血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平在乳腺癌中的表達及意義

王聰 張娜賢 周陽 王海彥★

乳腺癌主要發(fā)生于乳腺上皮組織，發(fā)生率較高，早期無明顯癥狀，隨著疾病的進展會出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移等惡化癥狀，進展至晚期腫瘤細胞會發(fā)生轉(zhuǎn)移，威脅患者的生命，因此，尋找乳腺癌的標記物，分析其臨床病理特征，對改善患者預后有重要意義［1］。微小核糖核酸（MicroRNA，miRNA）是非編碼RNA，與多種惡性腫瘤關(guān)系密切［2］。miR-141-3p 是miR-200 家族的成員，通過調(diào)節(jié)不同的信號通路，在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，目前已被證實其與前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌等發(fā)生密切相關(guān)［3］。sE-cadherin 廣泛存在于腫瘤患者血清和尿液中，已證實其在乳腺癌患者體內(nèi)水平升高，對乳腺癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移有重要意義；COX-2 是一種誘導基因，能增加基質(zhì)金屬蛋白酶活性，促進腫瘤侵襲淋巴結(jié)［4-5］。血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 在多種腫瘤中表達異常，但與乳腺癌的表達及臨床病理相關(guān)性少有報道。因此，本研究旨在探討血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平在乳腺癌中的表達，并分析其與不同病理特征、CD4+和CD8+的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年4 月至2021 年12 月南陽市第二人民醫(yī)院收治的乳腺癌患者50 例進行研究，設(shè)為病例組，研究已獲得院倫理會批準實施。年齡（48.72±4.41）歲，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20 例，未轉(zhuǎn)移30例。并選取同期入院的乳腺良性疾病患者50 名設(shè)為對照組，其中乳腺炎12 例，乳腺增生38 例，年齡（48.39±4.13）歲，兩組年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

參照《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范》［6］，乳房腫塊、乳房皮膚異常等癥狀；病理檢查證實。

病例組納入標準：①符合相關(guān)診斷標準；②無生命危險者；③未轉(zhuǎn)移者；④知情同意。排除標準：①病情無法控制者；②深度昏迷，意識模糊者；③中途退出研究者；④妊娠者；⑤復發(fā)性者。

1.2 實驗方法

采集兩組對象入組后第2 d 清晨空腹靜脈血，采用美國羅氏公司RNA 提取試劑盒聚合酶鏈反應法測定血清miR-141-3p。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定sE-cadherin、COX-2 水平，試劑盒購于赫澎（上海）生物科技有公司，儀器均使用酶標儀。試劑盒由深圳晶美生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，操作嚴格按試劑盒說明進行；流式細胞術(shù)檢測CD4+和CD8+含量。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 24.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布計量資料以（±s）表示，兩兩比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析；相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)分析；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平比較

病例組血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.01）。見表1。

表1 兩組血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum miR-141-3p，sE-cadherin and COX-2 levels between the two groups（±s）

表1 兩組血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum miR-141-3p，sE-cadherin and COX-2 levels between the two groups（±s）

2.2 兩組免疫細胞水平比較

病例組CD4+、CD4+/CD8+水平顯著低于對照組，CD8+顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.01）。見表2。

表2 兩組免疫細胞水平比較（±s）Table 2 Comparison of immune cell levels between the two groups（±s）

表2 兩組免疫細胞水平比較（±s）Table 2 Comparison of immune cell levels between the two groups（±s）

2.3 血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平與乳腺癌臨床病理的關(guān)系

所有患者不同年齡、病理組織學類型與血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 表達水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；腫瘤最大徑＞4 cm、病理分級Ⅲ級～Ⅳ級、分化程度高分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平均明顯高于腫瘤最大徑≤4 cm、病理分級Ⅰ～Ⅱ級級、中低分化程度、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平與乳腺癌臨床病理的關(guān)系（±s）Table 3 Relationship between serum miR-141-3p，sE-cadherin and COX-2 levels and clinicopathology of breast cancer（±s）

表3 血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平與乳腺癌臨床病理的關(guān)系（±s）Table 3 Relationship between serum miR-141-3p，sE-cadherin and COX-2 levels and clinicopathology of breast cancer（±s）

2.4 血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平達與乳腺癌臨床病理、細胞免疫的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 與乳腺癌患者腫瘤最大徑、病理分級、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及CD8+之間均呈正相關(guān)，血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 與乳腺癌患者CD4+、CD4+/CD8+之間均呈負相關(guān)（P＜0.05）。見表4。

表4 血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平達與乳腺癌臨床病理、細胞免疫的相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis of serum miR-141-3p，sE-cadherin and COX-2 levels with clinicopathology and cellular immunity of breast cancer

3 討論

乳腺癌是臨床常見惡性腫瘤之一，臨床表現(xiàn)為乳房腫塊、乳房皮膚異常等，若控制不及時，疾病進展至晚期細胞會發(fā)生轉(zhuǎn)移，出現(xiàn)器官病變，威脅患者生命［7］。近年來乳腺癌的發(fā)生率呈上升趨勢，據(jù)調(diào)查顯示，我國乳腺癌發(fā)生率居女性惡性腫瘤首位，死亡率居女性惡性腫瘤第二位，已成為當今社會的重大公共衛(wèi)生問題［8］。因此，了解乳腺癌發(fā)展的分子機制，并對疾病進行早期診斷、及時采取干預措施，對改善預后有重要意義。

miRNA 廣泛參與腫瘤的發(fā)展過程，miR-141-3p 是miR-200 家族的成員，可通過靶向表皮生長因子受體（Epithelial growth factor receptor，EGFR）影響下游途徑蛋白，抑制成纖維細胞的增殖，促進細胞凋亡［9］。sE-cadherin 是一種跨膜糖蛋白，有維持上皮細胞極性和細胞粘附的功能，其水平異常是腫瘤發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵，其水平下調(diào)時可減輕腫瘤細胞間的黏附能力，促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移［10］。COX-2 屬于誘導型酶，是合成前列腺素的重要限速酶，可通過調(diào)控細胞周期抑制細胞分裂，減少腫瘤新生血管形成，使腫瘤萎縮，在炎癥細胞因子、生長因子等刺激后誘導表達［11-12］。有研究指出，sE-cadherin 均是乳腺癌診斷的有效指標，但其靈敏度較低，因此，聯(lián)合多種血清腫瘤標志物對乳腺癌進行診斷，提高疾病的檢出率［13］。本研究結(jié)果提示，血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 在乳腺癌中呈高表達，可能參與了疾病的發(fā)展。分析其原因可能是因為sE-cadherin 可通過組織蛋白酶降解組織表面的E-cadherin 釋放入機體，腫瘤細胞組織蛋白酶的活性升高，能促進腫瘤組織表面的E-cadherin 發(fā)生降解，減弱腫瘤組織細胞間的黏附能力，E-cadherin 被釋放進血液循環(huán)內(nèi)，故而導致其水平升高。在病理狀態(tài)下COX-2 可過量分泌，通過誘導前列腺素合成，促進乳腺癌血管生成和腫瘤細胞增殖，提高血管通透性，增強腫瘤細胞轉(zhuǎn)移能力，從而參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展。

有研究顯示，乳腺癌的發(fā)生是一個多因素過程，常伴有細胞免疫水平變化，細胞免疫能抑制淋巴細胞，改變腫瘤的微環(huán)境，抑制腫瘤細胞清除［14］。CD4+細胞能調(diào)控炎癥與細胞毒相關(guān)的免疫應答，活化自然殺傷細胞；CD8+細胞毒性較輕，在殺死腫瘤細胞中發(fā)揮了重要的作用［15］。本研究結(jié)果提示，乳腺癌患者細胞免疫細胞異常。分析其原因可能是因為COX-2 可通過上調(diào)原癌基因Bcl-2 表達提高腫瘤細胞的抗凋亡能力，抑制淋巴因子產(chǎn)生，減少T 細胞增殖，減弱病人機體免疫監(jiān)視功能，故與細胞免疫關(guān)系密切。相關(guān)性分析顯示，血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 與乳腺癌患者腫瘤最大徑、病理分級、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及CD8+之間均呈正相關(guān)，血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 與乳腺癌患者CD4+、CD4+/CD8+之間均呈負相關(guān)。

綜上所述，乳腺癌患者中血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2 水平表達明顯升高，與臨床病理、細胞免疫之間關(guān)系密切，可能協(xié)同參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，對乳腺癌患者預后的評估具有重要意義。