NO熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果糖代謝及基因表達(dá)的影響

王雪，李乾，王新宇，李慧，畢瑩，劉彩紅，古麗丹·塔勒達(dá)吾，劉鳳蘭，王靜*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆林業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)林研究所，新疆 烏魯木齊 830063）

枸杞（Lycium barbarum L.）是茄科枸杞屬多年生落葉灌木，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)，如多糖、類胡蘿卜素、類黃酮、維生素和氨基酸等，有助于清潔肝臟、明亮眼睛、增強(qiáng)氣力、提高免疫力、預(yù)防心血管疾病和癌癥，因此它也被稱為“超級(jí)食品”[1]。由于新鮮枸杞皮薄且易損，因此在采摘和儲(chǔ)運(yùn)過程中，非常容易受到外力作用，導(dǎo)致細(xì)胞膜破壞，果膠等大分子物質(zhì)快速降解，同時(shí)，微生物入侵后極易引起霉變和損失。新鮮枸杞在儲(chǔ)運(yùn)階段出果率差導(dǎo)致貨架期過短，失去食用價(jià)值，影響鮮枸杞產(chǎn)業(yè)健康持續(xù)發(fā)展[2]。因此，尋找具有成本效益且高效的方法來延長新鮮枸杞的貯藏期并改善其貯藏品質(zhì)顯得尤為重要。

目前，枸杞鮮果采后保鮮主要集中于水楊酸處理[3]、水楊酸結(jié)合氣調(diào)[4]、冰溫[5]、預(yù)處理結(jié)合氣調(diào)包裝[6]、殼聚糖涂膜[7]和褪黑素處理[8]等，但采用NO 熏蒸枸杞鮮果保鮮的研究較少。

一氧化氮（NO）是一種生物活性分子，可以抑制水果在貯藏期間的呼吸速度，影響氧化物質(zhì)的代謝、糖類物質(zhì)的代謝、膜脂質(zhì)過氧化和功能成分的積累等，并可以調(diào)節(jié)水果和蔬菜的生長、成熟和抗病性等[9-11]。研究表明，用NO 處理可以抑制乙烯的產(chǎn)生和呼吸速率，推遲桃子的成熟[12]，并可抑制哈密瓜果實(shí)冷害的發(fā)生[13]；抑制“雨花露”水蜜桃果實(shí)膜脂過氧化，緩解軟化速率，改善常溫貯藏品質(zhì)[14]；控制木納格葡萄果肉的軟化程度和水分的流失，減慢其衰老速度[15]；減少蓮霧果實(shí)收獲后的絮狀綿軟速度，延長果實(shí)的貨架期[16]。NO 處理對(duì)糖代謝也存在影響，張美姿[17]研究發(fā)現(xiàn)，NO 處理顯著降低了冷藏枇杷果實(shí)中分解方向的相關(guān)酶[酸性轉(zhuǎn)化酶（acid invertase，AI）、中性轉(zhuǎn)化酶（neutral invertase，NI）]活力上升，并降低了合成方向的相關(guān)酶[蔗糖磷酸合成酶（sucrose phosphate synthase，SPS）和蔗糖合成酶（sucrose synthetase，SS）]的活性下降，降低了可溶性糖含量下降的速度，延緩了木質(zhì)化劣變的速度。經(jīng)NO 處理的肥城桃果實(shí)在貯藏前期AI、NI、己糖激酶（hexokinase，HK）、分解方向相關(guān)酶的活力水平高于對(duì)照，為呼吸躍變提供能量；貯藏后期處理果實(shí)的SPS活力高于對(duì)照，降低已糖激酶和磷酸葡糖異構(gòu)酶的活力，同時(shí)下調(diào)已糖激酶的基因表達(dá)，從而限制果實(shí)糖酵解速率，延長貯藏期[18]。孫振[19]以肥城桃為原料，發(fā)現(xiàn)NO 處理可以有效延緩糖類物質(zhì)相互之間的轉(zhuǎn)換；提高SPS活力，對(duì)AI、NI 和SS 活力的抑制有時(shí)間效應(yīng)。

糖代謝是多種代謝的中心，在果實(shí)軟化中起著重要作用[9]，并與果實(shí)的后熟軟化顯著相關(guān)[20-21]。維持糖代謝平衡，有利于保持果實(shí)細(xì)胞的膨壓和細(xì)胞壁張力，從而延緩軟化[22]。有研究指出，植物中蔗糖合成與分解之間的平衡是合成酶和轉(zhuǎn)化酶協(xié)同作用的結(jié)果[23]。AI、NI、SS、SPS 共同調(diào)節(jié)蔗糖的積累與降解，與果實(shí)品質(zhì)形成、成熟衰老等密切相關(guān)[24]。張強(qiáng)等[25]研究發(fā)現(xiàn)，果實(shí)軟化在一定程度上歸因于糖代謝的積累，在哈密瓜果實(shí)成熟后軟化過程中，蔗糖、果糖和葡萄糖含量下降，蔗糖代謝也參與瓜果成熟后軟化。董黎梨[26]發(fā)現(xiàn)淀粉酶和轉(zhuǎn)化酶參與菠蘿蜜果實(shí)成熟軟化過程中糖代謝的反應(yīng)，并與淀粉、可溶性總糖、葡萄糖、果糖和蔗糖含量的變化相關(guān)。齊秀東等[22]研究表明，蘋果果實(shí)可以在低溫下保持糖分穩(wěn)定，平衡細(xì)胞滲透壓進(jìn)行自我防御，防止硬度降低，有效減少果實(shí)軟化，從而有效地保存和延長水果的新鮮程度。但NO 熏蒸枸杞鮮果對(duì)糖代謝影響的研究鮮見報(bào)道。

本試驗(yàn)采用99.9%的外源NO 熏蒸“寧杞七號(hào)”枸杞鮮果，研究其對(duì)冷藏枸杞鮮果中糖代謝及基因表達(dá)的影響，以期為將外源NO 熏蒸應(yīng)用于延緩枸杞鮮果軟化方面提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

“寧杞七號(hào)”枸杞：2019 年7 月3 日采摘自新疆博樂市精河縣托里鄉(xiāng)。

3，5-二硝基水楊酸：上海科豐實(shí)業(yè)有限公司；結(jié)晶酚：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、亞硫酸鈉、氯化鎂、蔗糖、硼砂：天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；碳酸鈉、巰基乙醇：天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；乙二胺四乙酸：天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司；曲拉通X-100、果糖：天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；尿苷二磷酸葡萄糖（uridine diphosphate glucose，UDPG）、R1200 總RNA 提取試劑盒：北京索萊寶科技有限公司；PrimeScript 1st stand cDNA 試劑盒：北京莊盟國際生物基因科技有限公司。所用試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

本試驗(yàn)所需主要儀器見表1。

表1 主要儀器設(shè)備及生產(chǎn)廠家Table 1 Main instruments and manufacturers

1.3 方法

1.3.1 枸杞鮮果的處理方法

枸杞鮮果帶果柄和萼片采摘，在當(dāng)?shù)乩鋷欤?.0±0.5）℃中預(yù)冷24 h，然后將其裝框，運(yùn)到新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)冷庫（3.0±0.5）℃中，選擇16 kg 無腐爛、霉變及機(jī)械損傷的新鮮枸杞作為試材（處理組和對(duì)照組各8 kg）。熏蒸罐在樣品處理前一天晚上用酒精密閉消毒12 h，并在熏蒸前4 h 打開使酒精味消散。在酒精味消失后，將熏蒸罐進(jìn)行抽真空處理，在體積26 L 的熏蒸罐內(nèi)注入99.9%純度的NO 標(biāo)準(zhǔn)氣體，使用300 μL/L NO 室溫熏蒸3 h，每個(gè)熏蒸罐處理新鮮枸杞2 kg。將處理后的枸杞裝入帶孔的塑料筐中，每筐約2 kg（少于塑料筐的三分之一），并在上方用報(bào)紙覆蓋，并立即放置3 ℃的低溫冷庫進(jìn)行貯藏；對(duì)照組不使用NO 進(jìn)行熏蒸，其余條件與處理組均相同。每6 d 取1 次樣，共7 次。

1.3.2 硬度測(cè)定

處理組和對(duì)照組隨機(jī)各取50 枚果實(shí)，使用質(zhì)構(gòu)儀測(cè)定枸杞硬度。全質(zhì)構(gòu)分析（texture profile analysis，TPA）；探頭：P/36 R 柱形探頭；測(cè)試目標(biāo)模式：應(yīng)變；壓縮程度：70%；測(cè)前速度：2 mm/s；測(cè)中速度：1 mm/s；測(cè)后速度：1 mm/s。

1.3.3 可溶性固形物含量測(cè)定

隨機(jī)取10 g 枸杞，打漿機(jī)打碎，將枸杞汁滴在手持折光儀測(cè)定可溶性固形物含量（%），每種濃度測(cè)定10 次，取平均值。

1.3.4 可溶性糖含量測(cè)定

采用蒽酮硫酸法[27]測(cè)定可溶性糖含量。

1.3.5 酸性轉(zhuǎn)化酶活力的測(cè)定

參考楊涓[23]的方法進(jìn)行測(cè)定，并稍作改動(dòng)。稱取0.5 g 枸杞果實(shí)，加入5 mL 預(yù)冷緩沖液，冰浴研磨至勻漿，12 000 r/min、4 ℃離心20 min，收集上清液；在沉淀中繼續(xù)加入4 mL 提取緩沖液，同等條件離心1 次，合并上清液并用提取緩沖液定容至10 mL，為酶提取液。

25 mL 試管中加入1 mL 酶提取液和1 mL 反應(yīng)液[1%蔗糖、0.1 mol/L 醋酸緩沖液（pH5.5）]，在34 ℃的水浴條件下使其充分反應(yīng)1 h，再加入1.5 mL 3，5-二硝基水楊酸溶液后，沸水浴5 min 終止反應(yīng)，并立即用冷水將其降至室溫（20±5）℃后定容至25 mL，充分搖勻后在540 nm 波長下測(cè)定吸光度；以經(jīng)過10 min 沸水浴的酶液作對(duì)照，上述步驟重復(fù)3 次，取平均值。

1.3.6 中性轉(zhuǎn)化酶活力的測(cè)定

參考楊涓[23]的方法進(jìn)行測(cè)定，并稍作改動(dòng)。酶提取液提取方法同1.3.5，測(cè)定時(shí)將酸性轉(zhuǎn)化酶反應(yīng)液[1%蔗糖、0.1 mol/L 醋酸緩沖液（pH5.5）]替換為pH7.5、濃度為0.1 mol/L 磷酸緩沖液[1%蔗糖、5 mmol/L MgCl2、1 mmol/L 乙二胺四乙酸（ethylene dia-mine tetra-acetie acid，EDTA）]。

1.3.7 蔗糖合成酶活力的測(cè)定

參考楊涓[23]的方法進(jìn)行測(cè)定，并稍作改動(dòng)。酶提取液提取方法同1.3.5。將0.05 mL 酶提取液和0.05 mL SS 反應(yīng)液加入25 mL 的試管中，在34 ℃水浴條件下反應(yīng)1 h，加入30%KOH 溶液0.2 mL，煮沸10 min 終止反應(yīng)后自然冷卻至室溫（20±5）℃，加入3.5 mL 硫酸-蒽酮溶液，在40 ℃水浴條件下反應(yīng)20 min，冷卻至室溫（20±5）℃，充分搖勻后在620 nm 處測(cè)定溶液吸光度。以經(jīng)過10 min 沸水浴的酶液作對(duì)照，上述步驟重復(fù)3 次，取平均值。

1.3.8 蔗糖磷酸合成酶活力的測(cè)定

參考楊涓[23]的方法進(jìn)行測(cè)定，并稍作改動(dòng)。將SS反應(yīng)液[0.1 mol/L 磷酸緩沖液（pH8）、4 mmol/L UDPG、0.06 mol/L 果糖、15 mmol/L MgCl2]替換為pH8、濃度為0.1 mol/L 硼酸緩沖液（10 mmol/L UDPG、5 mmol/L果糖-6-磷酸、15 mmol/L 葡萄糖-6-磷酸、15 mmol/L MgCl2、1mmol/LEDTA），其余操作方法同1.3.7。

1.3.9 cDNA 合成與熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)引物分析的測(cè)定

使用試劑盒將經(jīng)檢測(cè)合格并定量的總RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，并將表2 中反應(yīng)混合物置于冰浴試管中。

表2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系1Table 2 Reverse transcription reaction system 1

加RNase free dH2O（滅菌蒸餾水）至10 μL，混勻后65 ℃孵育5 min，結(jié)束后迅速冰浴。在冰浴的試管中加入表3 反應(yīng)混合物。

表3 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系2Table 3 Reverse transcription reaction system 2

反應(yīng)混合物在42 ℃反應(yīng)30～60 min 后，再在95 ℃加熱5 min 結(jié)束反應(yīng)，并在冰浴條件下進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

結(jié)合貯藏過程中糖代謝酶的差異顯著性，選擇酸性轉(zhuǎn)化酶、中性轉(zhuǎn)化酶、蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶4 個(gè)酶進(jìn)行酶基因的定量表達(dá)測(cè)定。

實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）的定量基因特異性引物如表4 所示。

表4 qRT-PCR 引物序列Table 4 Primer sequence of qRT-PCR

選擇該目的基因的cDNA 為模板，進(jìn)行PCR，PCR 反應(yīng)體系如表5 所示。

表5 PCR 上機(jī)反應(yīng)體系Table 5 PCR reaction system

按照表5 反應(yīng)體系配制的PCR 反應(yīng)溶液置于PCR 儀上進(jìn)行PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)條件：95 ℃、5 min預(yù)變性，然后按95 ℃、15 s，60 ℃、30 s，共40 個(gè)循環(huán)。

1.3.10 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均由Excel 處理，SPSS 19 進(jìn)行方差分析，Origin 2018 制圖。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)的相對(duì)表達(dá)水平使用2-ΔΔCt進(jìn)行計(jì)算分析并使用Origin 2018做圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 NO 熏蒸對(duì)果實(shí)硬度的影響

NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果硬度的影響見圖1。

圖1 NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果硬度的影響Fig.1 Effect of NO fumigation on firmness of postharvest of Lycium barbarum fruit during cold storage

果實(shí)硬度是衡量果實(shí)感官質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，與商業(yè)價(jià)值和適口性密切相關(guān)。圖1 顯示，兩組枸杞硬度在貯藏0～6 d 均迅速下降，其中對(duì)照組下降速度更快；貯藏6～36 d，對(duì)照組果實(shí)的硬度迅速下降，但300 μL/L NO 處理組呈現(xiàn)小幅度波動(dòng)；在整個(gè)貯藏過程中，300 μL/L NO 處理組的果實(shí)硬度一直高于對(duì)照組枸杞。結(jié)果表明，300 μL/L NO 熏蒸可以推遲枸杞果實(shí)軟化，保持果實(shí)硬度。

2.2 NO 熏蒸對(duì)果實(shí)可溶性固形物含量的影響

NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果可溶性固形物含量的影響見圖2。

圖2 NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果可溶性固形物含量的影響Fig.2 Effect of NO fumigation on soluble solids of fresh fruits of Lycium barbarum during cold storage

枸杞中的可溶性固形物包括多糖、類胡蘿卜素和類黃酮類化合物等[28]?？扇苄怨绦挝锏暮颗c枸杞的質(zhì)量密切相關(guān)。通常，可溶性固形物含量越高，水果和蔬菜的貯藏品質(zhì)就越好。如圖2 所示，對(duì)照組新鮮枸杞的可溶性固形物含量呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，而使用300 μL/L NO 處理組的枸杞可溶性固形物含量則呈整體上升趨勢(shì)。貯藏12～30 d，300 μL/L NO 處理組的枸杞可溶性固形物含量迅速增加，而對(duì)照組呈下降趨勢(shì)；在貯藏結(jié)束時(shí)，300 μL/L NO 處理組的枸杞可溶性固形物含量達(dá)到最高值20.98%，較對(duì)照組高14%。試驗(yàn)結(jié)果表明，300 μL/L NO 熏蒸可顯著降低冷藏枸杞中可溶性固形物含量下降速度，貯藏結(jié)束時(shí)枸杞中的可溶性固形物含量仍保持在較高水平，可能是由于NO 對(duì)果實(shí)呼吸與多糖物質(zhì)降解有抑制作用，這與胡江偉等[29]的研究結(jié)果相似。

2.3 NO 熏蒸對(duì)果實(shí)可溶性糖含量的影響

NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果可溶性糖含量的影響見圖3。

圖3 NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果可溶性糖含量的影響Fig.3 Effect of NO fumigation on soluble sugar content of fresh fruits of Lycium barbarum during cold storage

一方面，果實(shí)的可溶性糖為收獲后的呼吸代謝消耗等提供能量和底物，另一方面，它們通過維持果實(shí)細(xì)胞的膨壓和細(xì)胞壁的張力來參與軟化過程[30]。如圖3 所示，枸杞的可溶性糖含量在貯藏期間呈“升-降-升”的趨勢(shì)變化。貯藏0～6 d，所有的處理都呈現(xiàn)出快速上升的趨勢(shì)，對(duì)照組枸杞可溶性糖含量在貯藏第6天時(shí)達(dá)到最大值11.16%；300 μL/L NO 處理組在貯藏至第12 天時(shí)達(dá)到最大含量，為8.85%；在貯藏結(jié)束時(shí)，使用300 μL/L NO 處理的枸杞可溶性糖含量比第0 天增加了34%；而對(duì)照組的枸杞可溶性糖含量比第0 天減少了1%。枸杞中可溶性糖含量的變化趨勢(shì)可能是由NO 處理下調(diào)AI 相對(duì)表達(dá)量和NI 相對(duì)表達(dá)量來降低貯藏后期AI 活力，同時(shí)抑制貯藏前期NI 活力，兩者共同作用減緩糖代謝進(jìn)程，保持較高的可溶性糖含量，維持細(xì)胞的膨壓和細(xì)胞壁張力，以此保護(hù)果實(shí)的形狀和硬度[30]。試驗(yàn)結(jié)果表明，300 μL/L NO 處理可抑制枸杞中可溶性糖含量下降，延長枸杞貯藏時(shí)間并保持枸杞鮮果品質(zhì)。

2.4 總RNA 提取結(jié)果

采用總RNA 提取試劑盒提取枸杞總RNA，結(jié)果見圖4。

圖4 枸杞總RNA 提取圖Fig.4 Total RNA extraction drawing of Lycium barbarum

由圖4 可知，從上到下分別為28S、18S 和5S rRNA，電泳結(jié)果顯示枸杞具有完整的18S 和28S，且主條帶清晰、單一、明亮，說明RNA 完整度好、沒有降解、無污染、純度高，可以用于下一步試驗(yàn)。

2.5 NO 熏蒸對(duì)果實(shí)AI 活力的影響

NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果AI 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響見圖5。

圖5 NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果AI 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.5 Effect of NO fumigation on AI activity and relative expression of fresh fruits of Lycium barbarum during cold storage

AI 催化蔗糖降解，其中不溶性AI 在細(xì)胞壁上，負(fù)責(zé)細(xì)胞壁質(zhì)外體的卸載[31]。由圖5a 可知，貯藏0～24 d，兩組枸杞的AI 活力先迅速增加，在貯藏的第12 天達(dá)到最高值，之后迅速下降；在貯藏至24 d 時(shí)，對(duì)照組的枸杞AI 活力比處理組高14.35%，差異極顯著（P＜0.01）；貯藏24～36 d，對(duì)照組的枸杞酶活性持續(xù)下降，而處理組的枸杞則呈現(xiàn)波動(dòng)的變化趨勢(shì)，且在第30 天，對(duì)照組酶活力顯著高于處理組（P＜0.05）。由圖5b 可以看出，貯藏第18 天，處理組AI 相對(duì)表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；貯藏第36 天，對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量極顯著高于處理組（P＜0.01），AI 相對(duì)表達(dá)量與AI 活力結(jié)果一致，這與韓帥[32]研究結(jié)果相似，表明貯藏后期NO 熏蒸通過調(diào)控枸杞AI 相對(duì)表達(dá)量抵抗果實(shí)軟化。由此說明，NO 熏蒸通過降低貯藏后期AI 表達(dá)水平，從而調(diào)節(jié)AI 活力，控制果實(shí)蔗糖分解速度，維持細(xì)胞膨壓，延緩枸杞軟化。

2.6 NO 熏蒸對(duì)果實(shí)NI 活力的影響

NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果NI 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響見圖6。

圖6 NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果NI 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.6 Effect of NO fumigation on Ni activity and relative expression of fresh fruits of Lycium barbarum during cold storage

由圖6a 可知，自貯藏開始至結(jié)束，兩組枸杞鮮果中NI 活力呈動(dòng)態(tài)變化；貯藏0～12 d，處理組枸杞中NI活力極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）；貯藏18～30 d，處理組NI 活力始終高于對(duì)照組，但兩者酶活力逐漸接近；貯藏第24 天，處理組枸杞NI 活力出現(xiàn)酶活力高峰，比對(duì)照組高峰出現(xiàn)時(shí)間推遲12 d。NI 活力的動(dòng)態(tài)變化說明NO 通過誘導(dǎo)不同貯藏時(shí)期的NI 轉(zhuǎn)錄水平從而調(diào)控不同時(shí)期的NI 活力，調(diào)節(jié)糖代謝進(jìn)程，使整個(gè)貯藏過程保持較高的可溶性糖含量和硬度，從而減緩果實(shí)軟化速度。

2.7 NO 熏蒸對(duì)果實(shí)SS 活力的影響

NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果SS 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響見圖7。

圖7 NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果SS 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.7 Effect of NO fumigation on SS activity and relative expression of fresh fruits of Lycium barbarum during cold storage

SS 是糖代謝中的重要酶類，既可以催化蔗糖合成又可以參與蔗糖分解，是一個(gè)可逆的過程[33]。由圖7a可知，貯藏0～36 d，兩組枸杞中SS 活力總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但處理組的枸杞酶活性始終低于對(duì)照組。貯藏第0～12 天，處理組和對(duì)照組的枸杞SS 活力差別不大，且兩組相互接近；在貯藏第12～36 天，對(duì)照組的枸杞酶活力高于處理組的酶活力。由圖7b 所示，貯藏第18天，對(duì)照組枸杞SS 的相對(duì)表達(dá)量略高于處理組；與圖7a 所示SS 活力有一定相似之處，貯藏第36 天，處理組枸杞中SS 相對(duì)表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），與酶的活力變化不同。整個(gè)貯藏過程中枸杞SS 活力的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，說明NO 熏蒸通過誘導(dǎo)枸杞貯藏后期LbSS 表達(dá)量升高延緩蔗糖分解，保持枸杞果實(shí)硬度，這與采后枇杷果實(shí)經(jīng)NO 處理后可提高SS 活力結(jié)果不同[17]，同時(shí)也說明NO 熏蒸枸杞通過調(diào)控SS 活力維持蔗糖代謝平衡從而抑制軟化有一定的復(fù)雜性。

2.8 NO 熏蒸對(duì)果實(shí)SPS 活力的影響

NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果SPS 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響見圖8。

圖8 NO 熏蒸對(duì)冷藏枸杞鮮果SPS 活力及其相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.8 Effect of NO fumigation on SPS activity and relative expression of fresh fruits of Lycium barbarum during cold storage

SPS 調(diào)控蔗糖合成，參與糖類運(yùn)輸[24]。由圖8 可知，貯藏0～6 d，處理組枸杞酶活力快速上升達(dá)到峰值；貯藏6～18 d，兩組枸杞SPS 活力不斷下降并逐漸接近，而對(duì)照組酶活力在第18 天高于處理組，這與SPS 相對(duì)表達(dá)量結(jié)果不一致；24～36 d，兩組枸杞酶活力均呈“升-降”趨勢(shì)，處理組枸杞中SPS 活力始終高于對(duì)照組并于貯藏第30 天出現(xiàn)酶活力高峰。由此說明，NO 熏蒸可以保持較高的SPS 活力，促進(jìn)蔗糖合成，保持細(xì)胞正常膨壓與細(xì)胞壁張力，延緩枸杞軟化。

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，NO 處理顯著上調(diào)貯藏第36 天LbSS 表達(dá)量，但是整個(gè)貯藏過程中保持較低SS 活力，調(diào)控不同貯藏時(shí)期LbAI 和LbNI 表達(dá)量，從而抑制貯藏前期（0～12 d）NI 活力和貯藏后期（24～36 d）AI 活力下降，NO 處理顯著上調(diào)貯藏第36 天LbSPS 表達(dá)量，保持較高的SPS 活力，加快蔗糖合成，保持較高的溶性固形物和可溶性糖含量，對(duì)維持細(xì)胞滲透壓，保持果實(shí)細(xì)胞堅(jiān)挺，延緩枸杞鮮果軟化具有一定的作用。