雞馬立克氏病綜合防治技術(shù)的研究

陳世佳

（丹陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇 丹陽 212300）

1 病原學(xué)

1.1 生物學(xué)的特性

馬立克氏病病毒（MDV）隸屬于皰疹病毒科、α皰疹病毒亞科的馬立克病毒屬[1]。MDV 核酸特點(diǎn)是線狀雙股DNA，全長約180 kb。MDV 的基因包括單純皰疹病毒同類物（如gB、gC、gD、gH）的基因和MDV獨(dú)特的基因。gC 與誘發(fā)腫瘤有關(guān)，gB 誘導(dǎo)中和抗體。

MDV 的復(fù)制是典型的細(xì)胞結(jié)合病毒的復(fù)制方式，病毒從感染細(xì)胞到正常細(xì)胞的傳遞通過形成細(xì)胞間橋完成[2]。MDV 誘導(dǎo)的發(fā)病機(jī)制包括生產(chǎn)性和非生產(chǎn)性病毒復(fù)制周期。

1.2 基因結(jié)構(gòu)與功能

MDV 以細(xì)胞結(jié)合和游離于細(xì)胞外兩種狀態(tài)存在。細(xì)胞結(jié)合性病毒又叫裸體粒子，可見于腫瘤組織中，與細(xì)胞共存亡；游離于細(xì)胞外的病毒即完全病毒存在于羽毛囊上皮細(xì)胞，隨皮屑排出污染環(huán)境，在疾病的傳播上有重要意義[3]。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源

病雞和帶病毒雞為該病的主要傳染源，尤其是無明顯臨床癥狀的帶病毒雞。在受感染雞群的血液、腫瘤、羽毛囊上皮細(xì)胞中均可以發(fā)現(xiàn)病毒的存在，其中以羽毛囊上皮細(xì)胞中的非細(xì)胞結(jié)合性病毒的傳播性最強(qiáng)。

羽毛囊上皮細(xì)胞是MDV 適宜的靶細(xì)胞，隨著皮膚代謝和羽毛脫落進(jìn)入外界的大量完整病毒是自然條件下最重要的傳染源。MDV 污染雞舍環(huán)境并和空氣中的灰塵顆?；旌?，隨空氣傳播，這也是MD 不易控制和消滅的原因。

2.2 傳播途徑

一年四季均可引起易感動(dòng)物的發(fā)病且具有局限性傳播的特點(diǎn)。病毒可以通過呼吸道或者消化道傳播。MD 具有高度接觸傳染性，因此往往造成MDV在雞群中廣泛傳播。如果飼養(yǎng)管理不當(dāng)，雞群抵抗力弱，甚至可以達(dá)到100%的感染率。

2.3 易感動(dòng)物

易感性最高的宿主是雞，發(fā)病的峰期為2～7 月齡。MD 可以感染不同品種的雞，但宿主發(fā)生腫瘤的抵抗力卻受很多因素的影響。鴿子、鵪鶉、鵝、山雞偶見受感染的報(bào)道，不感染哺乳動(dòng)物。但近年來，以色列Davidson 等分別報(bào)道了MD 危害火雞并造成重大損失。

3 致病機(jī)制

MDV 的復(fù)制是典型的細(xì)胞結(jié)合病毒的復(fù)制方式[4]。MDV 從侵入雞體后，到引起雞體出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，這段過程一般需要經(jīng)歷3 個(gè)時(shí)期,即：病毒溶細(xì)胞感染時(shí)期、病毒的潛伏感染時(shí)期、轉(zhuǎn)化和腫瘤的形成時(shí)期。

4 臨床癥狀和病理變化

根據(jù)臨床表現(xiàn)，可以分為神經(jīng)型、內(nèi)臟型、眼型和皮膚型4 種類型。

4.1 神經(jīng)型

神經(jīng)系統(tǒng)受侵害可見病雞運(yùn)動(dòng)失調(diào)，侵害的神經(jīng)不同所導(dǎo)致的臨床癥狀也有所不同，其中最為常見的是坐骨神經(jīng)受侵害。脖子斜向一側(cè)是頸神經(jīng)受侵害的表現(xiàn)。侵害腹神經(jīng)時(shí)，拉稀為主要癥狀。迷走神經(jīng)麻痹會(huì)引起病雞嗦囊膨大，呼吸困難，可見仰脖喘氣。臂神經(jīng)受損時(shí)，病雞可表現(xiàn)為翅下垂，一般表現(xiàn)為單側(cè)麻痹。當(dāng)坐骨神經(jīng)受損時(shí)，發(fā)病雞步態(tài)不穩(wěn)，甚至出現(xiàn)“劈叉”姿勢(shì)。

剖檢可見受侵害的神經(jīng)橫紋消失，變?yōu)榛野咨螯S白色，神經(jīng)腫大，局部或彌漫性增粗可達(dá)正常的2～3 倍，往往呈單側(cè)性，通常情況下可以與另一側(cè)進(jìn)行比對(duì)。

4.2 內(nèi)臟型

常為急性發(fā)病，病程短，無明顯的臨床癥狀。一般表現(xiàn)為精神不濟(jì)、食欲不佳、體重減輕、下痢、羽毛粗亂，外界給予刺激時(shí)反應(yīng)慢。通過觸診病雞時(shí)可以發(fā)現(xiàn)腹部明顯增大。

死后剖檢，往往在多處內(nèi)臟可見大小不等的腫瘤，腫瘤為灰白色，質(zhì)地堅(jiān)硬而致密，切面平滑。卵巢無正常的結(jié)構(gòu)，呈菜花樣。馬立克氏病中非腫瘤性變化是法氏囊和胸腺萎縮，少數(shù)情況下發(fā)生彌漫性增厚的腫瘤。

4.3 眼型

腫瘤細(xì)胞主要侵害眼睛，虹膜色素幾乎完全消失，形成“灰眼病”。瞳孔縮小且變形，喪失對(duì)光的調(diào)節(jié)能力，邊緣變成鋸齒狀，嚴(yán)重時(shí)只剩一個(gè)類似針頭大小的孔。

4.4 皮膚型

比較少見，由于缺少明顯的臨床癥狀一般不易被發(fā)現(xiàn)，通常在宰后褪毛才會(huì)發(fā)現(xiàn)羽毛囊增大，皮膚上有小結(jié)節(jié)或瘤狀物，少數(shù)毛囊有炎性滲出物。

5 診 斷

根據(jù)流行病學(xué)、典型的臨床癥狀和病理變化進(jìn)行綜合分析做出診斷。在沒有明確結(jié)論時(shí)，可進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

5.1 病毒分離

將疑似發(fā)病雞的羽毛囊處理后經(jīng)卵黃囊接種4日齡雞，于19 日齡的雞胚絨毛尿囊膜上可生成病毒痘斑[5]。

5.2 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

抗原和抗體在具有疏散網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的瓊脂糖中相向擴(kuò)散，形成沉淀。具體方法是先制備厚為2～3 mm的瓊脂糖凝膠板，室溫下冷卻后打孔，形成梅花形圖案。MD 陽性血清加到中央孔中，周邊1 孔加MD 標(biāo)準(zhǔn)瓊擴(kuò)抗原，而待檢羽根則加到其他6 孔中。加樣完畢后放置在濕盒中，37 ℃溫箱中孵育，24 h 后觀察。若出現(xiàn)白色沉淀線，說明檢測(cè)雞感染過MD 或有MD抗體存在。

5.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)

改變PCR 儀的控制溫度會(huì)使DNA 在體外高溫變性成單鏈，低溫時(shí)引物與模板結(jié)合，DNA 酶最適溫度時(shí)形成與模板鏈互補(bǔ)的新鏈。PCR 的優(yōu)勢(shì)：特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單易行、分辨率高、靈敏度高、易自動(dòng)化、對(duì)標(biāo)本純度要求低的特點(diǎn)，可用于鑒別MDV 的致弱株和野毒株以及腫瘤中的病毒DNA。MDV、網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖病病毒(REV)、淋巴白血病病毒(LLV)和淋巴增生性疾病病毒(LPDV)皆可引起雞的腫瘤病變[6]，肉眼可見變化相似的情況下可以用PCR 來鑒別。

5.4 免疫熒光試驗(yàn)

取雞的淋巴組織制成懸液后接種于雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）或鴨胚成纖維細(xì)胞（DEF），然后放置于5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。一般5～14 d 便可產(chǎn)生典型的蝕斑，以MDV-1 型單抗做間接熒光試驗(yàn)，若為陽性則說明分離病毒為MDV-1 型病毒。

6 防治措施

6.1 中西藥治療

本病無特效藥，抗生素或磺胺類藥物均無效，主要以預(yù)防為主。1993 年，在浙江省淳安縣十幾家養(yǎng)雞戶的雞都感染了MD，他們采用中藥加百毒殺對(duì)病雞進(jìn)行試驗(yàn)性治療并取得一定效果[7]。方法如下，可供參考：用十味中草藥（金銀花、蒲公英、丹參、生地、鉤藤、地龍等）組成方劑,煎熬取藥汁拌飼料喂雞，同時(shí)用百毒殺溶液進(jìn)行消毒。

6.2 綜合預(yù)防

搞好衛(wèi)生消毒工作，預(yù)防雛雞的早期感染；加強(qiáng)養(yǎng)殖場(chǎng)的飼養(yǎng)管理水平，提倡生態(tài)養(yǎng)殖，提供優(yōu)質(zhì)的生活條件，增強(qiáng)雞群的抵抗力；堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，科學(xué)飼養(yǎng)不僅可減少病毒帶入雞舍的可能性，而且能避免病毒的傳播與擴(kuò)散；采用全進(jìn)全出制度，杜絕各種傳染病的繼代循環(huán)感染；防止通風(fēng)不良，溫度過高過低等應(yīng)激因素和預(yù)防禽呼腸孤病毒感染（ARI）、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥（REV）等能引起家禽免疫抑制的傳染病。

在確診有MD 的爆發(fā)時(shí)，首先淘汰處理患病雞并按程序?qū)﹄u舍進(jìn)行打掃消毒，空置一段時(shí)間再引進(jìn)新的雛雞。

6.3 疫苗接種

防控MD 的關(guān)鍵是疫苗接種，而生物安全性措施的嚴(yán)格采用可以限制雛雞的早期感染，這也是至關(guān)重要的，否則即使出殼后接種有效疫苗效果也微乎其微。目前國內(nèi)主要使用的疫苗有單聯(lián)、二聯(lián)、三聯(lián)苗和重組DNA 疫苗。雖然這些疫苗并不能抗感染，但MD 發(fā)病率還是顯著減少，降低了部分經(jīng)濟(jì)損失。

為了更好地發(fā)揮疫苗的作用，我們要選擇適宜的疫苗并規(guī)范操作。單價(jià)苗如HVT、GVI-988 可在1日齡接種。通常父母代用血清1 或2 型疫苗，商品代則用血清3 型疫苗，以避免血清1 或2 型母源抗體的影響。

7 結(jié) 語

要想消滅MD，必須做好防治工作，結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查，從病原、流行的基本環(huán)節(jié)和易感動(dòng)物3 方面著手，才能起到好的預(yù)防效果。除此之外，疫苗的研制與更新也是重中之重。

對(duì)于送檢病雞的養(yǎng)殖場(chǎng)，首先應(yīng)該淘汰處理病雞，并對(duì)雞舍進(jìn)行全面的消毒，因?yàn)椴《究赡軙?huì)與空氣中的灰塵混合，但常用的化學(xué)消毒劑可使其失活。其次，雞舍要空置一段時(shí)間后才能再次引進(jìn)新的雛雞。