北京某三甲醫(yī)院男性人乳頭瘤病毒感染狀況分析

王道靖 朱浩妍 鄧國雄 姜永瑋 趙美美 孔曉牧 劉怡 高芃 曹永彤馬亮★

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一類嗜上皮細(xì)胞性雙股環(huán)狀DNA 病毒，分子大小約8 000 bp，目前發(fā)現(xiàn)有200 多種基因亞型［1］。HPV 的主要傳播途徑為性傳播，臨床上根據(jù)與腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性高低分為兩大類，低危亞型HPV（Low-risk HPV）與生殖道、肛周尖銳濕疣等良性病變相關(guān)，高危亞型HPV（High-risk HPV）常與宮頸癌、陰道癌、肛門癌、陰莖癌等病密切相關(guān)［2-3］。截至目前已明確女性高危亞型感染是幾乎所有宮頸癌及其前體病變（宮頸上皮內(nèi)瘤變）發(fā)生的必要因素［4］。研究發(fā)現(xiàn)，男性HPV 感染者在女性HPV 感染中承擔(dān)著“毒載體”作用，據(jù)報(bào)道中國男性HPV 感染率達(dá)10.5%［5］，高于女性，且持續(xù)感染時(shí)間長，自身病毒清除較慢，可增加女性伴侶發(fā)展為宮頸高級(jí)別病變乃至宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)［6］。本研究應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）與Taqman 探針相結(jié)合，對(duì)該地區(qū)男性初次行外生殖器HPV 檢測患者進(jìn)行分型檢測并結(jié)合臨床數(shù)據(jù)分析，為本地區(qū)男性HPV 感染流行病學(xué)調(diào)查、臨床防治、早期篩查和HPV 疫苗接種提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

本研究納入2021 年10 月至2022 年10 月在北京市中日友好醫(yī)院皮膚病與性病科門診行外生殖器HPV 檢測的所有男性患者標(biāo)本作為研究對(duì)象，共有1 415 例?；颊咂骄挲g（35.45±10.29）歲，所有待檢樣本均使用一次性細(xì)胞采集器采集樣本，采集男性患者尿道口、冠狀溝及肛周的組織脫落細(xì)胞或分泌物，采集的標(biāo)本立即放入專用采集管中，冷藏保存并送往本院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行HPV 檢測。本研究為回顧性分析，故豁免知情同意，本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

1.2 主要試劑和設(shè)備

高危亞型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）分型核酸測定試劑盒（熒光PCR 法）和低危亞型人乳頭瘤病毒（LR-HPV）6+11 型核酸測定試劑盒（熒光PCR法）以及核酸提取試劑盒均購自上海之江生物科技股份有限公司。儀器Autrax N10054 全自動(dòng)核酸提取工作站購自上海之江生物科技股份有限公司，SLAN-96S 全自動(dòng)醫(yī)用PCR 分析系統(tǒng)購自上海宏石醫(yī)療科技有限公司。

1.3 HPV 分型檢測

檢驗(yàn)原理應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR 技術(shù)，分別針對(duì)高危亞型HR-HPV（16、18、3l、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、66、82）15 種型別和低危亞型LR-HPV 6+11 型保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，通過PCR 變性、退火、延伸，將樣本中的病毒核酸特異性擴(kuò)增，熒光素標(biāo)記的探針發(fā)出的光信號(hào)被PCR 儀采集，在儀器上呈現(xiàn)出擴(kuò)增曲線，通過對(duì)擴(kuò)增曲線以及Ct 值的判斷，實(shí)現(xiàn)檢測目的。所有操作和判讀過程嚴(yán)格按照檢測試劑盒產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Excel 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段與感染類型分布情況

1 415 例男性HPV 研究樣本中HPV DNA 陽性感染者566 例，陰性849 例，總體陽性感染率為40.0%（566/1 415）。566 例男性HPV DNA 陽性感染者主要集中于25～35 歲年齡段和36～45 歲年齡段，占比分別為48.94%（277/566）和26.33%（149/566）。各年齡段內(nèi)HPV DNA 陽性檢出率以≤24 歲年齡段最高，高于總體感染率，不同年齡段之間HPV 陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.668，P＞0.05）。

566 例男性HPV DNA 陽性感染者中，感染類型以單純高危亞型感染為主，高低?；旌细腥颈壤钌?，HPV 高危亞型感染占比高達(dá)76.7%（單純高危亞型感染占比+高低?；旌蟻喰透腥菊急龋?。各年齡段均以單純高危亞型感染為主，其中36～45歲感染占比最高，不同年齡段之間感染類型差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.97，P＞0.05）。見表1。

表1 各年齡段的HPV 感染類型分布情況［n（%）］Table 1 The distribution of HPV infection types about different age groups［n（%）］

2.2 HPV 陽性樣本感染分布情況

HR-HPV各型別的多重感染均高于單一感染，試劑盒包含的15 種基因亞型均被檢出，前5 位依次為：HPV52 亞型、HPV16 亞型、HPV56 亞型、HPV58 亞型（11.31%）及HPV66 亞型。LR-HPV 試劑盒檢測HPV 6+11 型別，其中陽性檢出237 例，占總陽性樣本的41.87%，單一感染比多重感染更常見。見表2。

表2 HPV 感染的亞型分布［n（%）］Table 2 The prevalent subtypes of HPV infection［n（%）］

2.3 HPV 陽性樣本臨床癥狀分析

所收集男性樣本根據(jù)不同的臨床癥狀大致分為五組，以病毒疣與皮疹為主，兩者分別占總樣本數(shù)的42.27%（598/1 415）和37.03%（524/1 415），其余為包皮陰莖頭炎、無癥狀/體檢和尿路感染，不同臨床癥狀之間陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（χ2=101.828，P＜0.001）。其中病毒疣以低危亞型HPV6+11 感染占多數(shù)，皮疹以高危亞型HPV52 感染為主，其余均以高危亞型感染為主，不同臨床癥狀之間感染類型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=108.085，P＜0.001）。見表3。

表3 不同臨床癥狀HPV 感染特點(diǎn)［n（%）］Table 3 The different clinical symptoms of HPV infection［n（%）］

3 討論

HPV 是最常見的性傳播性病毒之一，高致癌風(fēng)險(xiǎn)的HPV 持續(xù)感染可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前對(duì)女性來說，由于系統(tǒng)的篩查和疫苗的預(yù)防接種，宮頸癌的發(fā)病率呈下降趨勢［7］。然而，男性人群缺乏有效的篩查系統(tǒng)，且男性HPV 疫苗的接種率遠(yuǎn)低于女性。目前我國男性人群中無癥狀攜帶者的數(shù)量日益上升，是女性人群HPV 陽性率居高不下的原因之一。

本研究該地區(qū)男性患者HPV 感染陽性率為40.0%，與溫州地區(qū)男性患者HPV 感染陽性率（40.59%）［8］相近，而低于杭州地區(qū)男性患者HPV 陽性檢出率68.02%［9］和北京東南地區(qū)男性HPV 感染陽性率（64.3%）［10］，高于廣州地區(qū)男性HPV 感染陽性率30.57%［11］。其中，低危亞型6+11 型占比居高，為23.32%，流行基因型與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，但高危亞型的流行基因亞型存在區(qū)域差異［8-10］。對(duì)比不同地區(qū)的報(bào)道發(fā)現(xiàn)，本研究數(shù)據(jù)顯示最常感染的高危亞型中56 型和66 型有呈逐漸上升的趨勢，感染率分別為11.66%和10.42%，均高于九價(jià)疫苗范圍內(nèi)女性感染比例較高的18 亞型感染率（6.71%），這提示男女性在HPV 感染狀態(tài)、機(jī)體免疫系統(tǒng)等方面可能存在差異，同時(shí)有研究證明HPV 感染在我國具有民族差異性［12］。目前在美國、英國、澳大利亞和韓國等多個(gè)國家已將男性HPV 疫苗接種納入免疫規(guī)劃［13］，我國二價(jià)、四價(jià)及九價(jià)HPV 疫苗均已上市，但尚未獲批適用于男性［14］。

本研究結(jié)果顯示，年齡因素在HPV 感染及檢測中發(fā)揮著一定的作用。本研究結(jié)果顯示，雖然不同年齡段HPV 的感染差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但不同年齡段檢測例數(shù)上存在差距，25～45 歲的HPV 感染人數(shù)最多，這與國內(nèi)其他報(bào)道一致［8，10-11］，且25～35歲陽性感染者比例達(dá)到48.93%，高于鐘文英、魏潔等［9，11］報(bào)道。在≤24 歲年齡段和≥56 歲年齡段雖然病例數(shù)量少可能導(dǎo)致檢出率偏高，但這兩個(gè)年齡段仍然值得關(guān)注，導(dǎo)致青年男性人群的感染率偏高的原因可能是性活躍、接觸性伴多以及有過非婚性接觸史等，而老年人群呈上升趨勢可能與某些老年人免疫力下降以及性行為混亂有關(guān)。應(yīng)加強(qiáng)對(duì)青少年和老年人的HPV 知識(shí)普及，使他們樹立正確的性觀念，提高免疫屏障，達(dá)到預(yù)防HPV 感染的目的。

根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，HPV感染的主要臨床表現(xiàn)為病毒疣和皮疹，這與文獻(xiàn)［15］報(bào)道基本一致，除HPV 6+11亞型外，還與HPV 52亞型密切相關(guān)。無癥狀/體檢組中約有4.2%男性為無癥狀感染者，以HPV16 型單純高危型為主。這可能與低危型HPV 感染會(huì)引起尖銳濕疣等疾病，感染傾向于表現(xiàn)出明顯可見的臨床癥狀，而癥狀不明顯或隱性攜帶者卻以高危型為主，故而大部分患者未出現(xiàn)不適癥狀，多以體檢等目的來醫(yī)院就診。本研究中鮮有致惡性病變的診斷，但已有研究指出HPV 感染與男性不育、生殖器官腫瘤與口咽部鱗癌等惡性腫瘤疾病的發(fā)生有關(guān)［8］。

綜上所述，研究對(duì)象的區(qū)域、人群不同，各地區(qū)的衛(wèi)生狀況和生活習(xí)慣參差不齊，以及宿主的免疫狀態(tài)差異等，都可能使得HPV 感染呈現(xiàn)不同的情況。北京是中國人口相對(duì)密集的城市，探索適合北京地區(qū)男性HPV 感染的預(yù)防方法和接種疫苗型別，從而可以更大限度地降低宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。本研究是回顧性研究，男性配偶感染情況和免疫細(xì)胞功能等資料未納入研究范圍，存在一定局限性。