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    快速冰凍切片技術在病理診斷中的應用

    2023-08-31 02:19:34黃秀華三明市沙縣區(qū)總醫(yī)院福建三明365050
    中國醫(yī)療器械信息 2023年13期

    黃秀華 三明市沙縣區(qū)總醫(yī)院 (福建 三明 365050)

    內(nèi)容提要: 目的:探討快速冰凍切片技術在病理診斷中的應用。方法:選取2020年1月~2022年1月在本院進行病理檢查的病理組織標本100例作為觀察對象,采取隨機分配的方式將標本分為觀察組與對照組,每組各50例,其中對照組實施常規(guī)石蠟切片技術(儀器為LEICA RM2245半自動輪轉式切片機,產(chǎn)地品牌:進口德國LEICA),觀察組實施快速冰凍切片技術(儀器為LEICA CM 1950冰凍切片機,產(chǎn)地品牌:進口德國LEICA)。對比不同切片技術下標本符合率及相關指標。結果:通過比較兩組間標本不同制作方式下的符合率,觀察組符合率和對照組區(qū)別不大;同時在相關指標中,觀察組清晰度、細胞結構以及細胞形態(tài)指數(shù)均與對照組常規(guī)切片指標相差不大,二者間差異不大,具有統(tǒng)計學意義,P>0.05。結論:在病理學臨床診斷中實施快速冰凍切片具有較高臨床應用價值。對比常規(guī)石蠟切片方式診斷過程速度快,從而針對患者病情做出快速反應;術中實行冰凍切片可避免患者實行二次手術,臨床醫(yī)生通過術中冰凍結果,選擇手術范圍,具有非常重要的意義。因此臨床中可根據(jù)患者的實際情況選擇是否實行快速冰凍切片。

    冰凍切片是病理切片技術之一,是通過冰凍技術快速制備病理切片,讓醫(yī)生在術中得到病理結果的過程。通??稍?0min之內(nèi)把組織迅速冷凍,經(jīng)過切片、染色、封片等環(huán)節(jié),制作出病理切片,病理醫(yī)生立刻作出診斷,提供給臨床醫(yī)生病理報告。冷凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法、二氧化碳冰凍切片法等,現(xiàn)階段臨床實用性最為廣泛地為低溫恒冷箱冰凍切片。在實施快速冰凍切片過程中,如果取材、制作未依照操作規(guī)范執(zhí)行,極易造成病理組織呈冰晶、褶皺、脫落等不良狀態(tài),使其清晰度及結構發(fā)生變化。因此技術人員需在制作期間特別注意不良因素造成的隱患,以保證標本清晰度與切片檢測質(zhì)量,為后續(xù)診斷和治療提供可靠的實驗室檢查依據(jù)[1-3]。本文選取本院病理組織標本100例作為觀察對象,通過為其實行快速冰凍切片技術檢查,進而明確其適用效果?,F(xiàn)報道如下。

    1.資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2020年1月~2022年1月在本院進行病理檢查的病理組織標本100例作為觀察對象,采取隨機分配的方式將標本分為觀察組與對照組,每組各50例。對照組實施常規(guī)石蠟切片技術處理,觀察組實施快速冰凍切片技術檢查。其中,觀察組樣本來源男性25例,女性25例,年齡35~45歲,平均(40.12±0.25)歲;對照組樣本來源男性35例,女性15例,年齡35~45歲,平均(40.18±0.15)歲。組間樣本一般資料無顯著差異,具有統(tǒng)計學意義。

    1.2 方法

    觀察組:實施快速冰凍切片技術(見圖1)。在標本選擇時需明確選取新鮮活體組織,將組織部位毛發(fā)以及脂肪剔除,注意規(guī)避壞死部位以及傷患出血位置的標本。標本大小需保持在1.5cm×1.5cm左右,標本厚度為<0.2cm,儀器選擇為LEICA CM 1950冰凍切片機(品牌:LEICA;產(chǎn)地:德國),待病理醫(yī)生取材后,用OCT包埋劑完全包裹組織,快速置于恒冷切片機內(nèi)進行冷凍,驟冷愈快愈好,避免冰晶產(chǎn)生,待組織凍透后利用LEICA CM 1950冰凍切片機切片,依照標本調(diào)節(jié)切片機溫度一般為-20~-25?C,切片厚度一般為6~7μm,細胞較質(zhì)密的組織如淋巴結、肝臟等組織,切片厚度為5μm。而后將其切片放置于玻璃片上,快速置于AF固定液1min左右,水洗,Harris蘇木素加溫染色1min,稍水洗,百分之一鹽酸酒精分化3S,稍水洗,氨水返藍,待其染色水洗呈藍色后,再滴入適量酸性染料水溶性伊紅Y,水洗后乙醇二甲苯脫水透明后用中性樹脂封片[4]。

    圖1.快速冰凍切片

    對照組:實施常規(guī)石蠟切片技術(見圖2)。儀器為LEICA RM2245半自動輪轉式切片機(品牌:LEICA;產(chǎn)地:德國)。技術人員接收患者病理標本,清點無誤后簽收,而后對標本實施脫水、包埋、切片、染色、封片等程序,均依照相關流程執(zhí)行,全程核對組織數(shù)量,注意脫水試劑的濃度,脫水試劑容積應為組織的5~10倍以上,保證脫水質(zhì)量,包埋石蠟過濾防止雜質(zhì),避免刀痕,切片刀鋒利,切片時用力均勻,厚度約3~5μm。Harris蘇木素染色5~10min,流水沖洗,1%鹽酸酒精分化5s左右,水洗,氨水返藍,待其染色水洗呈藍色后,酸性水溶性伊紅Y染1min左右。封固前須由梯度酒精脫水,二甲苯透明,濕封,且在此期間不可出現(xiàn)氣泡,不得有樹膠外溢。標簽須附著玻片左側,編號字跡清晰[5]。

    圖2.常規(guī)石蠟切片

    1.3 觀察指標與判定標準

    ①對比兩種切片檢測后診斷確診率。以兩組患者最終結果作為參照值,比較組間標本在不同方法下的診斷符合率,且明確組間良性腫瘤、惡性腫瘤以及交界性腫瘤占比情況,隨即作出組間數(shù)據(jù)對比。②兩種切片技術相關指標評分。請由本院兩名經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)生對不同技術下的切片質(zhì)量進行評測,總計分值為10分,分數(shù)越高,切片質(zhì)量越高。

    1.4 統(tǒng)計學分析

    通過統(tǒng)計學軟件SPSS23.0對患者群體進行數(shù)據(jù)研究,研究資料采用進行表述,相關數(shù)值進行t檢驗分析,同時兩組數(shù)值在P>0.05條件下,其可判斷為兩組間差異較大,具有統(tǒng)計學意義。

    2.結果

    2.1 對比兩種切片檢測后診斷確診率

    通過診斷結果可知,觀察組在實施冰凍切片技術檢測下,檢出良性腫瘤患者24例(48%)、惡性腫瘤20例(40%)、交界性腫瘤4例(8%),共計48例,檢出率96%。對照組在實施常規(guī)切片檢測下,檢出良性腫瘤患者24例(480%)、惡性腫瘤20例(40%)、交界性腫瘤4例(8%),共計48例,檢出率96%。兩組患者檢出效果無明顯差異,有統(tǒng)計學意義,P>0.05。

    2.2 兩種切片技術相關指標評分

    通過對兩組檢查數(shù)據(jù)結果對比可知,觀察組清晰度為(8.54±0.25)分;細胞結構為(8.13±1.34)分;細胞形態(tài)為(8.49±0.38)分。對照組清晰度為(8.53±0.18)分;細胞結構為(8.09±0.14)分;細胞形態(tài)為(8.89±0.18)分。兩組切片技術下三項指標無顯著差異,有統(tǒng)計學意義,P>0.05。

    3.討論

    在腫瘤診斷過程中病理診斷作為金標準,通過對患者實施手術切除、穿刺等方式,從而獲取病理標本,利用光學顯微鏡等配套儀器對標本實施動態(tài)觀察[6]。隨著現(xiàn)階段病理診斷的路徑不斷優(yōu)化,病理方法的不斷創(chuàng)新,常規(guī)石蠟切片活檢已不能滿足臨床需求,冰凍切片填補了常規(guī)石蠟切片速度慢的缺點[7]。冰凍切片是外科手術科室與病理科之間的一種緊急會診方式。通過手術切取一小塊組織,不經(jīng)過常規(guī)固定脫水石蠟包埋等冗繁程序后,通過特制的包埋劑,將組織凍結于-20?C左右,切成薄片并染色,進行鏡下觀察,以幫助手術確定組織良惡性,切除方式,切除范圍,確認不易肉眼辨認的組織等,進而能夠明確判定患者位置腫瘤惡性程度,可對患者確病情做到有效評估,便于制定后續(xù)治療方案。隨著現(xiàn)階段快速冷凍切片技術廣泛實施,其應用優(yōu)勢成效也逐步趨于明顯??焖俦鶅銮衅瑑?yōu)點在于:簡便,不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等即可進行切片;組織變化不大;能很好地保存脂肪和類脂等;能比較完好地保存各種抗原活性及酶類;用時短、速度快,可在短時間內(nèi)對手術標本進行病理診斷,進而確定臨床手術方案[8]。因此,冰凍切片技術通過對待檢部位進行冷凍,使其能夠快速達到檢測的適溫標準,從而使檢測流程更為便捷,讓患者能夠在短時間明確的診斷[9]。在使用器械上主要通過恒溫冷凍切片機完成操作,在儀器構造上主要由冷箱和切片機組成,其具有快速制冷、主動除霜、自行消毒以及負壓等作用。在功能作用上,其可通過物理降溫使形象組織標本在冷凍環(huán)境下,保持一定硬度進行切片。在實用優(yōu)勢上,該實施過程速度快,可以提高工作效率。同時,恒溫冷凍切片機可依照實際需求調(diào)整切片厚度,制備不同厚度病理切片,以適應不同實驗需求。同時,冷凍切片機通過微波、液氮等技術,可以針對組織標本快速凍結,確保組織原始形態(tài)、結構保存完好,制備切片質(zhì)量高,適用于各種臨床病理研究。臨床采用冷凍切片機技術操作便捷,僅需放置標本加以冷凍,即可制備高質(zhì)量切片樣本,適合大部分臨床應用。相較于傳統(tǒng)石蠟包埋技術,冷凍切片機無需依照有毒溶劑和昂貴設備,成本價格更低,更加環(huán)保。此外,該應用技術能夠在較短的時間內(nèi)向患者及家屬報告疾病發(fā)展情況,降低其心理壓力,縮短等待結果時長,有利于圍手術方案順利進行。不過在實施過程中仍需注意應注意安全,避免切傷手指,還應明確刀片角度和速度,確保切片質(zhì)量和厚度。以及在使用后應及時清洗維護,保證設備的正常使用壽命[10]。

    快速冰凍切片技術可以使檢測效率得以明顯提升,對病理診斷準確性得以有效保證。不過若不依照規(guī)范處理,則標本易成冰晶狀物質(zhì)或成褶皺脫落,進而導致細胞形態(tài)、結構及透明度受到影響。為此需依照臨床作業(yè)實施標準進行嚴格處理[11-13]。為能夠使患者標本保持在良好狀態(tài)下,應快速取材,在對患者標本選擇上應遵循標本取材規(guī)定,取材大小需保持在1.5cm×1.5cm左右,太大難以切完整,厚度>0.3cm,則冰凍費時,若標本溫度過低,則易影響患者標本保存質(zhì)量,出現(xiàn)脆硬現(xiàn)象。因此,在標本選取上需盡可能進行合理控制,確保切片質(zhì)量,注意觀察冷凍質(zhì)量,冷凍適溫需于0?C以下,并做好特殊環(huán)境的維持工作[13-16]。

    人體的體液分為混合液,含有蛋白質(zhì)、核酸、核糖等有機分子以及部分鹽類物質(zhì)。所以人體組織標本需于0?C受凍,進而要求技術人員需要熟練掌握冰凍技術,明確冰凍適溫、用時等相關標準,確??焖俦鶅黾夹g順利實施,同時針對切片厚度和質(zhì)量,技術人員應熟練掌握使用規(guī)定和適時流程。在確保切面干凈完整基礎上,染色后還需進行二次脫水處理,最后,在使用中性膠封膜過程中膠量不宜過多,防止膠片膠水溢出[17-20]。

    本研究結果可知,觀察組快速冰凍切片技術(儀器為LEICA CM 1950冰凍切片機,產(chǎn)地品牌:進口德國LEICA)符合檢出率與對照組常規(guī)切片技術(LEICA RM2245半自動輪轉式切片機,產(chǎn)地品牌:進口德國LEICA)無顯著差異,快速冰凍切片技術在檢出速度上優(yōu)于常規(guī)活檢,組間差異并不是很大,具有統(tǒng)計學意義,P<0.05。

    綜上所述,通過將快速冰凍切片技術應用于臨床病理診斷中,具有良好的檢出效果,優(yōu)點是速度快,可以為后續(xù)診治以及圍術治療提供有力依據(jù),常規(guī)和快速冰凍切片技術具有互補的作用,臨床中可根據(jù)患者的實際情況選擇檢測技術。

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