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    枯草芽孢桿菌對(duì)藜麥霜霉病的防治效果及其促生和改善土壤真菌群落作用

    2023-08-27 17:12:45秦楠周建波呂紅任璐陳亞蕾田淼殷輝趙曉軍
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年14期
    關(guān)鍵詞:藜麥枯草芽孢桿菌霜霉病

    秦楠 周建波 呂紅 任璐 陳亞蕾 田淼 殷輝 趙曉軍

    摘要:為研究枯草芽孢桿菌菌株LF17對(duì)藜麥霜霉病的防治效果及其促生和改善土壤真菌群落的作用,根施LF17菌劑進(jìn)而測(cè)定不同處理藜麥苗主要農(nóng)藝性狀指標(biāo)(莖長(zhǎng)、根長(zhǎng)、鮮質(zhì)量、干質(zhì)量等);采用宏基因組測(cè)序技術(shù)分析不同處理的真菌群落結(jié)構(gòu);通過田間噴施LF17菌劑研究其對(duì)霜霉病的防治效果。結(jié)果表明,處理2的藜麥苗鮮質(zhì)量和莖長(zhǎng)分別比對(duì)照提高54.5%、24.2%,穗長(zhǎng)和千粒質(zhì)量分別比對(duì)照提高20.4%、29.1%。宏基因組分析結(jié)果表明,處理A、處理B與對(duì)照共產(chǎn)生751個(gè)OTUs,其中A與B共有的OTU數(shù)最高;A與B在科與屬水平存在差異,A、B與對(duì)照相比提高了Plectosphaerellaceae、Pyronemataceae等的相對(duì)豐度,降低了Conocybe、Preussia、Stilbella、Fusarium等的相對(duì)豐度;聚類分析表明A、B與對(duì)照的群落組成有明顯差異,說明施用LF17菌劑可以改變土壤中真菌的群落結(jié)構(gòu),降低土壤中病原菌基數(shù)。田間試驗(yàn)表明LF17菌劑對(duì)霜霉病的防效為59.59%,顯著高于烯酰嗎啉、霜霉威鹽酸鹽等藥劑。本研究表明枯草芽孢桿菌LF17對(duì)藜麥具有促生作用且對(duì)藜麥霜霉病有良好的防治效果。

    關(guān)鍵詞:枯草芽孢桿菌;藜麥;霜霉?。淮偕?;田間防治

    中圖分類號(hào):S435.129文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1002-1302(2023)14-0159-05

    藜麥(Chenopodium quinoa)為藜屬的一年生雙子葉植物,其單體作物即可滿足人體所需的全部營(yíng)養(yǎng),是聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO)推薦的全營(yíng)養(yǎng)食品[1-2]。我國(guó)藜麥產(chǎn)業(yè)起步較晚,2014年以來,在我國(guó)的山西、青海、甘肅、河北等省份開始規(guī)?;N植。然而,隨著藜麥大面積連作,霜霉病成為生產(chǎn)中的重要病害,嚴(yán)重制約了藜麥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[3]。藜麥霜霉病致病菌為Peronospora variabilis,致使葉片枯黃脫落,嚴(yán)重地塊發(fā)病率達(dá)95%,減產(chǎn)約40%[3]。目前,化學(xué)藥劑是常用防治措施,但防治手段單一容易導(dǎo)致抗藥性、生態(tài)環(huán)境惡化等問題。因此,探索生物防治藜麥霜霉病的方法顯得尤為重要。

    芽孢桿菌是重要的生防資源,這類細(xì)菌具有抑制多種植物病原菌的能力,受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究和關(guān)注[4-6]。迄今,國(guó)內(nèi)外研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)藜麥種子中有生防作用的芽孢桿菌最多,包括好氧芽孢桿菌(Bacillus aerophilus)、解淀粉芽孢桿菌(B. amyloliquefaciens)、南海芽孢桿菌(B. australimaris)、短小芽孢桿菌(B. pumilus)、枯草芽孢桿菌(B. subtilis)、貝萊斯芽孢桿菌(B. velezensis)。2019年,徐瑛等發(fā)現(xiàn)B. amyloliquefaciens菌株11B91能促進(jìn)藜麥生長(zhǎng),增加其根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)及鮮質(zhì)量[7]。2022年,趙富清等研究表明B. velezensis菌株LMJB-14的發(fā)酵液浸種有助于促進(jìn)藜麥種子萌發(fā)[8]。

    目前,鮮有關(guān)于藜麥霜霉病生物防治的研究;但是有研究表明生防菌可以用來防治其他作物的霜霉?。?-12]。已篩選出B. amyloliquefaciens、B. megaterium對(duì)葡萄霜霉病菌有抑制作用[10]。田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)B. subtilis(菌株B-FS01)的可濕性粉劑對(duì)葡萄霜霉病具有良好的田間應(yīng)用前景,防效與72%霜脲氰·錳鋅可濕性粉劑相當(dāng)[11]。因此,探索B. subtilis對(duì)藜麥霜霉病的促生防病作用對(duì)生產(chǎn)有著重要的現(xiàn)實(shí)和理論意義。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試生防菌株為1×109 CFU/mL枯草芽孢桿菌水劑(LF17),由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所植物病害研究室提供。

    供試藜麥種子為稼祺505,由山西農(nóng)谷稼祺種業(yè)有限公司提供。

    供試化學(xué)藥劑:供試藥劑名稱、藥劑類型和使用劑量如表1所示。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 枯草芽孢桿菌(LF17)對(duì)藜麥的促生測(cè)定

    2020年4月8日,在山西農(nóng)業(yè)大學(xué)東陽(yáng)試驗(yàn)基地溫室中,放置180個(gè)內(nèi)徑20 cm的盆缽,每行(20盆)為 1個(gè)小區(qū),共設(shè)置3個(gè)處理,3次重復(fù)。每盆中播種藜麥種子(稼祺505)3~5粒,待出苗后定植,在處理組藜麥幼苗周圍分別均勻根施枯草芽孢桿菌(LF17)菌劑10 mL(處理1)、20 mL(處理2),以噴施20 mL清水處理作為空白對(duì)照。每7 d根施1次,共施3次,分別于30 d后將藜麥苗連根挖出,清洗晾干,分別統(tǒng)計(jì)藜麥苗莖長(zhǎng)、根長(zhǎng)、鮮質(zhì)量及干質(zhì)量,120 d后統(tǒng)計(jì)藜麥穗長(zhǎng)和千粒質(zhì)量。

    1.2.2 枯草芽孢桿菌(LF17)對(duì)藜麥田根圍土壤真菌群落的影響

    2022年6月8日,對(duì)盆栽藜麥60 d藜麥苗根施LF17菌劑20 mL(A)、菌劑LF17發(fā)酵液10 mL(B),以根施20 mL清水作空白對(duì)照,每隔7 d根施1次,共3次。30 d后隨機(jī)選取藜麥苗10株,除去地表層雜物,采集藜麥根系,將根系裝入塑料袋,回實(shí)驗(yàn)室后抖落根系附著土壤約10 g。移去表層土壤,采集藜麥根部周圍土壤,每個(gè)處理采集20份土樣、充分混勻,用于土壤真菌群落結(jié)構(gòu)的分析。提取樣品的總DNA并通過Mini Dorp測(cè)定樣品DNA的濃度及純度后,PCR擴(kuò)增ITS1基因[生工生物工程(上海)股份有限公司]。

    1.2.3 枯草芽孢桿菌(LF17)和化學(xué)藥劑對(duì)藜麥霜霉病的田間防效試驗(yàn)

    2022年7月8日,在山西省忻州市五臺(tái)縣靈境鄉(xiāng)靈境村的露地藜麥田進(jìn)行,試驗(yàn)地面積為 405 m2,周邊藜麥種植面積約 66 700 m2。試驗(yàn)地土壤偏堿性,肥力較高,澆水便利,管理水平較好。調(diào)查方法:本試驗(yàn)小區(qū)面積為15 m2,每小區(qū)用藥量為 1.25 L;以噴施等量清水處理作為空白對(duì)照,共設(shè)置 9個(gè)處理,3次重復(fù),每隔 7 d 用藥1次,連續(xù)用藥3次。末次藥后7 d調(diào)查發(fā)病情況,記載每張葉片的病級(jí)。嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0級(jí):整張葉片無病斑;1級(jí):病斑面積占葉片面積的1%~5%;3級(jí):病斑面積占葉片面積的6%~10%;5級(jí):病斑面積占葉片面積的11%~25%;7級(jí):病斑面積占葉片面積的26%~50%;9級(jí):病斑面積占葉片面積的51%以上。計(jì)算病情指數(shù)及防治效果。

    病情指數(shù)=[∑(各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值)/調(diào)查總?cè)~數(shù)×9】×100;

    防治效果=[(對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/對(duì)照區(qū)病情指數(shù)】×100%。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    將測(cè)序得到的原始序列進(jìn)行拼接、去除嵌合體后得到高質(zhì)量序列,根據(jù)序列97%的相似度,使用Usearch軟件對(duì)有效序列進(jìn)行聚類分析、劃分多個(gè)OTU,進(jìn)而進(jìn)行序列比對(duì)并獲得真菌組成。最后構(gòu)建物種豐度表、繪制群落結(jié)構(gòu)圖及層次聚類樹(QIIME軟件)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 枯草芽孢桿菌(LF17)對(duì)藜麥的促生作用

    2.1.1 對(duì)藜麥苗莖長(zhǎng)、根長(zhǎng)、鮮質(zhì)量及干質(zhì)量的影響

    根施枯草芽孢桿菌(LF17)30 d后,對(duì)照組、處理1、處理2的莖長(zhǎng)分別為12.26、13.46、15.23 cm,處理組和對(duì)照組之間差異顯著,處理2比對(duì)照提高24.2%(圖 1-A)。對(duì)照、處理1、處理2的鮮質(zhì)量分別為0.55、0.60、0.85 g,處理2與處理1、對(duì)照差異顯著,處理2比對(duì)照提高54.5%;對(duì)照、處理1、處理2干質(zhì)量分別為0.05、0.07、0.08 g,處理和對(duì)照差異不顯著(圖1-B)。

    2.1.2 對(duì)藜麥穗長(zhǎng)和千粒質(zhì)量的影響

    菌劑LF17施用120 d后,對(duì)照、處理1、處理2穗長(zhǎng)分別為98.00、105.33、118.00 cm,處理2和對(duì)照相比差異顯著,處理2比對(duì)照提高20.4%(圖2-A)。對(duì)照、處理1、處理2千粒質(zhì)量分別為78.01、85.34、100.65 g,三者之間差異顯著,處理2比對(duì)照提高29.0%(圖2-B)。

    2.2 枯草芽孢桿菌(LF17)對(duì)藜麥田土壤真菌群落的影響

    由圖3可知,本試驗(yàn)的測(cè)序量超過40 000讀長(zhǎng)時(shí)曲線趨于平緩,表明取樣合理、置信度高,測(cè)序深度可反映樣品的真菌群落結(jié)構(gòu)。

    本研究的3個(gè)處理(對(duì)照、處理A、處理B)共產(chǎn)生751個(gè)OTU,其中共有的OTU為148個(gè),占OTU總數(shù)的19.71%。3個(gè)處理的OTU數(shù)分別為366、478、412個(gè),特有OTU數(shù)依次為84、183、127個(gè)。兩兩共有(對(duì)照與處理A、對(duì)照與處理B、處理A與處理B)的OTU數(shù)依次為為220、210、223個(gè),處理A與處理B的共有OTU數(shù)最高(圖4)。說明施用LF17后豐富了土壤中真菌的群落結(jié)構(gòu)。

    不同處理土壤真菌群落在科水平上不同,豐度前5的科分別為織球殼科(Plectosphaerellaceae)、糞繡傘科(Bolbitiaceae)、毛球殼科(Lasiosphaeriaceae)、火絲菌科(Pyronemataceae)、被孢霉科(Mortierellaceae),在處理A、處理B和對(duì)照中這5類菌群所占比例分別為47.15%、15.38%、54.47%,其中Plectosphaerellaceae是藜麥田土壤中的主要優(yōu)勢(shì)菌群。結(jié)果表明施用生物菌劑LF17顯著降低了Bolbitiaceae、Lasiosphaeriaceae、莢胞腔菌科(Sporormiaceae)、從赤殼科(Nectriaceae)的相對(duì)豐度(圖5)。

    不同處理土壤真菌群落在屬水平上不同,結(jié)果表明施用生物菌劑LF17顯著降低了錐蓋傘屬(Conocybe)、柄孢殼屬(Podospora)、光黑殼屬(Preussia)、輪枝菌屬(Gibellulopsis)、束梗孢屬(Stilbella)、鐮刀菌屬(Fusarium)、枝頂孢霉屬(Acremonium)、裂殼屬(Schizothecium)、赤霉菌屬(Gibberella)的相對(duì)豐度;其中Conocybe、Preussia、Stilbella降幅最大,分別為26.40%~26.66%、9.08%~9.11%、7.06%~7.18%。同時(shí),施用生物菌劑LF17顯著提高了油壺菌屬(Olpidium)、枝孢屬(Cladosporium)、短柄霉屬(Aureobasidium)的相對(duì)豐度(圖6)。

    結(jié)果表明,不同處理的土壤真菌群落分為2支,A與B的真菌群落間遺傳距離較近,群落組成相似度高,而對(duì)照則獨(dú)立為一支。說明生物菌劑LF17可改變藜麥田土壤中真菌的群落結(jié)構(gòu),而添加生物菌劑LF17可使藜麥田土壤中的真菌群落向穩(wěn)定和多樣化方向發(fā)展(圖7)。

    2.3 枯草芽孢桿菌(LF17)和化學(xué)藥劑對(duì)藜麥霜霉病的防治效果

    供試8種藥劑對(duì)藜麥霜霉病田間防效為33.23%~59.59%,其中枯草芽孢桿菌LF17(60 mL)和甲霜霜霉威的防效較高,分別為59.59%和50.28%,二者無顯著差異;枯草芽孢桿菌LF17(60 mL)與其他6種藥劑相比差異顯著;枯草芽孢桿菌LF17(30 mL)和枯草芽孢桿菌可濕性粉劑防效較低,分別為33.23%、33.33%,二者無顯著差異(圖8)。

    3 結(jié)論與討論

    生物量是評(píng)價(jià)植株健康狀況最直觀的指標(biāo)之一。2022年,李迪秦等的研究表明枯草芽孢桿菌可增強(qiáng)煙草根系體積和根系活力,提高煙草株高、莖圍、葉面積等農(nóng)藝性狀指標(biāo)[12]。本研究表明根施菌劑LF17后,處理2的藜麥苗鮮質(zhì)量和莖長(zhǎng)比對(duì)照提高54.5%和24.2%,說明菌劑LF17對(duì)藜麥有促生作用。此外,本研究發(fā)現(xiàn)處理2的穗長(zhǎng)和千粒質(zhì)量分別比對(duì)照提高20.4%、29.1%;表明枯草芽孢桿菌能促進(jìn)藜麥的生長(zhǎng)。

    土壤真菌在農(nóng)業(yè)植物病害的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要角色。董艷輝等的研究表明,重茬使根際土壤微生物降低、病菌數(shù)量增多,導(dǎo)致藜麥病害逐年加重[13]。因此,調(diào)節(jié)土壤真菌群落,是控制藜麥病害的方法之一。李迪秦等發(fā)現(xiàn),枯草芽孢桿菌可提高土壤細(xì)菌和放線菌的種群數(shù)量,降低真菌的種群數(shù)量[12]。本研究通過根施菌劑LF17,減少了土壤中病原菌(Fusarium、Acremonium等)基數(shù),進(jìn)而控制藜麥病害發(fā)生[14]。此外,施用菌劑LF17可增加藜麥田土壤中真菌的種類和數(shù)量,使真菌群落多樣化。

    生產(chǎn)上主要使用化學(xué)藥劑防治霜霉病,防治措施單一化容易導(dǎo)致病菌抗藥性出現(xiàn)。利用生物菌劑來防治霜霉病安全有效,且不易產(chǎn)生抗藥性。目前生物菌劑已被應(yīng)用于黃瓜、葡萄等作物。張淑梅等發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌 ZH-8菌劑對(duì)黃瓜霜霉病的防效為69.12%[15];申紅妙等發(fā)現(xiàn),噴霧枯草芽孢桿菌JL4菌懸液3 d后對(duì)葡萄霜霉病的防效為88.0%[16];李戌彥等報(bào)道噴施枯草芽孢桿菌生物菌劑能夠降低葡萄葉片的SOD和CAT活性,提高葉片對(duì)霜霉病的防治效果[17]。本研究發(fā)現(xiàn)菌劑LF17對(duì)藜麥霜霉病的防治效果為59.59%,說明可以用菌劑LF17防治藜麥霜霉病。

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    收稿日期:2022-09-13

    基金項(xiàng)目:山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院優(yōu)秀青年基金(編號(hào):YCX2020YQ22);山西省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(編號(hào):2022ZDYF117);山西農(nóng)業(yè)大學(xué)“特”“優(yōu)”農(nóng)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展科技支撐工程課題(編號(hào):TYGC-23);山西省基礎(chǔ)研究計(jì)劃面上項(xiàng)目(編號(hào):20210302123419)。

    作者簡(jiǎn)介:秦 楠(1987—),男,山西長(zhǎng)治人,碩士,助理研究員,從事雜糧作物病害綠色防控研究。E-mail:372909027@qq.com。

    通信作者:趙曉軍,博士,研究員,從事果蔬、雜糧作物病害病原學(xué)、病原菌抗藥性及綜合治理研究,E-mail:zhaoxiaojun0218@163.com;殷 輝,碩士,副研究員,從事雜糧作物病害研究,E-mail:yinhui0806@ 163.com。

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