三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的HPLC定量分析及其腸黏膜滲透性研究

王筱懿，仇 坤，陳 明，彭桂明，賴(lài)樹(shù)生，蔣騰川，尉小慧，王崢濤

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所，中藥標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（上海 201203）；2.廣西梧州中恒集團(tuán)股份有限公司（廣西 梧州 543000）；3.廣西中恒創(chuàng)新醫(yī)藥研究有限公司（廣西 南寧 530000）

腸道是人體體腔內(nèi)與外界環(huán)境接觸面最大的器官，容易受到腸道病原體的入侵和破壞，而腸道表面的黏液層是腸道吸收的重要屏障，被稱(chēng)為腸黏液屏障［1］。腸黏液屏障由黏蛋白、水、無(wú)機(jī)鹽、免疫分子和促進(jìn)致病菌清除的抗菌肽等組成［2］。腸黏液的主要結(jié)構(gòu)成分是黏蛋白，這些蛋白由高度糖基化的蛋白主鏈組成，黏液蛋白單元之間的二硫化物橋接形成黏液的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)［3］，使黏液能夠調(diào)節(jié)一些微粒和小分子的擴(kuò)散。黏液層可捕獲病原體和外來(lái)顆粒，并通過(guò)不斷分泌黏液使腸道表面保持濕潤(rùn)和不斷更新，從而減少捕獲的病原體和外來(lái)顆粒在腸黏膜表面的停留時(shí)間，進(jìn)而有利于維持腸道環(huán)境穩(wěn)定［4-5］。黏蛋白和水形成的凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)還可為腸上皮細(xì)胞分泌的免疫分子提供擴(kuò)散和穩(wěn)定的場(chǎng)所，以更好地發(fā)揮其抗菌功能［6］。同時(shí)，小腸可通過(guò)運(yùn)動(dòng)將黏液及其中滲透的細(xì)菌等物質(zhì)推向遠(yuǎn)端［7］。然而，腸黏液的這種屏障功能在起到保護(hù)作用的同時(shí)，也會(huì)阻止藥物在黏膜表面的持續(xù)和靶向輸送［8］。因此，了解黏液的屏障特性、研究藥物在腸黏液層的滲透過(guò)程是探討藥物口服吸收機(jī)制的必要環(huán)節(jié)。

三七是五加科人參屬植物三七Panaxnotoginseng（Burk.） F.H.Chen 的干燥根及根莖，具有活血化瘀、消腫定痛等功效，臨床應(yīng)用廣泛［9］。其主要活性成分為三七總皂苷（panax notoginseng saponins，PNS）?！吨腥A人民共和國(guó)藥典（2020年版）：一部》［10］規(guī)定用于口服的三七總皂苷提取物中三七皂苷R1（C47H80O18）不得少于5.0%，人參皂苷Rg1（C42H72O14）不得少于25.0%，人參皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于30.0%。三七皂苷R1 是三七的代表性成分，而人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1 是三七總皂苷中含量最高的兩個(gè)成分，因此選取這3種皂苷成分作為研究對(duì)象。

目前臨床常用的三七總皂苷制劑以口服制劑和注射制劑為主［11］，相關(guān)的細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)、腸吸收、口服生物利用度等方面的研究較多，但進(jìn)入體內(nèi)口服吸收的第一道屏障——腸黏液的滲透過(guò)程卻鮮有研究報(bào)道。體外模型通常具有替代、簡(jiǎn)化、精準(zhǔn)等特點(diǎn)［12］，本課題采用前期建立的3 種體外腸黏液滲透模型——純化黏蛋白滲透模型（purified mucin infiltration model，PIM）、人工腸黏液滲透模型（artificial intestinal mucus infiltration model，AIM）及大鼠腸黏液滲透模型（rat intestinal mucus infiltration model，RIM），研究三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的腸黏液滲透作用，進(jìn)而為三七皂苷的口服吸收機(jī)制研究以及口服新制劑的設(shè)計(jì)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物與試劑 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 及人參皂苷Rb1 ，購(gòu)自成都德思特生物技術(shù)有限公司（批號(hào)分別為DSTDS005003、DSTDR000902、DSTDR000603）；磷酸，上海拜力生物科技有限公司（批號(hào)：20800100）；豬腸胃黏蛋白，上海源葉生物科技有限公司（批號(hào)：A11GS157442）；卵磷脂（E-80，濃度≥80%），上海麥克林有限公司（批號(hào)：C11134241）；卵磷脂酰膽堿（PC）、卵磷脂乙醇胺（PE）、卵磷脂絲氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）、膽固醇（Chol），上海源葉生物科技有限公司（批號(hào)分別為579010-150055-13、J21HS185636、J23HS185824、TO7D6-F6559、L29N8F49258）；侵襲實(shí)驗(yàn)（Transwell）小室，美國(guó)Corning 公司（批號(hào)：33721054）；三氯甲烷、乙腈，國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司（批號(hào)分別為20210514、20221209）。

1.2 主要儀器 電子分析天平，瑞士Mettler Toledo 公司（型號(hào)：BP211D ）；離心機(jī)，上海菲恰爾分析儀器有限公司（型號(hào)：SF-TGL-16M ）；超聲清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司（型號(hào)：KQ-250DB）；磁力攪拌器，德國(guó)AKI有限公司（型號(hào)：RT10）；高效液相色譜（HPLC）儀，美國(guó)安捷倫公司（型號(hào)：Agilent 1260 Series）。

2 方法

2.1 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 HPLC分析方法的建立

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 稱(chēng)取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 各10 mg，分別加入甲醇10 mL，得到1 g·L-1的單標(biāo)品溶液，制得對(duì)照品溶液。

2.1.2 樣品溶液制備 在PIM、AIM、RIM 中，取不同濃度不同時(shí)間點(diǎn)的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的接收室溶液各100 μL，10 000 r·min-1離心5 min，0.45 μm濾膜過(guò)濾后制得樣品溶液。

2.1.3 色譜條件

（1）三七皂苷R1測(cè)定色譜條件。色譜柱：Diamonsil Plus（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：A 為乙腈，B為0.1%磷酸水溶液。梯度洗脫：0～15 min，17%～27% A；15～18 min，27%～90% A。檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

（2）人參皂苷Rg1 測(cè)定色譜條件。流動(dòng)相：A 為乙腈，B 為0.1%磷酸水溶液，A∶B=22%∶78%，15 min 等度洗脫；其他同三七皂苷R1測(cè)定條件。

（3）人參皂苷Rb1 測(cè)定色譜條件。流動(dòng)相：A 為乙腈，B 為0.1%磷酸水溶液，A∶B=31%∶69%，15 min 等度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：205 nm；其他同三七皂苷R1 測(cè)定條件。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液，依次稀釋制成濃度分別為10、40、62.5、125、250、700及1 000 mg·L-1的混合對(duì)照品溶液。取10 μL在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行HPLC檢測(cè)分析，記錄峰面積，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rg1的線性回歸方程和線性范圍。

2.1.5 方法學(xué)考察

（1）精密度試驗(yàn)。取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1 對(duì)照品溶液，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行HPLC 檢測(cè)分析，每次進(jìn)樣10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一樣品溶液在不同時(shí)間（0、4、8、12、24、48 h）分別進(jìn)樣10 μL，進(jìn)行HPLC 檢測(cè)分析，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

（3）重復(fù)性試驗(yàn)。精密吸取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的樣品溶液進(jìn)行HPLC 檢測(cè)分析，平行6次試驗(yàn)，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

（4）加樣回收試驗(yàn)。精密吸取已知濃度的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1樣品溶液100 μL，分別加入含量為80%、100%、120%的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的對(duì)照品溶液，按照樣品溶液處理方法處理后用甲醇定容，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣分析，計(jì)算三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的加樣回收率。

2.2 體外腸黏液滲透模型的建立與皂苷類(lèi)成分表觀滲透系數(shù)（Papp）測(cè)定 利用Transwell 小室的擴(kuò)散原理，以Transwell 小室為主要工具，建立PIM、AIM 和RIM。如圖1 所示，將Transwell 小室分別分為4 個(gè)部分：接收室（A）、半透膜（B）、黏液層（C）、供體室（D）。其中3 種模型的主要不同在于黏液層，分別為純化的黏蛋白溶液、人工腸黏液及大鼠原生黏液層。見(jiàn)圖1。

圖1 侵襲實(shí)驗(yàn)滲透系統(tǒng)的示意圖

將Transwell 滲透體系插入一定體積的磷酸鹽緩沖液（PBS）中，然后將三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 配制成一定濃度的藥液后，加入供體室，置于黏液層上，在不同時(shí)間點(diǎn)收集接收室中的樣品溶液，HPLC進(jìn)樣檢測(cè)并計(jì)算Papp。

Papp 的大小反映藥物透過(guò)模型的能力以及速度，其計(jì)算公式如下：Papp= （dQ/dt）×1/A×1/C0。其中，dQ/dt為接收室在單位時(shí)間內(nèi)的累積轉(zhuǎn)運(yùn)量，A為T(mén)ranswell的膜表面積，C0為藥物加入供體室的起始濃度。

2.2.1 PIM 的建立及3 種皂苷成分Papp 測(cè)定［13］稱(chēng)取適量的黏蛋白，用pH 7.2 的PBS 溶液配制濃度為20 g·L-1的純化黏蛋白溶液。取空白Transwell小室，加入濃度為20 g·L-1的黏蛋白溶液，使其厚度為3.82 mm，36 ℃孵育5 min制得PIM。

稱(chēng)取適量的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 至2 mL 容量瓶，用pH 7.2 的PBS 溶液配制成濃度分別為20、10、5 g·L-1的溶液。在PIM 中，分別加入上述不同濃度的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 溶液各100 μL，將模型插入1.5 mL、pH 7.2 的PBS 溶液中，于0.5 h、1 h 取接收室溶液100 μL，再補(bǔ)足相應(yīng)的100 μL 的PBS 溶液至接收室，10 000 r·min-1離心5 min，采用HPLC檢測(cè)三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1含量。

2.2.2 AIM的建立及3種皂苷成分Papp測(cè)定［14］

（1）脂質(zhì)體1。稱(chēng)取0.5 g 的E-80 并溶解在10 mL 氯仿和乙醚混合物（體積分?jǐn)?shù)2∶1）中，加入圓底燒瓶中，36 ℃減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入25 mL 的PBS 溶液（pH 7.4），緩慢搖晃燒瓶獲得2%（W/V）脂質(zhì)體分散體，通過(guò)孔徑為0.25 μm濾膜得到脂質(zhì)體1。

（2）脂質(zhì)體2。稱(chēng)取 PC（W/W為26.5%）、PE（W/W為26.5%）、PS（W/W為7%）、PI（W/W為7%）、Chol（W/W為33%）共計(jì)0.5 g，加入圓底燒瓶中，36 ℃減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入25 mL 的PBS 溶液（pH 7.4），緩慢搖晃燒杯獲得2%（W/V）脂質(zhì)體分散體，通過(guò)孔徑為0.80 μm濾膜得到脂質(zhì)體2。

取200 μL 脂質(zhì)體1 置于Transwell 小室半透膜上，并以2 300 r·min-1離心5 min，50 ℃加熱45 min，重復(fù)2次。然后繼續(xù)取100 μL 脂質(zhì)體2 加入至脂質(zhì)體1 ，以2 300 r·min-1離心5 min，50 ℃加熱45 min，重復(fù)2 次。然后取上述Transwell 小室于-80 ℃條件下冷凍保存至少60 min，在實(shí)驗(yàn)前于50 ℃條件下解凍60 min。

在上述模型中分別加入不同濃度的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1溶液，取樣時(shí)間改為2 h、4 h，其余操作同“2.2.1”項(xiàng)下方法。

2.2.3 RIM 的建立及3 種皂苷成分Papp 測(cè)定［15］取新鮮大鼠腸黏液，-80 ℃條件下凍存，使用前室溫復(fù)融，在空白Transwell 小室中加入大鼠小腸黏液0.4 g，36 ℃孵育5 min制得RIM。

在上述模型中加入不同濃度的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 溶液，取樣時(shí)間改為0 h、1 h，其余操作同“2.2.1”項(xiàng)下方法。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將數(shù)據(jù)導(dǎo)入GraphPad 7.0 軟件，采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的描述和分析。計(jì)量資料以xˉ±s表示，兩組之間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 3 種皂苷成分HPLC線性范圍及方法學(xué)考察結(jié)果

3.1.1 線性范圍考察 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的線性回歸方程依次為y=2.248 4x-0.592 5（r2=0.999 5），y=3.719 4x-1.737（r2=0.999 5），y=2.269 3x-31.16（r2=0.999 0），表明三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 在10～1 000 mg·L-1濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。見(jiàn)圖2。

3.1.2 精密度試驗(yàn) 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的RSD值分別為0.47%、0.12%、0.18%（n=6），表明儀器的精密度良好。

3.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的RSD值分別為2.1%、2.9%、1.9%，表明供試品溶液的穩(wěn)定性良好。

3.1.4 重復(fù)性試驗(yàn) 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1的平均含量分別為369.68、41.54、25.90 mg·g-1，RSD值分別為1.3%、2.0%、1.0%（n=6），表明方法的重復(fù)性良好。

3.1.5 加樣回收試驗(yàn) 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的平均加樣回收率分別為99.72%、101.26%、99.14%，RSD值均<2%，表明方法的準(zhǔn)確度良好。見(jiàn)表1。

表1 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的加樣回收率

3.2 3 種皂苷成分在PIM 中的Papp 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 在PIM 中的Papp 實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示，在PIM 中，隨著濃度的升高，3種皂苷成分的滲透性都有不同程度的增加；三七皂苷R1 在不同濃度下的Papp都有顯著增加，與人參皂苷Rb1組、人參皂苷Rg1 組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；人參皂苷Rb1 組與人參皂苷Rg1 組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

表2 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1在純化黏蛋白滲透模型（PIM）中的表觀滲透系數(shù)比較（±s）

表2 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1在純化黏蛋白滲透模型（PIM）中的表觀滲透系數(shù)比較（±s）

注：與三七皂苷R1比較，*P<0.05。

成分表觀滲透系數(shù)/（cm·s-1·10-5）5 g·L-1 18.07±0.40 4.81±0.23*5.47±0.10*20 g·L-1 30.82±0.07 7.36±0.02*7.90±0.02*三七皂苷R1人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1 10 g·L-1 21.88±0.70 6.67±0.04*6.82±0.08*

3.3 3 種皂苷成分在AIM 中的Papp 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 在AIM 中的Papp 實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示，在AIM 中，隨著濃度的升高，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的滲透性都有不同程度的增加，在20 g·L-1濃度下的Papp 為三七皂苷R1>人參皂苷Rb1>人參皂苷Rg1（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1在人工腸黏液滲透模型（AIM）中的表觀滲透系數(shù)比較（±s）

表3 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1在人工腸黏液滲透模型（AIM）中的表觀滲透系數(shù)比較（±s）

注：與三七皂苷R1比較，*P<0.05；與人參皂苷Rg1比較，#P<0.05。

成分表觀滲透系數(shù)/（cm·s-1·10-5）5 g·L-1 4.53±0.35 2.34±0.01 2.52±0.10 20 g·L-1 11.56±0.07 5.37±0.01*7.84±0.04*#三七皂苷R1人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1 10 g·L-1 6.07±0.15 3.00±0.06 4.15±0.05

3.4 3 種皂苷成分在RIM 中的Papp 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 在RIM 中的Papp 實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示，在RIM 中，隨著濃度的升高，三七皂苷R1 和人參皂苷Rg1的滲透性增加幅度較大，而人參皂苷Rb1增加幅度較??；在5 g·L-1濃度下，人參皂苷Rg1 的滲透性較人參皂苷Rb1 顯著升高（P<0.05）；在10 g·L-1濃度下，三七皂苷R1 和人參皂苷Rg1 比人參皂苷Rb1 的滲透性顯著升高（P<0.05）；在20 g·L-1濃度下的Papp 為人參皂苷Rg1>三七皂苷R1>人參皂苷Rb1（P<0.05），與PIM、AIM模型滲透趨勢(shì)不同。見(jiàn)表4。

表4 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1在大鼠腸黏液滲透模型（RIM）的表觀滲透系數(shù)（±s）

表4 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1在大鼠腸黏液滲透模型（RIM）的表觀滲透系數(shù)（±s）

注：與三七皂苷R1比較，*P<0.05；與人參皂苷Rg1比較，#P< 0.05。

成分三七皂苷R1人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1表觀滲透系數(shù)（Papp）/（cm·s-1·10-5）5 g·L-1 4.28±0.45 8.73±0.07 2.45±0.01#20 g·L-1 13.53±0.33 20.31±0.64*4.82±0.13*#10 g·L-1 7.25±0.71 12.59±0.03 3.46±0.17*#

4 討論

隨著濃度的增加，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1 在3 種腸黏液滲透模型中的滲透性均有所增加。在不同濃度下，3 種皂苷成分在3 種模型中的滲透規(guī)律略有不同，在脂類(lèi)成分較少的PIM 和AIM 中，水溶性成分滲透較強(qiáng)，如三七皂苷R1；而在RIM 中，脂溶性成分滲透作用較強(qiáng)，如人參皂苷Rg1。

4.1 在PIM 中 在不同濃度下，三七皂苷R1 的滲透性明顯優(yōu)于人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1。模型中藥物滲透的主要驅(qū)動(dòng)力為被動(dòng)擴(kuò)散，藥物水溶性是影響藥物被動(dòng)擴(kuò)散的原因之一［16］。一方面，三七皂苷R1 的水溶性依次高于人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1［17］；另一方面，純化黏蛋白溶液缺失了磷脂層結(jié)構(gòu)［18］，模型本身脂溶性相對(duì)減少，使得PIM 中水溶性較高的三七皂苷R1具有較強(qiáng)的滲透性。

4.2 在AIM 中 AIM 藥物濃度為5 g·L-1和10 g·L-1時(shí)趨勢(shì)不顯著，當(dāng)濃度升高為20 g·L-1時(shí)，隨著藥物濃度的上升滲透性也隨之增加，三七皂苷R1 的滲透性最佳，人參皂苷Rb1 其次，人參皂苷Rg1 滲透性較差。但相較于3 種皂苷在PIM 中的滲透性，人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1更接近于三七皂苷R1的滲透性。這可能是因?yàn)锳IM 中含有細(xì)胞膜相似的脂質(zhì)組成成分及結(jié)構(gòu)，具備較好的生物相容性［19］，所以相對(duì)于PIM 有利于提高親脂性皂苷的滲透性［20］。

4.3 在RIM 中 隨著藥物濃度的上升，3 種皂苷成分的滲透性也逐步增加，表明提高濃度對(duì)藥物滲透效率具有一定的促進(jìn)作用。在濃度為20 g·L-1時(shí)，3 種皂苷成分的Papp 為人參皂苷Rg1>三七皂苷R1>人參皂苷Rb1（P<0.05）。RIM 為原生大鼠腸黏液滲透模型，能體現(xiàn)真實(shí)的腸道環(huán)境。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 均屬于原人參三醇型皂苷，更易被腸道吸收［21］，且人參皂苷Rg1 的親脂性大于三七皂苷R1，所以人參皂苷Rg1 在RIM中的滲透性最強(qiáng)。三七皂苷R1較人參皂苷Rb1滲透性高的原因可能在于其分子量比人參皂苷Rb1 的分子量小，更易透過(guò)大鼠腸黏液。

4.4 其他 建立的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的HPLC 含量測(cè)定分析方法，其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率良好，可用于體外腸黏液滲透模型的3種三七皂苷單體成分的含量測(cè)定。

三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 在PIM、AIM、RIM 中穩(wěn)定性良好，均可單獨(dú)用于藥物的滲透性評(píng)價(jià)。

藥物的腸道滲透性決定藥物被人體吸收的速率和程度，并進(jìn)一步?jīng)Q定了藥物口服生物利用度的高低［22］。目前大多數(shù)文獻(xiàn)主要通過(guò)針對(duì)三七總皂苷或其單體的口服生物利用度進(jìn)行研究，探討整個(gè)腸黏膜屏障對(duì)藥物吸收的影響［23-24］，但缺少對(duì)吸收過(guò)程中腸道黏液影響的研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)多種體外腸黏液滲透模型研究3 種三七皂苷單體成分在腸道部位的滲透作用，并對(duì)3種成分在腸黏液中的滲透規(guī)律進(jìn)行探討。該研究結(jié)果可與三七皂苷單體成分的口服藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果進(jìn)行互證，為三七皂苷類(lèi)成分的口服吸收機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)而為三七總皂苷口服新制劑的設(shè)計(jì)及進(jìn)一步的臨床應(yīng)用、開(kāi)發(fā)提供思路。同時(shí)，也為其他口服藥物進(jìn)行腸黏液滲透性研究時(shí)如何選擇適合的模型提供參考。