不同溫度和外源物質(zhì)處理對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響

劉方方, 黃進(jìn)嬋, 段 彤, 沈 敏, 洪 鍵,孫 淼, 張言周, 吳承東, 康貽軍

(1.鹽城師范學(xué)院海洋與生物工程學(xué)院,鹽城市濱海白首烏生物工程技術(shù)研究中心, 江蘇 鹽城 224007;2.江蘇省鹽土生物資源研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 江蘇 鹽城 224007;3.鹽城市新洋農(nóng)業(yè)試驗(yàn)站, 江蘇 鹽城 224049)

耳葉牛皮消(Cynanchumauriculatum)是蘿藦科鵝絨藤屬植物,其塊根與同屬的隔山牛皮消(Cynanchumwilfordii)和戟葉牛皮消(Cynanchumbungei)的塊根被并稱為白首烏,是一種傳統(tǒng)滋補(bǔ)中藥材。耳葉牛皮消的塊根富含C21甾苷類、多糖類、苯酮類等天然活性成分,具有抗腫瘤、抗氧化、保肝護(hù)肝、調(diào)節(jié)免疫及降脂減肥等多重藥理功效[1-4]。此外,耳葉牛皮消塊根中粗蛋白、粗脂肪、淀粉和氨基酸的含量較豐富,還含有多種維生素及鋅、錳、鐵、鈣等人體必需微量元素[5-6],具有較高的食用價值。耳葉牛皮消作為一種藥食同源的植物,開發(fā)利用價值較高,市場前景廣闊。目前,市場上白首烏產(chǎn)品的來源主要為濱海白首烏(耳葉牛皮消)和泰山白首烏(戟葉牛皮消)[4],全國95%的耳葉牛皮消產(chǎn)自江蘇省鹽城市濱海縣[7-8]。作為地產(chǎn)道地藥材,濱海白首烏被認(rèn)定為中國國家地理標(biāo)志產(chǎn)品,并建立了首個國家級白首烏標(biāo)準(zhǔn)化種植示范區(qū)[9]。

耳葉牛皮消的繁殖可采用多種方式,包括塊根繁殖、種子繁殖、藤蔓扦插和組織培養(yǎng)等,規(guī)?；斯ぴ耘嘀饕捎脡K根繁殖[10]。塊根無性繁殖的幼苗較健壯、成活率高,但成本較高,出苗周期長,且后期易發(fā)生侵染性病害,導(dǎo)致種性退化,影響白首烏的產(chǎn)量和品質(zhì)[11-12]。耳葉牛皮消種子繁殖的出苗整齊度不高,出苗速度和苗期生長較緩慢,但后期生長迅速,塊根粗大,產(chǎn)量有保障[13]。目前,規(guī)模化栽培中采用耳葉牛皮消種子繁殖的比例不高,通過種子萌發(fā)進(jìn)行耳葉牛皮消有性繁殖的研究也鮮有報道。本實(shí)驗(yàn)通過研究溫度、激素和化學(xué)試劑對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響,優(yōu)化種子萌發(fā)條件,以期為耳葉牛皮消良種繁育、種質(zhì)資源保護(hù)與利用以及產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

耳葉牛皮消種子于2021年11月初采自江蘇省鹽城市濱?？h濱海港鎮(zhèn),果實(shí)未開裂時摘取,風(fēng)干后果實(shí)裂開,取出種子,去雜,去種毛,干燥貯藏。

1.2 種子形態(tài)特征觀察與測量

采用目測法觀測種子基本形態(tài)。隨機(jī)選取10粒種子,用游標(biāo)卡尺測量種子長度、寬度和厚度。千粒重參照國標(biāo)規(guī)程(GB/T3543—1995),采用百粒法,隨機(jī)選取100粒種子,用萬分之一電子天平稱量,計算千粒重,重復(fù)4次。

1.3 種子預(yù)處理

選用大小均勻、飽滿、無破損、無病斑的種子。先用75%乙醇消毒5 min,無菌蒸餾水沖洗2次,再用3%次氯酸鈉消毒1 min,無菌蒸餾水沖洗4次后備用。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計

1.4.1發(fā)芽實(shí)驗(yàn)

將處理后的種子轉(zhuǎn)入含有無菌紙質(zhì)發(fā)芽床的培養(yǎng)皿中,每皿25粒種子,每個重復(fù)50粒,每個處理重復(fù)3次。在恒溫光照培養(yǎng)箱內(nèi),于光照時間12 h/d、光照度20%、相對濕度(RH)80%的條件下進(jìn)行發(fā)芽實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)培養(yǎng)皿內(nèi)失水情況補(bǔ)充無菌水,以保持發(fā)芽床濕潤。

1.4.2種子萌發(fā)條件的優(yōu)化

發(fā)芽溫度:將預(yù)處理后的種子分別在15,25,35 ℃的光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)芽實(shí)驗(yàn),以確定最佳發(fā)芽溫度。

浸種溫度:將預(yù)處理后的種子浸泡在無菌水中,分別于5,25,35 ℃水浴浸種24 h,然后在最佳發(fā)芽溫度的光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)芽實(shí)驗(yàn),以確定最佳浸種溫度。

激素處理:采用3種激素,設(shè)置濃度分別為:赤霉素(GA3)100,200,400 mg/L;吲哚乙酸(IAA)5,10,20 mg/L;6-芐氨基嘌呤(6-BA)50,100,200 mg /L。以無菌水為對照,于最佳浸種溫度下,將預(yù)處理后的種子在上述溶液中浸泡處理24 h,然后進(jìn)行發(fā)芽實(shí)驗(yàn)。

化學(xué)試劑處理:采用3種化學(xué)試劑(無機(jī)鹽),設(shè)置濃度分別為:氯化鈣(CaCl2)0.5,1.0,2.0 g/L;硝酸鉀(KNO3)2.0,4.0,6.0 g/L;氯化鈉(NaCl)1.0,5.0,10.0 g/L。以無菌水為對照,于最佳浸種溫度下,將預(yù)處理后的種子在上述溶液中浸泡處理24 h,然后進(jìn)行發(fā)芽實(shí)驗(yàn)。

組合處理:從激素和化學(xué)試劑處理中篩選出效果好的激素和試劑,進(jìn)行組合,采用混合溶液浸泡種子,以無菌水為對照進(jìn)行發(fā)芽實(shí)驗(yàn)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

1.5.1種子發(fā)芽指標(biāo)

將種子放入光照培養(yǎng)箱后,每天同一時間觀察種子發(fā)芽情況,記錄發(fā)芽種子數(shù)(露白,即胚根突破種皮1 mm為種子發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)),直至發(fā)芽結(jié)束,計算種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)等指標(biāo),具體計算方法如下:

發(fā)芽率/%=(發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù))×100%;

發(fā)芽勢/%=(前8 d內(nèi)發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù))×100%;

發(fā)芽指數(shù)=∑(Gt/Dt),式中:Gt為第t天的發(fā)芽種子數(shù),Dt為對應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)。

1.5.2數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理和計算,采用SPSS軟件進(jìn)行方差分析和多重比較(α=0.05)。數(shù)據(jù)均為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,采用Excel和GraphPad Prism軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 耳葉牛皮消種子形態(tài)特征

耳葉牛皮消結(jié)實(shí)率較高,種子扁卵狀,種皮褐色,種子頂端有一簇白色絨毛(圖1)。種子千粒重為(6.018±0.086)g,種子長度為(0.734±0.032)cm,種子寬度為(0.353±0.017)cm,種子厚度為(0.112±0.012)cm。

圖1 耳葉牛皮消種子形態(tài)特征Fig.1 Seed morphological characteristics of Cynanchum auriculatum

2.2 溫度對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響

2.2.1培養(yǎng)溫度對種子萌發(fā)的影響

不同培養(yǎng)溫度下耳葉牛皮消種子的萌發(fā)進(jìn)程(圖2a)。結(jié)果顯示,在15 ℃,25 ℃和35 ℃的條件下,種子起始萌發(fā)時間分別為第7天、第4天和第5天。15 ℃和25 ℃下,種子萌發(fā)進(jìn)程中有較明顯的高峰期,而35 ℃下,種子萌發(fā)進(jìn)程相對平緩。不同培養(yǎng)溫度下種子萌發(fā)相關(guān)指標(biāo)見表1,25 ℃下種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著高于15 ℃和35 ℃。以上結(jié)果表明,耳葉牛皮消種子萌發(fā)對溫度敏感,25 ℃為較佳的培養(yǎng)溫度。

表1 培養(yǎng)溫度對耳葉牛皮消種子萌發(fā)指標(biāo)的影響Table 1 Effects of culture temperature on seed germination indexes of Cynanchum auriculatum

圖2 溫度對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響Fig.2 Effects of temperature on seed germination of Cynanchum auriculatum

2.2.2浸種溫度對種子萌發(fā)的影響

在不同溫度下浸種處理后,耳葉牛皮消種子的萌發(fā)進(jìn)程(圖2b)。結(jié)果顯示,在5 ℃,25 ℃和35 ℃的浸種條件下,種子起始萌發(fā)時間分別為第5天、第4天和第3天;3個浸種溫度下,種子萌發(fā)進(jìn)程中均有較明顯的高峰期。種子萌發(fā)相關(guān)指標(biāo)(表2),隨著浸種溫度的升高,種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均逐漸提高,且35 ℃條件下的種子萌發(fā)指標(biāo)均顯著高于其他兩個溫度處理。以上結(jié)果表明,浸種溫度能不同程度地改變耳葉牛皮消種子的萌發(fā)進(jìn)程,其中,35 ℃浸種能顯著促進(jìn)種子萌發(fā)。

表2 浸種溫度對耳葉牛皮消種子萌發(fā)指標(biāo)的影響Table 2 Effects of soaking temperature on seed germination indexes of Cynanchum auriculatum

2.3 外源激素對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響

不同種類及濃度的外源激素處理下,耳葉牛皮消種子的萌發(fā)進(jìn)程見圖3。與對照相比,3種濃度的GA3處理后,種子萌發(fā)的高峰期均更為明顯,且有不同程度的提前;100 mg/L的GA3處理后,種子萌發(fā)起始時間比對照提前了1 d,200 mg/L和400 mg/L的GA3處理后,種子萌發(fā)起始時間與對照相同,但發(fā)芽終止時間明顯提前,由原來的大于等于第15天提前至第12天左右(圖3 a)。50 mg/L的6-BA處理后,種子萌發(fā)起始時間不變,萌發(fā)高峰期略有提前;100 mg/L的6-BA處理后,種子萌發(fā)起始時間提前了1 d,但萌發(fā)高峰期顯著推遲;200 mg/L的6-BA處理后,種子萌發(fā)起始時間推遲了3 d,萌發(fā)高峰期不明顯(圖3 b)。5 mg/L的IAA處理后,種子萌發(fā)起始時間不變,但隨著IAA濃度的提高,萌發(fā)起始時間逐漸推遲;3種濃度的IAA處理后,種子萌發(fā)高峰期均不明顯(圖3 c)。

圖3 外源激素對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響Fig.3 Effects of exogenous hormones on seed germination of Cynanchum auriculatum

如表3所示,GA3和IAA處理組,種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均隨著激素濃度的增加呈下降趨勢。在GA3處理組中,除400 mg/L濃度下的發(fā)芽率與對照無顯著差異外,其他濃度下種子的發(fā)芽指標(biāo)均顯著高于對照,當(dāng)GA3濃度為100 mg/L時,種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)分別較對照提高了20.2%、48.3%和57.3%。在IAA處理組中,5 mg/L濃度下種子的發(fā)芽率和發(fā)芽指數(shù)與對照無顯著差異,發(fā)芽勢顯著低于對照,10 mg/L和20 mg/L濃度下種子的發(fā)芽指標(biāo)均顯著低于對照。在6-BA處理組中,種子的發(fā)芽率和發(fā)芽指數(shù)均隨著6-BA濃度增加呈先上升后下降的趨勢,種子的發(fā)芽勢隨著激素濃度增加呈下降趨勢;當(dāng)6-BA濃度為100 mg/L時,種子的發(fā)芽率顯著高于對照,但發(fā)芽指數(shù)與對照無顯著差異,發(fā)芽勢顯著低于對照。以上結(jié)果表明,外源GA3能顯著促進(jìn)耳葉牛皮消種子萌發(fā),且當(dāng)GA3濃度為100 mg/L時,種子萌發(fā)效果最佳。

2.4 外源化學(xué)試劑對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響

不同種類及濃度的化學(xué)試劑處理下,耳葉牛皮消種子的萌發(fā)進(jìn)程見圖4,與對照相比,CaCl2處理對種子萌發(fā)進(jìn)程無顯著影響,種子萌發(fā)起始時間與對照相同,均為第3天;種子萌發(fā)高峰期較明顯,0.5 g/L和2 g/L濃度下萌發(fā)高峰期較對照提前了1 d,1 g/L濃度下萌發(fā)高峰期與對照相同(圖4 a)。當(dāng)KNO3濃度為6 g/L時,種子萌發(fā)起始時間較對照提前了1 d,萌發(fā)高峰期與對照相似;當(dāng)KNO3濃度為2 g/L和4 g/L時,種子萌發(fā)起始時間與對照相同,2 g/L濃度下萌發(fā)高峰期較對照提前了1 d,4 g/L濃度下萌發(fā)高峰期不明顯(圖4 b)。NaCl處理對種子萌發(fā)進(jìn)程有顯著影響,3種濃度下種子萌發(fā)起始時間均較對照提前了1 d,種子萌發(fā)高峰期均較為明顯,當(dāng)NaCl濃度為1 g/L時,萌發(fā)高峰期較對照提前了3 d(圖4 c)。

圖4 化學(xué)試劑對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響Fig.4 Effects of chemical reagents on seed germination of Cynanchum auriculatum

如表4所示,在CaCl2處理組中,種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均隨CaCl2濃度增加呈先上升后下降的趨勢,1 g/L濃度下種子發(fā)芽率與對照無顯著差異,發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)顯著高于對照。在KNO3處理組中,種子發(fā)芽率隨KNO3濃度增加呈上升趨勢,發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)隨試劑濃度增加呈先下降后上升的趨勢,當(dāng)KNO3濃度為6 g/L時,種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著高于對照,分別較對照提高了22.5%,25%和44.1%。在NaCl處理組中,種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均隨NaCl濃度增加呈下降趨勢,其中,1 g/L濃度下種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著高于對照,分別較對照提高了12.4%,30%和37.4%;但隨著NaCl濃度的增加,種子發(fā)芽相關(guān)指標(biāo)下降明顯,5 g/L和10 g/L濃度下,種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著低于對照。以上結(jié)果表明,特定種類及濃度的外源化學(xué)試劑浸種能促進(jìn)耳葉牛皮消種子萌發(fā),其中,6 g/L 的KNO3和1 g/L 的NaCl對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的促進(jìn)效果較好。

表4 化學(xué)試劑對耳葉牛皮消種子萌發(fā)指標(biāo)的影響Table 4 Effects of chemical reagents on seed germination indexes of Cynanchum auriculatum

2.5 激素和化學(xué)試劑組合處理對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響

從上述實(shí)驗(yàn)中選取對種子萌發(fā)效果較好的特定濃度激素和試劑,包括100 mg/L 的GA3、6 g/L 的KNO3和1 g/L 的NaCl,對耳葉牛皮消種子進(jìn)行組合處理,統(tǒng)計分析種子萌發(fā)相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示,各個組合處理下種子萌發(fā)起始時間和萌發(fā)高峰期均明顯早于對照組(圖5),種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著高于對照組(表5);各個組合處理之間也存在一定差異,綜合比較顯示,GA3+KNO3+NaCl組合處理下,種子萌發(fā)效果最佳。該組合處理與對照相比,種子萌發(fā)起始時間和萌發(fā)高峰期均提前了2 d;種子發(fā)芽勢由39.33%升高至62%,提高了57.6%;發(fā)芽率由58.67%升高至79.33%,提高了35.2%;發(fā)芽指數(shù)由4.43升高至8.62,提高了94.6%;發(fā)芽周期由原來的15 d以上縮短至12 d左右。

圖5 激素和化學(xué)試劑組合處理對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響Fig.5 Effects of combined treatment with hormone and chemical reagents on seed germination of Cynanchum auriculatum

表5 激素和化學(xué)試劑組合處理對耳葉牛皮消種子萌發(fā)指標(biāo)的影響Table 5 Effects of combined treatment with hormone and chemical reagents on seed germination indexes of Cynanchum auriculatum

3 討 論

在實(shí)際栽培種植中,由于耳葉牛皮消種子萌發(fā)比較緩慢,出苗整齊度欠佳且幼苗較瘦弱,因此較少采用播種的方式進(jìn)行種植。但種子繁殖是優(yōu)良種性保持和種質(zhì)資源保護(hù)的必要手段,優(yōu)化種子萌發(fā)條件進(jìn)而提高種子萌發(fā)活力對耳葉牛皮消的良種繁育和產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。

溫度是影響植物種子萌發(fā)的關(guān)鍵環(huán)境因子之一,本研究發(fā)現(xiàn),不同培養(yǎng)溫度對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響存在顯著差異,25 ℃下種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著高于15 ℃和35 ℃,表明耳葉牛皮消種子在萌發(fā)階段對溫度較敏感,過低或過高的溫度均不利于其萌發(fā)。這與耳葉牛皮消實(shí)際栽培中的播種條件較一致,江蘇濱海地區(qū)一般于每年4上中旬播種[10,14],此時環(huán)境溫度為20～25 ℃,是耳葉牛皮消種子的最佳萌發(fā)溫度。

浸種是生產(chǎn)中常用的種子催芽處理方法,溫度是影響浸種效果的關(guān)鍵因素之一,不同植物種子的最適浸種溫度不同。本研究結(jié)果表明,35 ℃浸種處理下耳葉牛皮消種子的萌發(fā)起始時間提早了1 d,種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著高于5 ℃和25 ℃浸種,這與李玉石等[15]對泰山白首烏(戟葉牛皮消)繁育技術(shù)的報道一致。推測溫水浸種能軟化耳葉牛皮消種皮,增加其通透性,進(jìn)而激活胚細(xì)胞活性,達(dá)到促進(jìn)發(fā)芽的效果。

植物激素在種子萌發(fā)階段發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,外源施加植物生長調(diào)節(jié)劑能有效干預(yù)種子的萌發(fā)。本研究發(fā)現(xiàn),不同種類的外源激素對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的影響差異較大。GA3能顯著促進(jìn)耳葉牛皮消種子萌發(fā),且100 mg/L的GA3對種子萌發(fā)的促進(jìn)效果最佳,隨著GA3濃度的升高,種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均呈下降趨勢。植物內(nèi)源赤霉素在種子萌發(fā)階段能打破休眠,促進(jìn)種子萌發(fā)[16]。本研究中外源施加的GA3能透過種皮進(jìn)入種子內(nèi)部,與內(nèi)源激素協(xié)同促進(jìn)耳葉牛皮消種子萌發(fā),但外源GA3濃度不宜過高,否則可能擾亂種子內(nèi)源激素動態(tài)平衡,抑制種子萌發(fā)。外源低濃度6-BA和IAA也能促進(jìn)耳葉牛皮消種子萌發(fā),但整體上不顯著,隨著處理濃度的升高,種子發(fā)芽指標(biāo)顯著降低,種子萌發(fā)受到抑制。這與何首烏[17]、多葉棘豆[18]、冰菜[19]和九龍山杜鵑[20]等植物種子萌發(fā)的研究結(jié)果相似,推測高濃度6-BA和IAA可能誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生了抑制種子萌發(fā)的代謝產(chǎn)物(如乙烯),或是抑制了一些能促進(jìn)種子萌發(fā)的酶的合成。

一定種類及濃度的化學(xué)試劑對耳葉牛皮消種子的萌發(fā)具有顯著改善作用。本研究中使用的耳葉牛皮消種子采自江蘇省濱?？h近海灘涂地區(qū),具有一定的耐鹽性,吳承東等[21]研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)NaCl濃度低于0.4%時,耳葉牛皮消種子的發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)等指標(biāo)與對照相比無顯著差異,表明耳葉牛皮消種子萌發(fā)過程對鹽脅迫有一定的耐受性。本研究發(fā)現(xiàn),NaCl濃度為1 g/L時,耳葉牛皮消種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)均顯著高于對照,而當(dāng)NaCl濃度高于5 g/L時,種子萌發(fā)受到了顯著抑制,表明低濃度NaCl處理能促進(jìn)耳葉牛皮消種子萌發(fā),高濃度NaCl處理會對種子萌發(fā)形成脅迫。KNO3對耳葉牛皮消種子萌發(fā)的改善效果優(yōu)于NaCl處理,本研究中2～6 g/L的KNO3處理均不同程度地促進(jìn)了耳葉牛皮消種子萌發(fā),其中,6 g/L的KNO3處理時,種子萌發(fā)效果最好。KNO3是使用較多的一種改善植物種子萌發(fā)的化學(xué)試劑,K+是植物細(xì)胞內(nèi)多種酶的激活劑,同時還能誘導(dǎo)多種植物內(nèi)源激素的合成并調(diào)控其活性[22],對植物種子萌發(fā)具有促進(jìn)作用,這在曼陀羅[23]、甜椒[24]和燕麥[25]等多種植物種子萌發(fā)的研究中得到了證實(shí)。

本研究還發(fā)現(xiàn),與單一因素處理相比,不同外源物質(zhì)組合處理能進(jìn)一步提升耳葉牛皮消種子萌發(fā)效果。100 mg/L GA3+6 g/L KNO3+1 g/L NaCl組合處理下,耳葉牛皮消種子萌發(fā)效果最佳,種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)分別較對照提高了35.2%,57.6%和94.6%,同時還縮短了發(fā)芽周期,提高了種子發(fā)芽整齊度。