• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    沙棘油對(duì)黑曲霉線粒體結(jié)構(gòu)及功能的影響

    2023-08-12 06:37:00辛燕花徐丁一吳雙全秦萌萌劉云紅張建華張鐵丹史曉晶
    食品研究與開發(fā) 2023年15期
    關(guān)鍵詞:黑曲霉膜電位琥珀酸

    辛燕花,徐丁一,吳雙全,秦萌萌,劉云紅,張建華,張鐵丹,史曉晶*

    (1.忻州師范學(xué)院生物系,山西 忻州 034000;2.廣州萬(wàn)物生健康產(chǎn)業(yè)有限公司,廣東 廣州 510642)

    沙棘(Hippophae rhamnoides L.)原產(chǎn)于歐亞大陸,已在俄羅斯、英國(guó)、德國(guó)、芬蘭、羅馬尼亞和法國(guó)等多個(gè)國(guó)家馴化并大量種植[1]。沙棘(sea buckthorn,SBT)富含生物活性物質(zhì),其中包括大量的維生素、胡蘿卜素、微量元素、氨基酸[2-5]。沙棘存在多種天然活性化合物,具有抗菌、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、放射防護(hù)、適應(yīng)性和組織再生等多種特性[1,6-9]。因此廣泛應(yīng)用于放射性損傷、燒傷、口腔炎癥、胃潰瘍的治療[10-13]。沙棘是一種含有豐富油脂的植物,其籽、果皮、果實(shí)及果渣中都可以檢測(cè)到油脂,沙棘籽成熟后,其油脂含量可高達(dá)20%,而干沙棘果中的油脂含量達(dá)到約為25%,另外,提取沙棘汁后的果渣也可含有高達(dá)20%的油脂。有文獻(xiàn)證實(shí)沙棘油包含多種不飽和脂肪酸、類胡蘿卜素及其衍生物、甾醇以及天然維生素E 等,多數(shù)為人體必需的活性成分,這些活性物質(zhì)具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗?jié)?、抗衰老、抗輻射、增?qiáng)免疫力等功能[14]。

    黑曲霉(Aspergillus niger),隸屬于半知菌亞門,絲孢綱,絲孢目,叢梗孢科,曲霉屬,是一種常見(jiàn)的大型絲狀真菌。黑曲霉是一種可以直接侵染人體導(dǎo)致系統(tǒng)性疾病的真菌,同時(shí)也能夠侵染食品、植物和藥材,改變它們?cè)械臓I(yíng)養(yǎng)成分和藥用成分,導(dǎo)致質(zhì)量下降從而喪失經(jīng)濟(jì)價(jià)值[15-16]。沙棘及其提取出的沙棘油含有廣泛的生物活性物質(zhì),具有無(wú)毒的特性,受到了研究者們的關(guān)注。目前大多數(shù)研究集中在沙棘提取物對(duì)細(xì)菌及真菌生長(zhǎng)的抑制作用上,已經(jīng)取得了一定臨床應(yīng)用進(jìn)展。有學(xué)者提取了沙棘葉、果實(shí)和沙棘籽中的油,并對(duì)細(xì)菌和一些致病真菌進(jìn)行了活性檢測(cè),結(jié)果顯示這些沙棘油粗提物可以抑制細(xì)菌和致病菌的生長(zhǎng)[14,17],但是目前沙棘油的抗菌機(jī)制尚不明確。線粒體是生物體中一個(gè)重要的細(xì)胞器,承擔(dān)著細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的重要職責(zé)[18]。細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育所需的能量都要依靠線粒體來(lái)提供,除此之外,細(xì)胞分化、細(xì)胞信息傳遞和細(xì)胞凋亡等過(guò)程也需要線粒體參與,細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期的調(diào)控也會(huì)在線粒體中發(fā)生,并可為膜電位調(diào)節(jié)及細(xì)胞程序性死亡控制提供場(chǎng)所[19]。因此,線粒體是抗真菌藥物的潛在靶點(diǎn),任何線粒體功能障礙都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡[20]。雖然沙棘有許多臨床療效,但以黑曲霉的細(xì)胞膜和線粒體為靶位點(diǎn),探討沙棘油抗真菌的作用機(jī)理研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本項(xiàng)目以沙棘油為研究對(duì)象,以黑曲霉的線粒體為靶位點(diǎn),在細(xì)胞水平上研究沙棘油的抗菌機(jī)制,對(duì)于研究沙棘的抗菌機(jī)制及深度開發(fā)沙棘有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

    在本研究中,黑曲霉經(jīng)沙棘油處理后,線粒體的超微結(jié)構(gòu)變化由透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,TEM)進(jìn)行測(cè)定;線粒體功能的評(píng)估通過(guò)測(cè)定膜電位、活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平以及與三羧酸循環(huán)(tricarboxylic acid cycle,TCA)循環(huán)相關(guān)的關(guān)鍵酶活性來(lái)揭示,以期為沙棘油抗真菌機(jī)理的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    黑曲霉(Aspergillus niger):廣東省微生物菌種保存中心;沙棘油純品:山西省山陽(yáng)藥業(yè)有限公司。琥珀酸脫氫酶活性測(cè)定試劑盒、ATP 酶活性測(cè)定試劑盒(Na+-K+,Ca2+-Mg2+)、丙二醛含量測(cè)定試劑盒、活性氧含量測(cè)定試劑盒:南京建成生物工程研究所;JC-1 線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒:上海翊圣生物科技有限公司。瓊脂:福建泉州市泉港化工廠;吐溫-20:西安天茂化工有限公司;三羥甲基氨基甲烷(trismetyl aminomethane,Tris)、乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)、甲萘醌:上海源葉生物有限公司;氯化鈉(NaCl)、鹽酸(HCl)、硫酸(H2SO4)、乙醇(含量≥95%):嘉興市天磊化工有限公司;苯甲基黃酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)、反-4-[(2-氨基-3.5-二溴芐基)氨基]-環(huán)乙醇鹽酸鹽:上海瑞永生物科技有限公司,2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,TBA)、二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO):上海百舜生物科技有限公司;丙酮:成都市科隆化學(xué)品有限公司。2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA):派科生物有限公司;以上試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(752N):上海精密科學(xué)儀器有限公司;水浴恒溫振蕩器(THZ-82A):金壇市榮華儀器制造有限公司;超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(JY92-IIDN):寧波新芝生物科技股份有限公司;臺(tái)式低速離心機(jī)(LC-4016):安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司;恒溫振蕩培養(yǎng)箱(THZ-98AB):天津歐諾儀器儀表公司;多功能微孔板檢測(cè)儀(SYNERGY HTX):美國(guó)伯騰儀器有限公司北京代表處;超純水器(GWA-UN4-F40):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

    1.3 方法

    1.3.1 培養(yǎng)基的配制

    PDA 培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,瓊脂20 g,磷酸二氫鉀3 g,硫酸鎂1.5 g,加水定容至1 000 mL,pH自然。PDB 培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,磷酸二氫鉀3 g,硫酸鎂1.5 g,加水定容至1 000 mL,pH 自然。

    1.3.2 黑曲霉孢子懸浮液的制備

    采用無(wú)菌NaCl(0.9%)沖洗已活化黑曲霉(約2 cm×2 cm)后,將固體培養(yǎng)基上的菌絲體輕輕刮下,經(jīng)無(wú)菌四層紗布過(guò)濾,取濾液,得到黑曲霉孢子懸浮液。離心(4 200 r/min,25 min),棄上清液,采用無(wú)菌NaCl(0.9%)溶液調(diào)整孢子懸浮液的濃度為1.0×107個(gè)孢子/mL。

    1.3.3 樣品的制備

    在制備好的黑曲霉孢子懸浮液中添加沙棘油溶液(最終濃度為3、6、18 mL/L 和24 mL/L),同時(shí)設(shè)置對(duì)照樣品。28 ℃恒溫振蕩(150 r/min)培養(yǎng)3 d 后,分離得到的菌絲體,采用無(wú)菌NaCl(0.9%)洗滌3 次,冷凍,用液氮研磨備用。

    1.3.4 黑曲霉線粒體的提取

    黑曲霉線粒體的提取參照文獻(xiàn)[17]進(jìn)行。稱取冷凍樣品2.0 g 于無(wú)菌離心管中,用無(wú)菌緩沖液(20 mmol/L Tris-HCl,5 mmol/L Na2EDTA 和15%葡萄糖,pH7.4)洗滌兩次,懸浮于20.0 mL 上述無(wú)菌緩沖液中。將樣品超聲3 min,離心(3 000 r/min,10 min),取上清液,再次離心2 次(4 200 r/min,25 min),棄上清,收集沉淀,用1.0 mL 無(wú)菌緩沖液懸浮線粒體,-20 ℃?zhèn)溆?。所有制備和提取步驟均在4 ℃進(jìn)行。

    1.3.5 黑曲霉線粒體超微結(jié)構(gòu)觀察

    收集對(duì)照組和最大濃度沙棘油(24 mL/L)處理的細(xì)胞中的線粒體,采用2.5%戊二醛固定4 h,觀察線粒體的超微結(jié)構(gòu)。

    1.3.6 黑曲霉線粒體酶活性測(cè)定

    稱取0.2 g 濕菌絲體,蒸餾水洗滌兩次,經(jīng)液氮研磨后,加入1.8 mL 0.9%NaCl,收集上清液得到初酶液,用于酶活性分析。三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatases,ATP)、琥珀酸脫氫酶(succinic dehydrogenase,SDH)和總脫氫酶(total dehydrogenase,THDA)的活性測(cè)定參考試劑盒指導(dǎo)。

    1.3.7 黑曲霉線粒體丙二醛測(cè)定

    丙二醛含量的測(cè)定同樣在試劑盒指導(dǎo)下進(jìn)行測(cè)定。

    1.3.8 黑曲霉線粒體活性氧測(cè)定

    在已制備好的黑曲霉孢子懸浮液中添加一定的沙棘油溶液(最終濃度為3、6、18 mL/L 和24 mL/L)后,進(jìn)行培養(yǎng)(25 ℃,150 r/min 振蕩培養(yǎng))。12 h 后,離心(4 200 r/min,30 min),收集沉淀,經(jīng)磷酸緩沖液(phos phate buffer solution,PBS)洗滌后重懸于500 μL PBS溶液中。加入DCFH-DA(1 mmol/L)至溶液終濃度為10 μmol/L,充分混勻,30 ℃,60 r/min 孵育4 h(以DMSO 作為溶劑對(duì)照)。將菌絲體離心收集后用PBS 沖洗,然后重懸于500 μL 的PBS 中,最后使用多功能微孔板檢測(cè)儀進(jìn)行時(shí)間掃描(激發(fā)波長(zhǎng)為485 nm,發(fā)射波長(zhǎng)為528 nm)。

    1.3.9 黑曲霉線粒體中膜電位變化的測(cè)定

    膜電位變化的測(cè)定根據(jù)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)定。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)采用SPSS statistics 21 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 沙棘油對(duì)黑曲霉線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響

    采用透射電鏡對(duì)經(jīng)過(guò)沙棘油處理后的黑曲霉線粒體超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果如圖1 所示。由圖1 可知,對(duì)照組和試驗(yàn)組的細(xì)胞線粒體在超微結(jié)構(gòu)方面存在明顯差異。未經(jīng)過(guò)沙棘油處理的細(xì)胞(對(duì)照組)線粒體內(nèi)外膜清晰,嵴腫脹正常。沙棘油處理后的細(xì)胞內(nèi)的線粒體表現(xiàn)出空泡化、異常小泡形成以及線粒體基質(zhì)結(jié)構(gòu)的破壞,這些現(xiàn)象可以在圖1B和圖1D 中觀察到。試驗(yàn)結(jié)果顯示,沙棘油能夠引發(fā)黑曲霉細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)上的損害。

    圖1 沙棘油對(duì)線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響Fig.1 Effects of SBT oil on mitochondrial ultrastructure

    2.2 沙棘油對(duì)黑曲霉線粒體琥珀酸脫氫酶活性的影響

    沙棘油對(duì)黑曲霉線粒體琥珀酸脫氫酶活性的影響見(jiàn)圖2。

    圖2 沙棘油對(duì)黑曲霉線粒體琥珀酸脫氫酶活性的影響Fig.2 Effects of SBT oil on SDH activity in Aspergillus niger cells

    由圖2 可知,對(duì)照組測(cè)得黑曲霉線粒體中的SDH酶活性為(470.29±26.30)U/mg 蛋白。經(jīng)不同濃度沙棘油處理后,黑曲霉線粒體中的SDH 活性水平下降,分別為(376.23±25.41)、(340.27±15.06)、(304.26±37.10)U/mg 蛋白質(zhì)和(251.31±23.41)U/mg 蛋白。結(jié)果表明,SDH 酶活性在沙棘油處理后呈劑量依賴性降低。

    2.3 沙棘油對(duì)ATP 酶活性的影響

    沙棘油對(duì)ATP 酶活性的影響見(jiàn)圖3。

    圖3 沙棘油對(duì)ATP 酶活性的影響Fig.3 Effects of SBT oil on ATPase activity

    由圖3 可知,對(duì)照組中Na+-K+ATP 酶活性為(108.94±1.98)U/mg 蛋白。用3、6、18 mL/L 和24 mL/L沙棘油處理后,Na+-K+ATP 酶活性為分別為(94.41±1.64)、(83.96±4.28)、(61.13±1.64)U/mg 蛋白和(36.71±1.07)U/mg 蛋白。并且對(duì)Ca2+-Mg2+ATP 酶活性進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)對(duì)照組的活性為(109.84±6.77)U/mg 蛋白,經(jīng)不同濃度的沙棘油處理后,Ca2+-Mg2+ATP 酶活性分別為(90.52±6.77)、(67.62±0.60)、(60.92±3.91)U/mg 蛋白和(34.69±3.29)U/mg 蛋白。在沙棘油濃度為24 mL/L處理時(shí),Na+-K+ATP 酶和Ca2+-Mg2+ATP 酶分別比對(duì)照降低66.3%和68.4%。結(jié)果表明,ATP 酶活性在沙棘油處理后呈劑量依賴性下降。

    2.4 沙棘油對(duì)丙二醛含量的影響

    沙棘油對(duì)丙二醛含量的影響見(jiàn)圖4。

    圖4 沙棘油對(duì)丙二醛含量的影響Fig.4 Effects of SBT oil on malondialdehyde content

    從圖4 中可以看出,黑曲霉線粒體丙二醛含量受沙棘油的影響。對(duì)照組測(cè)得丙二醛水平為(0.46±0.02)nmol/mg 蛋白。用3、6、18 mL/L 和24 mL/L 沙棘油處理細(xì)胞后,線粒體中丙二醛含量顯著升高,分別為(0.63±0.05)、(0.86±0.12)、(1.24±0.22)nmol/mg 蛋白和(4.10±0.30)nmol/mg 蛋白,均顯著高于對(duì)照細(xì)胞(p<0.05)。24 mL/L 沙棘油處理的細(xì)胞比對(duì)照細(xì)胞高550.79%。

    2.5 沙棘油對(duì)活性氧含量的影響

    沙棘油對(duì)活性氧含量的影響見(jiàn)圖5。

    圖5 沙棘油對(duì)活性氧含量的影響Fig.5 Effects of SBT oil on ROS levels

    由圖5 可知,黑曲霉細(xì)胞內(nèi)ROS 積累與沙棘油處理有一定的關(guān)系,活性氧的積累與沙棘油的濃度呈正相關(guān)。相對(duì)于對(duì)照組細(xì)胞中的標(biāo)準(zhǔn)化水平(100.00%),用3、6、18 mL/L 和24 mL/L 沙棘油處理使ROS 水平分別增加到(158.30±14.65)%、(163.57±12.06)%、(179.35±16.43)%和(276.67±6.96)%,均高于對(duì)照細(xì)胞(p<0.05)。

    2.6 沙棘油對(duì)線粒體膜電位的影響

    沙棘油對(duì)黑曲霉細(xì)胞線粒體膜電位的影響見(jiàn)圖6。

    圖6 沙棘油對(duì)膜電位變化的影響Fig.6 Effects of SBT oil on mitochondrial membrane potential levels

    由圖6 可知,線粒體膜電位在不同濃度沙棘油處理后呈劑量依賴性下降。經(jīng)過(guò)12 h 處理后,在整個(gè)試驗(yàn)劑量范圍內(nèi),膜電位下降顯著,分別為(82.93±2.04)%、(59.41±3.28)%、(57.06±2.12)%和(3.52±2.12)%,均低于對(duì)照組(p<0.05)。

    3 討論與結(jié)論

    沙棘油含有豐富的活性物質(zhì),針對(duì)沙棘油的研究已取得了一定的進(jìn)展,但是沙棘油抗菌活性的機(jī)制的探討比較少,有研究者發(fā)現(xiàn)沙棘油可抑制真菌和細(xì)菌的生長(zhǎng)[21]。在本研究中,發(fā)現(xiàn)沙棘油可誘導(dǎo)黑曲霉細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)損傷(圖1)。研究表明,在用茶樹油處理過(guò)的灰霉病桿菌中,線粒體的外觀和構(gòu)造會(huì)受到破壞,這對(duì)于抑制真菌生長(zhǎng)起到了積極作用[17]。檸檬醛能夠破壞線粒體的結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致線粒體的功能發(fā)生改變,這進(jìn)而限制了指狀假單胞菌的生長(zhǎng)[22]。

    線粒體內(nèi)的三羧酸循環(huán)需要脫氫酶這一類必不可少的酶[17]。琥珀酸脫氫酶是線粒體內(nèi)膜上催化琥珀酸進(jìn)行代謝的關(guān)鍵酶[23]。已有研究結(jié)果表明,茶樹油會(huì)影響琥珀酸脫氫酶活性,而且還能介導(dǎo)抗真菌活性[17]。琥珀酸脫氫酶活性可以很好地反映線粒體功能障礙的程度[24-25]。研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用羽苔素E 治療白色念珠菌時(shí),會(huì)導(dǎo)致線粒體中的脫氫酶活性降低,從而抑制白色念珠菌的生長(zhǎng)[26]。黃曲霉經(jīng)蒔蘿揮發(fā)油處理后,其細(xì)胞膜被破壞,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)琥珀酸脫氫酶的活性下降[27]。本研究發(fā)現(xiàn)琥珀酸脫氫酶活性與沙棘油的濃度正相關(guān)(圖2),這表明沙棘油可能引起線粒體結(jié)構(gòu)改變并進(jìn)一步影響線粒體功能,這與上述提到的研究結(jié)果相似。

    線粒體中進(jìn)行的一系列代謝反應(yīng)中,三羧酸循環(huán)是較為重要的代謝途徑,為細(xì)胞產(chǎn)生能量[28]。Li 等[18]證實(shí)灰霉病桿菌細(xì)胞內(nèi)的TCA 循環(huán)受到茶樹油抑制,ATP 酶活性顯著降低。在本研究中,加入沙棘油培養(yǎng)黑曲霉時(shí)發(fā)現(xiàn),ATP 酶的活性受到沙棘油的抑制(圖3),從而黑曲霉的生長(zhǎng)和存活產(chǎn)生了影響。

    丙二醛是用來(lái)評(píng)估脂質(zhì)過(guò)氧化的主要指標(biāo),當(dāng)細(xì)胞膜遭受氧化損傷時(shí),丙二醛的含量會(huì)上升[29]。有研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)青霉菌經(jīng)肉桂醛與檸檬醛聯(lián)合處理后,細(xì)胞中的丙二醛含量明顯增加[30]。研究百里酚的抗菌機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn),經(jīng)百里酚處理的谷鐮刀菌,細(xì)胞內(nèi)丙二醛的水平明顯升高[31]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沙棘油可以提升黑曲霉細(xì)胞中丙二醛的積累(圖4)通過(guò)影響膜流動(dòng)性從而對(duì)線粒體膜造成破壞。

    細(xì)胞的線粒體在呼吸變化時(shí)會(huì)產(chǎn)生ROS,當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),ROS 水平會(huì)大幅上升[27]。ROS 可以通過(guò)破壞細(xì)胞核酸、酶和細(xì)胞膜,從而對(duì)細(xì)胞活力產(chǎn)生影響[23]。細(xì)胞凋亡和活性氧的堆積有密切的關(guān)系,除了會(huì)引發(fā)細(xì)胞核碎裂、染色體濃縮和磷脂酰絲氨酸外露等細(xì)胞器的形態(tài)學(xué)變化,活性氧的積累還可能對(duì)其他方面的細(xì)胞功能產(chǎn)生影響[32]。研究表明,通過(guò)使用硼酸鹽處理炭疽菌孢子會(huì)引起線粒體受損,同時(shí)導(dǎo)致活性氧水平顯著上升[33]。同樣有研究證實(shí),羽苔素E 在抑制白念珠菌生長(zhǎng)時(shí),檢測(cè)到ROS 含量處于上升水平[26];蒔蘿揮發(fā)油也可以引起黃曲霉細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)ROS 含量增加,從而導(dǎo)致黃曲霉生長(zhǎng)受限[27];在研究肉桂醛和檸檬醛組合抑制擴(kuò)展青霉菌時(shí)發(fā)現(xiàn),細(xì)胞中的ROS 水平較對(duì)照組增加了很多[30];檸檬醛還可以導(dǎo)致小指藻線粒體的電子呼吸鏈?zhǔn)艿狡茐?,從而改變?xì)胞內(nèi)的ROS 水平[22]。通過(guò)使用沙棘油處理,本研究發(fā)現(xiàn)黑曲霉中ROS 積累增加(圖5),可能是線粒體功能障礙和氧化損傷的原因。

    當(dāng)化合物用于治療真菌感染時(shí),線粒體膜電位的變化是一種明顯的特征,而線粒體膜電位的喪失是細(xì)胞凋亡的一種共同表現(xiàn)[34]。研究表明,化合物2,5-雙(4-氨基苯基)呋喃可以使釀酒酵母中的線粒體膜電位顯著下降[35]。許多凋亡系統(tǒng)中,過(guò)量的活性氧生成是導(dǎo)致Δψm 去極化的主要誘因[34]。經(jīng)過(guò)使用沙棘油處理的黑曲霉細(xì)胞中,膜電位的損失與ROS 的積累增加表現(xiàn)出一致的變化趨勢(shì)(圖5),同時(shí)該處理使得Δψm 值明顯降低(圖6)。黑曲霉會(huì)使得細(xì)胞內(nèi)的ROS 增加,進(jìn)而導(dǎo)致線粒體膜內(nèi)孔洞變大,讓線粒體內(nèi)部更加通透,導(dǎo)致去極化、丟失Δψm 并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

    本研究考察了沙棘油介導(dǎo)下的黑曲霉線粒體結(jié)構(gòu)和功能的變化,發(fā)現(xiàn)沙棘油通過(guò)破壞線粒體的結(jié)構(gòu)進(jìn)而損傷線粒體的功能,可以為開發(fā)天然的抗真菌藥物提供一定參考。

    猜你喜歡
    黑曲霉膜電位琥珀酸
    有關(guān)動(dòng)作電位的“4坐標(biāo)2比較”
    參芪復(fù)方對(duì)GK大鼠骨骼肌線粒體膜電位及相關(guān)促凋亡蛋白的影響研究
    針刺聯(lián)合琥珀酸普蘆卡必利片治療腦卒中后便秘的臨床觀察
    琥珀酸美托洛爾的核磁共振波譜研究
    α-生育酚琥珀酸酯的酶法合成研究進(jìn)展
    復(fù)合誘變選育耐高溫高產(chǎn)葡萄糖酸鹽的黑曲霉菌株
    黑曲霉產(chǎn)纖維素酶混合發(fā)酵條件的研究
    酶法制備黑曲霉原生質(zhì)體的條件
    磺基琥珀酸酯表面活性劑市場(chǎng)2023年將達(dá)4.46億美元
    魚藤酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡及線粒體膜電位變化
    男女午夜视频在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜福利高清视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产野战对白在线观看| 嫩草影视91久久| 国产野战对白在线观看| 欧美黑人精品巨大| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美又色又爽又黄视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美性长视频在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 草草在线视频免费看| 黄片小视频在线播放| 国产午夜精品久久久久久| 51午夜福利影视在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 真人一进一出gif抽搐免费| 热99re8久久精品国产| 久9热在线精品视频| www日本黄色视频网| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产av不卡久久| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品九九99| 叶爱在线成人免费视频播放| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品国产乱码久久久久久男人| 99久久无色码亚洲精品果冻| 1024手机看黄色片| www国产在线视频色| 欧美大码av| 国产av麻豆久久久久久久| 中文字幕久久专区| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品电影一区二区三区| 日韩国内少妇激情av| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲成人久久性| 亚洲av美国av| 国产av又大| 精品久久久久久久久久免费视频| 久久久久久人人人人人| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲欧美日韩高清专用| 人人妻人人看人人澡| 国产三级中文精品| 亚洲av电影在线进入| 操出白浆在线播放| 在线观看舔阴道视频| www.自偷自拍.com| 制服丝袜大香蕉在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 99久久99久久久精品蜜桃| av福利片在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 一本一本综合久久| bbb黄色大片| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 成人国产综合亚洲| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一级毛片女人18水好多| 午夜福利18| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久香蕉精品热| 欧美午夜高清在线| 欧美日韩一级在线毛片| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 成人18禁在线播放| 日韩欧美 国产精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲片人在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | a级毛片a级免费在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产精品电影一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 欧美性猛交黑人性爽| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美黑人巨大hd| 青草久久国产| 99热6这里只有精品| 少妇的丰满在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91老司机精品| 亚洲一区中文字幕在线| 成人国产一区最新在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| av有码第一页| www.www免费av| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美性长视频在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产又色又爽无遮挡免费看| 91成年电影在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| bbb黄色大片| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美最黄视频在线播放免费| 男人舔女人的私密视频| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 美女大奶头视频| 欧美在线一区亚洲| 午夜久久久久精精品| 亚洲中文字幕日韩| 免费高清视频大片| 国产区一区二久久| 亚洲专区国产一区二区| 国产午夜精品久久久久久| 欧美日韩一级在线毛片| 狂野欧美激情性xxxx| 香蕉av资源在线| 亚洲国产精品999在线| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美一级毛片孕妇| √禁漫天堂资源中文www| 啦啦啦韩国在线观看视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲五月婷婷丁香| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产爱豆传媒在线观看 | 午夜精品一区二区三区免费看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 嫩草影院精品99| 亚洲av电影不卡..在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久香蕉国产精品| 日本三级黄在线观看| 国产视频一区二区在线看| 岛国视频午夜一区免费看| 日韩有码中文字幕| 曰老女人黄片| 哪里可以看免费的av片| 老司机午夜福利在线观看视频| 免费无遮挡裸体视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲国产高清在线一区二区三| 哪里可以看免费的av片| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日本五十路高清| 一夜夜www| 国产久久久一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 国产一区二区激情短视频| 免费在线观看亚洲国产| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲无线在线观看| 久久伊人香网站| 国产午夜福利久久久久久| 露出奶头的视频| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲专区中文字幕在线| 狠狠狠狠99中文字幕| www.熟女人妻精品国产| 午夜福利在线在线| 色播亚洲综合网| 精品久久久久久久久久免费视频| 村上凉子中文字幕在线| 精品久久久久久久末码| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产高清激情床上av| 欧美乱妇无乱码| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 精品人妻1区二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| www日本黄色视频网| 青草久久国产| 国产精品国产高清国产av| 色综合亚洲欧美另类图片| 真人一进一出gif抽搐免费| 搡老熟女国产l中国老女人| 两个人免费观看高清视频| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 麻豆一二三区av精品| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一本大道久久a久久精品| 婷婷六月久久综合丁香| 最近最新免费中文字幕在线| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日本 av在线| 久久久国产成人免费| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美午夜高清在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲中文字幕日韩| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 一区二区三区激情视频| www.自偷自拍.com| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 天堂√8在线中文| 麻豆av在线久日| 欧美3d第一页| 国产成人av激情在线播放| 白带黄色成豆腐渣| 欧美日本亚洲视频在线播放| videosex国产| 久久九九热精品免费| 久久久久精品国产欧美久久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美成人午夜精品| 国产一区在线观看成人免费| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲欧美精品综合久久99| 黄色 视频免费看| 一夜夜www| 国产探花在线观看一区二区| 国产主播在线观看一区二区| 桃色一区二区三区在线观看| 好男人电影高清在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产亚洲精品一区二区www| 国产91精品成人一区二区三区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 在线观看免费视频日本深夜| 国产成人精品久久二区二区91| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 色噜噜av男人的天堂激情| av福利片在线| 中文亚洲av片在线观看爽| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 一区二区三区高清视频在线| 在线观看午夜福利视频| 无限看片的www在线观看| 十八禁网站免费在线| 精品久久蜜臀av无| 国产精品影院久久| 日韩高清综合在线| 亚洲一区中文字幕在线| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲片人在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久久久久九九精品二区国产 | 国产高清视频在线播放一区| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 麻豆一二三区av精品| 久久精品国产清高在天天线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产av一区在线观看免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 窝窝影院91人妻| 动漫黄色视频在线观看| 国产精品一及| 国模一区二区三区四区视频 | 老司机午夜十八禁免费视频| 国产亚洲精品一区二区www| 国产在线观看jvid| cao死你这个sao货| 国产av一区在线观看免费| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲人成伊人成综合网2020| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美黑人精品巨大| 男插女下体视频免费在线播放| 国产成人av激情在线播放| 无遮挡黄片免费观看| 日本一二三区视频观看| 一级毛片高清免费大全| 国产私拍福利视频在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 久久久国产欧美日韩av| 午夜激情福利司机影院| 久久久久久九九精品二区国产 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲电影在线观看av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国内精品一区二区在线观看| 日本a在线网址| 成人欧美大片| 久久久久久久久久黄片| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲精品色激情综合| www.精华液| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 又大又爽又粗| 岛国在线观看网站| 两个人视频免费观看高清| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产高清videossex| 搡老岳熟女国产| 免费在线观看成人毛片| 波多野结衣高清无吗| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 18美女黄网站色大片免费观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品av久久久久免费| 可以在线观看毛片的网站| 国产精品一及| 国产精品一区二区免费欧美| 免费电影在线观看免费观看| svipshipincom国产片| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 免费看日本二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲人成电影免费在线| 久久香蕉精品热| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日本免费a在线| 91九色精品人成在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 丰满的人妻完整版| 国产久久久一区二区三区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 午夜老司机福利片| 午夜免费成人在线视频| 亚洲成a人片在线一区二区| www.自偷自拍.com| 热99re8久久精品国产| 欧美日韩黄片免| 久久性视频一级片| 999久久久精品免费观看国产| 男女视频在线观看网站免费 | 男人的好看免费观看在线视频 | 女警被强在线播放| 一进一出抽搐gif免费好疼| 两性夫妻黄色片| 一区二区三区激情视频| 麻豆国产av国片精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 不卡av一区二区三区| 国产真人三级小视频在线观看| 免费观看人在逋| 免费在线观看日本一区| 村上凉子中文字幕在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产久久久一区二区三区| 99国产精品一区二区三区| 亚洲成人国产一区在线观看| 无人区码免费观看不卡| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 91麻豆精品激情在线观看国产| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲一区中文字幕在线| 床上黄色一级片| 又爽又黄无遮挡网站| 女同久久另类99精品国产91| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日韩欧美 国产精品| 一夜夜www| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久久国内视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲第一电影网av| 两个人免费观看高清视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 男女床上黄色一级片免费看| 国产探花在线观看一区二区| 国产av不卡久久| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲国产欧美人成| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 在线视频色国产色| www国产在线视频色| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美一级毛片孕妇| 国产免费av片在线观看野外av| 午夜久久久久精精品| 1024香蕉在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 久久精品影院6| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日韩欧美在线乱码| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 最近最新免费中文字幕在线| 不卡一级毛片| 在线观看日韩欧美| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美日韩黄片免| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 免费看日本二区| 两性夫妻黄色片| 精品日产1卡2卡| 亚洲专区中文字幕在线| 久久精品91无色码中文字幕| 黑人操中国人逼视频| 国产高清激情床上av| 麻豆av在线久日| 精品高清国产在线一区| 一区福利在线观看| 国产日本99.免费观看| av免费在线观看网站| 嫩草影院精品99| 一级毛片女人18水好多| av在线播放免费不卡| 国产av又大| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲美女视频黄频| 欧美乱妇无乱码| 熟女电影av网| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 男人舔奶头视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲国产高清在线一区二区三| 黄频高清免费视频| netflix在线观看网站| videosex国产| 精品久久久久久久久久免费视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美黑人巨大hd| 精品福利观看| 成在线人永久免费视频| 日日夜夜操网爽| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 中出人妻视频一区二区| 免费在线观看影片大全网站| 国产成人影院久久av| 国产熟女xx| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日韩欧美国产在线观看| 午夜福利18| bbb黄色大片| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久精品91蜜桃| 日韩大码丰满熟妇| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲av熟女| 日本熟妇午夜| 免费观看人在逋| 91九色精品人成在线观看| 久久久国产精品麻豆| 免费观看精品视频网站| 宅男免费午夜| 级片在线观看| 两个人免费观看高清视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产真人三级小视频在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本五十路高清| 国内精品久久久久久久电影| 大型黄色视频在线免费观看| 后天国语完整版免费观看| 精品不卡国产一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲最大成人中文| 黄色视频,在线免费观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 午夜久久久久精精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 美女扒开内裤让男人捅视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久草成人影院| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| av片东京热男人的天堂| 三级国产精品欧美在线观看 | 精品乱码久久久久久99久播| 一本精品99久久精品77| 国产精品一及| xxx96com| 国产高清视频在线观看网站| 两个人看的免费小视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产久久久一区二区三区| 婷婷六月久久综合丁香| 伦理电影免费视频| 久久中文看片网| 最新美女视频免费是黄的| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲av成人av| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲,欧美精品.| 午夜精品一区二区三区免费看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日韩欧美三级三区| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久久精品大字幕| 99热只有精品国产| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 午夜福利免费观看在线| 特级一级黄色大片| 欧美zozozo另类| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 成人午夜高清在线视频| 婷婷亚洲欧美| 这个男人来自地球电影免费观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 99re在线观看精品视频| www.精华液| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲 欧美一区二区三区| 九九热线精品视视频播放| 一本大道久久a久久精品| av超薄肉色丝袜交足视频| 午夜两性在线视频| 成人手机av| 老司机靠b影院| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美成狂野欧美在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品 国内视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产三级中文精品| 成人av在线播放网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 两性夫妻黄色片| 亚洲 国产 在线| 午夜福利成人在线免费观看| 黄色女人牲交| 国产aⅴ精品一区二区三区波| АⅤ资源中文在线天堂| 国产亚洲精品av在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品1区2区在线观看.| 久久午夜亚洲精品久久| 2021天堂中文幕一二区在线观| 成人18禁在线播放| 天堂动漫精品| 免费一级毛片在线播放高清视频| 18禁美女被吸乳视频| 曰老女人黄片| 亚洲成av人片免费观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99在线视频只有这里精品首页| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日韩大码丰满熟妇| 国产爱豆传媒在线观看 | 精品不卡国产一区二区三区| 欧美日韩福利视频一区二区| av中文乱码字幕在线| 国产成人啪精品午夜网站| 九色成人免费人妻av| 国产午夜精品论理片| 一夜夜www| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲免费av在线视频| 久久亚洲精品不卡| 日韩欧美国产在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 日本熟妇午夜| 男女视频在线观看网站免费 | 国产成人精品久久二区二区91| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 成人手机av| 亚洲精品在线观看二区| 婷婷丁香在线五月| 草草在线视频免费看| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲国产欧美人成| 757午夜福利合集在线观看|