腸道菌群失調(diào)對(duì)抽動(dòng)障礙患兒免疫球蛋白水平的影響

張海娥，汪珍珍，張海燕

［1.錦州醫(yī)科大學(xué)研究生培養(yǎng)基地（孝感中心醫(yī)院），湖北 孝感 432000；2.武漢科技大學(xué)附屬孝感中心醫(yī)院兒科，湖北 孝感 432000］

腸道微生態(tài)系統(tǒng)是腸道內(nèi)菌群與腸道粘膜相互作用的整體，也是全身免疫組織結(jié)構(gòu)，其不但在胃腸道功能建立、免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)等多方面起重要作用，而且還影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能［1］。中樞神經(jīng)系統(tǒng)與胃腸道之間通過“腸－腦軸”的雙向作用可影響神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能［2-4］。腸道菌群失調(diào)可引起腸道屏障功能受損，有害物質(zhì)就可順利通過腸道粘膜進(jìn)入血液循環(huán)，造成機(jī)體免疫功能障礙和自身免疫病理損害［5-6］。對(duì)抽動(dòng)障礙（tic disorder,TD）的病因目前尚不明確，大量研究證實(shí)其發(fā)病機(jī)制與免疫失調(diào)有關(guān)［7］。本研究使用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，研究TD 患兒腸道菌群變化情況，并針對(duì)腸道菌群失調(diào)對(duì)TD 患兒免疫功能的影響情況進(jìn)行研究，為預(yù)防及治療抽動(dòng)障礙提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年3 月至2022 年4 月在錦州醫(yī)科大學(xué)研究生培養(yǎng)基地（孝感中心醫(yī)院）被確診為抽動(dòng)障礙兒童123 例作為觀察組，同期查體健康兒童40 例作為對(duì)照組。對(duì)照組2～6 歲20 例，＞6歲20 例；菌群失調(diào)9 例，非菌群失調(diào)31 例；觀察組2～6 歲31 例，＞6 歲92 例；菌群失調(diào)54 例，非菌群失調(diào)69 例。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 觀察組：年齡2～14 周歲；根據(jù)《美國精神疾病診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)》第5 版（DSM-5）進(jìn)行診斷，并采用耶魯綜合抽動(dòng)嚴(yán)重程度量表（Yale Global Tic Severity Scale,YGTSS）評(píng)估觀察組病情嚴(yán)重程度，按得分情況將病情嚴(yán)重程度分為3個(gè)等級(jí)：輕度（＜25 分）、中度（25～50 分）、重度（≥50 分），將確診輕度、中度且無任何共患病患兒作為觀察組。對(duì)照組：年齡2～14 周歲，排除抽動(dòng)障礙及其他神經(jīng)精神疾病，肝腎功能無異常，無其他遺傳、心血管、血液系統(tǒng)等惡性疾??；最近4周內(nèi)未使用免疫調(diào)節(jié)劑、腎上腺皮質(zhì)激素等藥物。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 在確診前半年內(nèi)有使用抗精神病、抗癲癇藥物、抗腫瘤等藥物；合并其他嚴(yán)重疾病的先天性遺傳性疾病、心血管和內(nèi)分泌異常疾病以及腫瘤病人；近期有腦外傷和神經(jīng)損傷的病史；未按時(shí)隨訪者、中途退出者或者遵從性極差者。

1.3 方法

1.3.1 研究方法 將所有研究對(duì)象按年齡分為2～6歲、＞6 歲兩個(gè)年齡階段。檢測(cè)這兩組不同年齡段腸道內(nèi)部菌群分布情況比較異同，根據(jù)腸道菌群分布情況，將觀察組和對(duì)照組均分為腸道菌群失調(diào)組和腸道菌群非失調(diào)組；檢測(cè)觀察組腸道菌群失調(diào)組和腸道菌群非失調(diào)組兒童免疫球蛋白的水平，觀察并分析這兩個(gè)年齡階段免疫球蛋白水平。

1.3.2 檢測(cè)方法 首先采取觀察組外周血5 mL 備用，并采集所有研究對(duì)象10 g 新鮮糞便在無菌容器中。在無菌環(huán)境中將采集的新鮮糞便均勻涂在載玻片上，然后輕推至薄膜狀，風(fēng)干后固定并染色，運(yùn)用革蘭染色法，待干燥后觀察。在油鏡中觀察涂片的10 個(gè)視野，主要有紅色和紫色兩種顏色，確定涂片上菌群的總量及菌群的種類，記錄下來，可參考《腸道菌群糞便涂片檢查圖譜》［8］確定是否失調(diào)。

1.3.3 觀察指標(biāo) 糞便涂片染色干燥后，放于油鏡中從10 個(gè)視野進(jìn)行檢測(cè)，主要有紅色和紫色兩種表現(xiàn)，記錄菌群的總數(shù)及各種顏色表現(xiàn)情況［9］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）［M（P25,P75）］表示，組間比較用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與觀察組各個(gè)年齡階段菌群失調(diào)率比較

本研究對(duì)照組40 例，存在腸道菌群失調(diào)的情況有9 例，占23%；觀察組患兒123 存在腸道菌群失調(diào)的情況有54 例，占44%；由以上統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：觀察組腸道菌群的失調(diào)率要明顯高于對(duì)照組。

觀察組在2～6 歲年齡段腸道菌群失調(diào)例數(shù)為21 例，占總31 例的67.74%，相較于對(duì)照組在相應(yīng)年齡段的腸道菌群失調(diào)例數(shù)為6 例，占總20 例的30%，在2～6 歲年齡段觀察組腸道菌群失調(diào)發(fā)生率升高，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在＞6 歲年齡段，對(duì)照組與觀察組腸道菌群失調(diào)發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 對(duì)照組與觀察組各個(gè)年齡階段菌群失調(diào)率比較［n(%)］

2.2 腸道菌群失調(diào)組和菌群非失調(diào)組各個(gè)年齡階段免疫球蛋白比較

觀察組在2～6 歲這個(gè)年齡段，腸道菌群失調(diào)組IgA 的含量比腸道菌群非失調(diào)組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而IgG 含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）：在＞6 歲的年齡段，IgG、IgA 及IgM 的含量與對(duì)照組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 腸道菌群失調(diào)組和菌群非失調(diào)組各個(gè)年齡段血清免疫球蛋白比較（,g/L）

表2 腸道菌群失調(diào)組和菌群非失調(diào)組各個(gè)年齡段血清免疫球蛋白比較（,g/L）

3 討論

3.1 腸道菌群失調(diào)與抽動(dòng)障礙患兒在不同年齡段的關(guān)系

人體腸道內(nèi)菌群的種類及分布情況會(huì)對(duì)機(jī)體代謝、免疫功能產(chǎn)生重要影響，而且其也需要經(jīng)過長時(shí)間的菌群發(fā)育［10-11］。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，腸道菌群通過腸-腦軸的雙向作用可影響神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能［12-13］。本研究對(duì)照組存在腸道菌群失調(diào)的情況占23%，觀察組存在腸道菌群失調(diào)的情況占44%，表明兒童腸道菌群失調(diào)與TD 患兒之間有相互作用，因此可以推測(cè)引起兒童抽動(dòng)障礙反復(fù)發(fā)生的其中一個(gè)致病因素可能是腸道菌群的失調(diào)。

腸道微生物組主要由兩個(gè)細(xì)菌系統(tǒng)類型定義：擬桿菌門和厚壁菌門，變形菌門、放線菌門、梭菌門的豐度相對(duì)較低［14-16］。腸道微生態(tài)的改變會(huì)引起腸道通透性增加，而后導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，導(dǎo)致炎癥指標(biāo)、血清脂多糖等水平升高，進(jìn)一步增加細(xì)胞膜通透性［17］。腸黏膜分泌sIgA 減少，可能會(huì)使腸粘膜表面更容易受到微生物定植的影響［18］。因?yàn)? 歲以下兒童的腸壁尚未發(fā)育完全，而且屏障功能較差，其內(nèi)部菌群平衡相對(duì)容易被破壞，這就是本研究中看到的6 歲以下兒童菌落失調(diào)比率相對(duì)較高的原因，故誘發(fā)兒童抽動(dòng)障礙發(fā)生的一個(gè)重要因素可能是腸道菌群失調(diào)，造成這種結(jié)果的原因可能是腸道菌群失調(diào)之后，身體內(nèi)的免疫球蛋白降低，免疫功能下降，從而使抽動(dòng)障礙發(fā)生。

3.2 兒童腸道菌群失調(diào)與抽動(dòng)障礙患兒免疫水平的關(guān)系

本研究表明2～6 歲的腸道菌群失調(diào)組兒童免疫球蛋白的含量降低，可能是由于菌群的變化影響了人體內(nèi)部的免疫球蛋白的含量。自身免疫介導(dǎo)神經(jīng)精神癥狀，TD 患者的免疫球蛋白生成異常［19］。目前越來越多的研究表明感染因素如GABHS 感染是導(dǎo)致神經(jīng)精神障礙和抽動(dòng)障礙的一個(gè)關(guān)鍵的病因，與其相關(guān)的兒童自身免疫性神經(jīng)心理障礙統(tǒng)稱為鏈球菌感染相關(guān)的兒童自身免疫神經(jīng)精神障礙［20］。在許多自身免疫性疾病中，B細(xì)胞的百分比已經(jīng)被報(bào)道為升高，而這種情況已被證明與遺傳數(shù)量性狀位點(diǎn)（5,13）有關(guān)［21］。有文獻(xiàn)通過研究免疫標(biāo)志物的血清水平與抽搐和共病強(qiáng)迫癥的嚴(yán)重程度之間的可能關(guān)系，從而驗(yàn)證Th1 細(xì)胞因子與癥狀嚴(yán)重程度正相關(guān)的假設(shè)，還發(fā)現(xiàn)血清IL-2 濃度與抽動(dòng)嚴(yán)重程度分級(jí)呈正相關(guān)，TD 或強(qiáng)迫癥兒童的血清中IL-12 和TNF-α 水平更高［22］。IL-2 水平和抽動(dòng)嚴(yán)重程度評(píng)級(jí)可能提示細(xì)胞免疫效應(yīng)通路參與抽動(dòng)障礙的發(fā)病機(jī)制［23］。有文獻(xiàn)證明，在TD 患者中，由于在感染過程中缺乏T 淋巴細(xì)胞，抑制自反應(yīng)淋巴細(xì)胞的能力下降，該機(jī)制可能是感染過程中抽搐加重的原因［24］。免疫應(yīng)答除了通過熟悉的結(jié)合伙伴和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮作用外，免疫蛋白也可能通過與未知免疫功能的蛋白的新型相互作用產(chǎn)生神經(jīng)元效應(yīng)［25］。通過消除致病性自身抗體或刺激特定神經(jīng)回路或結(jié)構(gòu)的功能的治療，可以預(yù)防終末器官病理［26］。有研究表明6 歲以上兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育基本日趨完善，腸道菌群失調(diào)對(duì)其體液免疫的影響降低［27］。由此可見腸道菌群失調(diào)是導(dǎo)致2～6 歲兒童抽搐反復(fù)發(fā)作的重要影響因素之一，檢測(cè)血液中IgA、IgM 含量，分析腸道菌落情況，可為抽動(dòng)障礙的治療及預(yù)防發(fā)展新的研究方向。

但本研究也有不足，納入樣本量過少，檢測(cè)指標(biāo)相對(duì)單一，這就希望更多的試驗(yàn)研究去探索人體微生態(tài)的結(jié)構(gòu)和功能的演變及其與人體相互作用的機(jī)理，為更多疾病的治療提供新的研究方向。