聯(lián)合測(cè)定血漿miRNA-19b及紅細(xì)胞分布寬度在COPD相關(guān)肺動(dòng)脈高壓中的臨床價(jià)值

張青 熊偉 劉明 張誠(chéng)實(shí) 王妮妮 陳榮榮 趙云峰

(1上海市浦東新區(qū)浦南醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,上海 200125;2上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是我國(guó)常見(jiàn)的一種呼吸道慢性氣道炎癥疾病,流調(diào)數(shù)據(jù)顯示我國(guó)40歲以上人群COPD患病率為14.1%〔1〕,按照病程分為COPD急性加重(AECOPD)和穩(wěn)定期,肺動(dòng)脈高壓(PH)是COPD常見(jiàn)并發(fā)癥,我國(guó)由COPD導(dǎo)致的PH占60%,PH是導(dǎo)致COPD患者死亡的重要原因。目前臨床常用的診斷PH的無(wú)創(chuàng)方法是多普勒超聲心動(dòng)圖,三尖瓣峰值流速>3.4 m/s可診斷為PH〔2〕。

微小RNA(miRNA)是短鏈非編碼RNA,在血清中能夠穩(wěn)定表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)miRNA參與細(xì)胞增殖、凋亡、血管生成等〔3～6〕,在COPD、PH等肺部疾病、血管重塑過(guò)程中發(fā)揮重要作用。miR-17-92基因簇為一種典型的含有多順?lè)醋訂?dòng)子的高度保守的基因簇,位于人染色體13q31.3處,包含7個(gè)成員:miR-17-3p、miR-17-5p、miR-18a-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20a-5p和miR-92a-3p。研究發(fā)現(xiàn)血漿中miRNA-19b參與AECOPD患者PH的形成〔7〕。紅細(xì)胞分布寬度(RDW)是反映紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù),RDW的正常參考范圍為11%～14%〔8〕,受年齡、種族及檢測(cè)儀器等多因素影響。數(shù)值越大,反映外周血紅細(xì)胞體積變化越大。近年研究表明RDW水平與PH之間密切相關(guān)。Petrauskas等〔9〕回顧性研究顯示PH患者的RDW水平明顯高于對(duì)照組,RDW聯(lián)合B型鈉尿肽(BNP)能明顯提高BNP預(yù)測(cè)患者發(fā)生PH的準(zhǔn)確性。本研究旨在探討聯(lián)合測(cè)定血漿miRNA-19b及RDW在COPD相關(guān)PH患者中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取上海市浦東新區(qū)浦南醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科病房2020年11月至2021年11月診治AECOPD患者共156例。納入標(biāo)準(zhǔn):符合AECOPD診治中國(guó)專(zhuān)家共識(shí) (2017年更新版)制定的AECOPD標(biāo)準(zhǔn)〔10〕。排除標(biāo)準(zhǔn):①下肢深靜脈血栓慢性血栓、栓塞性肺動(dòng)脈高壓、肺栓塞;②肝功能不全、腎功能不全、肺間質(zhì)纖維化、糖尿病;③惡性腫瘤;④心功能不全、冠心病等。本研究經(jīng)浦南醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò),患者均簽署知情同意書(shū),倫理批準(zhǔn)號(hào):PNYY2020-19。

1.2分組 分為AECOPD組(A組,45例)、AECOPD合并PH組(B組,111例)。A組男31例,女14例,年齡55～80歲,中位年齡69.5歲;B組男71例,女40例,年齡66～79歲,中位年齡72.7歲。兩組一般資料差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。測(cè)定兩組入院時(shí)血漿miRNA-19b、PASP、RDW,繪制血漿miRNA-19b和RDW診斷 COPD 相關(guān)PH及二者聯(lián)合的受試者工作特征(ROC)曲線;應(yīng)用 Logistic回歸分析預(yù)測(cè)概率,并計(jì)算診斷價(jià)值。

1.3超聲心動(dòng)圖測(cè)定肺動(dòng)脈收縮壓(PASP) 應(yīng)用Philip IE33超聲診斷檢測(cè)儀在彩色多普勒引導(dǎo)下測(cè)定PASP〔11〕。

1.4血漿miRNA-19b、RDW測(cè)定 于入院次日早晨抽取空腹靜脈血10 ml,取6 ml靜置后送至檢驗(yàn)科生化室檢測(cè);取4 ml室溫靜置30 min后,4 ℃下3 000 r/min離心10 min,提取血漿,移入 Eppendorf 管,置于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。血漿miRNA-19b測(cè)定采用定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(qRT-PCR)。按 Trizol 試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟提取細(xì)胞總 RNA 并測(cè)定其濃度,結(jié)果以2-ΔΔCt法表示〔12〕。血RDW測(cè)定:采用邁瑞B(yǎng)C3000CT全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定血RDW。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組PASP、血漿miRNA-19b、RDW比較 與A組比較,B組PASP、RDW均顯著升高、血漿miRNA-19b顯著下降(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組PASP、血漿miRNA-19b、RDW比較

2.2血漿miRNA-19b、RDW及二者聯(lián)合診斷COPD相關(guān)PH的ROC曲線比較 血漿miRNA-19b、RDW聯(lián)合診斷COPD相關(guān)PH的AUC(0.890)、敏感度(98.20%)、特異度(80.00%)均高于血漿miRNA-19b、RDW單獨(dú)診斷COPD相關(guān)PH的AUC(0.521、0.798)、敏感度(69.37%、64.86%)、特異度(40.00%、84.44%)。見(jiàn)圖1。

圖1 血漿miRNA-19b、RDW及二者聯(lián)合診斷COPD相關(guān)PH的ROC曲線比較

3 討 論

PH是以呼吸困難、疲勞、虛弱、心絞痛等非特異性臨床癥狀為主要表現(xiàn)且無(wú)法治愈的疾病,65歲以上人群中患病率約為10%,多以暈厥為常發(fā)癥狀,死亡率極高。當(dāng)合并COPD時(shí),常伴隨嚴(yán)重的肺功能損傷,可增加死亡率。miR-17-92簇是控制細(xì)胞凋亡和增殖最具特征的miRNA家族之一。miR-17-92基因簇上調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的減少和細(xì)胞增殖增加。miRNA-19b是miR-17-92基因簇中的成員,參與PH的形成〔13〕,研究發(fā)現(xiàn)〔7〕合并PH的AECOPD患者血漿miRNA-19b水平明顯低于不合并PH的AECOPD患者。在AECOPD相關(guān)PH老年患者中,隨著肺動(dòng)脈壓力逐漸增高,血漿miRNA-19b水平逐漸降低,血漿miRNA-19b水平與PASP呈負(fù)相關(guān)。

RDW是從標(biāo)準(zhǔn)全血細(xì)胞計(jì)數(shù)獲得的生化參數(shù),是循環(huán)中紅細(xì)胞大小變異性的量度,代表紅細(xì)胞大小的變異系數(shù)。當(dāng)機(jī)體動(dòng)脈血氧分壓降低時(shí),可激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng),促使紅細(xì)胞生成素活性降低,繼而影響紅細(xì)胞的形態(tài),促進(jìn)RDW異常增加〔14〕。此外,炎性反應(yīng)時(shí)生成的大量氧自由基可以抑制紅細(xì)胞的成熟,從而導(dǎo)致外周血中幼稚紅細(xì)胞的數(shù)量增加,導(dǎo)致RDW升高〔15〕。

當(dāng) COPD患者繼發(fā)PH時(shí),可造成肺循環(huán)阻力增加,從而加重機(jī)體的缺氧和二氧化碳潴留,導(dǎo)致骨髓造血功能亢進(jìn),同時(shí)刺激紅細(xì)胞生成素生成增多,最終導(dǎo)致繼發(fā)性紅細(xì)胞增多,引起 RDW 升高〔16〕。研究發(fā)現(xiàn) RDW 值隨肺動(dòng)脈壓力的升高而升高,并且兩者呈顯著正相關(guān),認(rèn)為RDW 可作為 COPD繼發(fā)PH的評(píng)估指標(biāo)之一〔16〕。Yang等〔17〕對(duì)213例COPD 患者的研究表明,合并 PH 患者的RDW顯著高于不合并 PH 患者。Xi 等〔18〕對(duì) 167 例特發(fā)性 PH 患者隨訪20 個(gè)月后證實(shí),RDW升高(>13.65%)與特發(fā)性PH嚴(yán)重程度和全因死亡率相關(guān)。一項(xiàng)無(wú)假設(shè)的全癥狀分析研究顯示,在1 364 種疾病中,與RDW最相關(guān)的臨床疾病為 PH〔19〕。

本研究結(jié)果與Yang等〔17〕研究結(jié)論類(lèi)似。本研究提示,聯(lián)合診斷可以提高診斷的敏感度和特異度,而降低誤診率及漏診率。本研究存在的不足之處是單中心、小樣本量研究,需要進(jìn)行多中心、大樣本臨床研究。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)COPD相關(guān)PH患者血漿miRNA-19b水平及RDW變化對(duì)判斷COPD合并PH患者的預(yù)后將會(huì)有一定的臨床價(jià)值。