附子丁香散加味穴位貼敷對(duì)陽(yáng)虛型慢傳輸型便秘大鼠血清血管活性腸肽、P物質(zhì)水平的影響

白克運(yùn)，韓瑋瑋，王本軍，解廣東，王志榮

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南 250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué))

慢傳輸型便秘(STC)是一類以結(jié)腸傳輸時(shí)間延長(zhǎng)、進(jìn)食后結(jié)腸高振幅推進(jìn)收縮減少為特征的功能性便秘。近年來(lái)研究表明，慢傳輸型便秘發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，占慢性功能性便秘的45.5%[1，2]，其病因復(fù)雜，癥狀頑固。陽(yáng)虛型便秘為STC的最常見(jiàn)證型之一。前期研究中我們應(yīng)用源于吳師機(jī)《理瀹駢文》的附子丁香散加味穴位貼敷治療陽(yáng)虛型STC，取得確切療效，但其作用機(jī)制不明。本研究用洛哌丁胺及氫化可的松制作出陽(yáng)虛型STC大鼠模型[3，4]，觀察了附子丁香散加味穴位貼敷對(duì)陽(yáng)虛型STC大鼠血清血管活性腸肽(VIP)、P物質(zhì)(SP)水平的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器 動(dòng)物SPF級(jí)健康Wistar大鼠60只，體質(zhì)量(200±20)g，購(gòu)于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，合格證號(hào)SCXK魯20140007。洛哌丁胺膠囊(西安楊森制藥有限公司，批號(hào)H10910085) ，枸櫞酸莫沙必利膠囊(上海信誼藥廠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H20051719)，氫化可的松注射液(上?，F(xiàn)代哈森藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H41021930)，VIP、SP酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(上海博蘊(yùn)生物科技有限公司)；Thermo Multiskan MK3 型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo 公司)，自制大鼠透明塑料固定盒(20 cm×5 cm×7 cm)。

1.2 大鼠分組、陽(yáng)虛型STC模型制備及附子丁香散加味穴位貼敷方法 將60只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、莫沙必利組、穴位敷貼組，各15只。模型組、莫沙必利組、穴位敷貼組大鼠連續(xù)21 d按3.0 mg/kg體質(zhì)量給予咯哌丁胺懸液(咯哌丁胺溶于蒸餾水)灌胃,同時(shí)每日給予氫化可的松注射液25 mg/(kg·d)后肢肌肉注射，飼以普通詞料；對(duì)照組給予同等體積的蒸餾水灌胃。造模結(jié)束后禁食不禁水24 h，釆用活性炭灌胃，記錄每只大鼠灌胃的時(shí)間，再觀察并記錄大鼠排出第一粒黑便的時(shí)間，兩者之差記為大鼠的胃腸道通過(guò)時(shí)間。其中以正常組大鼠排出首粒黑便時(shí)間的均數(shù)記為判斷造模是否成功的標(biāo)準(zhǔn)，即如果大鼠排出黑便的時(shí)間大于正常組的均值則視為造模成功，如果大鼠排出黑便的時(shí)間小于正常組的均值則視為造模不成功。模型組、莫沙必利組、穴位敷貼組大鼠均造模成功。然后模型組大鼠給予清水灌胃，1次/d，連續(xù)21 d。(莫沙必利組給予莫沙必利 1.5 mg/kg體質(zhì)量灌胃，1次/d，連續(xù)21 d。穴位貼敷組大鼠剃除腹部毛發(fā)，穴位選擇參照林文注主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》定位神闕穴(大鼠劍突與恥骨聯(lián)合連線下1/3處)、雙側(cè)天樞(神闕穴旁開(kāi)0.5 cm)。藥物：附子、苦丁香，肉豆蔻、干姜、炮川烏、白芷、牙皂、花椒，冰片，研末成粉末，用酒精調(diào)合成直徑2 cm厚為0.3 cm的餅狀膏藥，用醫(yī)用PU防水貼膜將藥餅貼敷于神闕穴及天樞穴上，1次/d，每次6 h，貼敷6 d后休息1 d為一個(gè)周期，共用藥3個(gè)周期。

1.3 血清VIP、SP檢測(cè)方法 末次灌胃后，從各組存活大鼠中隨機(jī)選取12只，用5%水合氯醛(0.8 mL/100 g)腹腔注射麻醉，抽取腹主動(dòng)脈血5 mL，靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，取上清液，-80 ℃冰箱冷凍備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清VIP、SP，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

2 結(jié)果

各組大鼠血清VIP、SP水平見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清VIP水平升高(P<0.05)，SP水平降低(P<0.05)。與模型組相比，莫沙必利組、穴位貼敷組大鼠血清VIP水平降低(P均<0.05)，SP水平升高(P均<0.05)。貼敷組與莫沙必利組血清VIP、SP水平相比，P均>0.05。

表1 附子丁香散加味穴位貼敷對(duì)各組大鼠血清SP、VIP含量的影響

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

3 討論

慢傳輸型便秘(STC)是一類以結(jié)腸傳輸時(shí)間延長(zhǎng)、進(jìn)食后結(jié)腸高振幅推進(jìn)收縮減少為特征的功能性便秘，主要癥狀為排便漸進(jìn)性困難、糞便干硬、排便費(fèi)力，伴腹脹不適，頑固性便秘導(dǎo)致患者精神緊張，焦慮抑郁，睡眠障礙，生活質(zhì)量嚴(yán)重下降[5～7]，且容易誘發(fā)多種疾病(心肌梗死、腦卒中、大腸癌等)[8]。西藥治療本病多采用各種類型瀉劑及促胃腸動(dòng)力藥物，大多數(shù)患者在長(zhǎng)期服用瀉劑后易產(chǎn)生藥物依賴性，形成更加頑固的便秘，甚至導(dǎo)致大腸黑變。外科手術(shù)治療創(chuàng)傷大、并發(fā)癥多，部分患者術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉，明顯影響生活質(zhì)量。中醫(yī)藥治療本病以湯藥和針灸為主要治療方法,而患者常有不受針刺之痛者,有不耐湯藥之味者,有不肯服藥之人,有不能服藥之癥。穴位貼敷方法適用于長(zhǎng)期慢性病人群,既可治療病癥,又有可免除長(zhǎng)期服藥、針灸之苦痛，其效果明顯亦如吳師機(jī)所著《理瀹駢文》中所言“膏藥之愈人無(wú)異湯藥”。

慢傳輸型便秘屬于中醫(yī)虛證便秘的范疇，STC常見(jiàn)證型為氣虛便秘、血虛便秘及陽(yáng)虛便秘。在臨床實(shí)踐中我們發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)虛便秘為STC的最常見(jiàn)證型，此類患者多由于勞累耗氣、貪涼飲冷，過(guò)用寒涼藥物，特別是濫用抗生素及大黃、芒硝等苦寒瀉下藥物，導(dǎo)致脾腎陽(yáng)氣虛弱，真陽(yáng)不足，溫煦無(wú)權(quán)，不能蒸化津液，使之陰寒內(nèi)結(jié)，糟粕不行，凝結(jié)腸道而成便秘。正如《景岳全書(shū)·雜證謨·秘結(jié)》曰:凡下焦陽(yáng)虛，則陽(yáng)氣不行，陽(yáng)氣不行，則不能傳送而陰凝于下，此陽(yáng)虛而陰結(jié)也，中醫(yī)多以溫陽(yáng)通便為治則，臨床中我們應(yīng)用源于吳師機(jī)的《理瀹駢文》的附子丁香散加味穴位貼敷治療陽(yáng)虛型STC，取得確切療效。附子丁香散加味穴位貼敷治療陽(yáng)虛便秘，最早記載于清代吳師機(jī)《理瀹駢文》中，其中附子丁香散來(lái)源于《普濟(jì)方》，由附子、干姜、苦丁香、肉豆蔻、白芷組成，功能溫陽(yáng)降逆，內(nèi)服用于治療惡心吐逆，臟冷泄瀉等癥，研末外用可溫陽(yáng)散結(jié)、行氣通便，我們通過(guò)在臨床中的不斷實(shí)踐，在此方基礎(chǔ)上，加入氣味俱厚、濃烈芳香、辛香溫?zé)嶂诖?、牙皂、花椒、冰片，外敷于雙側(cè)天樞及神闕穴，此法具有簡(jiǎn)單便捷、作用安全、起效快、效果好的特點(diǎn),既可自立一門,又可補(bǔ)內(nèi)治之不足。

近年對(duì)STC的病因病理學(xué)研究顯示，STC是“腸神經(jīng)病”,即腸神經(jīng)系統(tǒng) (ENS)功能的異常引起的病變。腸神經(jīng)系統(tǒng)是指胃腸道系統(tǒng)中所含的神經(jīng)元及其間的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的總稱，有"腸道的大腦"之稱,能不需中樞神經(jīng)系統(tǒng)的支配獨(dú)立行使其功能,控制腸道的運(yùn)動(dòng)、內(nèi)分泌和外分泌、胃腸道的微循環(huán)等。血管活性腸肽(VIP能神經(jīng)元和SP能神經(jīng)元是腸神經(jīng)系統(tǒng)中2種重要的肽能神經(jīng)元, 對(duì)胃腸的運(yùn)動(dòng)功能起著重要的調(diào)節(jié)作用。我們可以把ENS看作是一系列在胃腸道重復(fù)出現(xiàn)，互相重疊的包括感受神經(jīng)元、上行和下行中間神經(jīng)元、上行興奮性和下行抑制性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的單元。在這些回路和單元中,神經(jīng)遞質(zhì)是不可缺少的信息載體。VIP和SP就是ENS中2種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。SP主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及腸肌間神經(jīng)叢中，在整個(gè)胃腸道內(nèi)均有分布[9]，SP為調(diào)節(jié)腸道作用最強(qiáng)的興奮性遞質(zhì), 具有強(qiáng)烈促進(jìn)腸道平滑肌收縮, 刺激小腸、結(jié)腸黏膜分泌水和電解質(zhì), 促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)的作用[10]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)STC患者結(jié)腸組織進(jìn)行研究后認(rèn)為STC的發(fā)生可能與SP水平降低相關(guān), 這可能是導(dǎo)致結(jié)腸傳輸功能損害的原因之一[11～13]。VIP是腸神經(jīng)系統(tǒng)中的一種主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，VIP可通過(guò)松弛胃腸平滑肌, 抑制結(jié)腸和直腸緊張性, 抑制小腸運(yùn)動(dòng), 以減弱胃腸動(dòng)力, VIP增加造成了腸道動(dòng)力抑制性背景, 以致腸蠕動(dòng)性收縮不易發(fā)生, 導(dǎo)致便秘[14]。研究表明，便秘患者腸道中 VIP 的表達(dá)顯著降低，影響結(jié)腸下行性抑制，致使巨大遷移性收縮傳播障礙[15]。盡管VIP是胃腸道抑制性神經(jīng)遞質(zhì), 但國(guó)內(nèi)外大量學(xué)者通過(guò)對(duì)STC患者及動(dòng)物模型的研究認(rèn)為VIP有減少趨勢(shì), 其含量減少可能導(dǎo)致結(jié)腸出現(xiàn)過(guò)度的階段性蠕動(dòng)，使有效蠕動(dòng)減弱, 從而出現(xiàn)結(jié)腸傳輸障礙[16]。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清SP水平下降，VIP水平升高,與文獻(xiàn)報(bào)道相一致。予以附子丁香散加味穴位貼敷治療后，穴位貼敷組大鼠血清VIP水平降低，SP水平升高，與模型組相比有顯著差異，表明附子丁香散穴位貼敷對(duì)陽(yáng)虛型STC大鼠血清VIP及SP水平有調(diào)節(jié)作用，可能通過(guò)下調(diào)血清VIP水平和升高血清SP水平興奮平滑肌，引起平滑肌收縮，調(diào)節(jié)腸道功能，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，達(dá)到治療陽(yáng)虛型STC的目的，這可能是附子丁香散加味穴位貼敷治療陽(yáng)虛型STC的作用機(jī)理之一。

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