酶聯(lián)免疫吸附法與金標(biāo)快速檢測(cè)板法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物的價(jià)值

吳園

萬(wàn)載縣人民醫(yī)院 （江西宜春 336000）

乙肝是由乙肝病毒引起的以肝臟病變?yōu)橹鞯囊环N傳染病，具有較高的傳染性[1]。該病呈進(jìn)行性加重，若不及時(shí)采取干預(yù)措施，病情可逐步惡化，發(fā)展為肝硬化、重型肝炎、肝癌等，對(duì)患者生命安全造成極大威脅[2]。但大多數(shù)乙肝患者初期并無(wú)明顯癥狀，因此，快速、準(zhǔn)確的診斷尤為重要。乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物是發(fā)現(xiàn)乙肝病毒感染的最直接手段?，F(xiàn)階段，酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和金標(biāo)快速檢測(cè)板法是乙肝五項(xiàng)常用的檢測(cè)手段，前者因靈敏度及特異度高被廣泛應(yīng)用，后者具有快捷、簡(jiǎn)便、無(wú)需使用特殊儀器的優(yōu)點(diǎn)，上述方法均具有一定優(yōu)勢(shì)，但采用何種方法準(zhǔn)確度更高尚存在爭(zhēng)議[3]。鑒于此，本研究比較ELISA 與金標(biāo)快速檢測(cè)板法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物對(duì)乙肝的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月至2022 年6 月我院收治的68 例確診乙肝患者作為研究對(duì)象。男36 例，女32 例；年齡25～50 歲，平均（36.05±5.01）歲；文化程度，初中及以下15 例，高中或中專37 例，大專及以上16 例；體質(zhì)量指數(shù)20.15～27.48 kg/m2，平均（23.52±1.10）kg/m2。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（審批號(hào)：20191205001）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：伴食欲不振、全身乏力、肝區(qū)疼痛等癥狀；臨床資料齊全；均已簽署研究知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并血液系統(tǒng)嚴(yán)重疾?。患韧懈闻K手術(shù)史；合并肝臟其他病變；急慢性感染；合并惡性腫瘤、精神異常；妊娠期或哺乳期。

1.2 方法

采集所有參檢者3 ml空腹靜脈血，以4 000 r/min離心5 min，取上清液，置于-20 ℃下保存待測(cè)。所有參檢者均行ELISA、金標(biāo)快速檢測(cè)板法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)，即乙肝表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙 肝e 抗 體（hepatitis B e antibody，HBeAb）、乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙肝e 抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙肝核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）。采用中山生物工程有限公司生產(chǎn)的ELISA 試劑盒檢測(cè)HBcAb、HBeAb 樣本在450 nm 波長(zhǎng)下的吸光度（optical density，OD ）值，計(jì)算樣本吸光度值比臨界值（sample 的OD 值/cut off，S/CO）≥陰性對(duì)照孔均值×0.5 為陰性結(jié)果，否則為陽(yáng)性結(jié)果；檢測(cè)HBsAg、HBsAb、HBeAg 樣本在450 nm 波長(zhǎng)下的OD 值，計(jì)算樣本吸光度值比/臨界值（sample 的OD 值/cut off，S/CO）≥陰性對(duì)照孔均值×2.1 為陽(yáng)性結(jié)果，否則為陰性結(jié)果。金標(biāo)快速檢測(cè)板法所使用的乙肝五項(xiàng)檢查卡購(gòu)自英科創(chuàng)新（廈門）科技有限公司，在加樣區(qū)加入樣本，15 min 后觀察顏色變化，若質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)紫紅色條帶，則測(cè)試有效，否則須重新測(cè)試。HBsAg、HBeAg、HBsAb 檢測(cè)中，測(cè)試區(qū)若出現(xiàn)紫紅色條帶，則為陽(yáng)性；HBcAb、HBeAb 檢測(cè)中，測(cè)試區(qū)若未出現(xiàn)紫紅色條帶，則為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩種檢測(cè)方法對(duì)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率及對(duì)乙肝的診斷準(zhǔn)確度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法對(duì)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率比較

兩種檢測(cè)方法對(duì)HBsAg、HBeAg 的陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；ELISA 檢測(cè)對(duì)HBsAb、HBeAb、HBcAb 的陽(yáng)性檢出率高于金標(biāo)快速檢測(cè)板法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩種檢測(cè)方法對(duì)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率比較[例（%）]

2.2 兩種檢測(cè)方法對(duì)乙肝的診斷準(zhǔn)確度比較

ELISA 診斷乙肝的準(zhǔn)確度為88.24%（60/68），高于金標(biāo)快速檢測(cè)板法的73.53%（50/68），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.755，P=0.029）。

3 討論

我國(guó)乙肝患者與乙肝病毒攜帶者數(shù)量較多，人群感染率較高，現(xiàn)已成為影響我國(guó)公共衛(wèi)生安全的重大疾病，且其病情復(fù)雜，早期癥狀不明顯，易延誤最佳治療時(shí)機(jī)，造成病情加重，對(duì)患者生命安全造成極大威脅[4-5]。因此，早期對(duì)其診斷至關(guān)重要。乙肝五項(xiàng)檢測(cè)為早期發(fā)現(xiàn)乙肝的重要途徑，因此，行之有效的檢驗(yàn)方法對(duì)疾病早期預(yù)防與控制具有十分重要的作用。

ELISA 與金標(biāo)快速檢測(cè)板法是當(dāng)前檢測(cè)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物的主要手段。ELISA 具有較高的靈敏度和特異度，且重復(fù)性好[6]。金標(biāo)快速檢測(cè)板法以膠體金作為標(biāo)記物，采用免疫層析技術(shù)檢測(cè)抗原或抗體。本研究結(jié)果顯示，ELISA 法對(duì)HBsAb、HBeAb、HBcAb 的陽(yáng)性檢出率高于金標(biāo)快速檢測(cè)板法，ELISA 診斷乙肝的準(zhǔn)確度高于金標(biāo)快速檢測(cè)板法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明使用ELISA 檢測(cè)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物結(jié)果更可靠。金標(biāo)快速檢測(cè)板法檢測(cè)中顯色往往需要較高濃度的標(biāo)志物，且直徑較大的金顆粒才能獲得較高靈敏度，故其應(yīng)用具有一定限制。同時(shí)此檢測(cè)方法使用了競(jìng)爭(zhēng)抑制法，標(biāo)本陽(yáng)性時(shí)測(cè)試區(qū)無(wú)條帶出現(xiàn)，若標(biāo)本中HBsAb、HBcAb、HBeAb 濃度較低，則可能導(dǎo)致測(cè)試區(qū)出現(xiàn)顏色比質(zhì)控區(qū)稍淺的色帶，肉眼難以對(duì)其進(jìn)行分辨，進(jìn)而出現(xiàn)漏診[7-8]。ELISA 應(yīng)用雙抗體夾心法和雙抗原夾心法進(jìn)行檢測(cè)，采用二步法可降低“鉤狀效應(yīng)”的影響，使陽(yáng)性檢出率明顯升高[9-10]。臨床標(biāo)本檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，對(duì)于ELISA 檢測(cè)HBsAb 顯色淺的標(biāo)本，若使用金標(biāo)快速檢測(cè)板法復(fù)檢，往往在限定時(shí)間內(nèi)無(wú)法判斷出結(jié)果，故針對(duì)此情況不宜采用金標(biāo)快速檢測(cè)板法[11-12]。本研究結(jié)果還顯示，兩種檢測(cè)方法對(duì)HBsAg、HBeAg 的陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明ELISA 與金標(biāo)快速檢測(cè)板法檢測(cè)HBsAg、HBeAg 的陽(yáng)性檢出率相當(dāng)。金標(biāo)快速檢測(cè)板法操作方法簡(jiǎn)單，不需要特殊儀器，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員及實(shí)驗(yàn)室條件要求較低，且試劑穩(wěn)定性好，保存方便[13-14]。金標(biāo)快速檢測(cè)板法適用于急診標(biāo)本及獻(xiàn)血前的快速篩查，也可用于健康體檢或流行病學(xué)的調(diào)查，對(duì)保護(hù)醫(yī)護(hù)人員安全及預(yù)防感染具有重要的作用，但其僅可作為醫(yī)護(hù)人員預(yù)防乙型肝炎病毒感染的手段，不可作為診斷結(jié)果。若想要明確診斷，應(yīng)結(jié)合ELISA 復(fù)查。金標(biāo)快速檢測(cè)板法成本更高，不適用于對(duì)準(zhǔn)確性要求較高的診斷，故其應(yīng)用具有一定局限性。在現(xiàn)階段臨床實(shí)驗(yàn)中，ELISA 能夠很好地符合檢測(cè)要求，檢測(cè)準(zhǔn)確性度較高。值得注意的是，ELISA 檢測(cè)時(shí)需對(duì)樣本進(jìn)行稀釋，標(biāo)本量應(yīng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明添加，避免結(jié)果出現(xiàn)假陰性，最大限度提高診斷準(zhǔn)確度[15]。

綜上所述，ELISA 法對(duì)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物中HBsAb、HBeAb、HBcAb 的陽(yáng)性檢出率高于金標(biāo)快速檢測(cè)板法，且對(duì)乙肝具有較高的診斷準(zhǔn)確度，為臨床治療方案、判斷治療結(jié)果、評(píng)估預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。