血站全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測設(shè)備質(zhì)控與管理研究

□ 劉祎LIU Yi 桑列勇SANG Lie-yong 傅立強(qiáng)FU Li-qiang

獻(xiàn)血者血液質(zhì)量關(guān)系到受血患者的身體健康，隨著血站自動(dòng)化檢測設(shè)備的普及，血站擁有的血液檢測設(shè)備型號(hào)呈現(xiàn)多樣性，不同設(shè)備檢測同一血樣會(huì)出現(xiàn)結(jié)果差異，由于設(shè)備檢測質(zhì)量及設(shè)備之間的系統(tǒng)誤差直接關(guān)系到采集血液的質(zhì)量，因此， 實(shí)驗(yàn)室針對(duì)不同的檢測設(shè)備性能的分析比較就成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理和質(zhì)量控制的基本要求[1]。而針對(duì)血站檢測設(shè)備間的質(zhì)控操作要求在相關(guān)文件中沒有具體細(xì)則，因此檢測的過程控制、比對(duì)監(jiān)測是血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保障的重要環(huán)節(jié)[2]。為確保多種檢測設(shè)備間結(jié)果的一致性，我站根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程(2019)》附錄B 和ISO/IECI 17025 等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，參考同行的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)[3-8]，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，對(duì)不同酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)使用的設(shè)備進(jìn)行監(jiān)測，以了解之間的性能差異。

材料方法

1．標(biāo)本來源。實(shí)驗(yàn)室己檢測陰性結(jié)果標(biāo)本30 份，其中包括乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒螺旋體(TP)標(biāo)志物、人類嗜T 細(xì)胞病毒(HTLV)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測，以及乙肝DNA 病毒、丙肝RNA 病毒、艾滋RNA 病毒檢測，以上項(xiàng)目均陰性。2020 年4 月國家衛(wèi)生健康委臨檢中心室間質(zhì)評(píng)己知結(jié)果的檢測樣本5 份做為定性盲樣(EOASBS2051-EOASBS2055)；相應(yīng)檢測項(xiàng)目的質(zhì)控品平行檢測9 次。

2．試劑與儀器。酶聯(lián)免疫前處理加樣儀(瑞士TECAN EVO 1 號(hào)機(jī)和2 號(hào)機(jī))；酶聯(lián)免疫后處理儀(瑞士BEP Ⅲ3 號(hào)機(jī)和4 號(hào)機(jī)和德國FAME 1 號(hào)機(jī)和2 號(hào)機(jī))。以上設(shè)備均在校準(zhǔn)有效期內(nèi)，常規(guī)維護(hù)保養(yǎng)。檢測項(xiàng)目為乙型肝炎表面抗原(HBsAg)檢測試劑(中國廈門英科新創(chuàng)，批號(hào)：2019115134)；抗-丙型肝炎病毒(抗-HCV)檢測試劑1 為進(jìn)口(Ortho-Clinical Diagnostics，Inc， 批號(hào)：EXE303)、抗-HIV1/2 聯(lián)合P24 檢測試劑為進(jìn)口(法國伯樂，批號(hào)：9G0467)；抗-梅毒(抗-TP)檢測試劑2(中國廈門英科新創(chuàng)，批號(hào)：2019107525)；抗-丙型肝炎病毒(抗-HCV)檢測試劑為(中國廈門英科新創(chuàng)，批號(hào)：2019107525)。定值質(zhì)控品包括HCV 1NCU/ml(北京康徹斯坦，批號(hào)：201903001)；HCV 2NCU/ml(北京康徹斯坦，批號(hào)：201811002)；HIV 4NCU/ml(北京康徹斯坦，批號(hào)：201905002)；血篩四項(xiàng)質(zhì)控品(北京康徹斯坦，批號(hào)：201905010)；以上試劑經(jīng)過批檢合格，且均在有效期內(nèi)。

3．方法

3．1 前處理設(shè)備(EVO 系統(tǒng))之間比對(duì)。分別使用相同型號(hào)的兩臺(tái)前處理EVO1 號(hào)機(jī)和EVO2 號(hào)機(jī)加樣儀對(duì)上述標(biāo)本選擇了抗-丙型肝炎病毒(抗-HCV)和抗-HIV1/2聯(lián)合P24 的平行檢測，檢測試劑分別為(中國廈門英科新創(chuàng)，法國伯樂)，然后把用EVO1 號(hào)機(jī)加樣的兩塊酶標(biāo)板，以及用EVO2 號(hào)機(jī)加樣的兩塊酶標(biāo)板，放入相同后處理設(shè)備FAME2 號(hào)機(jī)檢測，用來比對(duì)EVO1 號(hào)機(jī)和EVO2 號(hào)機(jī)兩臺(tái)前處理設(shè)備間有無差異。

3．2 后處理設(shè)備(BEPIII 系統(tǒng))之間比對(duì)。使用前處理加樣儀EVO 1 號(hào)機(jī)加樣，用后處理設(shè)備BEPIII 3 號(hào)機(jī)和BEPIII 4 號(hào)機(jī)對(duì)上述樣本進(jìn)行檢測。選擇了這兩臺(tái)后處理常進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的抗-丙型肝炎病毒(抗-HCV)的平行檢測，檢測試劑為進(jìn)口(Ortho-Clinical Diagnostics Inc)，用來比對(duì)BEPIII 3 號(hào)機(jī)和BEPIII 4 號(hào)機(jī)兩臺(tái)后處理設(shè)備間有無差異。

3．3 后處理設(shè)備(FAME 系統(tǒng))之間比對(duì)。使用同一型號(hào)另一臺(tái)前處理加樣儀EVO2 加樣，用不同的后處理系統(tǒng)但是同一型號(hào)的兩臺(tái)設(shè)備FAME1 號(hào)機(jī)和FAME2 號(hào)對(duì)上述樣本進(jìn)行檢測。選擇了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和抗-梅毒(抗-TP)的平行檢測兩次，檢測試劑(中國廈門英科新創(chuàng))，然后將兩塊酶聯(lián)免疫板分別放入FAME1 號(hào)機(jī)和FAME2 號(hào)機(jī)，用來比對(duì)FAME1 號(hào)機(jī)和FAME2 號(hào)機(jī)兩臺(tái)后處理設(shè)備間有無差異。

4．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。應(yīng)用SPSS24 軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，并用kappa 進(jìn)行一致性檢驗(yàn)。

結(jié)果

同一型號(hào)的不同設(shè)備，實(shí)驗(yàn)檢測陰性標(biāo)本和定性盲樣標(biāo)本結(jié)果均正確，室內(nèi)質(zhì)控均符合有效性要求。各項(xiàng)目的質(zhì)控CⅤ值均＜15%，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)變異系數(shù)在15%以內(nèi)，批間變異系數(shù)在20%以內(nèi)[4]，結(jié)果詳見表1—4。

表1 前處理全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀EVO系統(tǒng)檢測結(jié)果比較

討論

隨著血站實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化檢測設(shè)備的普及，2 臺(tái)及以上檢測設(shè)備同時(shí)工作己成為實(shí)驗(yàn)的常態(tài)，由于設(shè)備檢測系統(tǒng)、購置年份、使用頻率不同，設(shè)備間的性能差異會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果，定期對(duì)檢測設(shè)備進(jìn)行質(zhì)控顯得尤為重要。設(shè)備監(jiān)測可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)設(shè)備存在的問題，以及時(shí)采取措施保障檢測質(zhì)量。對(duì)此，《血站技術(shù)操作規(guī)程(2019 版)》和CLIA88 均提出：實(shí)驗(yàn)室在使用不同儀器設(shè)備對(duì)同一項(xiàng)目檢驗(yàn)前，也應(yīng)對(duì)儀器間做比對(duì)，關(guān)鍵設(shè)備直接關(guān)系血液質(zhì)量和獻(xiàn)血者、用血者安全，血站應(yīng)確保專業(yè)設(shè)備運(yùn)行的安全性、精確性和可靠性[9]。雖然規(guī)程做出了對(duì)設(shè)備比對(duì)的明確規(guī)定，但還缺乏具體的操作規(guī)定。本實(shí)驗(yàn)室針對(duì)自身情況，設(shè)計(jì)了實(shí)驗(yàn)的具體步驟和操作內(nèi)容，雖不能直接針對(duì)設(shè)備本身功能，但通過對(duì)檢測結(jié)果的分析比對(duì)，可大致了解各設(shè)備間的性能差異，以判斷各設(shè)備檢測結(jié)果的一致性。故在設(shè)計(jì)比對(duì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們確保人員、設(shè)備、物料、基礎(chǔ)設(shè)施、環(huán)境溫度的一致性，選擇了各設(shè)備常使用的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目作為測試項(xiàng)，綜合考慮權(quán)重分配[10]。在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目選擇上覆蓋了最小量的(10uI)抗-HCV試驗(yàn)和最大量的(100uI)抗-TP 和HBsAg 試驗(yàn)，以及中間量的(75uI)抗-HIV 試驗(yàn)。在標(biāo)本選擇上，既有常規(guī)陰性標(biāo)本，也有各項(xiàng)目質(zhì)控品隨板做平行檢測，還加入了權(quán)威機(jī)構(gòu)的定性盲樣結(jié)果來做設(shè)備性能的判斷。通過相同條件，相同試劑的檢驗(yàn)結(jié)果，比對(duì)不同檢測設(shè)備間有無差異。因?yàn)楦髟O(shè)備使用年限不同，零配件會(huì)有不同程度的老化，通過統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)比對(duì)，可以識(shí)別到差異，及時(shí)了解設(shè)備的性能狀態(tài)。通過觀察表1、表2、表3，我們發(fā)現(xiàn)所有標(biāo)本的正確率為100%，k=1，一致性為優(yōu)。觀察表4 的數(shù)據(jù)，我們發(fā)現(xiàn)權(quán)威機(jī)構(gòu)的定性盲樣標(biāo)本在各處理設(shè)備的檢測結(jié)果一致性為100%(定性盲樣中含有陰性標(biāo)本、陽性標(biāo)本和弱陽性標(biāo)本)，經(jīng)過χ2檢驗(yàn)，各設(shè)備檢測的準(zhǔn)確性和特異性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0．05)。從表4 我們發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)CV 值符合板內(nèi)CV＜15%的標(biāo)準(zhǔn)，除一項(xiàng)抗-HC Ⅴ的板內(nèi)CV 為10．26%略高于其他檢測項(xiàng)目， 檢測總體的精密性都較好，該項(xiàng)CV值略高應(yīng)該是抗-HC Ⅴ加樣量較小相對(duì)誤差大引起的。通過比對(duì)我們發(fā)現(xiàn)后處理BEP3 號(hào)機(jī)CV 值略高于BEP4 號(hào)機(jī)，F(xiàn)AME2 號(hào)機(jī)CV 值略高于FAME1 號(hào)機(jī)，但差異都不大，可能與這兩個(gè)設(shè)備的使用年份、使用頻率不同有關(guān)。

表2 后處理全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀BEP系統(tǒng)檢測結(jié)果比較

表3 后處理全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀FAME系統(tǒng)檢測結(jié)果比較

表4 不同儀器設(shè)備各項(xiàng)目檢測結(jié)果數(shù)據(jù)(S/CO值)匯總分析

實(shí)現(xiàn)血液安全、充足是保障臨床用血的基礎(chǔ)，與之相關(guān)的設(shè)備與產(chǎn)品需要嚴(yán)格的制度保障[11]，檢測設(shè)備與檢測質(zhì)量是保障血液安全的重要環(huán)節(jié)。設(shè)備的比對(duì)是幫助血站保障血液檢測質(zhì)量，獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要途徑，每年一次的設(shè)備比對(duì)可以對(duì)儀器的性能進(jìn)行驗(yàn)證，以確保檢驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。按照國家對(duì)臨床血液檢測實(shí)驗(yàn)室的要求，建立科學(xué)、系統(tǒng)、有效的設(shè)備管理與質(zhì)控方法，定期對(duì)設(shè)備進(jìn)行比對(duì)，有利于保證檢驗(yàn)設(shè)備的可靠運(yùn)行，提升設(shè)備的管理能力。