℃，溶氧量7～8 mg·L-1，pH值7～8。

1.2 飼料

基礎(chǔ)飼料：魚粉42%、谷朊粉3%、豆粕22%、小麥粉14%、蝦粉3%、羧甲基纖維素2%、魚油8%、膽堿1%、磷酸二氫鈣1%、premix（預(yù)混料）4%。按配比均勻混合，加120 mL·kg-1的蒸餾水。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0‰、5‰、10‰、15‰、20‰平菇多糖，制成顆粒飼料。

1.3 樣本采集及指標(biāo)測定

1.3.1 樣本采集 分別在第0、7、14、21、28天取樣，每個重復(fù)取5尾，每個試驗組共15尾。解剖后取肝臟胰臟組織，所取樣本于冰箱-20 ℃冷凍保存。

1.3.2 指標(biāo)測定 測定酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、溶菌酶、一氧化氮（NO）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽還原酶（GSH-PX）等指標(biāo)。1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS 23.0軟件雙因素方差分析，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 平菇多糖對鸚鵡魚非特異性免疫指標(biāo)的影響

2.1.1 平菇多糖對鸚鵡魚肝臟AKP活性的影響? 由表1可知，0、7 d采樣中各試驗組AKP活力差異不顯著（P >0.05）；14、21 d 采樣中15‰、20‰添加量組AKP活力顯著高于其他組（P<0.05），而且隨平菇多糖添加量的增加AKP活力也呈遞增趨勢；28 d采樣中各試驗組AKP活力差異不顯著（P>0.05）。

2.1.2 平菇多糖對鸚鵡魚肝臟ACP活性的影響? 由表2可知，0、7 d各試驗組ACP濃度差異不顯著（P>0.05）；14 d 5‰、10‰、15‰ 濃度組ACP活力顯著高于對照組（P<0.05），20‰濃度組ACP活力顯著高于其他組（P<0.05）；21 d采樣中15‰濃度組ACP活力顯著高于其他組（P<0.05）；28 d各試驗組ACP活力差異不顯著（P>0.05）。

2.1.3 平菇多糖對鸚鵡魚肝臟溶菌酶活性的影響? ?從表3可知，0、7 d各試驗組溶菌酶活性差異不顯著（P>0.05）；14 d 15‰濃度組溶菌酶活性顯著高于其他組（P<0.05）；21 d采樣中5‰、10‰、15‰、20‰濃度組溶菌酶活力都顯著高于對照組（P<0.05）；28 d 10‰濃度組溶菌酶活性顯著高于其他濃度組（P<0.05）。

2.1.4 平菇多糖對鸚鵡魚肝臟NO含量的影響? 由表4可知，0、7 d采樣中各試驗組NO含量都高于對照組，但差異不顯著（P>0.05）；14 d采樣中10‰濃度組NO含量顯著提高（P<0.05），而且所有試驗組NO含量都高于對照組；21 d采樣中1.0‰濃度組與15‰濃度組NO含量顯著提高（P<0.05）；28 d采樣中各組間NO含量差異不顯著（P>0.05）。

2.2 平菇多糖對鸚鵡魚抗氧化指標(biāo)的影響

2.2.1 不同平菇多糖添加量對肝臟中SOD活力的影響 由表5可知，SOD活性隨著平菇多糖添加量的增加呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢。喂養(yǎng)7 d時，添加量10‰、15‰、20‰組SOD活性顯著高于對照組（P<0.05）；喂養(yǎng)14 d時，平菇多糖添加量10‰、15‰組SOD活性顯著高于對照組（P<0.05）；喂養(yǎng)21、28 d時，平菇多糖添加量10‰組SOD活性均顯著高于對照組（P<0.05）。

2.2.2 不同平菇多糖添加量對肝臟中CAT活性的影響 由表6可知，CAT活性隨著平菇多糖添加量的增加而普遍升高。喂養(yǎng)第7天，當(dāng)投喂量達(dá)到15‰時CAT活性出現(xiàn)顯著差異（P<0.05）；喂養(yǎng)第14天，當(dāng)平菇多糖添加量達(dá)到10‰、15‰時CAT活性出現(xiàn)顯著差異（P<0.05）；喂養(yǎng)第21天，添加量為5‰、15‰時CAT活性顯著高于其他組（P<0.05）；喂養(yǎng)第28天，投喂量為10‰、15‰時CAT活性顯著高于對照組（P<0.05）。

2.2.3 不同平菇多糖添加量對肝臟MDA的影響? 由表7可知，喂養(yǎng)7 d時，添加平菇多糖量10‰的MDA含量顯著低于其他各組（P<0.05）；喂養(yǎng)14 d時，添加平菇多糖量為10‰、15‰的MDA含量顯著低于其他組（P<0.05）；投喂21 d時，添加平菇多糖量5‰、10‰的MDA含量與其他組出現(xiàn)顯著差異（P<0.05）；投喂28 d時，添加平菇多糖量為10‰的MDA含量顯著低于其他各組（P<0.05）。

2.2.4 不同平菇多糖添加量對肝臟內(nèi)GSH-PX的影響 由表8可知，喂養(yǎng)7 d時，平菇多糖含量10‰、15‰組GSH-PX活性出現(xiàn)顯著性差異（P<0.05）；喂養(yǎng)14 d時，平菇多糖含量5‰、10‰、15‰組GSH-PX活性出現(xiàn)顯著性差異（P<0.05）；喂養(yǎng)21、28 d時，平菇多糖含量5‰、10‰試驗組GSH-PX活性顯著高于其他各組（P<0.05）。

2.2.5 不同平菇多糖添加量對肝臟T-AOC的影響? 由表9可知，喂養(yǎng)7 d時，平菇多糖含量10‰、15‰組T-AOC活性出現(xiàn)顯著性差異（P<0.05）；喂養(yǎng)14 d時，平菇多糖添加量5‰、10‰組T-AOC活性出現(xiàn)顯著性差異（P<0.05）；喂養(yǎng)21 d時，平菇多糖含量5‰、10‰、15‰組T-AOC活性出現(xiàn)顯著性差異（P<0.05）；喂養(yǎng)28 d時，平菇多糖含量10‰、15‰組T-AOC活性出現(xiàn)顯著性差異（P<0.05）。

3 討論與結(jié)論

3.1 平菇多糖對鸚鵡魚非特異免疫指標(biāo)的影響

不同藥物對魚類的非特異性免疫指標(biāo)的研究比較廣泛。白東清等[9]試驗證明，在一定的濃度環(huán)境情況下，黃芪多糖能增強黃顙魚非特異性免疫能力，持續(xù)向黃顙魚喂養(yǎng)適宜水平的黃芪多糖，會使得魚體內(nèi)SOD和CAT活力持續(xù)上升，同時MDA的含量有所下降，黃顙魚體內(nèi)LSZ活力與疾病抗性會相應(yīng)的提升，但是對魚體內(nèi)的NO含量卻有抑制傾向。劉含亮等[10]在飼料中添加殼聚糖，能顯著提高虹鱒魚非特異性免疫。王永宏等[11]也試驗證實，飼料中添加β-葡聚糖可以提高東方鲀魚的非特異性免疫能力。孫劉娟等[12]研究表明，1%、2%、3%、4%濃度的蝦青素并不會對非特異性免疫指標(biāo)肝臟中超氧化歧化酶活性和鰓中的溶菌酶活性造成明顯的影響。邢薇等[13]將免疫增強劑添加到飼料中對鸚鵡魚進行試驗，提高了AKP活性，第5周后LZM的活性明顯提高，補體C3并沒有明顯的變化。崔培等[14]將牛膝多糖添加到飼料投喂鸚鵡魚，結(jié)果表明0.4%添加量鸚鵡魚肝臟內(nèi)抗氧化指標(biāo)明顯增強，溶菌酶活力也得到了顯著地提高。

非特異性免疫系統(tǒng)是魚類的第一道防線，是最為迅速敏捷的防御系統(tǒng)，它首先對抗原作出反應(yīng)，釋放大量的水解酶，ACP、AKP是溶酶體的標(biāo)志性酶，能催化磷酸單酯水解，變成乙醇和磷酸[15-17]。本研究結(jié)果顯示，平菇多糖對鸚鵡魚肝臟中AKP的活性有促進作用，而且一定濃度下平菇多糖添加量與鸚鵡魚肝臟中AKP的活性呈正相關(guān)。飼料中添加平菇多糖14 d，5‰、10‰、15‰、20‰濃度組ACP活力均顯著高于對照組（P<0.05），說明一定濃度范圍下，平菇多糖的添加量對ACP活力的影響只在14～21 d短期內(nèi)具有明顯的促進作用，最適濃度可能在15‰～20‰之間。

溶菌酶是重要的非特異性免疫指標(biāo)，能夠抵御微生物對魚體的入侵。溶菌酶主要由于中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和吞噬細(xì)胞分泌，巨噬細(xì)胞中也大量存在溶菌酶[18-19]。本研究中，添加一定量的平菇多糖對鸚鵡魚肝臟內(nèi)溶菌酶活力有顯著的提高作用。崔培等[14]在試驗飼料中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0%、0.05%、0.10%、0.20%、0.40%的牛膝多糖喂養(yǎng)鸚鵡魚，第7、14、28天時，各試驗組肝臟內(nèi)溶菌酶活力隨牛膝多糖添加量的增加呈上升趨勢，這與本研究結(jié)果相似。

NO在水產(chǎn)動物體內(nèi)存在廣泛，是重要的免疫調(diào)節(jié)分子。本研究中，飼料中添加平菇多糖14 d，10‰濃度組NO含量顯著提高（P<0.05），且試驗組NO含量都高于對照組。白東清等[9]添加黃芪多糖，其中600、900、1 200、1 500 mg·kg-1劑量組黃顙魚體內(nèi)各個組織中NO含量隨著黃芪多糖水平增加而降低，其中600～1 500 mg·kg-1劑量組頭腎、中腎中的NO含量顯著低于對照組，此結(jié)果與本研究差異較大，原因可能是平菇多糖與黃芪多糖結(jié)構(gòu)差異。

3.2 平菇多糖對鸚鵡魚抗氧化指標(biāo)的影響

SOD是生物體中不可缺少的抗氧化酶，在生物體中廣泛存在，如動物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物體內(nèi)清除自由基的重要物質(zhì)[20-21]。平菇多糖具有較強的抗氧化性，能清除自由基，有延緩衰老的作用[22-24]。本研究結(jié)果顯示，添加10‰平菇多糖能夠提高鸚鵡魚的SOD活性，這與王留等[25]研究不一致。原因可能是添加的多糖種類、試驗動物不同。機體在正常情況下，體內(nèi)的氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)處于平衡狀態(tài)，形成脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物MDA，MDA水平可間接反映脂質(zhì)過氧化的程度[26-30]。平菇多糖具有較強的抗氧化作用，多糖分子通過提高體內(nèi)抗氧化酶活性來發(fā)揮其抗氧化作用，防止細(xì)胞膜脂質(zhì)氧化產(chǎn)生MDA，從而提高肝臟抗氧化能力。本研究結(jié)果顯示，平菇多糖添加量為10‰時，鸚鵡魚肝臟內(nèi)MDA含量最少。CAT能催化過氧化氫使其分解為水和氧，存在于動植物體內(nèi)，能夠清除體內(nèi)多余的過氧化氫，防止細(xì)胞受過氧化損傷，約占過氧化物酶總量的40%。本研究試驗組CAT活性普遍高于對照組，表明添加適量的平菇多糖能提高CAT活性，與薛凌峰等[31]、李學(xué)軍等[32]報道一致。

GSH-PX是機體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶，在清除自由基抗氧化損傷和維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)方面都起著很重要的作用，機體GSH-PX含量的變化也可以反應(yīng)機體抗氧化能力[33-34]。本研究結(jié)果顯示，試驗組GSH-PX 活性普遍高于對照組，表明添加適量的平菇多糖能提高機體GSH-PX 活性，GSH-PX與SOD變化不一致。原因可能是機體存在某種動態(tài)平衡，一種酶激活時另一種酶處于抑制狀態(tài)[35]。

T-AOC的大小反應(yīng)機體抗氧化系統(tǒng)對外來刺激的代償能力以及機體自由基代謝的狀況，是衡量機體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)[36]。本研究結(jié)果表明，試驗組T-AOC高于對照組，說明添加適量的平菇多糖能提高T-AOC含量；隨著平菇多糖添加量的增加，T-AOC含量出現(xiàn)先升高再降低的趨勢，表明基礎(chǔ)飼料中，添加高劑量的平菇多糖會降低鸚鵡魚肝臟內(nèi)T-AOC；當(dāng)平菇多糖添加量為10‰時，鸚鵡魚肝臟內(nèi)T-AOC含量達(dá)到最大值。

本研究試驗條件下，在鸚鵡魚飼料中添加5‰～15‰的平菇多糖可以起到促進其免疫力的作用。

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收稿日期：2023-03-25

基金項目：天津市淡水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團隊建設(shè)項目（ITTFRS2021000）；天津市科技計劃項目（22ZYCGSN00240）；甘肅省科技計劃項目（22CX8NE208）

作者簡介：張震（1997—）， 男， 山西運城人，在讀碩士生， 主要從事水產(chǎn)增養(yǎng)殖研究。

通訊作者簡介：陳成勛（1967—），男，天津人，研究員，碩士生導(dǎo)師， 主要從事水產(chǎn)增養(yǎng)殖研究。