新型gRNA文庫(kù)高通量合成技術(shù)

2023年3月20日，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院鄭敏教授與張龍教授團(tuán)隊(duì)合作在《核酸研究》（Nucleic Acids Research）在線發(fā)表了題為“A new method to synthesize multiple gRNA libraries and functional mapping of mammalian H3K4me3 regions”的研究論文（DOI： 10.1093/nar/gkad198）。

研究報(bào)道了一種可逆終止子技術(shù)整合入gRNA文庫(kù)合成工作的可控模板依賴延伸（CTDE）方法。研究人員將CTDE方法應(yīng)用于染色質(zhì)免疫沉淀獲得的組蛋白H3K4me3區(qū)域的DNA，構(gòu)建了大規(guī)模的gRNA文庫(kù)，篩選并確定了哺乳動(dòng)物細(xì)胞增殖必需位點(diǎn)的功能元件。最后選取一個(gè)重要的功能區(qū)域進(jìn)行深入研究，證實(shí)了LINC00339內(nèi)含子中的一個(gè)必要位點(diǎn)能夠調(diào)節(jié)其自身信使RNA的表達(dá)，并且該長(zhǎng)鏈非編碼RNA是維持HepG2細(xì)胞增殖的新型細(xì)胞周期調(diào)控基因。CTDE方法具有高效率、低成本和可自動(dòng)化等顯著優(yōu)勢(shì)，可廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物基因組中功能元件的鑒定和研究。

潘辰、李然、水麗艷博士研究生和肖政云助理研究員為論文第一作者。研究得到國(guó)家自然科學(xué)基金、浙江省重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目等資助。