心衰并肺部感染患者miR-155、miR-223 表達(dá)及臨床意義

孫國位 陳躍武

據(jù)《中國心血管病報(bào)告（2017）》調(diào)查顯示，我國心血管病患病率持續(xù)上升，心血管病死亡已成為我國城鄉(xiāng)居民的首要死亡原因［1］。肺部感染是心力衰竭（heart failure，HF）患者最常見的并發(fā)癥之一，尤其是老年患者，由于早期臨床癥狀不明顯，診斷較為困難［2］。既往研究報(bào)道，C 反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、降鈣素原（procalcitonin，PCT）等已被用于HF 并肺部感染患者的臨床診斷及預(yù)后評(píng)估［3］。然而，由于這些指標(biāo)存在敏感性合理但特異性不足的問題，導(dǎo)致肺部感染的臨床診斷和預(yù)后并不理想。微小RNA（microRNA，miRNA）是由20～25 個(gè)核苷酸組成的小分子非編碼RNA，miRNAs 作為一種強(qiáng)有力的基因表達(dá)調(diào)控因子，miRNA 參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化、侵襲、轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)過程［4］，已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。有研究報(bào)道m(xù)iRNA 參與心衰合并肺部感染發(fā)生機(jī)制［5-6］。因此miRNAs 可能是心衰并肺部感染早期診斷、預(yù)后或臨床治療反應(yīng)診斷的有前景的生物標(biāo)志物。miR-155 與炎癥、腫瘤發(fā)生發(fā)展和免疫調(diào)節(jié)密切相關(guān)［7］。miR-223 是免疫系統(tǒng)進(jìn)化和穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵因子，可調(diào)節(jié)特定的炎癥反應(yīng)［8］。研究報(bào)道m(xù)iR-155、miR-223 在感染中起著調(diào)節(jié)免疫和炎癥的作用［9］?；诖耍狙芯客ㄟ^分析心衰并肺部感染患者miR-155、miR-223 表達(dá)及臨床意義，以期為臨床心衰并肺部感染的診治提供新思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020 年1 月至2022 年12 月于海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科收治心衰患者100例。根據(jù)是否發(fā)生肺部感染［10］，分為感染組（n=41）和未感染組（n=59），納入標(biāo)準(zhǔn)：①HF 的診斷符合《中國心力衰竭診斷和治療指南2014》［11］；②入院前未合并急慢性感染性疾??；③患者自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①惡性腫瘤；②代謝疾??；③嚴(yán)重的肝腎功能損害。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 收集資料

患者的一般狀況：性別、年齡、美國紐約心臟病學(xué)會(huì)心功能分級(jí)（New York Heartassociation，NYHA）［12］、吸煙史、飲酒史。

1.3 血清miR-155、miR-223 水平檢測(cè)

所有入組患者在入組72 h 內(nèi)抽取靜脈血5 mL，3 000 r/min（半徑為10 cm）離心20 min 分離血清，使用TRIzol RNA 試劑盒（購自賽默飛世爾科技有限公司）提取總RNA，紫外分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)公司）檢測(cè)總RNA 濃度及純度。取2 μg 總RNA 使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（賽默飛世爾科技有限公司）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系為10 μL 體系，包括SYBR Premix Ex Taq 5 μL、正向引物0.3 μL、反向引物0.3 μL、cDNA 1 μL、雙蒸水3.4 μL。用2-ΔΔCt法計(jì)算各組基因的相對(duì)表達(dá)量。miR-155、miR-223分子熒光PCR 引物序列見表1。

表1 miR-155、miR-223 擴(kuò)增引物序列Table 1 miR-155，miR-223 amplification primer sequences

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用（±s）表示，兩組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較采用F檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，兩組比較采用χ2檢驗(yàn)，將單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的納入多因素分析，多因素分析采用Logistic 回歸模型，診斷價(jià)值分析采用受試者工作特征曲線（ROC）進(jìn)行評(píng)價(jià)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料比較

兩組臨床資料比較，發(fā)現(xiàn)兩組年齡、性別、NAHY 分級(jí)、吸煙史、飲酒史比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 兩組患者一般資料比較［（±s），n（%）］Table 2 Comparison of General Information between Two Groups of Patients［（±s），n（%）］

表2 兩組患者一般資料比較［（±s），n（%）］Table 2 Comparison of General Information between Two Groups of Patients［（±s），n（%）］

2.2 兩組患者血清miR-155、miR-223水平比較分析

感染組和未感染組患者血清miR-155、miR-223 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者血清miR-155、miR-223 水平變化（±s）Table 3 Changes in serum miR-155 and miR-223 levels in two groups of patients（±s）

表3 兩組患者血清miR-155、miR-223 水平變化（±s）Table 3 Changes in serum miR-155 and miR-223 levels in two groups of patients（±s）

2.3 多因素Logistic 回歸分析心衰并肺部感染的影響因素

將單因素分析中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量作為自變量，以是否心衰并肺部感染作為因變量（是=1，否=0）進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示miR-155、miR-223 是心衰并肺部感染的影響因素（P＜0.05）。見表4。

表4 多因素Logistic 回歸分析心衰并肺部感染的影響因素Table 4 Multivariate logistic regression analysis of the influencing factors of heart failure complicated with pulmonary infection

2.4 miR-155、miR-223 對(duì)心衰并肺部感染的診斷價(jià)值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，提示miR-155、miR-223對(duì)肺部感染診斷的AUC 為0.811、0.794，聯(lián)合檢測(cè)AUC 為0.926，高于單獨(dú)檢測(cè)（P＜0.05）。見表5、圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

表5 miR-155、miR-223 對(duì)心衰并肺部感染的診斷價(jià)值分析Table 5 Analysis of the predictive value of miR-155 and miR-223 for heart failure complicated with pulmonary infection

3 討論

肺部感染是心衰患者住院期間最常見的并發(fā)癥之一，可能導(dǎo)致患者長(zhǎng)時(shí)間住院、復(fù)發(fā)和死亡等情況。因此，診斷心衰發(fā)生肺部感染的風(fēng)險(xiǎn)具有重要的臨床意義。尋找能夠診斷心衰并肺部感染發(fā)生的指標(biāo)可以幫助醫(yī)護(hù)人員早期識(shí)別高危人群，并采取針對(duì)性的監(jiān)測(cè)和治療策略，從而減少并發(fā)癥的發(fā)生和提高治療效果。

本研究表明miR-155、miR-223 與肺部感染相關(guān)。miRNA 是一類非編碼單鏈RNA，通過抑制翻譯或降解靶mRNA 來負(fù)向調(diào)節(jié)基因表達(dá)。由于其轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)能力，miRNA 下調(diào)參與多種生物過程的蛋白質(zhì)的表達(dá)，包括細(xì)胞凋亡和增殖、免疫反應(yīng)和新陳代謝。越來越多的證據(jù)表明，miRNA 與各種炎癥性疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，并成為干預(yù)治療的新靶點(diǎn)［13］。miR-155 主要在活化的巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞以及B 和T 淋巴細(xì)胞中表達(dá)，并且miR-155被多種炎癥介質(zhì)和病原體上調(diào)［14］。miR-155 參與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥，李宏艷等［15］研究發(fā)現(xiàn)手術(shù)患者醫(yī)院感染易感性與外周血miR-155 水平有關(guān)。易志鋼等［16］研究發(fā)現(xiàn)miR-155 可能通過影響Th1/Th2、Th17/Treg 炎癥通路的方式參與肺部感染免疫過程。miR-223 是免疫系統(tǒng)進(jìn)化和體內(nèi)平衡的關(guān)鍵因素，可強(qiáng)烈調(diào)節(jié)特定的炎癥反應(yīng)。迄今為止，miR-223 的失調(diào)與許多炎癥性疾病有關(guān)，包括心肌炎、Ⅱ型糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎［17-19］。

本研究發(fā)現(xiàn)miR-155（OR=2.436）、miR-223（OR=0.191）是心衰并肺部感染的影響因素，其可能的原因在于心衰患者miR-155 水平上升和miR-223水平下降可能與免疫功能失調(diào)、細(xì)胞凋亡以及炎癥反應(yīng)等過程有關(guān)。其中miR-155 水平上升會(huì)導(dǎo)致巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的活性增加，從而增強(qiáng)了免疫反應(yīng)。同時(shí)，miR-155 還參與細(xì)菌感染和病毒感染的過程中，可以增強(qiáng)炎癥反應(yīng)并影響細(xì)胞防御機(jī)制。miR-223 是一種在感染和炎癥反應(yīng)過程中高度表達(dá)的miRNA。miR-223 可以抑制巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，也可以抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和增殖。miR-223 水平下降會(huì)導(dǎo)致免疫細(xì)胞的活性增加，從而進(jìn)一步增加免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)。心衰患者的心功能受損，循環(huán)血容量不足，機(jī)體的免疫功能降低，這些因素可能導(dǎo)致miR-155 水平上升和miR-223 水平下降。miR-155水平上升增加了炎癥反應(yīng)和細(xì)菌感染的風(fēng)險(xiǎn)，而miR-223 水平下降則降低了免疫防御的效能，從而導(dǎo)致肺部感染的發(fā)生。此外，miR-155 和miR-223 的變化可能還涉及其他免疫因素的變化，這些因素進(jìn)一步影響肺部感染的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。炎性反應(yīng)和免疫系統(tǒng)功能紊亂是心衰發(fā)生和肺部感染形成的重要環(huán)節(jié)，因此，在預(yù)防和治療心衰和肺部感染時(shí)，需要重點(diǎn)關(guān)注miR-155 和miR-223及其相關(guān)機(jī)制的調(diào)控。然而，對(duì)于該假說僅僅是基于實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)和臨床觀察，尚需更多的大型臨床研究以評(píng)估其價(jià)值。王萍等［20］研究發(fā)現(xiàn)miR-155 水平對(duì)老年重癥肺部感染患者28 d 臨床結(jié)局具有較高的診斷價(jià)值。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)ROC 曲線提示miR-155、miR-223 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺部感染的診斷和治療有重要價(jià)值。由此可見，miR-155、miR-223 或參與心衰患者肺部感染的發(fā)生，其具體機(jī)制仍有待探究。

綜上所述，血清miR-155、miR-223 在心衰并肺部感染患者中呈異常表達(dá)，還與肺部感染程度有關(guān)，miR-155、miR-223 可作為診斷心衰并肺部感染的指標(biāo)。然而本研究存在一定的局限性，首先是樣本量相對(duì)較?。黄浯挝磳?duì)患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，因此不能明確miR-155、miR-223 與心衰并肺部感染患者預(yù)后的關(guān)系；最后未明確miR-155、miR-223參與心衰并肺部感染發(fā)病的具體機(jī)制。