基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接技術(shù)探討復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的作用機(jī)制▲

羅 佳 黃國東 蘭天瑩 孫一銘 梁靜妍 周 雁 農(nóng)復(fù)香 許文聰

(1 廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬國際壯醫(yī)醫(yī)院腎病科,廣西南寧市 530219;2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯醫(yī)藥學(xué)院,廣西南寧市 530001;3 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院脾胃肝病科,廣西南寧市 530213)

腎小球?yàn)V過屏障主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球基底膜和足細(xì)胞組成,任何一部分的結(jié)構(gòu)或功能改變都會(huì)使腎小球?yàn)V過功能受損,而足細(xì)胞則是腎小球?yàn)V過屏障的最后一道防線[1],具有調(diào)解內(nèi)皮細(xì)胞功能、維持毛細(xì)血管袢正常開合的作用。許多腎臟疾病會(huì)導(dǎo)致足細(xì)胞損傷,包括狼瘡性腎炎、局灶節(jié)段性腎小球硬化、糖尿病腎病等[2]。足細(xì)胞損傷的臨床特征是蛋白尿,伴有或不伴有腎小球硬化導(dǎo)致的腎功能損傷[3],嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致腎小球基底膜脫離[4]。足細(xì)胞損傷是許多腎臟疾病的早期病理變化[5],對(duì)于評(píng)估狼瘡性腎炎[6]、糖尿病腎病[7]等腎臟疾病的進(jìn)展和預(yù)后具有重要意義。

已有研究表明,復(fù)方仙草顆粒中的多種成分可以保護(hù)足細(xì)胞骨架、促進(jìn)足細(xì)胞成活、抑制足細(xì)胞凋亡,最終減少足細(xì)胞損傷[8]。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接技術(shù)探究復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的有效活性成分、作用靶點(diǎn)及可能作用機(jī)制,為復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的進(jìn)一步研究提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 有效活性成分的篩選 在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP;https://old.tcmsp-e.com/index.php)搜索框中輸入復(fù)方仙草顆粒6味中藥(八仙草、黃芪、三七、薏苡仁、大黃、甘草)的名稱[9],以口服生物利用度(oral bioavailability,OB)≥30%、藥物相似性(drug-likeness,DL)≥0.18為篩選條件,進(jìn)一步篩選出有效活性成分[10]。

1.2 有效活性成分作用靶點(diǎn)的收集 在TCMSP中收集各個(gè)有效活性成分的作用靶點(diǎn)蛋白的名稱,借助UniProt(https://www.uniprot.org/)數(shù)據(jù)庫查找靶點(diǎn)蛋白的標(biāo)準(zhǔn)基因名。

1.3 足細(xì)胞損傷相關(guān)靶點(diǎn)的篩選 以“podocyte injury”為關(guān)鍵詞在OMIM?(https://www.omim.org/)[11]、PHARMGKB(https://www.pharmgkb.org/)[12]、GeneCard?(https://www.genecards.org/)3個(gè)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,匯總檢索結(jié)果后去重,得到足細(xì)胞損傷相關(guān)靶點(diǎn)。

1.4 交集靶點(diǎn)的獲取 使用R 4.0.5軟件對(duì)有效活性成分作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞損傷相關(guān)靶點(diǎn)取交集,并以Venn圖展示結(jié)果。

1.5 “成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將有效活性成分與交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1軟件,制作“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖[13]。利用Cytoscape 3.9.1軟件內(nèi)置的Analyze Network計(jì)算度值,根據(jù)度值進(jìn)行由大到小排序,將排名前3的有效活性成分作為關(guān)鍵有效活性成分。

1.6 交集靶點(diǎn)的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及核心靶點(diǎn)的篩選 將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/)[14],生物體類型設(shè)置為“homo sapiens”,獲得蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)數(shù)據(jù),將置信度設(shè)置為0.400,其他參數(shù)使用默認(rèn)數(shù)值,同時(shí)去除網(wǎng)絡(luò)中未連接的節(jié)點(diǎn),利用Cytoscape 3.9.1軟件建立PPI網(wǎng)絡(luò)。然后利用Cytoscape 3.9.1軟件中的CytoNCA插件,根據(jù)介數(shù)中心性(betweenness centrality,BC)、接近度中心性(closeness centrality,CC)、度中心性(degree centrality,DC)、特征向量中心性(eigenvector centrality,EC)、局部邊連通性(local average connectivity,LAC)、網(wǎng)絡(luò)中心性(network centrality,NC)6項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行篩選,以上述6項(xiàng)參數(shù)都大于中位值的靶點(diǎn)作為核心靶點(diǎn)。當(dāng)納入的靶點(diǎn)數(shù)目較多時(shí),可通過CytoNCA插件再次進(jìn)行核心靶點(diǎn)的篩選,篩選條件不變。

1.7 富集分析 利用R 4.0.5軟件對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體論(Gene Ontology,GO)功能富集分析,以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,完成生物學(xué)過程、細(xì)胞組分、分子功能分析。借助Metascape數(shù)據(jù)庫(https://metascape.org/gp/index.html)對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,選擇物種為人類(H.sapiens),以P<0.01為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[15]。

1.8 分子對(duì)接驗(yàn)證 通過檢索文獻(xiàn),將1.6中獲得的核心靶點(diǎn)中研究最多的5個(gè)靶點(diǎn)確定為與足細(xì)胞損傷關(guān)聯(lián)最大的靶點(diǎn),將其與關(guān)鍵有效活性成分進(jìn)行分子對(duì)接,得出分子對(duì)接效能。主要步驟:利用PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)獲取關(guān)鍵有效活性成分的2D結(jié)構(gòu),并將其保存為.sdf格式文件后導(dǎo)入Chem3D 19.0軟件,利用Chem3D 19.0軟件中的“Minimize Energy”將關(guān)鍵有效活性成分進(jìn)行能量最小化,并保存為.mol2格式文件。利用PDB數(shù)據(jù)庫(https://www.rcsb.org/)獲取5個(gè)核心靶點(diǎn)的.pdb格式文件,通過SYBYL-X軟件2.0的“Docking Suite”對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行去除水分子、加氫離子、加電荷等操作。最后應(yīng)用SYBYL-X軟件2.0的Surflex模塊對(duì)關(guān)鍵有效活性成分與核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接,獲得對(duì)接的Total Score。Total Score越大則結(jié)合活性越好,4.25≤Total Score≤5.00提示關(guān)鍵有效活性成分與核心靶點(diǎn)之間具有一定的結(jié)合活性,5.007.0提示關(guān)鍵有效活性成分與核心靶點(diǎn)之間具有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。

2 結(jié) 果

2.1 有效活性成分及其作用靶點(diǎn)的篩選結(jié)果 共收集到133種有效活性成分,主要為黃酮類、查爾酮類、蒽醌糖甙類、三萜類等化合物,其中11個(gè)有效活性成分屬于多味中藥的共有有效活性成分,見表1。分別收集到八仙草、大黃、黃芪、三七、薏苡仁、甘草的有效活性成分的作用靶點(diǎn)28個(gè)、56個(gè)、185個(gè)、162個(gè)、27個(gè)、209個(gè),將6味中藥的有效活性成分作用靶點(diǎn)進(jìn)行匯總、去重后得到有效活性成分的作用靶點(diǎn)234個(gè)。

表1 不同中藥的共有有效活性成分

2.2 足細(xì)胞損傷相關(guān)靶點(diǎn)的收集結(jié)果 在GeneCard?、OMIM?、PHARMGKB數(shù)據(jù)庫中分別收集到1 722個(gè)、3個(gè)、20個(gè)靶點(diǎn),去重取并集后共收集到1 733個(gè)靶點(diǎn)。

2.3 交集靶點(diǎn) 對(duì)有效活性成分作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞損傷相關(guān)靶點(diǎn)取交集,得到102個(gè)交集靶點(diǎn),即復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的相關(guān)靶點(diǎn),見圖1。

圖1 有效活性成分作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞損傷相關(guān)靶點(diǎn)的Venn圖

2.4 “成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò) 采用Cytoscape 3.9.1軟件構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)(見圖2),該網(wǎng)絡(luò)共有206個(gè)節(jié)點(diǎn)、845條邊。其中,槲皮素對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)最多(69個(gè)),其次是山柰酚(22個(gè))、柚皮素(20個(gè)),且三者的度值位居前三,其可能是復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的關(guān)鍵有效活性成分。

圖2 “成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 交集靶點(diǎn)的 PPI網(wǎng)絡(luò) 構(gòu)建交集靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)(見圖3),該P(yáng)PI網(wǎng)絡(luò)由101個(gè)節(jié)點(diǎn)和1 618條邊組成,平均節(jié)點(diǎn)度值為32。利用Cytoscape 3.9.1中CytoNCA插件篩選所需的核心靶點(diǎn),其中第1次篩選出40個(gè)核心靶點(diǎn),第2次篩選出17個(gè)核心靶點(diǎn),即復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的核心靶點(diǎn),分別為血紅素加氧酶1(heme oxygenase 1,HMOX1)、腫瘤抗原p53(tumor antigen p53,TP53)、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)、表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、白細(xì)胞介素1B(interleukin 1 beta,IL-1B)、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,AKT)1、絲裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)A、缺氧誘導(dǎo)因子 1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF1A)、Caspase-3、C-X-C基序趨化因子配體8(C-X-C motif chemokine ligand 8,CXCL8)、過氧化物酶體增生激活受體γ(peroxisome proliferative activated receptor gamma,PPARG)、Myc原癌基因蛋白(Myc proto-oncogene protein,MYC),見圖4。

圖3 交集靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖4 核心靶點(diǎn)

2.6 交集靶點(diǎn)的GO功能富集分析與KEGG通路富集分析 GO功能富集分析共得到2 145個(gè)生物學(xué)過程,主要涉及氧化應(yīng)激等;共得到61種細(xì)胞組分,主要與囊泡等有關(guān);共得到144種分子功能,主要與酶結(jié)合、抗氧化活性等有關(guān)。根據(jù)富集顯著程度由高至低對(duì)GO功能富集分析的生物學(xué)過程、細(xì)胞組分、分子功能進(jìn)行排序,選取前10個(gè)條目進(jìn)行展示,見圖5。KEGG通路富集分析共得到259條通路,主要涉及癌癥通路、糖尿病并發(fā)癥中的終末期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end product,AGE)-AGE受體(receptor of AGE,RAGE)信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路、糖尿病性心肌病、叉頭框O(forkhead box O,FoxO)信號(hào)通路、酒精性肝病、p53信號(hào)通路、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信號(hào)通路、壽命調(diào)節(jié)通路、壞死性凋亡、AMP依賴的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信號(hào)通路等。根據(jù)-lgP值由大到小進(jìn)行排序,選取排名前20的信號(hào)通路進(jìn)行展示,見圖6。

圖5 GO功能富集分析結(jié)果

圖6 KEGG通路富集分析結(jié)果

2.7 分子對(duì)接結(jié)果 經(jīng)過檢索,確定與足細(xì)胞損傷關(guān)聯(lián)最大的5個(gè)核心靶點(diǎn)分別是EGFR、MMP9、STAT3、VEGFA及PTGS2,將其與關(guān)鍵有效活性成分槲皮素、山柰酚、柚皮素進(jìn)行分子對(duì)接,得出分子對(duì)接Total Score(表2)。 EGFR、MMP9、PTGS2與槲皮素、山柰酚之間,以及EGFR、MMP9與柚皮素之間,均有一定的結(jié)合活性。Total Score>5.00的分子對(duì)接圖見圖7。

表2 復(fù)方仙草顆粒關(guān)鍵有效活性成分與核心靶點(diǎn)對(duì)接后的Total Score

圖7 Total Score>5.00的分子對(duì)接圖

3 討 論

腎為“先天之本”,藏精化氣、主生殖,為元陰元陽封藏之處。足細(xì)胞由細(xì)胞體、初級(jí)突起和分支足突組成,其中足突可以調(diào)節(jié)腎臟的濾過功能,防止蛋白等重要物質(zhì)流失體外,與腎臟藏精功能息息相關(guān),因而足細(xì)胞的發(fā)育、增殖和凋亡與元陰元陽有關(guān),如腎氣不固、藏精功能失常,則可出現(xiàn)足細(xì)胞損傷。除了腎虛不固,脾之運(yùn)化、統(tǒng)攝失常亦在足細(xì)胞損傷中發(fā)揮了重要作用:腎精首源于先天父母,亦受后天脾胃資助,脾胃能正常運(yùn)化水谷、輸布精微,則腎精充足;若先天稟賦不足,后天飲食失養(yǎng),元陰元陽生成乏源,則可導(dǎo)致足細(xì)胞凋亡[16]。與此同時(shí),痰濕熱邪致使腎臟功能失常,痰濕內(nèi)阻、氣機(jī)不暢則損傷足細(xì)胞,熱邪內(nèi)盛、腎絡(luò)受損可引起腎足細(xì)胞功能異常。因此,足細(xì)胞損傷是“脾腎虛”“痰濕熱內(nèi)盛”二者共同作用的結(jié)果,治療上應(yīng)立足于“虛”和“邪實(shí)”,以健脾益腎補(bǔ)虛、清熱利濕祛邪為主要治療原則。復(fù)方仙草顆粒包含八仙草、三七、大黃、黃芪、薏苡仁、甘草6味中藥,以益腎健脾、清熱利濕為組方原則。方中八仙草入肝經(jīng),其味苦、辛,性寒,具有清熱解毒、止痛、散瘀止血之功效,現(xiàn)代研究表明八仙草有抗氧化的作用,可以減輕氧化應(yīng)激所致的足細(xì)胞損傷[17];三七入肝經(jīng)、胃經(jīng),其味甘、微苦,性溫,具有散瘀止血、消腫定痛之功效,其主要成分三七總皂苷通過抗氧化應(yīng)激作用進(jìn)而抑制足細(xì)胞凋亡[18];大黃入脾經(jīng)、胃經(jīng)、大腸經(jīng)、肝經(jīng)、心經(jīng),其味苦,性寒,具有清熱瀉火、涼血解毒之功效,其有效成分大黃酸能夠抑制足細(xì)胞的nephrin表達(dá)[19],對(duì)于改善足細(xì)胞損傷具有積極作用;黃芪入脾經(jīng)、肺經(jīng),其味甘,性微溫,具有固表止汗、補(bǔ)氣升陽、利水消腫之功效,其有效成分可以改善游離脂肪酸或高糖所致的足細(xì)胞凋亡,同時(shí)通過抗氧化作用修復(fù)損傷的足細(xì)胞[20];薏苡仁入脾經(jīng)、胃經(jīng)、肺經(jīng),其味甘、淡,性涼,具備利水滲濕、健脾止瀉、解毒散結(jié)之功效,其提取物可以有效抑制糖尿病腎病大鼠的腎臟纖維化進(jìn)程及改善炎癥反應(yīng)[21];甘草入心經(jīng)、脾經(jīng)、肺經(jīng)、胃經(jīng),其味甘,性平,具有補(bǔ)中益氣、清熱解毒等功效,其有效成分甘草酸可以抑制高糖所致的足細(xì)胞損傷[22]。足細(xì)胞損傷是糖尿病腎病早期病理改變之一,與糖尿病腎病的進(jìn)展息息相關(guān)[23]。一項(xiàng)關(guān)于早期糖尿病腎病的臨床研究表明,復(fù)方仙草顆?？梢愿纳圃缙谔悄虿∧I病患者機(jī)體的炎癥狀態(tài)[24]。由此可見,應(yīng)用復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷具有一定的理論支持。本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的可能機(jī)制,為足細(xì)胞損傷相關(guān)疾病的臨床治療提供參考。

本研究最終獲得與足細(xì)胞損傷關(guān)聯(lián)最大的5個(gè)核心靶點(diǎn),即復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的核心靶點(diǎn),分別是EGFR、MMP9、PTGS2、STAT3、VEGFA。EGFR是各類能夠激活和控制細(xì)胞增殖、分化及凋亡的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子的?？课稽c(diǎn)。有研究表明,腎小球腎炎患者腎臟組織中的肝素結(jié)合性表皮因子能夠激活足細(xì)胞的EGFR信號(hào)傳導(dǎo)[25],阻斷這一過程能夠?yàn)檠装Y性腎臟疾病的治療提供新思路。另一項(xiàng)研究顯示,槲皮素可通過調(diào)節(jié)EGFR信號(hào)通路進(jìn)而抑制足細(xì)胞凋亡,減輕足細(xì)胞損傷[26]。MMP9是腎小球足細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化后的表面標(biāo)志物之一,抑制MMP9表達(dá)能夠減慢足細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程,進(jìn)而靶向保護(hù)足細(xì)胞,同時(shí)減少糖尿病腎病早期的尿蛋白水平[27]。還有研究表明,視黃酸受體α的過表達(dá)能夠下調(diào)受損足細(xì)胞中MMP9的表達(dá)并抑制其活性,從而保護(hù)腎功能并延緩體內(nèi)腎小球硬化的進(jìn)程[28]。PTGS2作為腎臟血流動(dòng)力學(xué)和炎癥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,其過表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致足細(xì)胞損傷[29-30],從而導(dǎo)致尿蛋白增加。STAT3是機(jī)體重要的靶點(diǎn)信號(hào),Janus激酶2/STAT3信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)及細(xì)胞的生長、凋亡相關(guān)。當(dāng)磷酸化STAT3表達(dá)水平上升時(shí),炎癥因子表達(dá)水平也隨之增加,進(jìn)而導(dǎo)致足細(xì)胞損傷[31]。VEGFA對(duì)于調(diào)節(jié)足細(xì)胞的Ca2+穩(wěn)態(tài)和保護(hù)足細(xì)胞存活具有其積極意義,但腎小球中過度表達(dá)的VEGFA會(huì)激活VEGFA/VEGF受體2信號(hào)通路和去氧腎上腺素信號(hào)通路,導(dǎo)致足細(xì)胞損傷[32-33]。將上述核心靶點(diǎn)與復(fù)方仙草顆粒的關(guān)鍵有效活性成分槲皮素、山柰酚、柚皮素進(jìn)行分子對(duì)接,結(jié)果顯示,EGFR、MMP9、PTGS2與3個(gè)關(guān)鍵有效活性成分具有良好的對(duì)接效能(除PTGS2與柚皮素外),其中EGFR與槲皮素、MMP9與柚皮素、PTGS2與槲皮素展現(xiàn)出較好的對(duì)接效能。由此推測(cè),復(fù)方仙草顆粒的關(guān)鍵有效活性成分槲皮素、山柰酚、柚皮素作用于EGFR、MMP9、PTGS2、STAT3、VEGFA后,通過抗炎、抗細(xì)胞凋亡等方式發(fā)揮治療足細(xì)胞損傷的作用。

本研究GO功能富集分析結(jié)果顯示,復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的相關(guān)靶點(diǎn)涉及酶結(jié)合、抗氧化活性等分子功能,以及與氧化應(yīng)激相關(guān)的生物學(xué)過程。本課題組的前期研究顯示,在阿霉素誘導(dǎo)的人腎足細(xì)胞損傷中,復(fù)方仙草顆?？赏ㄟ^降低活性氧簇水平來抑制氧化應(yīng)激水平,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)腎足細(xì)胞的保護(hù)作用[34],這與GO功能富集分析的結(jié)果相符。本研究通過KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn),多種通路共同參與復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的過程,包括糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、AMPK信號(hào)通路、壞死性凋亡等。其中,AGE-RAGE能通過氧化應(yīng)激及NF-κβ信號(hào)通路,刺激生長因子和細(xì)胞因子的增殖,最終導(dǎo)致足細(xì)胞損傷及腎小球硬化[35],干預(yù)AGE-RAGE信號(hào)通路能夠有效減輕足細(xì)胞損傷及延緩腎小球硬化進(jìn)程。同時(shí),NF-κB信號(hào)通路在高糖環(huán)境下會(huì)被激活,進(jìn)而誘導(dǎo)足細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遷移[36],從而導(dǎo)致足細(xì)胞損傷。VEGF信號(hào)通路能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、增加血管的通透性、促進(jìn)新血管生成[37],對(duì)減輕腎小球病變具有一定的積極意義。FoxO信號(hào)通路能夠有效調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡,活化FoxO1可以抑制足細(xì)胞上皮的間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化[38]。一項(xiàng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,復(fù)方仙草顆粒能夠通過降低FoxO4在腎臟組織中的表達(dá),以抑制其對(duì)腎足細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用[39]。當(dāng)出現(xiàn)急性腎損傷時(shí),AMPK信號(hào)通路會(huì)被激活,進(jìn)而引發(fā)一系列細(xì)胞損傷[40],因此,干預(yù)AMPK信號(hào)通路能夠減輕足細(xì)胞損傷。壞死性凋亡與腎臟缺血-再灌注損傷相關(guān),也參與缺血-再灌注損后的腎臟纖維化進(jìn)程,抑制壞死性凋亡則可明顯改善缺血-再灌注損傷后的腎功能,減輕足細(xì)胞損傷[41]。

綜上所述,復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同作用的特點(diǎn),復(fù)方仙草顆粒的多個(gè)有效活性成分可能通過EGFR、MMP9、PTGS2、STAT3、VEGFA等主要靶點(diǎn)作用于多個(gè)信號(hào)通路,來發(fā)揮抗氧化應(yīng)激、抗炎及抗細(xì)胞凋亡等作用,從而減輕足細(xì)胞損傷。目前,復(fù)方仙草顆粒治療足細(xì)胞損傷的部分作用機(jī)制已得到實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,但是更多的作用機(jī)制尚未被證實(shí),本研究的結(jié)果或許能夠?yàn)楹罄m(xù)研究提供方向和參考,未來需要更多的實(shí)驗(yàn)性研究對(duì)本研究結(jié)論加以驗(yàn)證。