母豬不同妊娠階段免疫豬瘟疫苗對(duì)仔豬母源抗體的影響及首免日齡的優(yōu)化

董麗娟 梁金滔 廖 利

（1 隴縣畜牧工作站，陜西寶雞 721200；2 樂山市諸滔農(nóng)牧科技公司，四川樂山 614000）

豬瘟給現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展造成了巨大影響，近年來，豬瘟疫苗的應(yīng)用大大降低了豬群對(duì)豬瘟病毒的感染率，豬瘟疫苗的免疫保護(hù)期為18 個(gè)月，母豬的免疫方式主要是跟胎免疫和普免[1]。母豬實(shí)行跟胎免疫即分娩后2～4 周免疫，免疫次數(shù)與母豬年產(chǎn)胎次相關(guān)，一般2～2.5 次/年，這樣免疫的優(yōu)勢(shì)是對(duì)母豬安全，能有效防控母豬患病，同時(shí)仔豬母源抗體相對(duì)整齊[2]。近年來，受豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒、霉菌毒素等的影響，母豬免疫抑制現(xiàn)象愈來愈嚴(yán)重，影響了豬瘟的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致母豬豬瘟抗體的有效保護(hù)期達(dá)不到6 個(gè)月[3]。徐凱等[4]研究表明，保育仔豬發(fā)生豬瘟的原因主要是先天感染和首免時(shí)間不當(dāng)，仔豬首免日齡確定應(yīng)根據(jù)母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。最佳首免時(shí)間為母源抗體降低至免疫臨界值以下，否則母源抗體對(duì)疫苗免疫產(chǎn)生干擾作用，導(dǎo)致免疫失敗[5]。

仔豬母源抗體對(duì)斷奶前的仔豬有天然的保護(hù)作用，然而，斷奶后1～2 周仔豬的母源抗體急劇下降直到消失，而自身的免疫系統(tǒng)和后天免疫又沒有完全建立起來，故而容易出現(xiàn)免疫空窗期而感染疾病。豬瘟是影響種仔豬生長(zhǎng)發(fā)育的重要疾病之一，母豬不同妊娠階段免疫豬瘟對(duì)仔豬母源抗體的影響至關(guān)重要。疫苗免疫是有效控制豬瘟的重要措施，種母豬的豬瘟免疫程序主要是跟胎產(chǎn)后免疫和“一刀切”普免模式[1]，關(guān)于豬瘟疫苗普免存在較大爭(zhēng)議，部分學(xué)者認(rèn)為在妊娠階段接種豬瘟活疫苗將對(duì)胎兒造成毒性死亡，所產(chǎn)仔豬出現(xiàn)15%～20%的“先天性抖抖癥”，造成部分仔豬死亡，多數(shù)耐過仔豬生長(zhǎng)受影響[5]。修金生等[6]研究表明，種豬豬瘟抗體維持高抗體滴度，窩均產(chǎn)仔數(shù)和仔豬生長(zhǎng)性能顯著提高。本試驗(yàn)選取1 家采用母豬普免豬瘟ST 傳代細(xì)胞苗的規(guī)模豬場(chǎng)，通過在母豬不同妊娠階段及產(chǎn)后20 d 免疫試驗(yàn)，確定仔豬適當(dāng)?shù)氖酌馊正g，減少母源抗體的干擾，為豬場(chǎng)科學(xué)制定仔豬免疫程序奠定理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)[5]。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

MultiskanTMFC 酶標(biāo)儀（購(gòu)自Thermo ScientificTM）；SorvallTMST40 離心機(jī)（購(gòu)自Thermo ScientificTM）；0.5～300 μL 八道微量可調(diào)移液器，100 μL 單道微量可調(diào)移液器（購(gòu)自eppendorf）；FormaTM900 系列-86℃立式超低溫冰箱（購(gòu)自Thermo ScientificTM）；8 000 系列水套式培養(yǎng)箱（購(gòu)自Thermo ScientificTM）。

1.2 試驗(yàn)疫苗與試劑盒

豬瘟活疫苗（ST 傳代細(xì)胞源），抗原含量≥7 500 RID，批號(hào)：1511060，批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥生字（2013）150251084，包裝規(guī)格：20 頭份/瓶。豬瘟抗體檢測(cè)阻斷ELISA 試劑盒（HerdChek?CSFV Ab ELISA,IDEXX）批號(hào)：F821。

1.3 試驗(yàn)豬場(chǎng)與試驗(yàn)動(dòng)物

該豬場(chǎng)飼養(yǎng)法系經(jīng)產(chǎn)母豬1 800 頭，是原農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)。一點(diǎn)式自繁自養(yǎng)生產(chǎn)模式，基礎(chǔ)養(yǎng)殖設(shè)施齊備，飼養(yǎng)管理規(guī)范，斷奶母豬95%背膘達(dá)16 mm，上產(chǎn)床98%背膘22 mm。營(yíng)養(yǎng)狀況良好，近2 年飼料檢測(cè)均無霉菌毒素超標(biāo)。此豬場(chǎng)PRRS 免疫經(jīng)典株藍(lán)耳活疫苗（IDEXX 藍(lán)耳抗體試劑盒監(jiān)測(cè)血清學(xué)持續(xù)2 年穩(wěn)定，無藍(lán)耳發(fā)病臨床病例），全群偽狂犬gE 陰性，臨床無重大流行豬病發(fā)生，豬群健康狀況良好。

1.4 試驗(yàn)分組與免疫方式

選擇臨床健康、3 胎的法系LY 二元母豬，血清檢測(cè)豬瘟抗體阻斷值在55～60 之間，按照產(chǎn)后20 d、妊娠20 d、50 d、70 d 和90 d 分為5 組，每組10 頭母豬，分別肌肉注射2 頭份豬瘟活疫苗（ST 傳代細(xì)胞源），抗原含量≥7 500 RID，批號(hào)：1511060。

從每頭母豬對(duì)應(yīng)所分娩仔豬中隨機(jī)選擇1 頭初生重為1.4～1.5 kg 仔豬作為參試對(duì)象，分別記錄為B1、B2、B3、B4、B5。整個(gè)試驗(yàn)期間不作豬瘟疫苗免疫，26 日齡斷奶，其他保健防疫，日常飼養(yǎng)管理按照公司《生產(chǎn)操作規(guī)程》執(zhí)行，同批次在圈舍、飼養(yǎng)員等相同條件下飼養(yǎng)。

1.5 血液樣本采集與血清制備

母豬和仔豬均采用前腔靜脈采血，仔豬分別采集3、4、5、6 周齡的血液樣本；37℃靜置2 h，4℃過夜，4 000 rpm 離心5 min，取上清待檢，備份血清置-80℃保持至試驗(yàn)結(jié)束。

1.6 抗體檢測(cè)及生產(chǎn)數(shù)據(jù)收集

采用IDEXX 豬瘟抗體試劑盒，阻斷ELISA 進(jìn)行檢測(cè)，按照使用說明書進(jìn)行操作，Xchek 軟件輔助生成檢測(cè)結(jié)果；試劑盒實(shí)驗(yàn)成立標(biāo)準(zhǔn)：試劑盒說明書規(guī)定阻斷率≥40%，判斷為陽(yáng)性；阻斷率≤30%，判斷為陰性；介于30%～40%，判斷為可疑。

1.7 數(shù)據(jù)分析

相關(guān)數(shù)據(jù)用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析，＜0.05，數(shù)據(jù)間差異顯著；＜0.01，數(shù)據(jù)間差異極顯著；＞0.05，數(shù)據(jù)間差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

由圖1 可知，3 周齡時(shí)抗體陽(yáng)性率為B4＞B3＞B5＞B2＞B1，妊娠70 d 豬瘟抗體陽(yáng)性率為100%，顯著高于妊娠20 d 組的82%（P＜0.05），極顯著高于產(chǎn)后20 d 免疫組的70%（P＜0.01）。所有參試豬3 周齡的豬瘟抗體阻斷率均值（60.7%～75.8%） 和陽(yáng)性率（70%～100%）均處于較高水平，仔豬完全能夠獲得足夠的母源抗體保護(hù)。隨著日齡增加，母源抗體表現(xiàn)為規(guī)律性下降，5 周齡時(shí)抗體陽(yáng)性率總體B4＞B5＞B3＞B2＞B1，都在50%以上，說明所有參試組5 周齡時(shí)豬瘟母源抗體尚能有效保護(hù)。6 周齡時(shí)則為B3＞B4＞（B5、B1）＞B2，妊娠20 d 組陽(yáng)性率最低為36%，下降速度最快，原因可能與試驗(yàn)組個(gè)體健康狀況或應(yīng)激因素有關(guān)；產(chǎn)后20 d、妊娠90 d 組均為50%，妊娠50 d、70 d 分別為73%和70%。

圖1 不同階段免疫豬瘟疫苗的仔豬母源抗體陽(yáng)性率

2.2 抗體離散度與平均值結(jié)果

由圖2 可知，豬瘟抗體均值B4＞B5＞B3＞B1＞B2，差異不顯著（P＞0.05）；抗體離散度為B3＜B4＜B5＜B2＜B1，其中妊娠50 d、70 d、90 d 組仔豬6 周齡內(nèi)離散度均小于50，說明這3 組的抗體離散度較好。產(chǎn)后20 d 和妊娠20 d 組之間差異不顯著（P＞0.05），但是明顯比母豬妊娠50 d、70 d、90 d 組差。產(chǎn)后20 d 組仔豬5 周齡、6 周齡時(shí)抗體陽(yáng)性均值為50.6%和40.6%，且抗體離散度明顯升高，5 周齡為59%，6 周齡達(dá)到77%，顯著高于妊娠90 d（P＜0.05），極顯著高于妊娠50 d、70 d 組（P＜0.01）。

圖2 不同階段免疫豬瘟疫苗的仔豬母源抗體平均值和離散度

總體來看，5 個(gè)參試組的母源抗體陽(yáng)性率、平均值變化規(guī)律基本一致。3 周齡最高，隨著日齡增長(zhǎng)，仔豬母源抗體規(guī)律性下降；離散度逐漸加大；6 周齡母源抗體平均值均在40.6%～56.4%，接近抗原刺激閾值[7]。

3 討論與結(jié)論

3.1 母豬不同階段免疫豬瘟疫苗對(duì)母源抗體陽(yáng)性率與離散度的影響

魏榕等[8]研究表明母豬普免豬瘟疫苗可以讓母豬群長(zhǎng)期處于良好的免疫狀態(tài)。豬瘟兔化弱毒疫苗安全性高，普免母豬不會(huì)對(duì)仔豬造成胎盤感染。豬屬于上皮絨毛膜型胎盤，母源抗體不能通過胎盤傳遞給胎兒，仔豬只能通過初乳獲得母源抗體[8]。本次試驗(yàn)中，母豬在不同妊娠階段免疫豬瘟的母源抗體均有差異，與吳家強(qiáng)[3]研究結(jié)果一致。仔豬均為3 周齡抗體阻斷率達(dá)到最高，均在70%以上，結(jié)合之前的研究報(bào)道，故本次試驗(yàn)沒有檢測(cè)新生仔豬或者臨產(chǎn)母豬豬瘟抗體。產(chǎn)后20 d 免疫豬瘟的仔豬最低為61.5%，比妊娠90 d 免疫的阻斷率平均值低5.6%，這一點(diǎn)與王長(zhǎng)義等[10]研究的母豬產(chǎn)前4 周免疫豬瘟疫苗比未免疫所產(chǎn)仔豬3 周齡時(shí)豬瘟抗體阻斷率高2.13%的結(jié)果基本一致。妊娠20 d、妊娠50 d、妊娠70 d 和妊娠90 d 免疫豬瘟疫苗的仔豬抗體離散度比產(chǎn)后20 d 免疫的低，較為整齊，有利于豬瘟的防控和仔豬階段豬瘟的免疫。母豬免疫豬瘟疫苗產(chǎn)生抗體時(shí)間一般為4 d，20 d 即可達(dá)到最高峰，隨著時(shí)間推移，其抗體水平逐漸下降[11]，仔豬通過吸吮初乳獲得母豬體內(nèi)的抗體。曹劍等[11]研究表明仔豬母源抗體與母豬豬瘟抗體水平的高低有密切關(guān)系。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)符合免疫抗體隨時(shí)間延長(zhǎng)而衰減的規(guī)律，母豬妊娠50 d、70 d、90 d 免疫豬瘟的仔豬母源抗體非常完美，抗體陽(yáng)性率高且離散度低，衰減速度較慢，有利于首次免疫豬瘟抗體的產(chǎn)生，減少母源抗體的中和干擾。陳亞敏等[12]通過對(duì)產(chǎn)前1 個(gè)月隱性感染母豬注射6 頭份豬瘟細(xì)胞苗，仔豬也獲得了充足的母源抗體，產(chǎn)生了良好的免疫結(jié)果。本次試驗(yàn)結(jié)果與之相一致。妊娠20 d 免疫豬瘟疫苗的仔豬母源抗體在5～6 周間下降非?？?，這可能與仔豬出生后受到的應(yīng)激、個(gè)體健康狀況的影響有關(guān)。

綜上所述，母豬妊娠50 d、70 d、90 d 免疫豬瘟傳代細(xì)胞苗的母源抗體明顯優(yōu)于產(chǎn)后20 d 和妊娠20 d 免疫的母豬，最有利于提高仔豬母源抗體的陽(yáng)性率，降低母源抗體的離散度。

3.2 母豬不同階段免疫豬瘟疫苗及仔豬首免日齡

在現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)中，免疫接種豬瘟活疫苗是有效控制豬瘟的最重要途徑[13]，仔豬發(fā)生豬瘟主要是因?yàn)槭状蚊庖邥r(shí)間不恰當(dāng)，母源抗體中和干擾了豬瘟疫苗造成免疫失敗而引起[14]。目前規(guī)?；i場(chǎng)制定的仔豬免疫程序基本都是針對(duì)母豬產(chǎn)后跟胎免疫而定[8]，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為普免豬瘟疫苗的豬群，因免疫母豬妊娠胎齡時(shí)間不同，所分娩的仔豬相同日齡會(huì)表現(xiàn)出母源抗體水平不一致，會(huì)影響首免日齡的確定[8]。因此，對(duì)仔豬母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律做了較多研究：吳家強(qiáng)等[3]對(duì)每年3 次普免豬瘟疫苗，每次免疫2 頭份的仔豬母源抗體檢測(cè)結(jié)果表明，25～28 日齡斷奶，母源抗體30～40 日齡大幅度下降，接近或低于臨界值，建議首免日齡為35 d。王長(zhǎng)義等[10]對(duì)母豬產(chǎn)前4 周注射豬瘟疫苗，研究表明其仔豬3 周齡斷奶時(shí)母源抗體阻斷率為81.44%，首免時(shí)間應(yīng)推遲到4周齡以后。閆學(xué)軍等[15]研究表明，母豬在配種前5 個(gè)月或1 個(gè)月、配種后1 個(gè)月或2 個(gè)月給母豬接種豬瘟弱毒疫苗，6 周齡時(shí)80%的仔豬中和抗體達(dá)到1∶40，建議首免日齡在此期間最佳，本試驗(yàn)結(jié)果均與之基本相符。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，母豬不同階段免疫豬瘟的母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律有一定差異，但都呈規(guī)律性消長(zhǎng)。對(duì)妊娠50 d和妊娠70 d 免疫豬瘟的母豬，其所產(chǎn)仔豬在6 周齡時(shí)的母源抗體陽(yáng)性率都在70%以上，但均值分別為47.5%和56.4%，靠近抗原刺激閾值，并開始快速下降。本次試驗(yàn)研究基于臨床生產(chǎn)和之前大量報(bào)道，沒有繼續(xù)追蹤6 周齡之后的抗體消長(zhǎng)規(guī)律；母豬妊娠90 d 和產(chǎn)后免疫的，其仔豬6 周齡時(shí)的母源抗體陽(yáng)性率為50%，離散度明顯加大，接近臨界值；妊娠20 d 免疫的仔豬5 周齡時(shí)抗體陽(yáng)性率為64%，抗體均值為47.7%，6 周齡時(shí)的母源抗體陽(yáng)性率快速下降為36%，低于臨界值。綜上所述，針對(duì)本次母豬不同階段免疫豬瘟疫苗的仔豬母源抗體陽(yáng)性率和離散度消長(zhǎng)規(guī)律的試驗(yàn)，仔豬的首免日齡應(yīng)調(diào)整為5～6 周齡之間。

隨著我國(guó)養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)和規(guī)模的變化，規(guī)?；i場(chǎng)每年監(jiān)測(cè)2～3 次仔豬的母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律極其重要，適時(shí)調(diào)整仔豬豬瘟疫苗的首免日齡，從而確保仔豬和商品豬的豬瘟疫苗免疫效果。