紫外線對(duì)狂犬病毒的滅活效果

曲曉蒙,張志剛

(北京民海生物科技有限公司,北京 102600)

0 引言

狂犬病毒(Rabies virus,RV)屬于彈狀病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒屬(Lyssavirus),其頭部為半球形,末端常為平端,形態(tài)呈典型的子彈狀,長(zhǎng)約130～240 nm,直徑65～80 nm[1],是引起狂犬病的病原體。它是一種高神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)及高度可變病毒,發(fā)病期通常會(huì)持續(xù)數(shù)月,病毒感染周邊神經(jīng)進(jìn)而上升到背根神經(jīng)節(jié),一旦感染到脊髓,病毒迅速擴(kuò)散至大腦,引發(fā)致命性腦炎,最終殺死宿主。該病毒易被日光、紫外線、甲醛、新潔爾滅、50%～70%酒精等滅活,病毒懸液經(jīng)56 ℃ 30～60 min或100 ℃ 2 min即滅活,病毒于-70 ℃或凍干后置0 ℃～4 ℃中可保持活力數(shù)年,被感染的組織可保存于50%甘油內(nèi)送驗(yàn)[1]。

紫外線殺菌消毒是利用適當(dāng)波長(zhǎng)的紫外線破壞微生物機(jī)體細(xì)胞中的DNA (脫氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)的分子結(jié)構(gòu),造成生長(zhǎng)性細(xì)胞死亡及再生性細(xì)胞死亡,達(dá)到殺菌消毒效果。根據(jù)國(guó)際紫外線協(xié)會(huì)(International Ultraviolet Association)報(bào)道,在254 nm的光照下,40 mJ/cm2的劑量至少可以殺死99.99%的任何病原微生物[2-3]。紫外線殺菌消毒不會(huì)取代清潔消毒,而是對(duì)其他經(jīng)過驗(yàn)證的消毒方法的一種補(bǔ)充。為確認(rèn)紫外線對(duì)狂犬病毒的滅活效果,于2022年3月30日—2022年5月10日在北京某生物科技有限公司狂犬5C車間進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以期為狂犬病疫苗生產(chǎn)車間的生物安全風(fēng)險(xiǎn)防控提供參考。

然而胡塞爾始終認(rèn)為：“這個(gè)共同的、客觀的世界是被設(shè)想的，它是被我與他人所意識(shí)到的，但它不是被我體驗(yàn)到的，因?yàn)樗[含著對(duì)沒有真正被體驗(yàn)到的和無法真正被體驗(yàn)到的、而是被他人體驗(yàn)到周圍世界?！保ㄞD(zhuǎn)引自耿寧2011：10）這決定了交互主體性語(yǔ)境下，譯者無法像作者本人那樣領(lǐng)會(huì)原作的完整意義，讀者同樣也無法完整領(lǐng)會(huì)譯作。在翻譯的實(shí)際操作層面，所謂愛的共同體和譯者三級(jí)交互是終極目標(biāo)，只是理論上的存在，但譯者交互隱形所強(qiáng)調(diào)的主體交互正是限制譯者過度發(fā)揮主觀能動(dòng)性的無形尺度。據(jù)此，我們進(jìn)一步探究譯者交互隱形對(duì)譯本呈現(xiàn)的尺度價(jià)值，繼而提出譯者交互隱形梯升度。

黨的十八大以來，敬業(yè)拼搏的天脊人，堅(jiān)持精致生產(chǎn)的基礎(chǔ)地位不動(dòng)搖，堅(jiān)持市場(chǎng)深耕的中心地位不動(dòng)搖，堅(jiān)持流動(dòng)風(fēng)控的關(guān)鍵地位不動(dòng)搖，精精致致做產(chǎn)品，規(guī)規(guī)范范做市場(chǎng)，真真切切做服務(wù)，打造天脊品牌，堅(jiān)定品質(zhì)自信，為鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略實(shí)施、深入推進(jìn)脫貧攻堅(jiān)、農(nóng)民增產(chǎn)豐收助力加油。

1 試驗(yàn)材料與設(shè)備

狂犬病毒懸液?？袢〔《竟潭ǘ?PM株)購(gòu)自于法國(guó)巴斯德,由北京民海生物科技有限公司狂犬5C車間保存培養(yǎng),接種于MRC-5細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)、收獲制成狂犬病毒懸液,初始病毒懸液滴度為7.31 gLD50/mL。

2.2.1 病毒載體的制備

凈化設(shè)備層流傳遞窗為中科圣杰科技有限公司制造,安裝于北京某生物科技有限公司狂犬5C車間,符合《消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)GB 15981-1995》的要求,紫外線輻照強(qiáng)度≥70 μw/cm2。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 殺菌紫外線強(qiáng)度確認(rèn)

需獲得測(cè)試病毒并進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增,以得到充足的病毒量。制備狂犬病毒懸液,確認(rèn)初始病毒懸液的滴度,在生物安全柜下將其稀釋至>31 g LD50/mL,抽取稀釋后的病毒液1 mL均勻涂布于φ 9 cm玻璃平皿內(nèi),此病毒載體需現(xiàn)制現(xiàn)用,按照上述方法配置陽(yáng)性對(duì)照,要求陽(yáng)性對(duì)照病毒滴度>31 g LD50/mL,制備完成后,置于生物安全柜內(nèi)風(fēng)干(此試驗(yàn)連續(xù)進(jìn)行3次測(cè)試,測(cè)試用量共配置9皿,其中試驗(yàn)用6皿,對(duì)照3皿)。

2.2 病毒滅活試驗(yàn)

試驗(yàn)動(dòng)物選擇SPF級(jí)的小鼠。KM小鼠為2022年4月11日購(gòu)自于斯貝福(北京)生物科技有限公司,級(jí)別為SPF級(jí),規(guī)格為11～13 g♀,合格證編號(hào):110324221101842963,小鼠數(shù)量共432只。

在殺菌過程中,紫外線強(qiáng)度是一個(gè)非常重要的因素,它能夠影響殺菌效果及速度。因此,需對(duì)紫外線強(qiáng)度進(jìn)行確認(rèn),以確保殺菌的有效性。一種常用的方法是使用紫外線強(qiáng)度計(jì)或紫外線強(qiáng)度指示卡來測(cè)量紫外線強(qiáng)度。測(cè)量前,將紫外線燈管清潔干凈,以免燈管表面的污垢及灰塵影響紫外線透過率。將紫外線強(qiáng)度計(jì)或指示卡置于紫外線輻射下,按照說明書上的操作步驟進(jìn)行測(cè)量,記錄下測(cè)得的數(shù)值。為了確保殺菌的有效性,紫外線強(qiáng)度通常應(yīng)達(dá)到一定的標(biāo)準(zhǔn)。例如:對(duì)于一些常見的病毒及細(xì)菌,要求紫外線強(qiáng)度達(dá)到30 μW/cm2以上,輻照時(shí)間為15～30 min。需要注意的是,不同的細(xì)菌及病毒對(duì)紫外線的敏感程度不同,因此在確定紫外線強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)時(shí),需結(jié)合具體情況進(jìn)行評(píng)估。試驗(yàn)人員用在效期內(nèi)的紫外線強(qiáng)度指示卡對(duì)層流傳遞窗的紫外線強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè),指示卡顏色深于或與標(biāo)準(zhǔn)色塊一致。

2.2.2 測(cè)試方法及布點(diǎn)圖

將病毒置于一定條件下進(jìn)行滅活處理,滅活方法包括熱處理、化學(xué)處理、紫外線輻照等。待玻璃平皿內(nèi)的病毒液風(fēng)干后,立即按照布點(diǎn)圖在層流傳遞窗內(nèi)放置含病毒載體的玻璃培養(yǎng)皿,關(guān)閉傳遞窗門,15 min紫外線消毒完成后,取出平皿,立即添加1 mL病毒培養(yǎng)液于平皿內(nèi)進(jìn)行復(fù)溶,收集至樣品管中。待玻璃平皿內(nèi)的病毒液風(fēng)干后,陽(yáng)性對(duì)照中立即添加1 mL病毒培養(yǎng)液于平皿內(nèi)進(jìn)行復(fù)溶,并完成收集。將供試品與陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行檢測(cè)。

圖1 實(shí)驗(yàn)布點(diǎn)圖

2.2.3 動(dòng)物法檢測(cè)

經(jīng)過滅活處理后的病毒需要進(jìn)行檢測(cè),以確認(rèn)其是否失去傳染性。常用的病毒檢測(cè)方法包括感染細(xì)胞、動(dòng)物等或采用特定的檢測(cè)試劑及方法。供試品、對(duì)照組分別注射48只小鼠,注射量為0.03 mL/只,注射方式為腦腔注射。小鼠接種后飼養(yǎng)14 d。注射后第3 d開始逐日逐只觀察,觀察至第14 d。第14 d有麻痹、癱瘓等狂犬病癥狀的動(dòng)物按死亡計(jì)算。前3 d內(nèi)死亡動(dòng)物不計(jì)。

3 結(jié)果

3.1 紫外線強(qiáng)度指示卡結(jié)果

① 1 mL初始病毒液+9 mL病毒培養(yǎng)液→10 mL。

如圖2所示,采用紫外線強(qiáng)度指示卡進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果符合要求,確認(rèn)此次試驗(yàn)中紫外線輻照強(qiáng)度≥70 μw/cm2。

圖2 紫外線強(qiáng)度指示卡

3.2 病毒懸液稀釋過程

初始病毒懸液滴度為7.31 g LD50/mL。

初始病毒懸液稀釋至>31 g LD50/mL:

紫外線強(qiáng)度指示卡是一種用于檢測(cè)紫外線輻射強(qiáng)度的工具。它通常由一個(gè)小卡片和一個(gè)特殊的化學(xué)試劑組成,化學(xué)試劑能夠在不同紫外線輻射強(qiáng)度下發(fā)生變色反應(yīng)。使用時(shí),將指示卡暴露在紫外線輻射下,一段時(shí)間后,觀察化學(xué)試劑變色程度及顏色,判斷紫外線輻射的強(qiáng)度范圍。

供試品無動(dòng)物死亡,陽(yáng)性對(duì)照組有動(dòng)物死亡。

獨(dú)立學(xué)院法學(xué)專業(yè)在構(gòu)建課程體系時(shí)要適當(dāng)調(diào)整理論學(xué)時(shí)和實(shí)踐學(xué)時(shí)的比例，使理論學(xué)時(shí)和實(shí)踐學(xué)時(shí)的比例至少達(dá)到7∶3以上，著重訓(xùn)練學(xué)生的法律職業(yè)素養(yǎng)與職業(yè)技能，強(qiáng)化學(xué)生的創(chuàng)新精神、實(shí)踐能力以及運(yùn)用法律思維解決實(shí)際法律問題的能力。

③ 3 mL②+27 mL病毒培養(yǎng)液→30 mL。

[23]阿蘭·羅伯-格里耶：《自然本性、人本主義、悲劇》，《快照集/為了一種新小說》，余中先譯，長(zhǎng)沙：湖南美術(shù)出版社，2001年，第118頁(yè)。

3.3 動(dòng)物法檢測(cè)結(jié)果

② 1 mL①+9 mL病毒培養(yǎng)液→10 mL。

第一次測(cè)試結(jié)果見表1。

在服務(wù)體系方面，恒輪德國(guó)集團(tuán)目前在全球擁有約500名員工、30個(gè)服務(wù)基地及超過40?000個(gè)專門用于售后服務(wù)的備品備件?！拔覀兿Ｍㄟ^我們的服務(wù)能力、優(yōu)秀的服務(wù)可靠性和持久性，與我們的用戶達(dá)成一種長(zhǎng)期的，甚至是永久的合作伙伴關(guān)系。這不僅僅是我們的目標(biāo)，同時(shí)也是我們通過努力已經(jīng)取得的成果?！焙爿啓C(jī)床（常州）有限公司服務(wù)副經(jīng)理呂虎林先生說道。

表1 第一次測(cè)試結(jié)果

第二次測(cè)試結(jié)果見表2。

表2 第二次測(cè)試結(jié)果

第三次測(cè)試結(jié)果見表3。

1.2 材料及設(shè)備 3shape Trios口內(nèi)掃描儀(3shape，丹麥)，3shape 模型掃描儀 (3shape， 丹麥)，IPS E-max Press鑄瓷系統(tǒng)(Ivoclar，列支敦士登)，加聚型硅橡膠印模材(DMG，德國(guó))，超硬石膏(賀利氏，美國(guó))。

綜上所述，在小學(xué)低年級(jí)數(shù)學(xué)教學(xué)中應(yīng)用游戲教學(xué)模式，能夠改變傳統(tǒng)教學(xué)模式的禁錮。教師應(yīng)結(jié)合小學(xué)生的年齡特點(diǎn)和心理特點(diǎn)選擇適合的游戲，充分發(fā)揮其教學(xué)優(yōu)點(diǎn)，針對(duì)教學(xué)中存在的問題，采取措施，深入探索和思考。數(shù)學(xué)教學(xué)方式和游戲教學(xué)模式的有效結(jié)合，能夠培養(yǎng)學(xué)生合作學(xué)習(xí)能力，引導(dǎo)學(xué)生將所學(xué)知識(shí)應(yīng)用到生活中，應(yīng)用數(shù)學(xué)知識(shí)解決實(shí)際問題，提升小學(xué)數(shù)學(xué)質(zhì)量，拓展學(xué)生思維，為學(xué)生未來發(fā)展奠定良好基礎(chǔ)。

表3 第三次測(cè)試結(jié)果

4 討論

由于我國(guó)商業(yè)化規(guī)模滅活疫苗生產(chǎn)車間多采用大容量生物反應(yīng)器開展全病毒培養(yǎng)活動(dòng),病毒濃度較高,一旦發(fā)生泄漏將引發(fā)重大生物安全事故[4],因此應(yīng)從生產(chǎn)車間風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、人員機(jī)構(gòu)、設(shè)施設(shè)備、檢測(cè)驗(yàn)證、體系建設(shè)及生物安保等角度進(jìn)行全面考慮,合理有效地控制病毒泄漏,減少生物安全事故的發(fā)生。目前,常用的病毒滅活方法包括高溫高壓蒸汽穿透滅活、甲醛熏蒸、汽化過氧化氫(VHP)熏蒸、化學(xué)試劑等,不同方法適用于不同的病毒滅活。有效滅活涉及病毒的傳播控制、生物安全等方面,因此探討紫外線對(duì)狂犬病毒的滅活效果具有重要的意義。商業(yè)化規(guī)模狂犬疫苗生產(chǎn)車間常需要從外界傳遞物品進(jìn)入生產(chǎn)活動(dòng)區(qū)域,部分物品不能進(jìn)行高溫高壓蒸汽滅菌,為防止狂犬病毒泄漏,將物品安全傳遞至有毒區(qū)成為了關(guān)鍵。部分生產(chǎn)車間會(huì)使用傳遞窗,狂犬病毒從有毒區(qū)一側(cè)進(jìn)入傳遞窗,但再次打開無毒區(qū)一側(cè)的傳遞窗門時(shí),紫外線未能對(duì)病毒進(jìn)行有效消殺,易造成有毒一側(cè)攜帶狂犬病毒的空氣進(jìn)入無毒一側(cè),導(dǎo)致病毒泄漏,引發(fā)生物安全風(fēng)險(xiǎn)。本研究證明,紫外線對(duì)狂犬病毒有滅活作用,輻照強(qiáng)度≥70 μw/cm2的紫外線照射下作用15 min能徹底殺滅狂犬病毒,為使用紫外傳遞窗殺滅病毒及狂犬病疫苗生產(chǎn)車間的生物安全風(fēng)險(xiǎn)防控提供了科學(xué)依據(jù)。