• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    肉桂精油脂質(zhì)體的制備及理化性質(zhì)研究

    2023-09-13 02:00:18涂倩簡玉英謝大明曾珍劉韞滔王彩霞胡濱李誠
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2023年17期
    關(guān)鍵詞:吐溫肉桂脂質(zhì)體

    涂倩,簡玉英,謝大明,曾珍,劉韞滔,王彩霞,胡濱,李誠

    (四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院,四川 雅安,625000)

    肉桂精油是從肉桂葉和樹皮中提取的次級(jí)代謝產(chǎn)物,呈黃色黏性狀,含有肉桂醛、香芹酚、香葉醇、芳樟醇及α-水芹烯等一系列活性物質(zhì),具有抑菌、抗氧化、消炎鎮(zhèn)痛、抑制癌細(xì)胞生長繁殖等多種生理功能[1]。肉桂精油作為一種天然防腐劑,對食源性致病菌和腐敗菌(大腸桿菌、假單胞菌屬、沙門氏菌等)的生長表現(xiàn)出良好的抑制作用,此外,精油中的烯萜類、醛類等活性成分亦賦予其較強(qiáng)的抗氧化活性[2]。然而,肉桂精油穩(wěn)定性和水溶性差、對環(huán)境敏感以及伴有強(qiáng)烈的氣味,限制了其應(yīng)用范圍[3]。

    脂質(zhì)體是由磷脂分子在水溶性中形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的閉合囊泡,可同時(shí)包裹疏水性和親水性物質(zhì),具有生物相容性、兩親性、緩釋等優(yōu)點(diǎn),在食品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域有重要應(yīng)用前景[4]。作為一種運(yùn)載體系,脂質(zhì)體不僅可增強(qiáng)被包封物質(zhì)的穩(wěn)定性,還可延長活性物質(zhì)在體內(nèi)的保留時(shí)間,達(dá)到緩釋作用。將精油制備成脂質(zhì)體這一載體形式,不僅可有效降低環(huán)境因素(如氧氣、光、溫度等)對肉桂精油的不利影響,還可掩蓋精油的刺激性氣味,提高感官屬性和精油的生物利用度。

    近年來,隨著研究的不斷深入,學(xué)者們對精油脂質(zhì)體的研究逐步展開。例如,劉玉蘭[5]采用乙醇注入法制備了肉桂醛脂質(zhì)體,通過考察保留率、粒徑等理化指標(biāo),證明了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。李偉[6]通過薄膜超聲分散法將肉桂精油/β-環(huán)糊精包合物包封于脂質(zhì)體內(nèi),再通過凍融方法制得包埋肉桂精油/β-環(huán)糊精的蛋白脂質(zhì)體,通過體外釋放證實(shí)了蛋白脂質(zhì)體運(yùn)載體系具有控釋抗菌作用。高壓微射流均質(zhì)技術(shù)制備的脂質(zhì)體具有粒徑小、分散均勻且避免使用有毒試劑的特點(diǎn),但目前關(guān)于采用該技術(shù)優(yōu)化制備肉桂精油脂質(zhì)體的報(bào)道尚未出現(xiàn)。鑒于此,本研究采用薄膜分散-高壓均質(zhì)法制備肉桂精油脂質(zhì)體,以包埋率和平均粒徑為指標(biāo)對制備工藝進(jìn)行優(yōu)化,并對其zeta電位、形貌、熱穩(wěn)定性、紅外光譜、體外釋放及抑菌性能等理化性質(zhì)進(jìn)行考察。研究旨在開發(fā)一種包埋率較高、穩(wěn)定性好、緩釋效果好的脂質(zhì)體運(yùn)載體系,以擴(kuò)大肉桂精油的應(yīng)用范圍。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    肉桂精油(純度85%),上海源葉有限公司;蛋黃卵磷脂(純度90%)、膽固醇(純度95%)、吐溫-80,上海生工生物工程股份有限公司;磷酸鹽緩沖液(PBS,0.01 mol/L,pH 7.2),北京索萊寶科技有限公司;大腸桿菌(ATCC 25922)、金黃色葡萄球菌(ATCC 6538),嘉楚生物工程有限公司。

    1.2 主要儀器設(shè)備

    Nano-ZS馬爾文分析儀,英國馬爾文儀器有限公司;3001-2207酶標(biāo)儀,美國賽默飛有限公司;AH-BASIC高壓均質(zhì)機(jī),安拓思納米技術(shù)有限公司;RCD-1A高速均質(zhì)機(jī),常州越新儀器制造有限公司;Nicolet IS 10傅里葉紅外色譜儀,賽默飛世爾科技有限公司;Q200MDSC差示掃描量熱儀,美國TA公司;59750氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀,美國Agilent公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 肉桂精油脂質(zhì)體的制備

    將一定比例的蛋黃卵磷脂、膽固醇、吐溫-80、肉桂精油溶于25 mL無水乙醇中,溶解混勻后轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中,置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)(45 ℃,40 r/min),除去有機(jī)溶劑,形成脂質(zhì)薄膜,再加入PBS超聲水化得到懸濁液,然后利用高速分散機(jī)在10 000 r/min下剪切2 min,最后在60 MPa高壓均質(zhì)下循環(huán)3~4次得到肉桂精油脂質(zhì)體。

    1.3.2 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    分別探究:(1)在膽固醇與肉桂精油、吐溫-80質(zhì)量比為1∶1∶1的條件下,磷脂與膽固醇質(zhì)量比(1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1);(2)在磷脂與膽固醇、吐溫-80質(zhì)量比為4∶1∶1的條件下,肉桂精油質(zhì)量濃度(1、1.5、2、2.5、3、3.5 mg/mL);(3)在磷脂與膽固醇、精油質(zhì)量比為4∶1∶1條件下,吐溫-80質(zhì)量濃度(1、1.5、2、2.5、3、3.5 mg/mL);(4)在磷脂與膽固醇、精油、吐溫-80質(zhì)量比為4∶1∶1∶1的條件下,PBS用量(20、30、40、50、60、70 mL)對肉桂精油脂質(zhì)體平均粒徑和包埋率的影響。單因素試驗(yàn)優(yōu)化某一參數(shù)時(shí),分別固定磷脂與膽固醇質(zhì)量比4∶1(磷脂質(zhì)量濃度為10 mg/mL,膽固醇質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL),肉桂精油質(zhì)量濃度2.5 mg/mL,吐溫-80質(zhì)量濃度2.5 mg/mL,PBS用量40 mL。

    1.3.3 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,篩選出磷脂與膽固醇質(zhì)量比(A)、肉桂精油質(zhì)量濃度(B)、吐溫-80質(zhì)量濃度(C)作為考察對象,包埋率(Y)為因變量,利用Box-Behnken設(shè)計(jì)對肉桂精油脂質(zhì)體的制備工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,試驗(yàn)因素及編號(hào)見表1。

    表1 試驗(yàn)因素水平表Table 1 Table of test factor levels

    1.3.4 肉桂精油脂質(zhì)體理化性質(zhì)的表征

    1.3.4.1 肉桂精油包埋率的測定

    肉桂精油標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密稱取肉桂精油100 mg置100 mL容量瓶中,無水乙醇稀釋定容制得1 mg/mL母液。取母液分別配制100、80、60、40、20、10 μg/mL系列溶液,以無水乙醇為空白參比,在290 nm波長下測吸光度,計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y=0.008 4x+0.066 7,R2=0.998 4,該范圍內(nèi)線性較好。

    參考李暢等[7]的方法稍作修改,取1 mL脂質(zhì)體于10 mL的離心管中,加4 mL石油醚,渦旋混勻后離心(6 000 r/min,10 min),收集上清液,重復(fù)操作2次后合并有機(jī)相,無水乙醇定容至25 mL,在290 nm處測定吸光度,按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算游離精油含量A1。另取1 mL脂質(zhì)體,用無水乙醇稀釋定容至25 mL,水浴超聲1 h,測定吸光度值并計(jì)算肉桂精油總含量A2,按公式(1)得出包封率:

    (1)

    式中:EE,肉桂精油包埋率,%;A1,游離肉桂精油含量,mg;A2,肉桂精油總含量,mg。

    1.3.4.2 透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)

    參考CHAVES等[8]的方法,將少量肉桂精油脂質(zhì)體滴加于100目銅網(wǎng)上,自然風(fēng)干后用10 g/L磷鎢酸進(jìn)行負(fù)染,晾干后進(jìn)行TEM分析。

    1.3.4.3 粒徑、聚合物分散性指數(shù)(polymer dispersity index,PDI)及zeta電位的測定

    參考郝靜梅等[9]的方法,樣品用超純水稀釋100倍后,采用馬爾文分析儀測定其平均粒徑、PDI及zeta電位。

    1.3.4.4 差示掃描量熱分析(differential scanning calorimetry,DSC)

    參考顧家毓等[10]的方法,取5 mg經(jīng)干燥的樣品置于坩堝中,以空白坩堝為對照,N2為載氣,10 ℃/min速度從25 ℃加熱至100 ℃,研究分析脂質(zhì)體的熱至相變情況。

    1.3.4.5 傅里葉紅外光譜分析(Fourier transform infrared spectrometer,FTIR)

    參考ZHANG等[11]的方法,將樣品與KBr混勻壓片后,在4 000~500 cm-1紅外波段內(nèi)對肉桂精油、肉桂精油脂質(zhì)體進(jìn)行光譜分析。

    1.3.4.6 體外釋放分析

    采用透析法[12]進(jìn)行,取2 mL脂質(zhì)體于透析袋(14 ku)中,置于100 mL PBS中并在25 ℃下連續(xù)振蕩(200 r/min),分別在0.5、2、4、6、8、12、24、36、48、60、72 h定時(shí)取樣,同時(shí)補(bǔ)充等量緩沖液,在290 nm處測定吸光度,計(jì)算肉桂精油累計(jì)釋放量,并對體外釋放結(jié)果進(jìn)行動(dòng)力學(xué)擬合分析。

    1.3.4.7 肉桂精油脂質(zhì)體抑菌性能分析

    將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌活化后,加7.5 g/L生理鹽水稀釋菌懸液,分別取4 mL肉桂精油脂質(zhì)體和10 g/L吐溫-80稀釋的肉桂精油溶液于不同菌懸液中,體積分?jǐn)?shù)為40%,37 ℃振蕩培養(yǎng),每隔1 d取樣進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

    1.3.5 數(shù)據(jù)處理與分析

    采用Design-Expert 8.0.6.1進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)與分析,Origin 2018進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    2.1.1 蛋黃卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比

    膽固醇是類脂質(zhì)的主要成分,常作為脂質(zhì)體的穩(wěn)定劑[13],在適宜的濃度下,親水性羥基基團(tuán)與磷脂分子極性基團(tuán)形成氫鍵,利用氫鍵間相互作用來調(diào)解脂膜的剛性和致密性,能極大地穩(wěn)定脂質(zhì)體結(jié)構(gòu),進(jìn)而穩(wěn)定脂質(zhì)體的負(fù)載能力。圖1-a結(jié)果顯示,隨著磷脂與膽固醇質(zhì)量比的增大,包埋率顯著增加后降低,平均粒徑先減小后增加,當(dāng)質(zhì)量比為4∶1時(shí),包埋率達(dá)最大(76.23%),平均粒徑最小(91.18 nm)。脂質(zhì)體的濃度與其負(fù)載能力均會(huì)影響精油的包埋率,當(dāng)磷脂與膽固醇質(zhì)量比增加時(shí),形成的脂質(zhì)體分子增多且平均粒徑逐漸減小,結(jié)構(gòu)逐漸趨于穩(wěn)定,導(dǎo)致包埋率顯著增大。當(dāng)質(zhì)量比大于4∶1后,包埋率反而呈下降趨勢,且平均粒徑逐漸增大,這是由于磷脂濃度過高影響了脂質(zhì)體膜的形成,降低了脂質(zhì)體電荷之間的靜電排斥作用,聚集現(xiàn)象出現(xiàn)導(dǎo)致粒徑增大[14],此時(shí)的脂質(zhì)體濃度高但體系不穩(wěn)定,精油泄露,負(fù)載能力顯著減弱,致使包埋率降低。本試驗(yàn)研究結(jié)果與前人研究結(jié)果相似[15]。綜合考慮確定磷脂與膽固醇的最佳質(zhì)量比為4∶1,此時(shí)包埋率最大、粒徑最小、負(fù)載能力較好。

    a-磷脂與膽固醇質(zhì)量比;b-肉桂精油質(zhì)量濃度;c-吐溫-80質(zhì)量濃度;d-PBS用量圖1 磷脂與膽固醇質(zhì)量比、肉桂精油質(zhì)量濃度、吐溫-80質(zhì)量濃度和PBS用量對肉桂精油脂質(zhì)體包埋率、平均粒徑的影響Fig.1 Effects of mass ratio of phospholipid to cholesterol, mass concentration of cinnamon essential oil, mass concentration of tween 80 and PBS dosage on the embedding efficiency and average particle size of cinnamon essential oil liposomes

    2.1.2 肉桂精油質(zhì)量濃度

    圖1-b結(jié)果表明,肉桂精油質(zhì)量濃度從1 mg/mL增加到2.5 mg/mL,包埋率從62.48%增加到最大(81.26%),當(dāng)精油質(zhì)量濃度超過2.5 mg/mL時(shí),包埋率逐漸降低,證明肉桂精油濃度過低或過高均不利于精油脂質(zhì)體的形成,同時(shí)磷脂形成的脂質(zhì)體具有一定的空間承載能力[16]。當(dāng)肉桂精油濃度較低時(shí),包埋率偏低,這可能是精油在低濃度下與脂質(zhì)體體系接觸機(jī)率較少所致;隨著肉桂精油添加量增多,接觸機(jī)率增加,包埋率隨之增加;當(dāng)添加量超過脂質(zhì)體的負(fù)載能力時(shí),再添加更多肉桂精油,亦不能被包埋于脂質(zhì)體,最終導(dǎo)致包埋率降低。而平均粒徑隨肉桂精油濃度的增加先降低后逐漸增大,當(dāng)肉桂精油為2 mg/mL時(shí),粒徑最小為87.17 nm,出現(xiàn)此現(xiàn)象的原因是精油添加量超出了脂質(zhì)體空間負(fù)荷,干擾磷脂間相互作用力,導(dǎo)致磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的柔韌性和致密性減弱,致使雙分子層膨脹,粒徑增大[17]。綜合分析,選擇肉桂精油質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL較為理想,此時(shí)包埋率最大,粒徑相對較小。

    2.1.3 吐溫-80質(zhì)量濃度

    由圖1-c可知,隨著吐溫-80質(zhì)量濃度增加平均粒徑呈持續(xù)下降趨勢,包埋率先增大后減小,當(dāng)吐溫-80質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL時(shí),包埋率達(dá)最大(79.74%),而當(dāng)濃度繼續(xù)增加,包埋率減小。吐溫-80是一種呈親水性長鏈結(jié)構(gòu)的化合物,通過物理吸附在脂質(zhì)體膜表面形成一定厚度親水層,具有空間位阻效應(yīng),使得脂質(zhì)體系統(tǒng)牢固[18];然而過量的吐溫-80的加入導(dǎo)致乳化過度,脂質(zhì)體囊泡被溶解,平均粒徑降低,同時(shí)造成脂質(zhì)體內(nèi)空間受限,不能對肉桂精油進(jìn)行有效包埋[19]。綜合考慮,選擇吐溫-80質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

    2.1.4 PBS緩沖液用量

    由圖1-d可知,平均粒徑先降低隨后趨于平穩(wěn)且變化幅度較小,隨著緩沖液用量的增加,脂質(zhì)體體系濃度下降,粒子間更加均勻分布,使得平均粒徑減少直到趨于平穩(wěn)[20]。肉桂精油脂質(zhì)體包埋率隨緩沖液用量增加逐漸升高,但緩沖液用量超過40 mL,包埋率略有下降。但過少的PBS,不利于脂質(zhì)的水化過程,易產(chǎn)生聚集絮凝,從而導(dǎo)致包埋率較低。同時(shí)調(diào)查發(fā)現(xiàn),本試驗(yàn)研究契合宋恭帥等[21]的研究結(jié)果。綜上,PBS的增加引起包埋率和平均粒徑的變化并不明顯,確定PBS最佳用量為40 mL。

    2.2 響應(yīng)面優(yōu)化分析

    利用Design-Expert軟件對包埋率與各因素間的關(guān)系進(jìn)行回歸分析,響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果見表2。通過回歸擬合得到多元回歸方程為:

    表2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Response surface optimization test results

    Y=81.68+1.08A+3.53B+5.80C-2.57AB+0.55AC-4.58BC-9.82A2-8.24B2-6.21C2

    根據(jù)表3的方程分析,模型具有極顯著性(P<0.000 1);失擬項(xiàng)不顯著(P>0.05);R2=0.993 2,可以解釋99.32%的總變化,說明該模型擬合情況好,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表3 響應(yīng)面方差分析Table 3 Response surface analysis of variance

    此外,線性系數(shù)A及相互作用系數(shù)AB對Y有顯著影響(P<0.05),線性(B、C)、相互作用系數(shù)(BC)和二次項(xiàng)系數(shù)(A2、B2、C2)對結(jié)果達(dá)到極顯著水平(P<0.01)。根據(jù)分析結(jié)果,影響包埋率的因素主次為:吐溫80質(zhì)量濃度>肉桂精油質(zhì)量濃度>磷脂與膽固醇質(zhì)量比。如表3所示,兩兩因素之間的相互作用大小依次為:BC>AB>AC。

    根據(jù)模型試驗(yàn)結(jié)果,預(yù)測肉桂精油脂質(zhì)體制備的最佳工藝條件為:磷脂與膽固醇質(zhì)量比為4.09∶1(磷脂質(zhì)量濃度為10.23 mg/mL,膽固醇質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL)、肉桂精油質(zhì)量濃度為2.46 mg/mL、吐溫80質(zhì)量濃度為2.99 mg/mL,此時(shí)理論包埋率為83.01%。為驗(yàn)證該模型的可靠性,通過3次重復(fù)試驗(yàn),得出的包埋率平均值為81.95%,相對誤差為1.28%,說明理論值與實(shí)際值較為符合。

    2.3 肉桂精油脂質(zhì)體的理化性質(zhì)

    2.3.1 微觀結(jié)構(gòu)

    如圖2所示,肉眼下肉桂精油脂質(zhì)體呈均勻的淡黃色乳液,電鏡下肉桂精油脂質(zhì)體呈亮色的單層囊泡,囊泡周邊均出現(xiàn)一層陰影,分布均勻,這與郭嘉斌等[22]制備的香葉木素脂質(zhì)體形態(tài)結(jié)構(gòu)相似。同時(shí)觀察到存在小囊泡向大囊泡融合的趨勢,可能是脂質(zhì)體囊泡存在熟化行為[23],這使得體系更加穩(wěn)定。

    a-外觀;b-微觀形態(tài)圖2 肉桂精油脂質(zhì)體的外觀及微觀形態(tài)Fig.2 Appearance and microscopic morphology of cinnamon essential oil liposomes

    2.3.2 粒徑與zeta電位分析

    粒徑和zeta電位是衡量脂質(zhì)體膠體穩(wěn)定性的重要指標(biāo)。如圖3所示,肉桂精油脂質(zhì)體粒徑和zeta電位圖均為正態(tài)分布,其平均粒徑為94.21 nm,屬于納米顆粒,與TEM所顯示的尺寸基本一致。但動(dòng)態(tài)光散射(dynamic light scattering,DLS)獲得的脂質(zhì)體粒徑值不是絕對的,而是表觀粒徑,這是因?yàn)榱脚c布朗運(yùn)動(dòng)有關(guān)[24]。PDI為0.133<0.3,體系分散均勻。張婷等[25]制得蛋清肽脂質(zhì)體平均粒徑為(95.0±0.8) nm,PDI為0.210±0.009,與本結(jié)果相似。通常情況下納米顆粒的zeta電位絕對值大于30 mV時(shí),被認(rèn)為是穩(wěn)定的,而本研究結(jié)果顯示脂質(zhì)體乳液的zeta電位為-40.4 mV,說明脂質(zhì)體表面帶負(fù)電荷,粒子間相互排斥,沒有絮凝的傾向,較穩(wěn)定。

    a-粒徑;b-zeta電位圖3 肉桂精油脂質(zhì)體的粒徑和zeta電位Fig.3 Particle size and zeta potential of cinnamon essential oil liposomes

    2.3.3 DSC分析

    DSC分析可檢測脂質(zhì)體的相變溫度和穩(wěn)定性。當(dāng)溫度升高時(shí),脂質(zhì)體膜出現(xiàn)層狀凝膠相、波動(dòng)凝膠相和液晶相等狀態(tài),其中從層狀凝膠態(tài)到波動(dòng)凝膠態(tài)過程稱為預(yù)相變,波動(dòng)凝膠態(tài)到液晶態(tài)過程稱為主相變。由圖4可知,空白脂質(zhì)體在35.48和71.64 ℃處出現(xiàn)了凝膠態(tài)向液晶態(tài)的致熱相變,其中35.48 ℃為預(yù)相變。與空白脂質(zhì)體相比,肉桂精油脂質(zhì)體的相變溫度(32.85、67.51 ℃)分別降低了2.62、4.13 ℃,表明肉桂精油脂質(zhì)體的熱穩(wěn)定性降低,這是由于肉桂精油與脂質(zhì)體的膜材蛋黃卵磷脂的非極性頭部之間發(fā)生了疏水相互作用,降低了雙分子層的致密性和剛性,使得相變溫度降低[26],也可能是肉桂精油中的晶體結(jié)構(gòu)和大小發(fā)生變化形成精油-磷脂復(fù)合物所致[27]。

    圖4 差示掃描量熱分析圖Fig.4 Differential scanning calorimetry analysis

    2.3.4 FTIR分析

    圖5 紅外光譜分析圖Fig.5 Infrared spectrum analysis

    2.3.5 體外釋放分析

    以PBS作為釋放介質(zhì),模擬作為抑菌劑應(yīng)用場景下的釋放,探究肉桂精油脂質(zhì)體的釋放性能,結(jié)果如圖6所示。肉桂精油脂質(zhì)體在2、24、48、72 h時(shí)的累積釋放度分別為5.13%,50.56%,79.23%,81.24%,說明該脂質(zhì)體可以有效控制和減緩精油釋放。然后采用零級(jí)方程、一級(jí)方程和Higuchi方程對體外釋放數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合,三者得到的擬合結(jié)果分別為Mt=1.207 5t+10.555 5(R2=0.896 9),Mt=92.462 6(1-e-0.034 6t)(R2=0.991 1),Mt=11.989 2t1/2-10.938 0(R2=0.972 8),結(jié)果顯示肉桂精油脂質(zhì)體的體外釋放規(guī)律最符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程。

    圖6 肉桂精油脂質(zhì)體的累積釋放曲線Fig.6 Cumulative release curve of cinnamon essential oil liposomes

    2.3.6 肉桂精油脂質(zhì)體抑菌性能分析

    圖7-a和圖7-b分別是肉桂精油和肉桂精油脂質(zhì)體對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌作用結(jié)果。大腸桿菌和金黃色葡萄球菌菌懸液的初始濃度值為7.6×107lg CFU/mL。在第0天2種菌懸液濃度與初始濃度相比略有上升,這是由于兩種菌處于對數(shù)生長期所致。圖7-a顯示肉桂精油對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。2 d后由于精油揮發(fā),細(xì)菌數(shù)分別達(dá)到7.08×107和6.87×107lg CFU/mL,并持續(xù)增長。而由圖7-b可知,加入肉桂精油脂質(zhì)體后,培養(yǎng)1 d后2種菌的菌落總數(shù)均顯著減少(P<0.05),并且菌落數(shù)隨著時(shí)間的延長呈顯著持續(xù)下降的趨勢,表明肉桂精油從肉桂精油脂質(zhì)體中緩慢釋放出來,對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出長效抑菌作用。此外,由于革蘭氏陽性菌具有特殊的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),觀察到肉桂精油脂質(zhì)體對金黃色葡萄球菌的抗菌活性高于大腸桿菌。革蘭氏陰性菌(大腸桿菌)的細(xì)胞壁呈現(xiàn)多層結(jié)構(gòu),其中包括肽聚糖、脂蛋白、磷脂和脂多糖;而革蘭氏陽性菌(金黃色葡萄球菌)的細(xì)胞壁僅被肽聚糖層包圍[30],因此肉桂精油脂質(zhì)體釋放的精油很容易穿過革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁并與其內(nèi)容物相互作用。

    a-肉桂精油;b-肉桂精油脂質(zhì)體圖7 肉桂精油和肉桂精油脂質(zhì)體的抑菌性能Fig.7 Bacteriostatic effect of cinnamon essential oil and cinnamon essential oil liposomes

    3 結(jié)論

    本文以包埋率、平均粒徑為指標(biāo),采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化了肉桂精油脂質(zhì)體的制備工藝。得到最佳工藝參數(shù)為:磷脂與膽固醇質(zhì)量比4.09∶1(磷脂質(zhì)量濃度為10.23 mg/mL,膽固醇質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL),肉桂精油質(zhì)量濃度2.46 mg/mL,吐溫-80質(zhì)量濃度2.99 mg/mL,PBS用量為40 mL(0.01 mol/L,pH 7.2)。在此條件下得到包埋率為81.95%,粒徑為94.21 nm,PDI為0.133,zeta電位為-40.4 mV的肉桂精油脂質(zhì)體。透射電鏡結(jié)果表明其微觀結(jié)構(gòu)呈囊泡狀,分布均勻。通過熱力學(xué)性質(zhì)和紅外光譜分析證實(shí)肉桂精油成功包封在脂質(zhì)體內(nèi)。此外,體外釋放和抑菌性能研究表明肉桂精油脂質(zhì)體具有控釋抗菌作用,能提高肉桂精油殺菌效果。本研究以肉桂精油為切入點(diǎn),構(gòu)建了脂質(zhì)體運(yùn)載體系,并對肉桂精油脂質(zhì)體制備工藝關(guān)鍵參數(shù)及其理化性質(zhì)進(jìn)行研究,成功優(yōu)化并建立了一種穩(wěn)定、高效的制備肉桂精油脂質(zhì)體技術(shù),為肉桂精油脂質(zhì)體在食品中的進(jìn)一步開發(fā)利用提供技術(shù)參考。

    猜你喜歡
    吐溫肉桂脂質(zhì)體
    羅定榃濱鎮(zhèn)舉行肉桂文化節(jié)
    源流(2023年5期)2023-07-01 14:07:24
    PEG6000修飾的流感疫苗脂質(zhì)體的制備和穩(wěn)定性
    馬克·吐溫:辣你沒商量
    馬克·吐溫的孩童時(shí)代
    超濾法測定甘草次酸脂質(zhì)體包封率
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:20:08
    TPGS修飾青蒿琥酯脂質(zhì)體的制備及其體外抗腫瘤活性
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:08:52
    不同肉桂品種光合能力差異分析
    正二十面體Au13和Pt13團(tuán)簇上肉桂醛的吸附
    肉桂油納米微乳的制備
    《敗仗秘史》與馬克·吐溫的反戰(zhàn)訴求
    最近最新中文字幕大全免费视频| 最新美女视频免费是黄的| 国产精品一区二区免费欧美| 国产亚洲av高清不卡| 日本五十路高清| 国产黄a三级三级三级人| cao死你这个sao货| 大码成人一级视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品国产清高在天天线| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美中文综合在线视频| 欧美成人午夜精品| 88av欧美| 一级作爱视频免费观看| 在线观看免费高清a一片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 精品人妻在线不人妻| 满18在线观看网站| 亚洲成国产人片在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 999久久久国产精品视频| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲人成电影观看| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲专区字幕在线| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 成年人黄色毛片网站| www.熟女人妻精品国产| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 日本黄色日本黄色录像| 69精品国产乱码久久久| 美女福利国产在线| 涩涩av久久男人的天堂| 狠狠狠狠99中文字幕| 在线av久久热| 手机成人av网站| 欧美在线黄色| 久久精品成人免费网站| 亚洲在线自拍视频| 999久久久国产精品视频| 国产精品九九99| 久99久视频精品免费| 看免费av毛片| av天堂在线播放| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品久久久久成人av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品 国内视频| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲一区中文字幕在线| av欧美777| cao死你这个sao货| xxx96com| 麻豆久久精品国产亚洲av | 91在线观看av| 国产一区在线观看成人免费| 丝袜人妻中文字幕| 国产激情欧美一区二区| 涩涩av久久男人的天堂| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成人欧美在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 黄色视频,在线免费观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 手机成人av网站| 一区二区日韩欧美中文字幕| 青草久久国产| 真人做人爱边吃奶动态| 一级a爱片免费观看的视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 一级片'在线观看视频| 欧美日韩av久久| 黄色女人牲交| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久青草综合色| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久香蕉国产精品| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 1024视频免费在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产成+人综合+亚洲专区| 波多野结衣av一区二区av| 99精国产麻豆久久婷婷| 美女扒开内裤让男人捅视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 深夜精品福利| 国产熟女午夜一区二区三区| 美国免费a级毛片| 久久人人精品亚洲av| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲精品国产区一区二| 成在线人永久免费视频| 在线播放国产精品三级| 9色porny在线观看| 18禁观看日本| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 超碰97精品在线观看| 黄色视频不卡| 久久久久国产一级毛片高清牌| 色老头精品视频在线观看| 黄色女人牲交| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 成人永久免费在线观看视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲视频免费观看视频| 在线观看免费午夜福利视频| 热99国产精品久久久久久7| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 一级a爱片免费观看的视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 操美女的视频在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 午夜福利欧美成人| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 黑人猛操日本美女一级片| 久久青草综合色| 91老司机精品| 99精品在免费线老司机午夜| 日本一区二区免费在线视频| 操出白浆在线播放| 女人被狂操c到高潮| 国产极品粉嫩免费观看在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| www.www免费av| cao死你这个sao货| 亚洲成av片中文字幕在线观看| videosex国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲av第一区精品v没综合| 电影成人av| 99热国产这里只有精品6| 性少妇av在线| 成人18禁在线播放| 亚洲精品av麻豆狂野| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 男女午夜视频在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美黑人精品巨大| 精品一区二区三卡| 99re在线观看精品视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲黑人精品在线| 操出白浆在线播放| 正在播放国产对白刺激| 一级毛片女人18水好多| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 黄片大片在线免费观看| 精品国产一区二区久久| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 高清欧美精品videossex| av免费在线观看网站| 国产精品久久久久成人av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 悠悠久久av| 亚洲第一av免费看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 交换朋友夫妻互换小说| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 老司机福利观看| 精品高清国产在线一区| 女同久久另类99精品国产91| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 99久久人妻综合| 他把我摸到了高潮在线观看| 免费在线观看完整版高清| 黄频高清免费视频| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲成国产人片在线观看| 天堂影院成人在线观看| 在线国产一区二区在线| 在线观看66精品国产| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| av视频免费观看在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 久久久久久久精品吃奶| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩大码丰满熟妇| 女警被强在线播放| 亚洲国产中文字幕在线视频| 中文字幕高清在线视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 日日夜夜操网爽| 久久久久久免费高清国产稀缺| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产欧美日韩精品亚洲av| a在线观看视频网站| 亚洲男人的天堂狠狠| 十分钟在线观看高清视频www| 黄片播放在线免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜精品国产一区二区电影| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲黑人精品在线| а√天堂www在线а√下载| 99久久综合精品五月天人人| 精品国产国语对白av| 亚洲五月色婷婷综合| 一级a爱片免费观看的视频| 国产一区二区激情短视频| 久久精品91无色码中文字幕| 多毛熟女@视频| 欧美日韩av久久| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 一区二区三区国产精品乱码| 国产视频一区二区在线看| 超碰97精品在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 久99久视频精品免费| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 曰老女人黄片| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美日韩视频精品一区| 制服人妻中文乱码| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 午夜久久久在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久亚洲精品不卡| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 欧美中文综合在线视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 午夜免费鲁丝| a级毛片黄视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产一区二区激情短视频| 波多野结衣一区麻豆| 91麻豆av在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 99久久99久久久精品蜜桃| 女性被躁到高潮视频| 黄色 视频免费看| 美女高潮到喷水免费观看| 中文欧美无线码| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一级毛片女人18水好多| 亚洲欧美激情在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 人人妻人人澡人人看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 精品国产一区二区久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产99白浆流出| 欧美午夜高清在线| 亚洲人成电影观看| 免费在线观看日本一区| 亚洲成人久久性| 大陆偷拍与自拍| 亚洲人成电影免费在线| 国产高清国产精品国产三级| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久精品国产亚洲av高清一级| x7x7x7水蜜桃| 色播在线永久视频| 免费看a级黄色片| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美丝袜亚洲另类 | 黄色丝袜av网址大全| 正在播放国产对白刺激| 国产熟女xx| 国产精品久久久av美女十八| 精品免费久久久久久久清纯| 女警被强在线播放| 黄片播放在线免费| 美女福利国产在线| 91字幕亚洲| 岛国视频午夜一区免费看| 日韩大码丰满熟妇| 国产成人av激情在线播放| 好男人电影高清在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 午夜久久久在线观看| 久久精品国产综合久久久| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99热国产这里只有精品6| 91大片在线观看| 身体一侧抽搐| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久性视频一级片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲自拍偷在线| 欧美在线一区亚洲| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产午夜精品久久久久久| 成人国语在线视频| www日本在线高清视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲av电影在线进入| 女警被强在线播放| 日日爽夜夜爽网站| 村上凉子中文字幕在线| 中亚洲国语对白在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲五月色婷婷综合| 久久天堂一区二区三区四区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 成人18禁在线播放| 91字幕亚洲| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品99久久99久久久不卡| 嫩草影视91久久| 日韩视频一区二区在线观看| 视频区图区小说| 91九色精品人成在线观看| 一进一出好大好爽视频| 国产麻豆69| 国产免费男女视频| 亚洲精品国产区一区二| 国产免费现黄频在线看| 两人在一起打扑克的视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 99国产精品免费福利视频| 精品久久久久久电影网| 欧美乱色亚洲激情| 精品一品国产午夜福利视频| 久久99一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日韩免费av在线播放| 中文字幕人妻丝袜制服| 正在播放国产对白刺激| 999久久久国产精品视频| 亚洲九九香蕉| 久久午夜亚洲精品久久| 高清在线国产一区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产一区二区三区综合在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品久久久精品久久久| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 成人三级黄色视频| 国产一区二区激情短视频| 日本一区二区免费在线视频| 日韩精品中文字幕看吧| 宅男免费午夜| 欧美乱妇无乱码| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲av美国av| e午夜精品久久久久久久| 久久久久久久久中文| 波多野结衣av一区二区av| 日日干狠狠操夜夜爽| 色尼玛亚洲综合影院| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产免费现黄频在线看| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美日韩av久久| 99国产精品免费福利视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品野战在线观看 | 国产精华一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品久久久av美女十八| 国产成人影院久久av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 男女之事视频高清在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲色图综合在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久精品国产清高在天天线| 十分钟在线观看高清视频www| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 免费高清视频大片| 亚洲一区高清亚洲精品| 丁香六月欧美| 国产成人系列免费观看| 久久99一区二区三区| 日韩欧美在线二视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 电影成人av| 午夜91福利影院| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一夜夜www| 级片在线观看| 韩国精品一区二区三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品在线美女| 午夜亚洲福利在线播放| 日韩欧美在线二视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 午夜影院日韩av| 精品国产乱码久久久久久男人| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 露出奶头的视频| 国产精品永久免费网站| 日韩精品青青久久久久久| 久久精品成人免费网站| 黄色毛片三级朝国网站| 男女午夜视频在线观看| 大陆偷拍与自拍| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 黄色成人免费大全| 黑丝袜美女国产一区| 黄色a级毛片大全视频| 在线观看66精品国产| 视频区欧美日本亚洲| 最新在线观看一区二区三区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 午夜福利免费观看在线| 成人影院久久| 天天影视国产精品| 久久亚洲真实| 亚洲精品久久午夜乱码| 波多野结衣av一区二区av| 一区二区三区精品91| 亚洲av成人一区二区三| av欧美777| 操出白浆在线播放| 国产乱人伦免费视频| 美女高潮到喷水免费观看| 在线av久久热| 丁香欧美五月| 久久久国产成人免费| 欧美最黄视频在线播放免费 | 日本 av在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久国产精品影院| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| xxx96com| 涩涩av久久男人的天堂| 久久九九热精品免费| 水蜜桃什么品种好| 欧美日韩乱码在线| 黑人操中国人逼视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲一码二码三码区别大吗| 窝窝影院91人妻| 两个人免费观看高清视频| 无人区码免费观看不卡| 精品国产亚洲在线| 丝袜美腿诱惑在线| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 免费看a级黄色片| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲成人免费电影在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 日日爽夜夜爽网站| 欧美黑人精品巨大| 精品日产1卡2卡| 成人三级黄色视频| 热99re8久久精品国产| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久中文字幕一级| 国产在线精品亚洲第一网站| 99re在线观看精品视频| 久久性视频一级片| 国产1区2区3区精品| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久九九热精品免费| 成人影院久久| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲中文日韩欧美视频| 五月开心婷婷网| 丁香六月欧美| 色综合站精品国产| 成人影院久久| 在线视频色国产色| 在线观看免费午夜福利视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产精品九九99| 校园春色视频在线观看| 国产成人欧美| 一夜夜www| 久久青草综合色| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av片东京热男人的天堂| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品免费一区二区三区在线| av网站在线播放免费| 国产深夜福利视频在线观看| 久久性视频一级片| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲av成人av| www.熟女人妻精品国产| 一区福利在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 在线观看午夜福利视频| 757午夜福利合集在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产欧美日韩一区二区三| 久久草成人影院| 精品久久久久久,| 桃色一区二区三区在线观看| 日本五十路高清| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 九色亚洲精品在线播放| 免费观看人在逋| 在线国产一区二区在线| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 国产av在哪里看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久久久久人人人人人| 麻豆国产av国片精品| 色哟哟哟哟哟哟| 久久午夜亚洲精品久久| 女同久久另类99精品国产91| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲av五月六月丁香网| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲中文av在线| 黄色毛片三级朝国网站| 黄色视频不卡| 亚洲精品久久午夜乱码| 老汉色av国产亚洲站长工具| 黄色毛片三级朝国网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 脱女人内裤的视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 看免费av毛片| 国产一区二区在线av高清观看| 可以在线观看毛片的网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲精品粉嫩美女一区| 脱女人内裤的视频| 黄色视频不卡| 日日夜夜操网爽| 老汉色av国产亚洲站长工具| 丁香六月欧美| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲专区字幕在线| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 午夜激情av网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产一区二区三区视频了| 波多野结衣一区麻豆| 国产高清视频在线播放一区| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产国语露脸激情在线看| 成人国产一区最新在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 日本欧美视频一区| 成人国语在线视频| 亚洲国产精品999在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 男男h啪啪无遮挡| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 在线观看午夜福利视频| 老司机靠b影院| 国产97色在线日韩免费| 在线观看免费视频网站a站| 精品久久久久久久久久免费视频 | 在线观看午夜福利视频| 亚洲三区欧美一区| 午夜精品久久久久久毛片777| 日韩精品青青久久久久久| 精品欧美一区二区三区在线| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 中文字幕人妻丝袜制服| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 99香蕉大伊视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | www国产在线视频色|