微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)在臨床血型鑒定與輸血中的應(yīng)用分析

范雪明 林建 李麗紅

輸血治療是目前臨床治療中的常用方法，在大出血、剖宮產(chǎn)、出血性休克等患者中應(yīng)用較多，但輸血前需進(jìn)行血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)，才能保證輸血質(zhì)量的安全性[1]。血型鑒定與交叉配血試驗(yàn)，可快速篩查出相同血型的人群，交叉配血能夠預(yù)防血型不同導(dǎo)致的相互排斥現(xiàn)象。在傳統(tǒng)輸血治療前，一般采用抗人球配血檢驗(yàn)，進(jìn)而篩查出不完全抗體，但這種方法操作復(fù)雜性高，容易出現(xiàn)假陰性情況[2]。因此臨床急需探索一種新型的交叉配血及血型鑒定技術(shù)，提高不完全抗體檢出率及交叉配血成功率。微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)是目前臨床輸血前的常用技術(shù)，可同時(shí)輔助檢驗(yàn)血型和交叉配血，均以抗人球蛋白為基礎(chǔ)展開檢驗(yàn)，檢驗(yàn)精確性較高，因此受到臨床醫(yī)師的歡迎。也有報(bào)道提示在血型鑒定和交叉配血過程中，需輔助應(yīng)用聚凝胺法、鹽水試管法等，可有效提升血型鑒定準(zhǔn)確性和交叉配血成功率[3]。聚凝胺法可中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆性的紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象，此方法可離心查看結(jié)果，為輸血提供安全保障，集操作簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)于一身。鹽水試管法操作簡(jiǎn)便，但只能檢出不配合的完全抗體。為進(jìn)一步分析微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值，本研究以2021年1月—2022年6月龍巖市第二醫(yī)院輸血科收治的60 例患者為對(duì)象，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究以2021年1月—2022年6月龍巖市第二醫(yī)院輸血科收治的60 例患者為對(duì)象，男性36 例，女性24 例；年齡19 ～62 歲，平均（42.50±3.26）歲；病程1 ～12 個(gè)月，平均（6.50±0.50）個(gè)月；體質(zhì)量52 ～80 kg，平均（60.50±1.25）kg；身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）18 ～28 kg/m2，平均（22.50±1.50）kg/m2；血型：A 型15 例，B 型20 例，AB 型20 例，O 型5 例。所有患者均采集靜脈血進(jìn)行微柱凝膠檢驗(yàn)，資料齊全，可進(jìn)行后續(xù)分析。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者知情同意。（2）精神狀態(tài)正常，可配合醫(yī)護(hù)工作的患者。（3）近期未服用藥物的患者。（4）無先天性疾病的患者。（5）嚴(yán)重貧血、失血性休克，需輸血治療的患者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并肝腎功能不全的患者。（2）無法配合長(zhǎng)期隨訪的患者。（3）輸注其他血液制品。（4）溝通障礙的患者。

1.2 方法

血型鑒定：（1）微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)：取患者靜脈血3 mL，采用全自動(dòng)生化分析儀（濟(jì)南愛來寶醫(yī)療科技公司，BK600）進(jìn)行高速離心處理，分離血漿、紅細(xì)胞。室溫保存血型鑒定卡，制作5% 紅細(xì)胞懸液，懸液制作完成后取10 μL 倒入微孔管進(jìn)行正定型處理；反定型處理：準(zhǔn)備10 μL 5%濃度A 型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞、B 型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，與50 μL 血漿共同加入微孔板，離心處理后快速讀取結(jié)果。（2）鹽水試管法：所有血液樣本離心處理，參照相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行血型鑒定。正定型處理：將2滴抗血清滴入5% 的紅細(xì)胞懸液中，完全搖勻后高速離心處理15 s，設(shè)置轉(zhuǎn)速3 000 r/min，處理完成后觀察并記錄結(jié)果。反定型處理：抽取2 滴血液樣本血清，加入1 滴紅細(xì)胞混懸液到血清中，完全搖勻后高速離心處理15 s，設(shè)置轉(zhuǎn)速3 000 r/min，處理完成后觀察并記錄結(jié)果。設(shè)置陰性對(duì)照管，排除冷凝集。

交叉配血：（1）微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)：高速離心處理后分離血液樣本的血漿、紅細(xì)胞。血型鑒定卡靜置一段時(shí)間達(dá)到室溫，制備紅細(xì)胞懸液（北京市斑珀斯技貿(mào)有限責(zé)任公司，血型分析用稀釋液 DG Gel Sol，國(guó)械備20160416號(hào)），標(biāo)記微柱孔主次。主側(cè)孔試劑：供血者紅細(xì)胞懸液（50 μL，1%）+血漿25 μL，均從供血者血液樣本中提??；次測(cè)孔：受血者紅細(xì)胞懸液（50 μL，1%）+供血者血漿25 μL，均從受血者血液樣本中提取。高速離心處理后，讀取并記錄結(jié)果。（2）聚凝胺檢驗(yàn)：A 管：受血者血漿2滴，供血者紅細(xì)胞鹽水懸液1 滴（3%）；B 管：供血者血漿2 滴+受血者紅細(xì)胞鹽水懸液1 滴（3%）。分別在受血者、供血者樣本中加入0.8 mL 的低離子介質(zhì)，充分混合均勻后放置2 min；分別在2 份混合液中加入1 滴凝聚胺，高速離心處理15 s，設(shè)置3 000 r/min 轉(zhuǎn)速，倒出上清液后扣搖，可肉眼見到凝集狀提示處理成功，在管底加1 滴重懸液，輕輕搖勻后，判定檢測(cè)結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)：凝塊在1 min 內(nèi)消失，提示陰性，否則為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）記錄微柱凝膠法、鹽水試管法的檢測(cè)結(jié)果，包括正反定型不符合率和正反定型符合率。

（2）記錄交叉配血成功率。

（3）統(tǒng)計(jì)兩種血型鑒定結(jié)果的陽性檢出率。

（4）計(jì)算不同血清鑒定方法的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)錄入采用Excel 表格，利用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以（±s）表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，轉(zhuǎn)化為正態(tài)分布后，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，多組或不符合兩組檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)，采用校正χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定結(jié)果分析

兩種方法鑒定血型結(jié)果相比，正反定型符合率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 血型鑒定結(jié)果分析[例（%）]

2.2 交叉配血成功率

兩種方法的交叉配血成功率相比，微柱凝膠法較高（P＜0.05）。見表2。

表2 交叉配血成功率[例（%）]

2.3 檢驗(yàn)結(jié)果分析

鹽水試管法、微柱凝膠法檢驗(yàn)結(jié)果顯示，微柱凝膠法的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均較高（P＜0.05）；微柱凝膠法陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值（100%、90.91%）均高于鹽水試管法（81.63%、9.09%）（P＜0.05）。見表3 ～表4。

表3 檢驗(yàn)結(jié)果分析[例（%）]

表4 靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度比較（%）

3 討論

輸血治療是急救治療中的常用方法，能夠快速提升患者血容量，維持機(jī)體正常血液循環(huán)，避免機(jī)體血液流失過多，進(jìn)而出現(xiàn)休克、昏迷、缺氧等癥狀。但輸血需要保證供血者和受血者的血型相同，否則血型不符會(huì)導(dǎo)致輸血排斥[4]。血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)，是輸血治療前必須進(jìn)行的準(zhǔn)備工作，能夠有效提升輸血效率。

鹽水試管法是傳統(tǒng)的血型鑒定方法，也是最早最簡(jiǎn)單的鑒定方法，紅細(xì)胞懸浮于鹽水介質(zhì)中，能夠和相應(yīng)抗體分子快速結(jié)合，形成凝集狀，肉眼可見。1 min 內(nèi)凝集狀是否消散，是主要的鑒別標(biāo)準(zhǔn)。完全抗體用鹽水試管法檢驗(yàn)，具有較高的準(zhǔn)確性，用于血型初次鑒定，不要求較高的儀器精準(zhǔn)度，能夠保證一定的檢測(cè)準(zhǔn)確度。但鹽水試管法也有缺陷性，儀器無法檢測(cè)大量血液標(biāo)本，需要手工進(jìn)行復(fù)雜操作，自動(dòng)化程度低且無法保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，容易出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象[5]。為降低假凝集發(fā)生率，必須保證試管清洗干凈，時(shí)刻核查血清是否漏加，嚴(yán)格按照先后順序加入血清和紅細(xì)胞懸液，且整個(gè)檢測(cè)過程需在光線充足環(huán)境下進(jìn)行。鹽水試管法離心處理必須保證轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間，檢測(cè)后立即觀察并記錄結(jié)果，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性下降。但實(shí)際操作過程中，很難避免某些影響檢測(cè)結(jié)果的因素，如加錯(cuò)試劑、順序錯(cuò)誤等，都會(huì)導(dǎo)致鑒定結(jié)果錯(cuò)誤[6]。

本研究用60 例患者作為研究對(duì)象，分析微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)在血型鑒定和輸血中的應(yīng)用價(jià)值。研究結(jié)果顯示，微柱凝膠法和鹽水試管法鑒定血型結(jié)果相比，正反定型符合率差異不大；與聚凝胺法相比，微柱凝膠法的交叉配血成功率顯著提高（P＜0.05）。提示微柱凝膠法能夠準(zhǔn)確檢測(cè)血液中的不規(guī)則抗體，可有效提升交叉配血的成功率?；颊邔?duì)血型鑒定和交叉配血的結(jié)果都比較滿意，微柱凝膠法在血型鑒定和交叉配血中都有應(yīng)用，可見其在提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確率中起到關(guān)鍵性作用。

微柱凝膠法目前在臨床中的應(yīng)用相當(dāng)廣泛，輔助完成血型鑒定、交叉配血試驗(yàn)的同時(shí)，快速協(xié)助醫(yī)生進(jìn)行輸血治療，臨床療效顯著。微柱凝膠法可快速檢出血液中的不規(guī)則抗體，有利于提升交叉配血的精確性[7]。高速離心處理過程中，凝膠顆粒濾網(wǎng)配合分子抗阻層析原理，迫使紅細(xì)胞在膠表面或膠中大量聚集（這類紅細(xì)胞能夠與抗體發(fā)生反應(yīng)），而在膠尖底位置的紅細(xì)胞，不與抗體相互反應(yīng)[8]。經(jīng)過長(zhǎng)期臨床實(shí)踐證實(shí)，微柱凝膠法使用的檢測(cè)試劑量少，且操作簡(jiǎn)便，能夠快速得到結(jié)果，檢驗(yàn)人員容易判讀檢驗(yàn)結(jié)果。整個(gè)檢驗(yàn)過程基本為儀器操作，大幅降低主觀因素對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，反應(yīng)結(jié)果圖譜穩(wěn)定，保存方便，因此可推薦在臨床上應(yīng)用[9]。此外，微柱凝膠檢驗(yàn)還具有以下優(yōu)勢(shì)：結(jié)果清晰、穩(wěn)定、易于判讀，檢測(cè)結(jié)果可拍照存盤以備查找；實(shí)驗(yàn)步驟標(biāo)準(zhǔn)化，自動(dòng)化程度高；靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好；結(jié)合條形碼技術(shù)上機(jī)檢測(cè)，可以減少標(biāo)記，避免錯(cuò)誤。

本研究還對(duì)鹽水試管法、微柱凝膠法檢驗(yàn)下的血型鑒定結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，微柱凝膠法的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均較高（P＜0.05）。提示微柱凝膠法在血型鑒定中具有顯著優(yōu)勢(shì)，可提高血型鑒定準(zhǔn)確率，但該方法也存在局限性。本研究采用微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)2 例患者的正反定型不符，導(dǎo)致正反定型不相符的可能原因?yàn)椋弘x心不徹底，樣本存在細(xì)菌污染，紅細(xì)胞懸液新鮮程度低，都會(huì)導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果失效，出現(xiàn)假陽性或假陰性的情況。為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，有必要控制紅細(xì)胞濃度和細(xì)胞懸液質(zhì)量。對(duì)2 例正反定型不相符進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，1 例患者存在凝血功能障礙，另1 例患者患有自身免疫性溶血性貧血。結(jié)合以往相關(guān)報(bào)道，說明血型鑒定中，自身疾病也會(huì)對(duì)微柱凝膠檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，因此檢驗(yàn)前需嚴(yán)格查對(duì)患者有無疾病。

本研究交叉配血試驗(yàn)比較微柱凝膠檢驗(yàn)和聚凝胺法的成功率，提示微柱凝膠法交叉配血符合率高，可見微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)在輸血檢驗(yàn)中具有明顯優(yōu)勢(shì)。本研究聚凝胺檢驗(yàn)中有8 例存在交叉配血不合情況，其中3 例交叉配血不合是由自身抗體導(dǎo)致的，反應(yīng)為次側(cè)（-），主側(cè)（+），抗體篩選（+），直接抗球蛋白試驗(yàn)（direct antiglobulin test，DAT）（-）。分析可能原因是供血者和患者血清中的抗原抗體存在對(duì)立情況，患者血清抗體與提供血液的紅細(xì)胞發(fā)生拮抗反應(yīng)，經(jīng)過復(fù)查ABO 血型（ABO blood group，ABO）及RH 血型（RH blood group，RH）（D）血型，糾正錯(cuò)誤鑒定結(jié)果，并選擇正確的血液輸入治療。3 例患者交叉配血不合適為自身存在免疫性疾病導(dǎo)致的，反應(yīng)為次側(cè)（+），主側(cè)（-），DAT（+），自身（-），抗體篩選（-）。分析可能原因?yàn)楣┭吆突颊哐逯械目乖贵w拮抗，因此重新復(fù)查患者血型并排除亞型，輸注主側(cè)相合的血液。剩余2 例患者交叉配血不合的主要原因?yàn)殚L(zhǎng)期使用抗生素，受青霉素、頭孢菌素等藥物的干擾，紅細(xì)胞受膜狀態(tài)改變，導(dǎo)致紅細(xì)胞膜大量吸引蛋白，最終造成DAT 陽性[10]。這2 例患者有明確的藥物使用史，無輸血史和自身免疫性疾病史，同時(shí)血漿總蛋白正常，無纖維蛋白原增高和血球蛋白比例倒置，考慮為藥物致敏。

與微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)相比，聚凝胺法的交叉配血不合格率較高，分析原因：聚凝胺法通過陰離子溶液、凝聚胺作用，會(huì)加快紅細(xì)胞表面陽離子層電位剝離，加快紅細(xì)胞、IgG 的結(jié)合，快速聚集紅細(xì)胞，產(chǎn)生細(xì)胞凝集反應(yīng)[11]。故配血結(jié)果可依據(jù)是否順利散開進(jìn)行判定，但在肝素、低濃度抗體等因素影響下，也會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞散開[12]。此外，聚凝胺檢驗(yàn)技術(shù)受人為影響因素大，搖勻力度、解聚時(shí)間都會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，處理完成后需在1 min 內(nèi)完成結(jié)果判讀和記錄，若凝集反應(yīng)較弱，用力振搖會(huì)導(dǎo)致凝集狀態(tài)消失，導(dǎo)致判定結(jié)果錯(cuò)誤。因此臨床血型鑒定和輸血過程中，需應(yīng)用微柱凝膠檢驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行判別。為控制檢驗(yàn)質(zhì)量，需做好以下工作：做好患者的健康宣教，讓患者清楚血型鑒定和交叉配血的重要性，從而配合相關(guān)工作；提高醫(yī)護(hù)人員的綜合能力，采血一次性成功，檢驗(yàn)一次到位，避免二次采血給患者帶來更大傷害；與患者做好溝通，及時(shí)解答患者疑惑，避免患者滋生焦慮、抑郁等不良情緒，提高患者檢驗(yàn)工作的依從性。

綜上所述，在臨床患者血型鑒定與輸血過程中，采用微柱凝膠檢測(cè)技術(shù)能夠有效提升交叉配血成功率，提高血型鑒定的敏感度、特異度和準(zhǔn)確性，建議在臨床上推廣應(yīng)用。