HR-HPV陽(yáng)性宮頸癌患者免疫細(xì)胞與炎癥因子特征分析

張瀟瀟,王 俊,馬苗苗,石義祥,武 地,李 寧△

1.陜西省西安高新醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西西安 710075;2.陜西省西安市第五醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西西安 710082;3.陜西省商洛市山陽(yáng)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西商洛 726400

宮頸癌發(fā)生率在我國(guó)女性惡性腫瘤中居第6位,每年約有3.4萬(wàn)例患者因?qū)m頸癌死亡,且近年來(lái)宮頸癌發(fā)病年齡有年輕化趨勢(shì)[1]。宮頸癌是極少數(shù)病因可以明確的惡性腫瘤,其中高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)持續(xù)感染能夠促使宮頸上皮微環(huán)境的重塑,影響癌基因表達(dá),使陰道菌群失衡,導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,是宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)發(fā)展為宮頸癌的重要風(fēng)險(xiǎn)因素[2]。T細(xì)胞亞群與惡性腫瘤的發(fā)生明顯相關(guān),根據(jù)T細(xì)胞功能,可將其分為輔助性T細(xì)胞(Th)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)等類(lèi)型。目前認(rèn)為,宮頸癌患者往往存在T細(xì)胞組成方面的變化及功能失調(diào),包括Th1/Th2、Th17/Treg的變化,且與患者病情進(jìn)展具有一定的關(guān)系[3]。本研究擬通過(guò)分析HR-HPV陽(yáng)性宮頸癌患者的免疫細(xì)胞和炎癥因子特征,了解HR-HPV在宮頸癌中的作用機(jī)制,以期為宮頸癌患者的細(xì)胞免疫治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年10月至2021年10月陜西省西安市高新醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱(chēng)本院)收治的宮頸癌患者196例作為宮頸癌組,年齡37～65歲,平均(49.36±7.12)歲;鱗癌154例(鱗癌組),腺癌42例(腺癌組);國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期中,Ⅰ期25例,Ⅱ期67例,Ⅲ期92例,Ⅳ期12例。選擇同期收治的CIN患者40例作為CIN組,年齡35～64歲,平均(48.95±6.98)歲;CINⅡ級(jí)24例,CINⅢ級(jí)16例。另選取同期慢性宮頸炎患者40例作為對(duì)照組,年齡34～62歲,平均(48.85±8.10)歲。3組年齡比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn):均經(jīng)病理檢查首次確診[4];病歷資料完整;無(wú)放化療史。排除標(biāo)準(zhǔn):近期有激素或免疫治療史;合并高血壓、感染性疾病、糖尿病、心血管疾病等疾病;合并免疫功能異常;合并其他良惡性腫瘤;處于妊娠期或哺乳期。所有研究對(duì)象均自愿參與本研究,并簽署知情同意書(shū),本研究通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 (1)采集所有研究對(duì)象入院后空腹靜脈血5 mL,使用美國(guó)貝克曼CytoFLEX流式細(xì)胞儀檢測(cè)免疫細(xì)胞Treg、Th17、Th17/Treg、Th1、Th2及Th1/Th2水平。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)白細(xì)胞介素(IL)-17、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、干擾素-γ(IFN-γ)、IL-4水平。試劑盒均由深圳市達(dá)科為生物工程有限公司提供。(2)宮頸癌組患者入院后均進(jìn)行HR-HPV檢測(cè),患者取膀胱截石位,暴露宮頸口后,采用HPV專(zhuān)用毛刷置于患者宮頸管,順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5～10圈取宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本,立即送檢。HR-HPV檢測(cè)試劑盒由上海博湖生物科技有限公司提供,所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。記錄宮頸癌患者HR-HPV陽(yáng)性率。

1.3觀(guān)察指標(biāo) (1)比較3組研究對(duì)象的免疫細(xì)胞、炎癥因子水平。(2)根據(jù)組織學(xué)類(lèi)型的不同,將宮頸癌組患者進(jìn)一步分為鱗癌組和腺癌組,比較鱗癌組和腺癌組的免疫細(xì)胞、炎癥因子水平。(3)根據(jù)宮頸癌組患者是否合并HR-HPV感染,分為陽(yáng)性組(167例)和陰性組(29例),比較陽(yáng)性組和陰性組患者的免疫細(xì)胞、炎癥因子水平。

2 結(jié) 果

2.13組免疫細(xì)胞水平比較 宮頸癌組Treg、Th17、Th17/Treg、Th1、Th2水平明顯高于CIN組和對(duì)照組,Th1/Th2水平明顯低于CIN組和對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CIN組Treg、Th17、Th17/Treg、Th1、Th2水平明顯高于對(duì)照組,Th1/Th2水平明顯低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組免疫細(xì)胞水平比較

2.23組炎癥因子水平比較 宮頸癌組IL-17、TGF-β、IFN-γ、IL-4水平明顯高于CIN組和對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CIN組IL-17、TGF-β、IFN-γ、IL-4水平明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 3組炎癥因子水平比較

2.3鱗癌組與腺癌組免疫細(xì)胞水平比較 鱗癌組與腺癌組Treg、Th17、Th17/Treg、Th1、Th2及Th1/Th2水平比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 鱗癌組與腺癌組免疫細(xì)胞水平比較

2.4鱗癌組與腺癌組炎癥因子水平比較 鱗癌組與腺癌組IL-17、TGF-β、IFN-γ及IL-4水平比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 鱗癌組與腺癌組炎癥因子水平比較

2.5陽(yáng)性組與陰性組免疫細(xì)胞水平比較 陽(yáng)性組Treg、Th17、Th17/Treg、Th2水平明顯高于陰性組,Th1/Th2水平明顯低于陰性組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組Th1水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表5。

表5 陽(yáng)性組與陰性組免疫細(xì)胞水平比較

2.6陽(yáng)性組與陰性組炎癥因子水平比較 陽(yáng)性組IL-17、TGF-β、IL-4水平明顯高于陰性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組IFN-γ水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

表6 陽(yáng)性組與陰性組炎癥因子水平比較

2.7HR-HPV感染與免疫細(xì)胞、炎癥因子水平的相關(guān)性 宮頸癌患者HR-HPV感染與Treg、Th17、Th17/Treg、Th2、IL-17、TGF-β、IL-4水平呈正相關(guān)(r=0.400、0.322、0.312、0.361、0.337、0.351、0.322,P<0.05),與Th1/Th2水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.365,P<0.05),與Th1、IFN-γ水平無(wú)相關(guān)性(r=-0.045、-0.038,P=0.176)。

3 討 論

全球?qū)m頸癌發(fā)生率約為13.1/100 000,是導(dǎo)致女性死亡的主要惡性腫瘤,目前研究認(rèn)為,CIN可階段性進(jìn)展為宮頸癌,這一過(guò)程持續(xù)可達(dá)20年[5]。其中HR-HPV屬于雙鏈環(huán)形DNA病毒,以游離型等多種方式存在于機(jī)體細(xì)胞中,主要包括HPV16、18型等類(lèi)型,HR-HPV陽(yáng)性是CIN進(jìn)展為宮頸癌的主要風(fēng)險(xiǎn)因素[6]。研究發(fā)現(xiàn),宮頸組織感染HR-HPV后,HR-HPV能夠通過(guò)將E6等致癌基因整合至宿主DNA,增加E6等癌蛋白的表達(dá),并通過(guò)與抑癌基因p53、p16等相互作用,促使抑癌基因活性減低,癌細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng),最終導(dǎo)致癌性病變的發(fā)生[2];HR-HPV可造成宮頸組織的持續(xù)性感染,使炎癥因子表達(dá)受到影響,促使免疫逃逸等發(fā)生,進(jìn)而導(dǎo)致患者病情的進(jìn)展[7]。但是目前關(guān)于HR-HPV對(duì)宮頸癌患者免疫功能的影響機(jī)制尚存在一定爭(zhēng)議,通過(guò)分析HR-HPV陽(yáng)性宮頸癌患者免疫細(xì)胞和炎癥因子特征,可為宮頸癌患者的早期治療提供參考。

Th17可介導(dǎo)IL-17等炎癥因子的分泌,加強(qiáng)機(jī)體炎癥反應(yīng),促使腫瘤新生血管的生成,加快患者病情的進(jìn)展[8]。有研究發(fā)現(xiàn),Th17與宮頸癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有一定的相關(guān)性[9]。Treg可介導(dǎo)TGF-β等的表達(dá),在機(jī)體免疫耐受調(diào)控中起到重要作用,有助于免疫逃逸[10]。目前認(rèn)為,下調(diào)宮頸癌患者Treg的表達(dá),有助于患者病情的改善[11]。Th17和Treg相互制約、相互調(diào)節(jié),阻礙機(jī)體過(guò)度免疫反應(yīng)的發(fā)生,其中Th17/Treg上升提示機(jī)體處于免疫失衡狀態(tài)[12]。本研究發(fā)現(xiàn),Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、TGF-β水平在宮頸癌組、CIN組及對(duì)照組中逐漸下降,不同組織學(xué)類(lèi)型宮頸癌患者的免疫細(xì)胞和炎癥因子水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而HR-HPV陽(yáng)性宮頸癌患者Treg、Th17、Th17/Treg、IL-17、TGF-β水平均明顯高于HR-HPV陰性患者,且宮頸癌患者HR-HPV感染與Treg、Th17、Th17/Treg、IL-17、TGF-β水平呈正相關(guān)(P<0.05)。提示隨著宮頸病變患者病情的進(jìn)展,機(jī)體炎癥反應(yīng)增強(qiáng),Th17/Treg失衡逐漸加重,而HR-HPV陽(yáng)性可加劇Th17/Treg失衡,進(jìn)而可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力,促使免疫逃逸的發(fā)生。這可能是由于HR-HPV可通過(guò)促使Rb等宿主基因活性的喪失,阻礙p16與細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶4/6的相互作用,進(jìn)而使p16過(guò)表達(dá),機(jī)體免疫應(yīng)答下調(diào),促使Th17/Treg等的變化[13-14]。

Th1主要介導(dǎo)IFN-γ等炎癥因子的表達(dá),能夠增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活性,提高一氧化氮水平,增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答,促進(jìn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的增殖,進(jìn)而提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用[15]。Th2可通過(guò)介導(dǎo)IL-4等炎癥因子的表達(dá),抑制Th1生成,降低自然殺傷細(xì)胞活性,阻礙機(jī)體免疫活性[16]。有研究發(fā)現(xiàn),機(jī)體處于CIN時(shí),即可發(fā)生明顯的Th1/Th2失衡[17]。本研究發(fā)現(xiàn),Th2、IFN-γ、IL-4水平在宮頸癌組、CIN組和對(duì)照組逐漸下降,Th1/Th2逐漸上升,提示隨著宮頸病變的進(jìn)展,機(jī)體Th1/Th2免疫功能紊亂加重。本研究發(fā)現(xiàn),陽(yáng)性組和陰性組Th1、IFN-γ水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但是陽(yáng)性組Th2、IL-4水平明顯高于陰性組,Th1/Th2明顯低于陰性組,且宮頸癌患者HR-HPV感染與Th2、IL-4水平呈正相關(guān)(P<0.05),與Th1/Th2呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。這可能是由于在腫瘤微環(huán)境中,HR-HPV感染可經(jīng)由52L1等短肽通路促使T淋巴細(xì)胞功能受損,創(chuàng)造支持性感染后微環(huán)境,影響宮頸免疫狀態(tài),干擾機(jī)體的免疫應(yīng)答,促使細(xì)胞免疫缺陷的發(fā)生,導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制加重,使宮頸癌患者的免疫功能向Th2偏移,Th2水平上升[18-19]。

綜上所述,宮頸癌患者存在一定的Th17/Treg、Th1/Th2紊亂,其中HR-HPV陽(yáng)性可進(jìn)一步促使患者Th17/Treg、Th1/Th2失衡。提示通過(guò)改善HR-HPV陽(yáng)性宮頸癌患者的免疫微環(huán)境,有助于患者的治療。但是本研究仍存在一定局限,包括未對(duì)宮頸癌患者HR-HPV感染類(lèi)型進(jìn)行檢測(cè),未能明確HR-HPV感染類(lèi)型對(duì)宮頸癌患者免疫功能的影響;本研究為單中心研究,未來(lái)仍需大樣本、多中心分析以明確結(jié)論。