補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊的體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)

柯明婧 梁嘉健 葉翔凌 吳淮 許學(xué)猛

1廣州中醫(yī)藥大學(xué)第五臨床醫(yī)學(xué)院（廣州 510405）；2廣東省第二中醫(yī)院骨科（廣州 510095）

補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊（又名補(bǔ)腎活血膠囊）由杜仲、補(bǔ)骨脂、骨碎補(bǔ)、熟地黃、血竭和全蝎等組成，具有活血通絡(luò)、祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛等功效，經(jīng)過前期臨床GDP 研究，安全無毒副作用，已經(jīng)成為廣東省第二中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)制劑（批號(hào)：粵YZB-2002-005），廣泛應(yīng)用于骨關(guān)節(jié)炎等疾病的防治，取得較好的臨床效果［1-2］。但尚缺乏動(dòng)物實(shí)驗(yàn)安全性研究基礎(chǔ)，因此本研究擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)評(píng)估補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊的體內(nèi)安全性，為進(jìn)一步探討臨床安全性用藥提供科學(xué)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 所用動(dòng)物均為SPF 級(jí)SD 大鼠，日齡45 ～50 d，體質(zhì)量150 ～180 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，所提供大鼠均具備《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證》，許可證號(hào)為：SCXK（粵）2018-0002，實(shí)驗(yàn)單位許可證編號(hào)為：SCXK（粵）2020-0059。所有動(dòng)物均在廣東省第二中醫(yī)院（廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院）飼養(yǎng)，均符合SPF 級(jí)飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均在廣東省第二中醫(yī)院（廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院）醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)科完成，并在本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)開展實(shí)驗(yàn)研究（倫理號(hào)為：048890）。在實(shí)驗(yàn)研究期間嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查指南（GB/T 35892-2018）》要求開展相關(guān)研究，嚴(yán)格遵守《動(dòng)物倫理學(xué)》所要求的3R 原則善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

1.2 主要儀器與試劑 主要儀器與試劑TBA-40FR 全自動(dòng)生化分析儀；Sysmex1800i 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀；邁瑞B(yǎng)C-7500 血液細(xì)胞分析儀；羅氏Cobas702 全自動(dòng)生化分析儀；SYSMEX CN-6000 凝血儀。

1.3 主要測(cè)試藥物 補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊，命名為BSQJ。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將40 只SPF 級(jí)SD 大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為Control 組和BSQJ 組，每組各20 只，雌雄各半。

1.4.2 給藥 SD 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后開始給藥，給藥前對(duì)大鼠禁食不禁水16 h。按最大給藥量對(duì)BSQJ 組進(jìn)行灌胃，補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊用純凈水配制為大鼠灌胃針能夠抽吸的最大濃度以生藥含量計(jì)為0.8 g/mL，以大鼠能耐受的最大給藥體積40 mL/（kg·d）為給藥標(biāo)準(zhǔn)，1 d 內(nèi)灌胃3 次（每次給藥間隔8 h），給藥量以生藥計(jì)為32 g/（kg·d），相當(dāng)于臨床成人用藥劑量［1.629 g/（kg·d）］的20 倍左右。Control 組予灌胃等量0.9%氯化鈉溶液。給藥結(jié)束后，兩組連續(xù)觀察14 d。

1.4.3 取材 給藥結(jié)束14 d 后對(duì)SD 大鼠予戊巴比妥行腹腔麻醉。麻醉完全后，分別將Control 組和BSQJ 組的大鼠行心臟取血。取血完成后，所有動(dòng)物予腹腔注射過量麻醉劑處死大鼠，隨后取心、肝、脾、肺、腎等內(nèi)臟組織用4%多聚甲醛固定以備用。

1.4.4 急性毒性反應(yīng)觀察 給藥期間每天持續(xù)觀察SD 大鼠有無死亡現(xiàn)象以及毒性反應(yīng)，包括SD大鼠外觀、行為活動(dòng)、呼吸、精神狀態(tài)、飲食、二便情況以及有無異常分泌物等，并且于第1、4、7、11、14 天時(shí)稱量SD 大鼠體質(zhì)量并記錄。

1.4.5 血液學(xué)檢查 將收集至血常規(guī)管的血液立刻送至醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科進(jìn)行血液學(xué)分析，檢查指標(biāo)主要為：白細(xì)胞計(jì)數(shù)（white blood cell，WBC）、中性粒細(xì)胞（neutrophil，NEUT）、中性粒細(xì)胞比值（neutrophil%，NEUT%）、淋巴細(xì)胞（lymphocytes，LY）、淋巴細(xì)胞比值（lymphocytes%，LY%）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（red blood cell，RBC）、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）和血小板計(jì)數(shù)（platelet count，PLT）等。

1.4.6 血生化檢查 將收集至生化采血管的血液放入離心機(jī)離心（3 500 r/min，15 min），隨后對(duì)離心后的血清立刻送至醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科進(jìn)行生化分析，檢查主要肝腎功能指標(biāo)為：谷丙轉(zhuǎn)氨酶總蛋白（total protein，TP）、（alanine transaminase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、ALP、血糖（glucose，Glu）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血清肌酐（serum creatinine，Scr）、尿酸（Uric acid，UA）等生化指標(biāo)。

1.4.7 溶血實(shí)驗(yàn) 取SD 大鼠新鮮血漿2 mL，然后按照1∶10 的比例加入0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行稀釋，搖勻后放入離心機(jī)離心（1 500 r/min，10 min）。棄上清液后，將沉淀的紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液洗滌3 次。隨后將紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%的紅細(xì)胞混懸液供試驗(yàn)用。將補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊內(nèi)的生藥按照1∶3 的比例加入0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行稀釋，將稀釋后藥液作為供試藥液。取潔凈透明離心管7 只并編號(hào)，其中1-5 號(hào)管為供試藥液管，6 號(hào)管為陽性對(duì)照管，7 號(hào)管為陰性對(duì)照管。按表1 所示依次在所對(duì)應(yīng)的離心管內(nèi)加入2% 紅細(xì)胞懸液、0.9% 氯化鈉溶液、供試藥液及蒸餾水，混勻后置于37 ℃水浴鍋中孵育60 min。孵育時(shí)間結(jié)束后，將所有待測(cè)樣品放入離心機(jī)離心（3 000 r/min，5 min）。離心結(jié)束后，取各組上清液200 μL 于酶標(biāo)儀545 nm 波長(zhǎng)處測(cè)OD值并根據(jù)公式（1）計(jì)算溶血率（HR）：溶血率（HR）=（A 試-A 陰）/（A 陽-A陰）×100%

表1 溶血實(shí)驗(yàn)中溶液加入順序Tab.1 Solution addition sequence in hemolysis experiment

表2 大鼠各個(gè)時(shí)間段體重Tab.2 Body weight in rats at different time periods ±s，g

表2 大鼠各個(gè)時(shí)間段體重Tab.2 Body weight in rats at different time periods ±s，g

注：BSQJ 組與Control 組比較，雄性和雌性SD 大鼠的不同時(shí)期體質(zhì)量均P ＞0.05

時(shí)間Day 0 Day 1 Day 4 Day 7 Day 11 Day 14合計(jì)（只）雄雌Control 組184.00 ± 6.23 186.43 ± 6.74 206.88 ± 7.55 232.52 ± 8.43 257.54 ± 8.27 289.85 ± 7.02 10 BSQJ 組183.26 ± 6.74 186.43 ± 6.28 203.21 ± 8.32 228.75 ± 8.25 256.16 ± 7.79 284.63 ± 8.96 10 Control 組157.28 ± 3.89 160.53 ± 4.47 169.78 ± 4.97 179.02 ± 6.33 202.28 ± 6.24 223.41 ± 6.24 10 BSQJ 組156.24 ± 2.67 157.69 ± 2.97 169.21 ±4.85 175.84 ± 5.70 200.65 ± 6.34 220.24 ± 6.81 10

A 試為各供試藥液管OD值，A 陰為陰性對(duì)照管OD值，A 陽為陽性對(duì)照管OD值。

1.4.8 組織學(xué)檢查 將SD 大鼠內(nèi)臟組織從4%多聚甲醛取出，隨后將組織置于脫水盒內(nèi)、依次梯度脫水、包埋、蠟塊冷卻、切片、脫蠟、依次沖洗、染色、再次梯度脫水、滴中性樹膠、蓋玻片封固。隨后使用電子顯微鏡觀察并采集圖像。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0（IBM，USA）統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，對(duì)于計(jì)量資料首先進(jìn)行Shapiro-Wilk檢驗(yàn)判斷是否符合正態(tài)分布，滿足正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。對(duì)于符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，則按照兩組獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，并檢驗(yàn)方差齊性，方差齊采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，方差不齊采用t'檢驗(yàn)進(jìn)行分析。當(dāng)P＜0.05 時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SD 大鼠毒性癥狀觀察及體重變化情況 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程期間，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未出現(xiàn)動(dòng)物死亡。見圖1，給藥前，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的大鼠體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給藥后，BSQJ 組與對(duì)照組的雄性和雌性大鼠體質(zhì)量均出現(xiàn)增長(zhǎng)，且雄性組大鼠在第0、1、4、7、11 和14 天的體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.81、1.00、0.32、0.33、0.71、0.16），雌性組大鼠同樣差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.50、0.11、0.80、0.25、0.57、0.29）。

圖1 大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)體質(zhì)量Fig.1 Acute toxicity experiment weight in rats

2.2 血液學(xué)檢查 見表3 和表4。分別為BSQJ 組與對(duì)照組之間雌性和雌性SD 大鼠體內(nèi)2 周的血常規(guī)的檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)結(jié)果表明，與僅灌胃生理鹽水的Control 組相比，BSQJ 組在雄性SD 大鼠所檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.63、0.91、0.67、0.32、0.46、0.92、0.42、0.32），對(duì)雌性SD 大鼠所檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)也差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.49、0.47、0.95、0.58、0.93、0.37、0.56、0.80）。

表3 雄性大鼠2 周的血常規(guī)結(jié)果Tab.3 Blood routine results in male rats at 2 weeks ±s

表3 雄性大鼠2 周的血常規(guī)結(jié)果Tab.3 Blood routine results in male rats at 2 weeks ±s

注：BSQJ 組與Control 組比較，雄性SD 大鼠灌胃2 周后主要血常規(guī)指標(biāo)對(duì)比均P ＞0.05

血常規(guī)WBC（× 109/L）NEUT（× 109/L）NEUT（%）LY（× 109/L）LY（%）RBC（× 109/L）Hb（g/L）PLT（× 109/L）雄性大鼠Control 組7.97 ± 1.92 2.71 ± 1.12 33.35 ± 7.98 4.94 ± 1.00 62.53 ± 7.42 8.66 ± 0.94 169.67 ± 10.07 1 154.33 ± 170.98 BSQJ 組7.43 ± 1.85 2.65 ± 0.85 35.00 ± 4.82 4.33 ± 1.03 59.07 ± 8.10 8.60 ± 1.21 165.17 ± 8.52 1 056.17 ± 150.69

表4 雌性大鼠2 周的血常規(guī)結(jié)果Tab.4 Blood routine results in female rats at 2 weeks ±s

表4 雌性大鼠2 周的血常規(guī)結(jié)果Tab.4 Blood routine results in female rats at 2 weeks ±s

注：BSQJ 組與Control 組比較，雌性SD 大鼠灌胃2 周后主要血常規(guī)指標(biāo)對(duì)比均P ＞0.05

血常規(guī)WBC（× 109/L）NEUT（× 109/L）NEUT（%）LY（× 109/L）LY（%）RBC（× 109/L）Hb（g/L）PLT（× 109/L）雌性大鼠Control 組6.55 ± 1.96 1.85 ± 0.64 29.22 ± 9.57 4.32 ± 1.57 65.05 ± 10.81 8.30 ± 0.87 149.33 ± 7.63 1 047.33 ± 157.13 BSQJ 組7.31 ± 1.69 2.15 ± 0.74 28.92 ± 6.19 4.78 ± 1.18 65.53 ± 6.64 7.77 ± 1.06 146.50 ± 8.71 1 020.50 ± 200.27

2.3 血生化檢查 見表5 和表6。分別為BSQJ 組與對(duì)照組之間雄、雌性SD 大鼠體內(nèi)2 周的血生化的檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)結(jié)果表明，與僅灌胃生理鹽水的空白對(duì)照組相比，BSQJ 組在雄性SD 大鼠所檢測(cè)的各項(xiàng)生化指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.65、0.67、0.95、0.21、0.72、0.17、0.15、0.12），雌性SD 大鼠所檢測(cè)的各項(xiàng)生化指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.67、0.11、0.30、0.17、0.21、0.95、0.63、0.59）。

表5 雄性大鼠2 周的肝腎功能結(jié)果Tab.5 Liver and renal function results in male rats at 2 weeks ±s

表5 雄性大鼠2 周的肝腎功能結(jié)果Tab.5 Liver and renal function results in male rats at 2 weeks ±s

注：BSQJ 組與Control 組比較，雄性SD 大鼠灌胃2 周后主要生化指標(biāo)對(duì)比均P ＞0.05

肝腎功能TP（g/L）ALT（U/L）AST（U/L）ALP（U/L）Glu（mmol/L）BUN（mmol/L）Scr（μmol/L）UA（μmol/L）雄性大鼠Control 組48.28 ± 3.73 45.85 ± 2.75 152.67 ± 67.82 173.83 ± 33.24 12.22 ± 3.06 7.55 ± 1.77 29.67 ± 5.99 82.83 ± 35.11 BSQJ 組49.20 ± 3.06 49.83 ± 21.72 140.00 ± 65.40 201.83 ± 39.19 13.19 ± 5.60 6.17 ± 1.42 25.00 ± 4.34 53.00 ± 25.18

表6 雌性大鼠2 周的肝腎功能結(jié)果Tab.6 Liver and kidney function results in female rats at 2 weeks ±s

表6 雌性大鼠2 周的肝腎功能結(jié)果Tab.6 Liver and kidney function results in female rats at 2 weeks ±s

注：BSQJ 組與Control 組比較，雌性SD 大鼠灌胃2 周后主要生化指標(biāo)對(duì)比均P ＞0.05

肝腎功能TP（g/L）ALT（U/L）AST（U/L）ALP（U/L）Glu（mmol/L）BUN（mmol/L）Scr（μmol/L）UA（μmol/L）雌性大鼠Control 組39.80 ± 4.33 2.71 ± 1.12 43.67 ± 12.11 155.33 ± 33.26 10.07 ± 2.43 5.62 ± 1.13 24.67 ± 7.06 45.00 ± 20.77 BSQJ 組40.85 ± 3.92 2.65 ± 0.85 34.00 ± 6.03 191.33 ± 49.58 8.57 ± 1.30 5.57 ± 1.31 27.00 ± 8.99 50.33 ± 10.82

2.4 溶血實(shí)驗(yàn) 見圖2。BSQJ 不同劑量水溶液的溶血情況，圖2（A）可以看到各組BSQJ 均未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，圖2（B）反映了各組BSQJ 的溶血率情況，結(jié)果表明所測(cè)試BSQJ 樣品溶血率均＜5%。

圖2 溶血實(shí)驗(yàn)Fig.2 Hemolysis experiment

2.5 組織學(xué)檢查 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)SD 大鼠進(jìn)行了剖檢，隨后對(duì)SD 大鼠的心、肝、脾、肺、腎等主要內(nèi)臟組織進(jìn)行組織學(xué)檢查。見圖3，H&E 染色結(jié)果表明，Control 組和BSQJ 組的各個(gè)內(nèi)臟組織結(jié)構(gòu)正常，未見任何病理性改變。其中，肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝索肝竇未見明顯異常，肝細(xì)胞體積未明顯增大，肝細(xì)胞胞漿及胞核未見明顯異常。此外，腎組織切片可見腎小球形態(tài)及大小正常、邊界清晰，近曲和遠(yuǎn)曲腎小管未見明顯異常，腎小管內(nèi)毒刷狀緣結(jié)構(gòu)完整，腎小管上皮細(xì)胞未見明顯異常，腎間質(zhì)未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。此外，兩組心臟組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常，未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。肺組織可見正常肺泡及肺間質(zhì)，未見肺泡腔廣泛的縮小或消失，未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。脾臟紅、白髓結(jié)構(gòu)清晰，小梁結(jié)構(gòu)明顯，白髓內(nèi)淋巴小結(jié)可見。

圖3 雄、雌SD大鼠2周心、肝、脾、肺、腎的H&E染色圖片（比例尺=100 μm）Fig.3 H&E staining images of the heart，liver，spleen，lungs，and kidneys in male and female SD rats at 2 weeks（scale=100 μm）

3 討論

補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊是廣東省名中醫(yī)許學(xué)猛教授的經(jīng)驗(yàn)方，方中選用杜仲、補(bǔ)骨脂、骨碎補(bǔ)進(jìn)行補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨，熟地滋陰補(bǔ)腎，這四藥共為君藥，血竭活血通絡(luò)為臣藥，另外以全蝎祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛為佐藥，合用組方具有強(qiáng)筋壯骨、活血通絡(luò)止痛等作用，適用于由肝腎不足，筋脈瘀滯所引起的各類骨科疾病的治療。中醫(yī)藥角度防治骨關(guān)節(jié)疾病具有整體調(diào)節(jié)等優(yōu)點(diǎn)［3］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，方中所選用的中藥大多具有促進(jìn)調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)成骨分化和調(diào)控炎癥等作用。杜仲對(duì)多種原因?qū)е碌墓琴|(zhì)疏松均有治療作用［4］；地黃多糖可以改善骨質(zhì)疏松大鼠的骨結(jié)構(gòu)［5］；全蝎的提取物含有鎮(zhèn)痛成分的多肽，可以治療慢性炎性關(guān)節(jié)炎和脊椎炎［6］；補(bǔ)骨脂素具有多種生物活性，可用于治療骨質(zhì)疏松癥、腫瘤、病毒、細(xì)菌和炎癥［7］；補(bǔ)骨脂素抑制軟骨細(xì)胞的炎性生產(chǎn)，可用于減弱骨性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展［8］；血竭產(chǎn)生類似和肝素抗凝的效果，還具有獨(dú)特的抗血栓形成的作用［9］。

補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊經(jīng)過臨床肝腎功能等安全性評(píng)價(jià)無明顯的毒副作用，多年的臨床應(yīng)用中無明顯不良反應(yīng)，然而仍缺乏動(dòng)物實(shí)驗(yàn)安全性研究。查閱相關(guān)文獻(xiàn)，其中某些成分有肝腎毒性的相關(guān)報(bào)道。GAO 等［10］通過補(bǔ)骨脂成分的大鼠表皮生長(zhǎng)因子受體鑒別試驗(yàn)（EGFR）研究鑒定出補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素等107 個(gè)化合物，高劑量組小鼠，肝臟和腎臟可能是其主要靶器官，表現(xiàn)為肝細(xì)胞變性，腎臟出現(xiàn)脂滴和蛋白管型。YU 等［11］研究發(fā)現(xiàn)高劑量補(bǔ)骨脂素給藥3 d 顯著增加小鼠肝臟系數(shù)，降低腎臟系數(shù)。組織病理學(xué)檢查顯示肝臟內(nèi)有少量炎性細(xì)胞灶和空泡變性，補(bǔ)骨脂素顯著改變了血清中ALT、TBA、BUN 和CRE 的水平。補(bǔ)骨脂素可能會(huì)擾亂膽汁酸代謝的平衡通過抑制射流的表達(dá)，從而導(dǎo)致肝損傷［12］。

與中藥安全性相關(guān)的因素主要有兩個(gè)，即內(nèi)在毒性化合物和外在有害物質(zhì)［13-15］，中藥的療效和毒性一般取決于其基本物質(zhì)，中藥誘導(dǎo)毒性的機(jī)制也非常多樣化，可能對(duì)各種組織、器官、細(xì)胞和分子表現(xiàn)出不同的毒性作用［16］。中藥的藥物毒性試驗(yàn)中應(yīng)重視對(duì)肝、腎的毒性研究［17］。通過腎病理損傷、血液生化學(xué)［18］、代謝組學(xué)［19］，能夠有效檢測(cè)中藥導(dǎo)致的腎損傷。在美國(guó)，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)藥物引起的肝損傷和肝衰竭所占比例不斷增加，已經(jīng)成排名第二的因素［20］。由于肝臟在代謝和解毒方面的首要作用，該器官是藥物誘導(dǎo)毒性的重要靶點(diǎn)［21］。中藥中的某些成分能誘發(fā)各種毒副作用，過量攝入引起的藥源性肝損傷也時(shí)有發(fā)生［22］。

根據(jù)《中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《藥物臨床前安全性評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則》和《藥物重復(fù)給藥毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，血常規(guī)是評(píng)估中藥毒性的基本指標(biāo)之一。作為藥物代謝和排泄的主要器官，肝、腎更容易受到藥物毒性的影響。中藥復(fù)方制劑成分復(fù)雜，靶點(diǎn)多，部分有毒的動(dòng)物類中藥可能對(duì)肝、腎產(chǎn)生不利影響。因此，中藥的藥物毒性試驗(yàn)中應(yīng)重視對(duì)肝、腎的毒性研究［17］。溶血是指紅細(xì)胞的細(xì)胞膜因物理、化學(xué)和生物等外源性因素受損破裂，進(jìn)而引起紅細(xì)胞死亡的現(xiàn)象。中藥制劑的成分復(fù)雜，存在發(fā)生溶血的可能，因此中藥溶血性實(shí)驗(yàn)也是安全性評(píng)價(jià)的組成部分。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相對(duì)于人類臨床試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)就是容易獲得組織標(biāo)本，應(yīng)進(jìn)行病理性檢查。本研究對(duì)補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)，對(duì)保障其安全性應(yīng)用具有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：與僅灌胃生理鹽水的Control 組相比，相當(dāng)于臨床成人用藥劑量的20 倍的大劑量的BSQJ 組在1 日內(nèi)間隔8 h 3 次最大劑量給藥后，SD 大鼠全部存活，且均未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明BSQJ 組不會(huì)引起劇烈的生理變化；血常規(guī)（WBC、NEUT、NEUT、LY、RBC、HB、PLT）主要指標(biāo)、生化主要指標(biāo)（TP、ALT、AST、ALP、Glu、Bun、SCR、UA）差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。表明相對(duì)于Control 組，BSQJ 組良好的血液安全性，不會(huì)發(fā)生全身炎性反應(yīng)、造成明顯的肝腎毒性、發(fā)生溶血反應(yīng)。

本研究首次對(duì)補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊院內(nèi)制劑進(jìn)行了初步的藥物安全性研究，表明大劑量補(bǔ)腎強(qiáng)筋膠囊未對(duì)SD 大鼠產(chǎn)生急性毒性反應(yīng)，未發(fā)生肝腎毒性，對(duì)主要臟器組織未產(chǎn)生病理性損傷，具有良好的體內(nèi)安全性。本實(shí)驗(yàn)還存在一些不足之處，如未對(duì)藥物的極量、有效濃度，半數(shù)致死量等進(jìn)行研究；未進(jìn)行長(zhǎng)期的藥物安全性實(shí)驗(yàn)；未檢測(cè)凝血指標(biāo)等，有待進(jìn)一步研究。

【Author contributions】KE Mingjing and YE Xiangling performed the experiments and wrote the article.LIANG Jiajian performed the experiments.WU Huai and XU Xuemeng revised the article.YE Xiangling designed the study, WU Huai reviewed the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.