• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)在動(dòng)脈粥樣硬化中的研究進(jìn)展*

    2023-08-10 02:04:05杜高輝魏宇淼
    關(guān)鍵詞:小鼠

    杜高輝, 張 青, 魏宇淼

    華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院心內(nèi)科,武漢 430022

    動(dòng)脈粥樣硬化是由脂質(zhì)驅(qū)動(dòng),多種細(xì)胞共同參與的血管慢性炎癥性疾病,主要發(fā)生于大中動(dòng)脈,是缺血性心臟病和中風(fēng)的主要原因[1]。動(dòng)脈粥樣硬化早期,氧化脂質(zhì)損害并激活內(nèi)皮細(xì)胞,造成內(nèi)皮功能障礙,是動(dòng)脈粥樣硬化病變的起始環(huán)節(jié)。隨后循環(huán)中的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)皮下,進(jìn)一步分化為泡沫細(xì)胞,加速斑塊脂質(zhì)核心的形成和擴(kuò)張,與平滑肌細(xì)胞及其分泌物形成的纖維帽共同構(gòu)成動(dòng)脈粥樣硬化的標(biāo)志性病變。近年,中性粒細(xì)胞,特別是中性粒細(xì)胞形成的胞外誘捕網(wǎng)(neutrophil extracellular trapping nets,NETs)被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化病程進(jìn)展的重要參與者。NETs直接損傷內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞,招募循環(huán)中的單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等其它免疫細(xì)胞,加重動(dòng)脈粥樣硬化病變的炎癥反應(yīng),導(dǎo)致斑塊壞死核心擴(kuò)大和斑塊不穩(wěn)定性增加,嚴(yán)重威脅人體健康[2]。本文從NETs產(chǎn)生,NETs與內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及其他細(xì)胞的相互作用出發(fā),闡明NETs對動(dòng)脈粥樣硬化病程進(jìn)展的關(guān)鍵作用,為動(dòng)脈粥樣硬化的研究提供新的思路。

    1 NETs概述

    1.1 NETs的發(fā)現(xiàn)

    中性粒細(xì)胞是機(jī)體固有免疫的主力軍,機(jī)體受到炎癥刺激時(shí),中性粒細(xì)胞從循環(huán)中遷移至感染部位結(jié)合并吞噬病原體,通過脫顆粒釋放抗菌因子抵御病原體,并通過抗微生物蛋白、釋放活性氧迅速殺死病原體。Brinkmann等[3]于2004年首次發(fā)現(xiàn)并描述了NETs。它由活化的中性粒細(xì)胞產(chǎn)生,其主要成分包括核染色質(zhì)、組蛋白和顆粒蛋白,如髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、彈力蛋白酶(neutrophil elastase,NE)和肽基精氨酸脫亞胺酶Ⅳ(peptidearginine deaminase 4,PAD4)等。核染色質(zhì)由核酸和蛋白質(zhì)組成,作為NETs的骨架,組蛋白起到促進(jìn)微生物和病原體粘附的作用。顆粒蛋白中的MPO、NE等發(fā)揮消滅病原體的作用。NETs最早被認(rèn)為是打擊入侵病原體(主要為細(xì)菌)的一個(gè)重要工具[4]。隨后的研究發(fā)現(xiàn),NETs對細(xì)菌毒素、原生生物和病毒也有抵御作用。此外,越來越多的證據(jù)表明,NETs在多種疾病中都發(fā)揮作用,如自身免疫性疾病[5]、腫瘤[6]、糖尿病[7]、阿爾茲海默病[8]等。同樣的,NETs與動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理進(jìn)展也息息相關(guān)[9]。

    1.2 NETs產(chǎn)生的機(jī)制

    NETs產(chǎn)生的過程稱為NETosis[3],包括NETs的生成和釋放。目前的研究認(rèn)為NETs的產(chǎn)生有兩種不同的機(jī)制,分別為:自殺性NETosis(核膜裂解NETs形成)和非自殺性NETosis(囊泡介導(dǎo)的NETs形成)。自殺性NETosis是一種進(jìn)展緩慢(持續(xù)數(shù)小時(shí))的細(xì)胞死亡方式,有別于壞死和凋亡[10]。目前關(guān)于自殺性NETosis的機(jī)制研究表明,中性粒細(xì)胞通過佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)處理而被激活,隨后通過上調(diào)糖酵解途徑,誘導(dǎo)激活細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),繼而誘導(dǎo)NADPH氧化酶復(fù)合物的磷酸化和組裝。NADPH氧化酶調(diào)節(jié)活性氧(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生[11],提高Ca2+水平,進(jìn)一步激活PAD4。PAD4則通過將組蛋白H3和H4的精氨酸轉(zhuǎn)化為瓜氨酸,使組蛋白丟失大量陽離子,發(fā)生染色質(zhì)凝集[12]。同時(shí),ROS的大量產(chǎn)生會(huì)破壞中性粒細(xì)胞顆粒膜和溶酶體膜,誘導(dǎo)釋放MPO和NE。NE可以將GSDMD(gasdermin D)轉(zhuǎn)化為活性形式GSDMD-NT,介導(dǎo)核膜、顆粒膜、質(zhì)膜孔隙的形成。在此過程中,顆粒蛋白被轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中,參與染色質(zhì)的去折疊。隨后核膜破裂,染色質(zhì)與細(xì)胞質(zhì)蛋白混合,進(jìn)入細(xì)胞外液[13]。

    自殺性NETosis形成的時(shí)間主要在刺激后3~4 h,而中性粒細(xì)胞也可以通過非??斓乃俣?5~60 min)釋放NETs,且不依賴于細(xì)胞死亡,即非自殺性NETosis。目前的研究認(rèn)為非自殺性NETosis在調(diào)節(jié)病原體感染方面發(fā)揮更重要的作用,中性粒細(xì)胞通過Toll樣受體2(Toll-like repetor 2,TLR2)、Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)和補(bǔ)體受體識別不同刺激物誘導(dǎo)NETs產(chǎn)生,與NADPH氧化酶激活無關(guān)[13]。如金黃色葡萄球菌和白色念珠菌分別激活TLR2和補(bǔ)體受體,大腸埃希菌和脂多糖激活的血小板則激活TLR4。Toll樣受體和補(bǔ)體受體激活PAD4,使得NE向細(xì)胞核移位,參與染色質(zhì)去凝集,隨后蛋白質(zhì)修飾的染色質(zhì)通過小泡排出而不破壞細(xì)胞膜。不同于自殺性NETosis,非自殺性NETosis在NETs釋放后,中性粒細(xì)胞仍然可以存活并發(fā)揮進(jìn)一步功能。

    1.3 NETs的檢測

    基于NETs的組成成分,研究者使用多種檢測方法對不同部位的NETs進(jìn)行識別和定量。Perdomo等[14]通過熒光光譜法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測和定量血清中的游離DNA(circulating-free DNA,cfDNA)和NETs中的瓜氨酸化組蛋白H3(cit-H3)、NE、MPO等組分。Gavillet等[15]使用抗瓜氨酸化組蛋白抗體和抗MPO抗體結(jié)合DNA染料,通過流式細(xì)胞術(shù)識別和量化人或小鼠血液樣本中的NETs。Zhao等[16]使用一種新的方法,通過結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)與熒光顯微鏡區(qū)分并量化自殺性NETosis和非自殺性NETosis。電子顯微鏡技術(shù)可以檢測NETs的形態(tài)和結(jié)構(gòu),如通過掃描電鏡(SEM)可以觀察NETs的超微結(jié)構(gòu),而通過透射電鏡(TEM)觀察細(xì)胞釋放NETs的過程,例如核膜裂解,并且區(qū)分細(xì)胞壞死、細(xì)胞凋亡、NETosis[10]。在小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型中,通過蛋白質(zhì)印跡法和免疫熒光染色可以檢測到結(jié)腸組織中NETs的組分,如PAD4、MPO、NE、cit-H3較對照組表達(dá)量升高[17]?;铙w顯微鏡技術(shù)是實(shí)時(shí)檢測NETs產(chǎn)生的方法之一。Bruns等[18]在小鼠煙曲霉感染模型中使用雙光子顯微鏡進(jìn)行實(shí)時(shí)成像,檢測到NETs的產(chǎn)生及抵御煙曲霉感染的過程,并使用中性粒細(xì)胞耗竭抗體證明此過程需要中性粒細(xì)胞的參與。

    2 NETs與動(dòng)脈粥樣硬化

    動(dòng)脈粥樣硬化是由脂質(zhì)驅(qū)動(dòng),多種細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞)共同參與的慢性動(dòng)脈炎癥性疾病。眾多研究表明,中性粒細(xì)胞和NETs在動(dòng)脈粥樣硬化疾病進(jìn)展中發(fā)揮作用。Megens等[19]首次報(bào)道NETs存在于人和小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化病變處。Pertiwi等[20]的研究則通過對44個(gè)復(fù)雜斑塊(包括斑塊內(nèi)出血、糜爛、破裂)和20個(gè)完整斑塊進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,揭示不同形態(tài)斑塊的中性粒細(xì)胞和NETs分布情況。結(jié)果顯示,完整斑塊中無NETs,但其周圍血管組織分布有大量中性粒細(xì)胞和NETs。而在復(fù)雜斑塊(如斑塊內(nèi)出血、糜爛和破裂等)中,中性粒細(xì)胞和NETs則廣泛存在,且在不同復(fù)雜斑塊間分布無明顯差異。另一項(xiàng)關(guān)于人類頸動(dòng)脈內(nèi)膜標(biāo)本的研究表明,與富含脂質(zhì)的不穩(wěn)定斑塊相比,侵蝕斑塊表面分布有大量中性粒細(xì)胞和NETs,并且與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡數(shù)量相關(guān)[21]。NETs也廣泛分布于小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變部位。NE和蛋白酶3(PR3)是NETs發(fā)揮生物學(xué)功能的重要工具。Warnatsch等[22]的研究表明,與對照組ApoE基因敲除小鼠相比,ApoE/NE/PR3基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積減少約3成。給予ApoE基因敲除小鼠脫氧核糖核酸酶(deoxyribonuclease,DNase)治療,其斑塊面積同樣減少約3成,但給予ApoE/NE/PR3基因敲除小鼠DNase治療,斑塊面積幾乎不發(fā)生改變。這些研究證明了NETs在動(dòng)脈粥樣硬化中的重要作用。動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素也會(huì)誘導(dǎo)NETs的產(chǎn)生,如斑塊中的oxLDL、膽固醇結(jié)晶、氧化甾醇、血小板和各種趨化因子等等。研究表明oxLDL以濃度和時(shí)間依賴的方式,增加活性氧的產(chǎn)生,并且通過TLR2和TLR6途徑來誘導(dǎo)NETs的產(chǎn)生[23]。另一項(xiàng)研究表明,oxLDL可以增加PMA處理后中性粒細(xì)胞NETs的產(chǎn)生,并增加NETs中MPO的釋放[24]。氧化磷脂也在NETs形成中發(fā)揮重要作用,如給予LNK基因敲除小鼠ox-PL抗體不僅可以減少血清oxPL水平,還會(huì)減少NETs和動(dòng)脈血栓形成[25]。同時(shí),中性粒細(xì)胞自身膽固醇過度積累也會(huì)影響NETs的形成。如骨髓細(xì)胞中ABCA1/ABCG1缺乏(ABCA1/ABCG1介導(dǎo)膽固醇流出至高密度脂蛋白HDL)會(huì)導(dǎo)致單核/巨噬細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞過量膽固醇積累,激活NLRP3炎癥小體,導(dǎo)致動(dòng)脈病變部位中性粒細(xì)胞的浸潤和NETs的釋放[26]。Curcic等[27]發(fā)現(xiàn)分泌性磷脂酶A2修飾的HDL可以抑制中性粒細(xì)胞的活化,以及NETs的形成,原因可能是sPLA2修飾的HDL,其膽固醇外流能力增強(qiáng)或是抑制中性粒細(xì)胞內(nèi)Ca2+的升高??偠灾?NETs與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系存在復(fù)雜性和多樣性,NETs不僅在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊處廣泛分布,還與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞相互作用。

    2.1 NETs與內(nèi)皮細(xì)胞

    內(nèi)皮功能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化病變早期的標(biāo)志性事件。NETs起始于血流紊亂和剪切應(yīng)力增強(qiáng)的部位,可以直接激活和損傷內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙[28]。Carmona-Rivera等[29]發(fā)現(xiàn)NETs中存在的基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)與內(nèi)皮細(xì)胞中MMP-2的激活和內(nèi)皮功能障礙密切相關(guān),抑制MMP-2的激活可以恢復(fù)內(nèi)皮功能,減輕NETs引起的血管毒性。同時(shí),NETs也通過IL-1α和組織蛋白酶G的協(xié)同作用激活內(nèi)皮細(xì)胞,促進(jìn)凝血。NETs會(huì)進(jìn)一步放大和加重侵蝕斑塊血栓并發(fā)癥引起的內(nèi)皮功能障礙。而內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和激活會(huì)進(jìn)一步誘導(dǎo)NETs和網(wǎng)狀中性粒細(xì)胞的產(chǎn)生,二者的相互作用形成一系列惡性循環(huán),加重內(nèi)皮功能障礙[30]。因此,減少NETs產(chǎn)生可以改善內(nèi)皮細(xì)胞功能,預(yù)防早期動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)展。

    2.2 NETs與平滑肌細(xì)胞

    中性粒細(xì)胞和NETs會(huì)優(yōu)先聚集在平滑肌細(xì)胞富集的粥樣斑塊中,通過TLR2依賴的途徑誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致侵蝕斑塊的形成[31]。通過對355例頸動(dòng)脈斑塊進(jìn)行中性粒細(xì)胞標(biāo)記CD66b染色發(fā)現(xiàn)[32],與其余斑塊相比,中性粒細(xì)胞富集的斑塊,其脂質(zhì)核心更大,巨噬細(xì)胞數(shù)量更多,相反膠原纖維和平滑肌細(xì)胞數(shù)量則較之減少。同時(shí)中性粒細(xì)胞數(shù)量與斑塊內(nèi)炎癥因子IL-8,以及MMP-8、MMP-9水平呈正相關(guān)。PAD4是NETs形成的關(guān)鍵分子,也與侵蝕斑塊形成密切相關(guān)。Knight等[33]通過氯脒抑制PAD4從而減少NETs形成,減輕動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病變面積,進(jìn)一步表明NETs在動(dòng)脈粥樣硬化中的重要作用。在動(dòng)脈粥樣硬化小鼠中,斑塊內(nèi)激活的平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的遷移并釋放NETs。NETs中的組蛋白H4則可結(jié)合并溶解平滑肌細(xì)胞[34]。斑塊內(nèi)平滑肌細(xì)胞的死亡會(huì)減少間質(zhì)膠原合成,導(dǎo)致纖維帽變薄,斑塊不穩(wěn)定性增加。使用抗組蛋白H4抗體抑制這一反應(yīng)后,起到減小斑塊面積,增加斑塊穩(wěn)定性的作用。

    2.3 NETs與巨噬細(xì)胞

    巨噬細(xì)胞與中性粒細(xì)胞相互作用會(huì)加重斑塊內(nèi)的炎癥反應(yīng)。如膽固醇結(jié)晶激活中性粒細(xì)胞后,促進(jìn)巨噬細(xì)胞合成IL-1β的前體分子,同時(shí)巨噬細(xì)胞吞噬膽固醇結(jié)晶,促進(jìn)IL-1β成熟,進(jìn)一步上調(diào)T細(xì)胞促炎因子IL-17的表達(dá),IL-17則會(huì)進(jìn)一步招募免疫細(xì)胞至動(dòng)脈粥樣硬化病變部位,加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展[22]。此外,NETs通過巨噬細(xì)胞的TLR9/NF-κB通路,介導(dǎo)IL-8的釋放。反之,IL-8通過其受體CXC受體2(CXC chemokine receptor 2,CXCR2)介導(dǎo)NETs的形成[35]。Josefs等[36]發(fā)現(xiàn),糖尿病LDLR基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變部位NETs數(shù)量增加,誘導(dǎo)病變部位巨噬細(xì)胞向M1型極化。給予糖尿病LDLR基因敲除小鼠DNase治療后,NETs誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥減輕,斑塊面積、壞死核心及膽固醇結(jié)晶也相應(yīng)減少。

    2.4 NETs與DC細(xì)胞

    NETs不僅與巨噬細(xì)胞相互作用,與DC細(xì)胞之間聯(lián)系亦十分緊密。研究表明,NETs通過激活漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞的自身免疫反應(yīng)致動(dòng)脈粥樣硬化[37],即NETs或死亡細(xì)胞產(chǎn)生的DNA與中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的顆粒蛋白共同激活血管壁中的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞,引發(fā)強(qiáng)烈的Ⅰ型干擾素反應(yīng),導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。反之,漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞的缺失則會(huì)減輕斑塊負(fù)荷及Ⅰ型干擾素反應(yīng)[38]。Knight等[33]的研究表明,NETs促進(jìn)漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞活化,產(chǎn)生干擾素α促進(jìn)血管損傷、血栓和動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。抑制PAD4可消除NETs釋放,減輕Ⅰ型干擾素反應(yīng),并減少動(dòng)脈粥樣硬化病變血管中膜和外膜網(wǎng)狀中性粒細(xì)胞的數(shù)量。

    2.5 NETs與血小板

    Clark等[39]于2007年首次報(bào)道血小板參與NETs的形成。在小鼠膿毒血癥模型中,LPS通過結(jié)合血小板表面TLR4,促使血小板與中性粒細(xì)胞結(jié)合,導(dǎo)致中性粒細(xì)胞快速活化和NETs產(chǎn)生。血小板和中性粒細(xì)胞也通過p-選擇素(p-selectin)和白細(xì)胞表面受體p-選擇素糖蛋白配體-1(PSGL-1)相互作用[40]。此外,血小板糖蛋白(GP)Ⅰb與中性粒細(xì)胞β2整合素(CD18)結(jié)合也參與二者的相互作用。研究表明,阻斷中性粒細(xì)胞β2整合素(CD18)可以顯著減少血小板活化介導(dǎo)的NETs生成[41]。血小板活化對于中性粒細(xì)胞NETs的產(chǎn)生至關(guān)重要,其活化后分泌的蛋白或細(xì)胞因子可以直接參與中性粒細(xì)胞NETs的形成。如血小板活化后釋放高遷移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1),誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的自噬反應(yīng)并加速NETs的產(chǎn)生[42]。血小板因子4(platelet factor 4,PF4)則參與炎癥部位中性粒細(xì)胞的募集和其DNA的釋放。體外研究表明,通過抑制PF4可減少中性粒細(xì)胞DNA的釋放,相反,重組PF4則促進(jìn)NETs的形成[41]。

    3 小結(jié)與展望

    中性粒細(xì)胞作為先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在感染性疾病和炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊表面NETs的形成和釋放會(huì)不斷侵蝕斑塊,誘導(dǎo)斑塊內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及斑塊表面血栓形成。NETs也會(huì)加重斑塊的炎癥反應(yīng)、增加斑塊內(nèi)脂質(zhì)負(fù)荷和膽固醇壞死結(jié)晶數(shù)量,并加速平滑肌細(xì)胞死亡,導(dǎo)致膠原纖維合成減少,纖維帽變薄及斑塊不穩(wěn)定性增加??偠灾?NETs在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展中的作用不容忽視。關(guān)于NETs和動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系還需要更加深入和細(xì)致的研究,從而為后續(xù)的治療和藥物研發(fā)起到指導(dǎo)作用。

    猜你喜歡
    小鼠
    晚安,大大鼠!
    萌小鼠,捍衛(wèi)人類健康的“大英雄”
    視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞再生令小鼠復(fù)明
    科學(xué)(2020年3期)2020-11-26 08:18:30
    小鼠大腦中的“冬眠開關(guān)”
    今天不去幼兒園
    清肝二十七味丸對酒精性肝損傷小鼠的保護(hù)作用
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:34
    米小鼠和它的伙伴們
    高氟對C57BL/6J小鼠睪丸中AQP1、AQP4表達(dá)的影響
    Avp-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
    加味四逆湯對Con A肝損傷小鼠細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用
    精品午夜福利在线看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 51国产日韩欧美| 男女视频在线观看网站免费| av视频在线观看入口| 一级二级三级毛片免费看| 国产亚洲最大av| 欧美一区二区国产精品久久精品| 精品国产三级普通话版| 久久99热这里只有精品18| 国产精品无大码| 亚洲成人中文字幕在线播放| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产亚洲av嫩草精品影院| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久综合国产亚洲精品| 日韩强制内射视频| 青春草亚洲视频在线观看| 丰满乱子伦码专区| 久久久久久大精品| 九九热线精品视视频播放| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 久久精品综合一区二区三区| 久久精品影院6| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 床上黄色一级片| 国产av不卡久久| 色哟哟·www| 久久久久久大精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久久久久伊人网av| 日本午夜av视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| www.色视频.com| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| www.色视频.com| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 又爽又黄a免费视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 三级毛片av免费| 人妻系列 视频| 久久精品久久久久久久性| 青春草国产在线视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 丰满乱子伦码专区| 有码 亚洲区| 成年女人永久免费观看视频| 国产成人精品婷婷| 一边亲一边摸免费视频| 99在线人妻在线中文字幕| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产成人免费观看mmmm| 久久99热这里只有精品18| 大香蕉久久网| 18+在线观看网站| 国产一级毛片在线| 国产一级毛片在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 极品教师在线视频| 国产精品伦人一区二区| 国产69精品久久久久777片| 国产真实乱freesex| 能在线免费观看的黄片| 热99re8久久精品国产| 三级毛片av免费| 晚上一个人看的免费电影| 精品久久久久久成人av| 亚洲不卡免费看| 亚洲人成网站高清观看| 成人美女网站在线观看视频| 天堂网av新在线| 欧美潮喷喷水| 亚洲欧美成人精品一区二区| 中文字幕av在线有码专区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 91狼人影院| 日韩国内少妇激情av| 看免费成人av毛片| 最近中文字幕2019免费版| 国产精品久久久久久久电影| 国产成人freesex在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 内射极品少妇av片p| 伊人久久精品亚洲午夜| av在线亚洲专区| 伊人久久精品亚洲午夜| 全区人妻精品视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 国产久久久一区二区三区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 久久久a久久爽久久v久久| 国产淫语在线视频| 欧美+日韩+精品| 大香蕉久久网| 白带黄色成豆腐渣| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 级片在线观看| 中文字幕久久专区| 看片在线看免费视频| 国产精品99久久久久久久久| 黄色日韩在线| 1000部很黄的大片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产又色又爽无遮挡免| kizo精华| 黄色配什么色好看| 亚洲av二区三区四区| 欧美三级亚洲精品| 国内精品美女久久久久久| 欧美又色又爽又黄视频| 午夜日本视频在线| 波多野结衣高清无吗| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 午夜福利在线在线| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产三级中文精品| 亚洲欧美日韩无卡精品| 五月伊人婷婷丁香| 国产成年人精品一区二区| 欧美性猛交黑人性爽| 搡老妇女老女人老熟妇| 日韩欧美精品免费久久| 国产片特级美女逼逼视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久久久久久国产电影| 内地一区二区视频在线| 国产 一区 欧美 日韩| 一级爰片在线观看| 久久久欧美国产精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美区成人在线视频| 欧美精品一区二区大全| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲精品色激情综合| 久久久精品94久久精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 精品久久久久久久久久久久久| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久精品人妻少妇| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美一区二区国产精品久久精品| 一区二区三区四区激情视频| 国产亚洲精品久久久com| 日本黄色片子视频| 99久久人妻综合| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 麻豆成人av视频| 欧美三级亚洲精品| 91av网一区二区| 一边亲一边摸免费视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 小说图片视频综合网站| 日韩欧美 国产精品| 美女大奶头视频| 色吧在线观看| 深爱激情五月婷婷| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品一区www在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 少妇高潮的动态图| 两个人的视频大全免费| 少妇丰满av| 精品久久久久久久久av| 免费搜索国产男女视频| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 国产爱豆传媒在线观看| www日本黄色视频网| 长腿黑丝高跟| 一个人观看的视频www高清免费观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 天堂影院成人在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 日本黄大片高清| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲最大成人av| 最近手机中文字幕大全| 女人被狂操c到高潮| 国产色婷婷99| 亚洲经典国产精华液单| 久久99精品国语久久久| 美女国产视频在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 国产人妻一区二区三区在| 精品人妻一区二区三区麻豆| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产午夜福利久久久久久| eeuss影院久久| or卡值多少钱| 好男人在线观看高清免费视频| 国产69精品久久久久777片| 欧美潮喷喷水| 欧美区成人在线视频| 国产三级在线视频| 久久精品综合一区二区三区| 美女cb高潮喷水在线观看| 极品教师在线视频| 亚洲性久久影院| 最近中文字幕2019免费版| 我的女老师完整版在线观看| av在线天堂中文字幕| 能在线免费看毛片的网站| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲丝袜综合中文字幕| 在线观看66精品国产| 婷婷色综合大香蕉| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产人妻一区二区三区在| 国产在线一区二区三区精 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 91久久精品国产一区二区三区| 午夜精品在线福利| 高清在线视频一区二区三区 | 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲精品乱久久久久久| 男女视频在线观看网站免费| 国产中年淑女户外野战色| 国产成人精品一,二区| 精品国产露脸久久av麻豆 | 欧美人与善性xxx| 身体一侧抽搐| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美一区二区亚洲| 乱系列少妇在线播放| 成人综合一区亚洲| 久久精品国产亚洲av涩爱| 日本黄色视频三级网站网址| 色综合亚洲欧美另类图片| 听说在线观看完整版免费高清| 乱系列少妇在线播放| videos熟女内射| 网址你懂的国产日韩在线| 国产极品天堂在线| 国产av不卡久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产欧美日韩精品一区二区| 全区人妻精品视频| 久久这里只有精品中国| 两个人视频免费观看高清| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 日韩 亚洲 欧美在线| 又爽又黄a免费视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 大话2 男鬼变身卡| 国产精品一及| 免费搜索国产男女视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区四那| 三级国产精品欧美在线观看| 国产成人91sexporn| av视频在线观看入口| 人妻系列 视频| kizo精华| 亚洲真实伦在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 午夜精品在线福利| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲成人av在线免费| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲av一区综合| 少妇人妻精品综合一区二区| av专区在线播放| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产私拍福利视频在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 成年免费大片在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产成年人精品一区二区| 亚洲va在线va天堂va国产| 尤物成人国产欧美一区二区三区| .国产精品久久| 亚洲av.av天堂| 国产成人a∨麻豆精品| 如何舔出高潮| 国产伦理片在线播放av一区| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲自偷自拍三级| 久久久久九九精品影院| 欧美另类亚洲清纯唯美| 麻豆成人av视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 成年女人永久免费观看视频| 国产亚洲精品久久久com| 观看免费一级毛片| 九九在线视频观看精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美zozozo另类| 亚洲图色成人| 久久久久久久久久久免费av| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 国产午夜精品一二区理论片| 我的老师免费观看完整版| 日韩欧美三级三区| 一本久久精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 亚洲经典国产精华液单| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 六月丁香七月| 在线播放国产精品三级| av天堂中文字幕网| 久久亚洲精品不卡| 性插视频无遮挡在线免费观看| 日韩欧美国产在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲伊人久久精品综合 | 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲国产精品合色在线| 2021天堂中文幕一二区在线观| 午夜亚洲福利在线播放| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产黄片美女视频| 草草在线视频免费看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品久久久久久成人av| av福利片在线观看| 亚洲伊人久久精品综合 | 国产精品永久免费网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日本色播在线视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 中文字幕av成人在线电影| 不卡视频在线观看欧美| 99久久人妻综合| 美女大奶头视频| 成年av动漫网址| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 青春草亚洲视频在线观看| 成人二区视频| 老司机影院毛片| 亚洲18禁久久av| 亚洲成人久久爱视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 免费观看a级毛片全部| 日日摸夜夜添夜夜爱| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲欧美精品自产自拍| 97在线视频观看| 成人av在线播放网站| 亚洲最大成人中文| 亚洲欧洲国产日韩| 国模一区二区三区四区视频| 男女那种视频在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久久精品94久久精品| 久久99热6这里只有精品| 国产精品.久久久| 亚洲av福利一区| 热99re8久久精品国产| 一个人看视频在线观看www免费| www.色视频.com| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久精品国产亚洲av涩爱| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 国国产精品蜜臀av免费| 久久精品久久久久久久性| 在线a可以看的网站| 一边亲一边摸免费视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 色网站视频免费| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲在线自拍视频| 永久免费av网站大全| 最近中文字幕高清免费大全6| 日本三级黄在线观看| 日本黄大片高清| 免费看美女性在线毛片视频| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品久久久久久久电影| 乱人视频在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲精品aⅴ在线观看| 欧美性感艳星| 老司机福利观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲最大成人av| 欧美极品一区二区三区四区| 天堂中文最新版在线下载 | 中文字幕制服av| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久综合国产亚洲精品| 国产乱人偷精品视频| 亚洲av中文av极速乱| 免费搜索国产男女视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产精品福利在线免费观看| 97热精品久久久久久| 日韩一区二区视频免费看| 国产一区二区在线观看日韩| 国产人妻一区二区三区在| 国产免费男女视频| 精品久久久久久电影网 | 小说图片视频综合网站| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美高清性xxxxhd video| 久久热精品热| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品电影一区二区三区| 91av网一区二区| 久久久色成人| 国产精品国产高清国产av| 九色成人免费人妻av| 极品教师在线视频| 成人毛片60女人毛片免费| 岛国在线免费视频观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 日本色播在线视频| 一区二区三区乱码不卡18| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品,欧美在线| 午夜激情福利司机影院| 国语自产精品视频在线第100页| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 99国产精品一区二区蜜桃av| 一级毛片aaaaaa免费看小| www.色视频.com| 韩国高清视频一区二区三区| 夫妻性生交免费视频一级片| 舔av片在线| videos熟女内射| 亚洲欧美日韩无卡精品| 最后的刺客免费高清国语| 少妇的逼水好多| 久久亚洲精品不卡| 久久精品夜色国产| 久久精品91蜜桃| 观看美女的网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲四区av| 看十八女毛片水多多多| 久久久久久国产a免费观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲四区av| 国产黄片美女视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产成人a区在线观看| 久久精品国产自在天天线| 午夜爱爱视频在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 丰满乱子伦码专区| 国产大屁股一区二区在线视频| 日本色播在线视频| 午夜激情福利司机影院| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩成人av中文字幕在线观看| 看片在线看免费视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 欧美色视频一区免费| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲人成网站高清观看| 草草在线视频免费看| 日本黄色片子视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精华一区二区三区| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | av国产久精品久网站免费入址| 一个人看视频在线观看www免费| 高清av免费在线| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久99久视频精品免费| 国产午夜福利久久久久久| av视频在线观看入口| 国产亚洲精品av在线| 九色成人免费人妻av| av黄色大香蕉| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品一二三区在线看| 国产精品综合久久久久久久免费| 六月丁香七月| 国产精品乱码一区二三区的特点| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲图色成人| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩人妻高清精品专区| 1024手机看黄色片| 国产极品精品免费视频能看的| av在线老鸭窝| 在线观看一区二区三区| 久久久国产成人精品二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 日本一二三区视频观看| 国产老妇女一区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲无线观看免费| 久久久久久国产a免费观看| 日本一本二区三区精品| 精品一区二区免费观看| 内地一区二区视频在线| 免费观看a级毛片全部| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精华一区二区三区| 国产高清不卡午夜福利| 欧美zozozo另类| 日韩国内少妇激情av| 18禁在线播放成人免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| 高清av免费在线| 成人美女网站在线观看视频| 我的女老师完整版在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日本三级黄在线观看| 精品国产三级普通话版| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日韩精品有码人妻一区| 晚上一个人看的免费电影| 免费观看a级毛片全部| 国产单亲对白刺激| 中文欧美无线码| 国产亚洲一区二区精品| 国产精品福利在线免费观看| 国产精品一二三区在线看| 国产av在哪里看| 99热这里只有是精品在线观看| 波多野结衣高清无吗| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久热精品热| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 大话2 男鬼变身卡| 在线免费十八禁| 两个人的视频大全免费| 国产真实乱freesex| 91久久精品电影网| 久久久国产成人免费| 国产高潮美女av| 在现免费观看毛片| 日韩欧美 国产精品| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 久久这里有精品视频免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av卡一久久| av天堂中文字幕网| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲综合精品二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 夫妻性生交免费视频一级片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 黄色日韩在线| 好男人视频免费观看在线| 成年版毛片免费区| 一区二区三区免费毛片| 人体艺术视频欧美日本| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲第一区二区三区不卡| 好男人在线观看高清免费视频| 中文天堂在线官网| 三级国产精品片| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲精品乱久久久久久| 中文在线观看免费www的网站| 高清日韩中文字幕在线| 久久久精品大字幕| 国产黄a三级三级三级人| 成人欧美大片| 男女国产视频网站| 欧美激情国产日韩精品一区| 一二三四中文在线观看免费高清| 大香蕉久久网| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品国产露脸久久av麻豆 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产精品野战在线观看| 欧美性感艳星| 女人久久www免费人成看片 | 在线观看66精品国产| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品一区二区性色av| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲精品,欧美精品| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲在线观看片| 亚洲精品国产成人久久av| 国产伦在线观看视频一区| 丝袜美腿在线中文| 在线观看66精品国产| 男人的好看免费观看在线视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产真实乱freesex| 日本五十路高清| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 少妇丰满av| 天堂影院成人在线观看| 欧美精品国产亚洲| 18+在线观看网站|