柴胡4種活性成分的體外抗氧化作用*

王淑惠,劉澤干,黃小鳳,雷攀,王莉博,江明珠,蔡華,杜士明,

(1.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院,十堰 442000;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院科研處,十堰 442000;3.湖北醫(yī)藥學(xué)院武當(dāng)特色中藥研究湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,十堰 442000)

柴胡(Bupleurumchinese)是傘形科植物柴胡(Bupleurumchinese DC.)或狹葉柴胡(Bupleurumscorzonerifolium willd.)的干燥根,具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽(yáng)氣等功效[1]。柴胡治療肝病的歷史悠久,張仲景《傷寒論》中記載小柴胡湯具有疏肝利膽、化濁解郁的功效[2];宋代《太平惠民和劑局方》中記載逍遙散,由柴胡、當(dāng)歸、炒白術(shù)等8味中藥組成,用于肝郁氣滯所致疾病[3]等,在以柴胡為君藥的經(jīng)典名方中,其主要發(fā)揮疏肝解郁的作用[4]。研究發(fā)現(xiàn),柴胡的主要成分是柴胡多糖、柴胡黃酮、柴胡皂苷、柴胡揮發(fā)油等,具有抗氧化、抗炎、解熱、抗病毒和抗腫瘤等藥理作用,其主要成分可通過(guò)清除自由基、增強(qiáng)抗氧化酶活性等途徑發(fā)揮抗氧化的作用[5-6]。謝志明等[7]研究柴胡多糖減輕氧化反應(yīng),發(fā)揮小鼠肝損傷的保護(hù)作用;張娜等[8]研究發(fā)現(xiàn),柴胡皂苷d抑制人正常肝細(xì)胞焦亡和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化減輕肝纖維化,但是柴胡4種活性成分抗氧化保肝作用及比較筆者尚未見(jiàn)報(bào)道。

慢性肝病持續(xù)進(jìn)展可致肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝癌[9]。氧化應(yīng)激是影響慢性肝病發(fā)生發(fā)展的主要因素之一,體內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)失衡導(dǎo)致肝細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)破壞,促進(jìn)炎癥反應(yīng),進(jìn)一步加重氧化應(yīng)激并誘導(dǎo)肝細(xì)胞持續(xù)性損傷[10]。因此,抗氧化應(yīng)激為慢性肝病提供新的治療策略。柴胡及其復(fù)方制劑在臨床上被運(yùn)用于預(yù)防和治療肝臟疾病,謝維寧等[11]研究柴胡疏肝散改善非酒精性脂肪肝患者的肝功能;劉靜等[12]研究小柴胡湯減輕非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠的病理?yè)p傷,改善小鼠肝臟功能等,但柴胡的活性成分基于抗氧化發(fā)揮保護(hù)慢性肝病的作用需進(jìn)一步明確,因此本研究通過(guò)提取柴胡4種活性成分,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH]法和2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽[2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulpho-nate),ABTS]法比較其化學(xué)抗氧化作用強(qiáng)弱,篩選出抗氧化活性較好的柴胡3種活性成分,對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞(LO2)的損傷模型進(jìn)行干預(yù),測(cè)定細(xì)胞存活率、抗氧化酶活性及丙二醛等指標(biāo),評(píng)價(jià)并比較柴胡3種活性成分的抗氧化作用,為柴胡在臨床上治療慢性肝病提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1儀器 TU-1901型紫外分光光度儀(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);TS100型生物倒置顯微鏡(日本Olympus公司);HERACE11型二氧化碳(CO2)恒溫培養(yǎng)箱(美國(guó)Thermo Fisher公司);RE-3000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);SB-079型多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Scientific公司);SF-TDL-5A型臺(tái)式離心機(jī)(上海菲恰爾分析儀器有限公司)。

1.2藥物及試劑 柴胡飲片購(gòu)于湖北神農(nóng)本草中藥飲片有限公司(批號(hào):20220301),由湖北醫(yī)藥學(xué)院杜士明教授鑒定為傘形科柴胡屬植物北柴胡(BupleurumchineseDC.)的干燥根,按2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》中柴胡項(xiàng)下檢查,符合各項(xiàng)要求;DPPH、ABTS和乙醇等試劑購(gòu)自阿拉丁試劑上海有限公司;達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自Gibco公司;水為純化水。

1.3細(xì)胞系 LO2由湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院生物醫(yī)學(xué)研究所饋贈(zèng),培養(yǎng)條件:37 ℃、5%CO2;培養(yǎng)液:含10%胎牛血清的達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。

2 方法與結(jié)果

2.1柴胡4種活性成分的提取及含量測(cè)定

2.1.1柴胡多糖的提取及含量測(cè)定 采用水提醇沉法[13]提取柴胡多糖,稱取柴胡飲片100 g,加入純化水750 mL,回流提取3 h,濾過(guò),減壓濃縮,離心(4 000 r·min-1,r=32 mm,15 min,下同),取上清液,加入95%乙醇使提取液中乙醇濃度達(dá)60%,冷藏靜置過(guò)夜后,離心收集沉淀物,20 mL水復(fù)溶,加入等體積Sevage試劑[三氯甲烷-正丁醇(4：1)],劇烈振搖后離心,除去蛋白層,得柴胡多糖溶液,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

以無(wú)水葡萄糖作為對(duì)照,采用苯酚硫酸法[14]測(cè)定柴胡多糖含量,精密吸取柴胡多糖溶液1.0 mL,置于冰水浴中,依次加入5%苯酚和95%濃硫酸各5.0 mL,搖勻后冷卻,室溫放置20 min,采用紫外-可見(jiàn)分光光度法于487 nm波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度(A值)。通過(guò)計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程:Y=0.007 5X+0.049 9,R2=0.999 2,測(cè)算得柴胡多糖的含量5.78 mg·mL-1。

2.1.2柴胡黃酮的提取及含量測(cè)定 采用堿溶酸沉法[15]提取柴胡黃酮,取柴胡飲片50 g,加入85%乙醇500 mL,回流提取2 h,減壓濃縮成浸膏狀,加入5%碳酸鈉(Na2CO3)溶液溶解粗提取物20 mL,再緩慢加入濃鹽酸(HCl),pH值為2時(shí)抽濾,收集沉淀,反復(fù)2次堿溶酸沉過(guò)程,低溫干燥法得柴胡黃酮,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

以蘆丁作為對(duì)照,稱取柴胡黃酮提取物86.8 mg,加入60%乙醇50 mL溶解,精密吸取10.0 mL,依次加入5%亞硝酸鈉(NaNO2)1.0 mL、硝酸鋁[Al(NO3)3]1.0 mL和氫氧化鈉(NaOH)溶液(1 mol·L-1) 10.0 mL,搖勻后放置15 min,采用紫外-可見(jiàn)分光光度法于波長(zhǎng)506 nm處測(cè)定A值[16],通過(guò)計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.992 9X+0.036 7,R2=0.999 8,測(cè)算得柴胡黃酮的含量1.071 mg·mL-1。

2.1.3柴胡皂苷的提取及含量測(cè)定 采用熱回流法[17]提取柴胡皂苷,取柴胡飲片100 g,加入70%乙醇2 000 mL,加熱回流提取150 min,趁熱濾過(guò)并濃縮,得乙醇浸膏,正丁醇萃取3次,合并萃取液減壓濃縮,乙醇溶解得柴胡皂苷溶液。以柴胡皂苷A為對(duì)照,采用紫外-可見(jiàn)分光光度法[17]測(cè)定柴胡皂苷含量,依次加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸0.8 mL,60 ℃恒溫水浴15 min,冷卻至室溫,再加入冰醋酸,于波長(zhǎng)610 nm處測(cè)A值。通過(guò)計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)回歸方程Y=0.437 3X+0.091 2,R2=0.991 2,測(cè)算得柴胡皂苷的含量0.484 g·mL-1。

2.1.4柴胡揮發(fā)油的提取及含量測(cè)定 采用水蒸氣蒸餾法提取柴胡揮發(fā)油[18],取柴胡飲片100 g,加入10%NaCl溶液1 200 mL,水蒸氣蒸餾,收集初餾液進(jìn)行重蒸餾得到柴胡揮發(fā)油精提液50 mL。以柴胡注射液為對(duì)照,通過(guò)紫外-可見(jiàn)分光光度法[18]測(cè)定柴胡揮發(fā)油濃度,甲醇溶解揮發(fā)油精提液,于波長(zhǎng)276 nm處測(cè)定A值,分別測(cè)得柴胡揮發(fā)油精提液和柴胡注射液的吸光度為A1和A2,計(jì)算得柴胡揮發(fā)油含量1.893 g·mL-1(生藥含量)。

2.2柴胡4種活性成分化學(xué)抗氧化活性的測(cè)定

2.2.1DPPH法測(cè)定自由基清除能力 DPPH測(cè)定液的配置:分別量取等倍稀釋濃度的柴胡多糖、黃酮、皂苷和揮發(fā)油溶液各2 mL,分別加入DPPH乙醇溶液(0.1 mmol·L-1) 2 mL,搖勻后室溫避光30 min,即得DPPH測(cè)定液[19]。

DPPH清除能力的測(cè)定:采用紫外-可見(jiàn)分光光度法于517 nm波長(zhǎng)測(cè)定樣品溶液吸光度(Ai)、空白組吸光度(A0)和無(wú)水乙醇對(duì)照組吸光度(Aj)。依據(jù)“公式1”計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程,采用SPSS 25.0版軟件計(jì)算得半數(shù)抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50),結(jié)果見(jiàn)表1和圖1。

圖1 4種活性成分的濃度與DPPH自由基清除能力的關(guān)系

表1 柴胡4種活性成分的DPPH自由基清除能力

DPPH自由基清除率(%)=[A0-(Ai-Aj)]/A0×100%

(公式1)

柴胡4種活性成分對(duì)DPPH自由基清除能力隨一定濃度升高而增強(qiáng),IC50值分別為38.718 μg·mL-1(柴胡多糖)、51.297 μg·mL-1(柴胡黃酮)、3.149 mg·mL-1(柴胡皂苷)和2.426 g·mL-1(柴胡揮發(fā)油),而柴胡揮發(fā)油的最大提取濃度1.893 8 g·mL-1,無(wú)法達(dá)到其IC50值,表明柴胡揮發(fā)油對(duì)DPPH清除能力不足。由此得出,柴胡4種成分DPPH自由基清除能力與柴胡多糖、黃酮和皂苷密切相關(guān)。

2.2.2ABTS法測(cè)定自由基清除能力 ABTS測(cè)定液配置:取等體積ABTS溶液和過(guò)硫酸鉀溶液,混勻得ABTS工作液。分別量取等倍稀釋濃度的柴胡多糖、黃酮、皂苷和揮發(fā)油溶液各1.0 mL,依次加入ABTS工作液2.0 mL,混勻后室溫避光30 min,即得 ABTS測(cè)定液[20]。

ABTS清除能力的測(cè)定:采用紫外可見(jiàn)光分光度法于波長(zhǎng)734 nm處測(cè)定樣品溶液吸光度(Ai),空白組吸光度(A0)。依據(jù)“公式2”計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程,采用SPSS 25.0版統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算得IC50,結(jié)果見(jiàn)表2和圖2。

圖2 4種活性成分的濃度與ABTS自由基清除能力的關(guān)系

表2 柴胡4種活性成分的ABTS自由基清除能力

ABTS自由基清除率(%)=(A0-Ai)/A0×100%

(公式2)

柴胡4種活性成分對(duì)ABTS自由基清除能力隨一定濃度范圍升高而增強(qiáng),IC50值分別為130.931 μg·mL-1(柴胡多糖)、351.484 μg·mL-1(柴胡黃酮)、5.422 mg·mL-1(柴胡皂苷)和2.241 g·mL-1(柴胡揮發(fā)油),而柴胡揮發(fā)油的最大提取濃度1.893 8 g·mL-1時(shí),對(duì)ABTS自由基清除率僅為39.80%,無(wú)法達(dá)到其IC50值,表明柴胡揮發(fā)油對(duì)ABTS清除能力不足。由此得出,柴胡發(fā)揮ABTS自由基清除能力與柴胡多糖、黃酮和皂苷密切相關(guān)。

2.3柴胡3種活性成分體外抗氧化活性的測(cè)定

2.3.1H2O2誘導(dǎo)LO2氧化損傷模型的建立 采用噻唑藍(lán)法檢測(cè)不同濃度H2O2誘導(dǎo)LO2細(xì)胞的存活率。培養(yǎng)LO2細(xì)胞,制備成單細(xì)胞懸液,按每孔100 μL(含細(xì)胞5×103個(gè)) 接種于96孔板中,設(shè)模型組(0 μmol·L-1H2O2)、對(duì)照組(100、200、300、400、500、600、700、800、900 μmol·L-1H2O2)和空白組(只加入培養(yǎng)液),每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔,于37 ℃、5% CO2下培養(yǎng)24 h,棄去培養(yǎng)液,每孔加入含有10%噻唑藍(lán)(0.5 mg·mL-1)的培養(yǎng)液100 μL,培養(yǎng)箱中孵育4 h后,加入二甲亞砜150 μL,搖床溶解15 min,于酶標(biāo)儀λ=570 nm處測(cè)定A值,根據(jù)“公式3”計(jì)算細(xì)胞存活率,結(jié)果見(jiàn)圖3。

①與0 μmol·L-1 H2O2組比較,t=3.063～20.19,P<0.05。

細(xì)胞存活率(%)=(模型組A值-空白組A值)/(對(duì)照組A值-空白組A值)×100%

(公式3)

細(xì)胞存活率隨H2O2濃度增加而降低,當(dāng)H2O2濃度為800 μmol·L-1時(shí),細(xì)胞存活率降低至50%。因此實(shí)驗(yàn)選取800 μmol·L-1H2O2作用24 h作為后續(xù)誘導(dǎo)LO2細(xì)胞氧化損傷模型的條件[21]。

2.3.2柴胡多糖、黃酮、皂苷的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn) 采用噻唑藍(lán)法測(cè)定柴胡多糖、黃酮、皂苷對(duì)LO2的細(xì)胞毒性,培養(yǎng)LO2細(xì)胞,制備成單細(xì)胞懸液,按每孔100 μL(含細(xì)胞5×103個(gè)) 接種于96孔板中,設(shè)正常對(duì)照組(不做任何處理),給藥組(給予不同濃度的柴胡多糖、黃酮、皂苷,二甲亞砜為溶媒)和空白對(duì)照組(只加入培養(yǎng)液),每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔,細(xì)胞存活率檢測(cè)依據(jù)“2.3.1節(jié)”,結(jié)果見(jiàn)圖4。

①與正常對(duì)照組比較,t=2.942～21.74,P<0.05。

LO2細(xì)胞存活率隨藥物濃度增加而降低,與正常對(duì)照組比較,當(dāng)給予柴胡多糖(6.936 μg·mL-1)、柴胡黃酮(32 μg·mL-1)、柴胡皂苷(60 μg·mL-1)時(shí),細(xì)胞存活率下降至90% (P<0.05)。因此實(shí)驗(yàn)分別選取柴胡多糖的低中高濃度(2.312、4.624、6.936 μg·mL-1)、柴胡黃酮的低中高濃度(16、24、32 μg·mL-1)和柴胡皂苷的低中高濃度(20、40、60 μg·mL-1)作為L(zhǎng)O2 細(xì)胞氧化損傷的作用濃度。

2.3.3柴胡多糖、黃酮、皂苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)LO2氧化損傷模型存活率 采用噻唑藍(lán)法測(cè)定不同濃度柴胡多糖、黃酮和皂苷對(duì)細(xì)胞存活率的影響,設(shè)置正常對(duì)照組(不做任何處理),模型對(duì)照組(采用800 μmol·L-1H2O2誘導(dǎo)24 h),實(shí)驗(yàn)組(分別同時(shí)用低、中、高濃度的柴胡多糖、黃酮、皂苷預(yù)處理LO2細(xì)胞6 h后,800 μmol·L-1H2O2誘導(dǎo)24 h),檢測(cè)方法與“2.3.1節(jié)”相同,結(jié)果見(jiàn)圖5。

①與正常對(duì)照組比較,t=30.16,P<0.01;②與模型對(duì)照組比較,t=3.630～10.90,P<0.05。

與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組LO2細(xì)胞存活率顯著下降至51.65% (P<0.01);與模型對(duì)照組比較,柴胡多糖、黃酮和皂苷呈劑量依賴提高LO2細(xì)胞存活率,柴胡多糖(6.936 μg·mL-1)、柴胡黃酮(32 μg·mL-1)和柴胡皂苷(60 μg·mL-1)分別顯著提高LO2細(xì)胞存活率至63.92%、60.85%和67.47% (P<0.05)。因此實(shí)驗(yàn)分別選取柴胡多糖(6.936 μg·mL-1)、柴胡黃酮(32 μg·mL-1)和柴胡皂苷(60 μg·mL-1)作為L(zhǎng)O2 細(xì)胞氧化損傷的作用濃度。

2.3.4谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量測(cè)定 試劑盒檢測(cè)柴胡3種活性成分對(duì)模型細(xì)胞中GSH-Px、SOD活性及MDA含量的影響。將LO2細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中,設(shè)正常對(duì)照組(不做任何處理)、模型對(duì)照組(800 μmol·L-1H2O2誘導(dǎo)24 h)、實(shí)驗(yàn)組(柴胡多糖、黃酮、皂苷預(yù)處理細(xì)胞6 h后,800 μmol·L-1H2O2誘導(dǎo)24 h);棄去上清液,加入細(xì)胞裂解液,冰上裂解30 min后,4 ℃下離心(12 000 r·min-1,r=32 mm,15 min),棄去沉淀,試劑盒檢測(cè)GSH-Px酶活性、SOD酶活性和MDA含量,結(jié)果見(jiàn)圖6。

A.正常對(duì)照組;B.模型對(duì)照組;C.柴胡多糖組;D.柴胡黃酮組;E.柴胡皂苷組。 ①與正常對(duì)照組比較,t=9.886～16.71,P<0.05;②與模型對(duì)照組比較,t=4.81～13.65,P<0.05。

與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組GSH-Px、SOD酶活性下降至11.17,35.18 U·mg-1(P<0.05),MDA含量提高至4.51 μmol·g-1(P<0.05);給予柴胡多糖(6.936 μg·mL-1)、柴胡黃酮(32 μg·mL-1)和柴胡皂苷(60 μg·mL-1)后,細(xì)胞內(nèi)GSH-Px酶活性顯著增加至15.81,17.10和17.06 U·mg-1(P<0.05),SOD酶活性顯著增加至46.79,47.11和52.05 U·mg-1(P<0.05),MDA含量顯著降低至2.34,2.28和2.11 μmol·g-1(P<0.05)。結(jié)果表明柴胡多糖、黃酮、皂苷能顯著提高H2O2誘導(dǎo)LO2細(xì)胞氧化損傷的GSH-Px和SOD酶活性,降低MDA含量,其中柴胡皂苷作用最顯著。

3 討論

氧化應(yīng)激是指機(jī)體或細(xì)胞暴露于氧化因子引起的損傷,同時(shí)機(jī)體自由基異常升高導(dǎo)致氧自由基累積,誘導(dǎo)細(xì)胞衰老、凋亡或壞死[22]。DPPH和ABTS法是體外評(píng)價(jià)自由基清除能力的常用方法[23],本實(shí)驗(yàn)通過(guò)該方法測(cè)定并比較柴胡4種活性成分清除自由基作用的強(qiáng)弱,結(jié)果表明柴胡多糖、黃酮和皂苷具有較好的自由基清除能力。GSH-Px酶、SOD酶和MDA是反映機(jī)體氧化和抗氧化水平的重要指標(biāo),當(dāng)肝細(xì)胞受到H2O2誘導(dǎo)時(shí),氧化與抗氧化水平失衡,引起GSH-Px酶和SOD酶表達(dá)水平下降,MDA表達(dá)水平升高[22]。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了H2O2誘導(dǎo)LO2模型,分別給予柴胡多糖、黃酮和皂苷干預(yù),并測(cè)定GSH-Px酶、SOD酶和MDA的水平,結(jié)果顯示柴胡皂苷的抗氧化作用最顯著,為柴胡基于抗氧化治療慢性肝病提供理論依據(jù)。

3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果與柴胡常用制劑的作用和用途相互印證 小柴胡湯、護(hù)肝片等均是以柴胡為君藥制成的制劑,主要成分為柴胡多糖、黃酮和皂苷等,具有抗氧化、提高免疫力等藥理作用,在臨床上主要用于治療慢性肝炎、肝硬化等肝臟疾病[24];柴胡注射液是柴胡經(jīng)水蒸氣蒸餾法制成的溶液,主要成分為揮發(fā)油,具有解熱、鎮(zhèn)痛等藥理作用,在臨床上用于治療感冒及瘧疾等疾病引起的發(fā)熱[25]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示柴胡4種活性成分中,柴胡多糖、黃酮和皂苷強(qiáng)于柴胡揮發(fā)油,因此本實(shí)驗(yàn)印證了柴胡不同制劑發(fā)揮不同藥理作用與其活性成分密切相關(guān)。

3.2對(duì)柴胡產(chǎn)品開發(fā)的啟示 柴胡具有植物抗生素的[26]稱謂,揮發(fā)油是發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛作用的物質(zhì)基礎(chǔ),而柴胡注射液在臨床應(yīng)用中風(fēng)險(xiǎn)高,成分復(fù)雜易引起不良反應(yīng),12歲以下兒童禁用,但這類人群又是呼吸道感染的好發(fā)群體。王莉博等[27]將揮發(fā)油制成栓劑,為治療12歲以下兒童治療呼吸道感染提供了安全、可靠的治療方案。臨床上常將柴胡煎煮成湯劑,此過(guò)程中揮發(fā)油部分揮發(fā)較多,若將柴胡提取成解熱和抗氧化兩大物質(zhì)群,分為揮發(fā)油和多糖、黃酮和皂苷等,以顆粒劑的方式供應(yīng)市場(chǎng),將有利于合理運(yùn)用中藥柴胡資源。

3.3對(duì)柴胡種植業(yè)的啟發(fā) 不同產(chǎn)地、采收時(shí)間柴胡的活性成分不盡相同[28],鄂西北地區(qū)柴胡多糖、黃酮和皂苷的含量與柴胡不同采收期密切相關(guān),分別在種子成熟11、10、7月份采收最佳[29];產(chǎn)地甘肅、山西的柴胡皂苷的含量較高[30]。因此,可以根據(jù)使用柴胡的不同活性成分選取不同產(chǎn)地及適宜采收時(shí)間,獲取柴胡最大利用價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)柴胡單一活性成分抗氧化保肝作用進(jìn)行探討,后期研究主要以柴胡皂苷為主,分析其關(guān)鍵活性成分和結(jié)構(gòu),在體內(nèi)外探究其抗氧化改善慢性肝病的作用及分子機(jī)制,進(jìn)一步探究柴胡3種成分在體內(nèi)外協(xié)同抗氧化保肝作用及機(jī)制,為綜合開發(fā)和應(yīng)用柴胡中藥資源奠定理論基礎(chǔ)。