拉氏仔稚魚發(fā)育、饑餓不可逆點(diǎn)及適時(shí)下塘研究

任星月,駱小年,鄧舒萍,段友健,姜玉聲,李 姣

( 大連海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧 大連 116023 )

1 材料與方法

1.1 拉氏仔魚

1.2 胚后仔稚魚發(fā)育觀察

1.3 拉氏饑餓不可逆點(diǎn)試驗(yàn)

取6日齡的仔魚(鰾形成,鰾一室開始充氣,仔魚部分可以短暫平游)2000尾,置于4個(gè)培養(yǎng)箱中(500尾/箱,規(guī)格0.45 m×0.25 m×0.20 m),分為對(duì)照組、饑餓組1及饑餓組2。對(duì)照組正常投喂,饑餓組1、饑餓組2試驗(yàn)期間不投喂;對(duì)照組用于后續(xù)胚胎觀察,饑餓組1用于測(cè)定仔魚開口率,饑餓組2試驗(yàn)期間用于計(jì)算仔魚死亡率。3組水溫保持16～17 ℃,pH 7.6±0.2,采用連續(xù)微量充氣,保持溶解氧水平不低于5.0 mg/L。仔魚開口后,每日16:00自對(duì)照組、饑餓組1中取出20尾仔魚,放入規(guī)格相同的培養(yǎng)箱中適應(yīng),適應(yīng)后投喂人工飼料,2.5 h后取出仔魚,麻醉后在解剖鏡下逐尾檢查攝食情況,并計(jì)算饑餓組1開口仔魚初次攝食率、最高攝食率,記錄每天攝食率;試驗(yàn)期間每日8:00檢查饑餓組2個(gè)體死亡狀況?？刂扑?.15 m,每日8:00、16:00清理死魚,每隔1 d換水1/3(11:00),養(yǎng)殖用水使用300目浮游生物網(wǎng)過濾后的養(yǎng)殖用水。

1.4 拉氏仔魚最適下塘試驗(yàn)

1.4.1 網(wǎng)籠制作

上部開口的圓柱體網(wǎng)籠的制作為:將60目篩絹網(wǎng)(輪蟲及部分較小的枝角類、橈足類可以通過)分別裁剪為1.5 m×1.0 m的長(zhǎng)方形網(wǎng)布和面積為0.17 m2的圓形網(wǎng)布(直徑0.46 m),共計(jì)39套,縫合好后,將篩絹網(wǎng)套在鐵絲框架外,縫合固定,對(duì)網(wǎng)籠按1～13進(jìn)行編組。

1.4.2 放苗池塘準(zhǔn)備及下塘試驗(yàn)

1.4.3 池塘水化學(xué)指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)期間水溫每日6:00、15:00使用溫度計(jì)現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定。

試驗(yàn)期間每日8:00采樣測(cè)定溶解氧、氨氮、pH水化學(xué)指標(biāo)。溶解氧參照GB 7489—1987采用水質(zhì)溶解氧碘量法進(jìn)行測(cè)定[14],氨氮采用奈氏試劑法測(cè)定,pH使用上海雷磁精密臺(tái)式酸度計(jì)測(cè)定。

1.4.4 輪蟲生物量的指標(biāo)測(cè)定

輪蟲生物量定量采集和測(cè)定,計(jì)數(shù)及質(zhì)量計(jì)算方法參考文獻(xiàn)[15],每2 d測(cè)量1次。

1.5 相關(guān)攝食和生長(zhǎng)指標(biāo)的計(jì)算

攝食發(fā)生率為消化道內(nèi)含有食物的仔魚數(shù)量占總檢查仔魚數(shù)量的百分比;初次攝食率為消化道中含有食物的仔魚數(shù)量占樣本總數(shù)量的百分?jǐn)?shù);饑餓不可逆點(diǎn)時(shí)間為所測(cè)定的仔魚攝食發(fā)生率為最高初次攝食發(fā)生率的50%時(shí)的時(shí)間,以孵化后時(shí)間來表示;變異系數(shù)為樣本標(biāo)準(zhǔn)差占樣本平均值的百分比。

卵黃囊體積(V,mm3)計(jì)算公式為:

V球=4/3πr3或V橢圓=πRr2/6

(1)

式中,R為卵黃囊長(zhǎng)徑,r為卵黃囊短徑。

體長(zhǎng)/體質(zhì)量相對(duì)生長(zhǎng)率(R,%)計(jì)算公式為:

R=(A-A0)/A0×100%

(2)

式中,A為當(dāng)日仔魚體長(zhǎng)/體質(zhì)量,A0為初始仔魚體長(zhǎng)/體質(zhì)量。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

饑餓初次攝食率試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 Excel 2016計(jì)算、Origin 2019b繪圖;全長(zhǎng)生長(zhǎng)及卵黃囊體積長(zhǎng)徑采用R與Origin 2019b處理擬合曲線;仔魚成活率數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0進(jìn)行單因素方差分析及Bonferroni檢驗(yàn),仔魚出塘體長(zhǎng)、體質(zhì)量采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法校驗(yàn)后,使用鄧肯多重比較檢測(cè)各測(cè)量指標(biāo)的差異,以P<0.05為差異顯著;數(shù)據(jù)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;其他圖像采用Photoshop CS 6.0繪制。

2 結(jié) 果

2.1 拉氏仔稚魚形態(tài)發(fā)育

圖2 拉氏仔稚魚局部特征Fig.2 Characters on partial regions of P. lagowskii larvae a.孵化12 h仔魚; b.1日齡仔魚的圍心腔,箭頭表示圍心腔膜; c.1日齡仔魚的臀鰭基部;d.2日齡仔魚眼球色素出現(xiàn)期,黑色耳石; e.3日齡仔魚體色素出現(xiàn)期,箭頭表示色素細(xì)胞;f.4日齡仔魚肛門; g.5日齡仔魚口裂;h.5日齡仔魚尾柄基部鰭膜凹陷; i.6日齡鰾室充氣期,箭頭分別表示胸鰭和鰾;j.箭頭表示7日齡仔魚鰾一室、口;k.箭頭表示7日齡仔魚脊索.a.larvae hatched for 12h;b.the pericardial cavity of 1 dph larvae, the arrow represents the pericardial membrane; c.anal fin base at 1 dph larvae; d.appearance of fish eyeball pigment at 2 dph larvae ,black otolith; e. appearance of body pigment at 3 dph larvae, the arrow shows the pigment cell; f. the anus of 4 dph larvae; g. 5 dph larvae crack mouth; h. caudal peduncle base fin membrane depression at 5 dph larvae; i. bladder chamber aeration period at 6 dph larvae, arrows indicate pectoral fins and swim bladders; j. arrow indicates a chamber and mouth of 7 dph larvae ; k.arrow indicates notochord of 7 dph larvae.

2.1.1 卵黃囊期(0～7 d)

卵黃囊期即從仔魚破膜至卵黃全部吸收的時(shí)期,卵黃囊期仔魚又分為眼球色素出現(xiàn)期、體色素出現(xiàn)期、鰾室充氣期。

剛破膜仔魚全長(zhǎng)(4.69±0.37) mm,卵黃囊全長(zhǎng)(3.12±0.10) mm,卵黃前端呈橢圓球狀,后端如柱狀(圖1a);心臟輪廓清晰呈管狀,有明顯搏動(dòng),眼囊輪廓明顯,耳囊內(nèi)透明可見耳石,血液透明無色素。孵化12 h后測(cè)得全長(zhǎng)(4.99±0.06) mm,心率146～169次/min(圖2a)。

1日齡:仔魚全長(zhǎng)(5.56±0.35) mm,心率130～182次/min,卵黃囊全長(zhǎng)(3.00±0.07) mm,前后端凹陷明顯,心臟呈紅色(圖1b),圍心腔形成,腔膜清晰可見(圖2b),臀鰭基部褶皺凹陷(圖2c),全身血液逐漸變紅。

2日齡:眼球色素出現(xiàn)期(圖1c),仔魚全長(zhǎng)(6.12±0.10) mm,卵黃囊全長(zhǎng)(2.90±0.24) mm,呈線形,部分卵黃囊有空缺,心率160～199次/min,耳石呈黑色(圖2d),頭部與尾柄腹側(cè)血流明顯,血液呈橙紅色。

3日齡:體色素出現(xiàn)期(圖1d),仔魚全長(zhǎng)(6.90±0.26) mm,心率192～221次/min,卵黃囊全長(zhǎng)(2.91±0.31) mm,卵黃囊顏色變淺,仔魚背脊出現(xiàn)十字花紋,形成兩列點(diǎn)狀黑色素(圖2e),鰓蓋、口裂開始形成,胸鰭可以張開,仔魚感光后竄游。

4日齡:仔魚全長(zhǎng)(6.85±0.25) mm,卵黃囊全長(zhǎng)(2.99±0.10) mm(圖1e),鰾開始形成,肛門形成(圖2f),消化道表面出現(xiàn)褶皺,褶皺前端增大,脊柱下方隨卵黃囊分布黑色色素,背鰭基部凹陷,尾鰭血管曲折。

5日齡:仔魚全長(zhǎng)(6.95±0.32) mm,卵黃囊全長(zhǎng)(2.78±0.23) mm,頭部花紋聚集呈放射狀,眼睛呈青灰色,口裂清晰可見(圖2g),消化道貫通,消化道上方及全身黑色素增多(圖1f),尾柄基部鰭膜開始凹陷(圖2h),少部分可以平游。

6日齡:鰾室充氣期(圖1g),仔魚全長(zhǎng)(7.64±0.31) mm,卵黃囊呈線形,鰾一室開始充氣,鰾室呈橢圓狀,腹部黑色素覆蓋,胸鰭張開(圖2i),尾鰭開始擴(kuò)大,仔魚鰓蓋打開開始呼吸,基本可以平游。

7日齡:仔魚全長(zhǎng)(8.00±0.28) mm,鰾一室充氣明顯(圖2j),仔魚開口攝食(圖1h),頭部背部黑色斑點(diǎn)變大,脊索末端開始向上彎曲(圖2k),背鰭、尾鰭鰭膜明顯收縮。

2.1.2 晚期仔魚(8～30 d)

晚期仔魚即卵黃囊全消失至各部鰭發(fā)育完善時(shí)期。

9日齡:仔魚全長(zhǎng)(8.25±0.23) mm,仔魚卵黃囊消失,仔魚脊索末端上彎曲明顯(圖1i),尾鰭鰭條出現(xiàn),胸鰭至肛門前鰭膜寬大,長(zhǎng)度未至鰾前端,尾柄基部鰭膜凹陷明顯。

10日齡:仔魚全長(zhǎng)(8.28±0.11) mm,仔魚自頭背至尾、腹部呈明顯淡黃色(圖1j),尾鰭鰭條開始出現(xiàn),可集群趨光游動(dòng)。

12日齡:仔魚全長(zhǎng)(8.51±0.22) mm,仔魚脊椎骨形成,肌節(jié)由“V”型變?yōu)椤癢”型(圖1k),鰾二室開始形成,背鰭鰭膜收縮,開始分化,仔魚鰾下方局部出現(xiàn)虹彩細(xì)胞,呈銀色反光,臀鰭開始形成,尾鰭鰭條明顯。

21日齡:仔魚全長(zhǎng)(10±0.18) mm,鰾二室充氣(圖1l),背鰭后方褶皺縮小至不明顯、腹鰭?cǎi)薨檶挻?尾柄褶皺縮小。

23日齡:仔魚全長(zhǎng)(13±0.26) mm,鰓蓋后緣出現(xiàn)銀光色物質(zhì),仔魚腹部銀光色物質(zhì)逐漸延伸至肛門處(圖1m)、背鰭、臀鰭形成,腹褶縮小,尾叉開始形成。

25日齡:仔魚全長(zhǎng)(14±0.21) mm,仔魚腹鰭輪廓明顯,周圍褶皺縮小,腹部銀光色物質(zhì)向上延伸至鰾上方,向下覆蓋大半個(gè)腹部(圖1n),鰓蓋部分銀光色物質(zhì)增多。

27日齡:仔魚全長(zhǎng)(16.5±0.13) mm,仔魚鰓蓋骨、腹鰭開始形成(圖1o),尾叉加深,鰓絲和鰾上方血流呈紅色。

30日齡:仔魚全長(zhǎng)(18.5±0.27) mm,腹鰭?cǎi)薨櫜幻黠@,銀光色物質(zhì)覆蓋整個(gè)腹部(圖1p)。

35日齡(進(jìn)入稚魚期):仔魚全長(zhǎng)(21±0.31) mm,各鰭發(fā)育完善(圖1q),銀光色物質(zhì)由鰓蓋向眼眶下緣,腹部向背部延伸。

2.2 拉氏初次攝食發(fā)生率與饑餓不可逆點(diǎn)

圖3 拉氏饑餓仔魚初次攝食率Fig.3 Initial feeding rate of P. lagowskii larvae starvation

2.3 拉氏仔魚卵黃囊卵黃的吸收

圖4 拉氏卵黃囊全長(zhǎng)與日齡的關(guān)系Fig.4 Relationship between total length of yolk sac and age in P. lagowski

2.4 拉氏仔魚生長(zhǎng)

圖5 拉氏仔魚開口前全長(zhǎng)與日齡變化Fig.5 Changes of total length and age before P. lagowski larvae mouth-open

2.5 拉氏仔魚適時(shí)下塘

2.5.1 試驗(yàn)池塘主要生態(tài)因子的變化

試驗(yàn)期間池塘輪蟲生物量為8.3～18.58 mg/L,4日齡輪蟲生物量與其他各組有顯著性差異(P<0.05),輪蟲數(shù)量總體變化趨勢(shì)為先升后降(表1)。池塘主要生態(tài)因子監(jiān)測(cè)表明:水溫最低為14.5 ℃,最高為20.1 ℃,平均水溫不超過19 ℃,日變化2～6 ℃,5日齡(2021-05-01)、6日齡(2021-05-02)下午下塘水溫與其他日水溫差異顯著(P<0.05),且二者之間上午水溫有顯著差異(P<0.05);上午池塘水溫為14.5～17.0 ℃,下午池塘水溫為16.5～20.1 ℃;溶解氧8.0～9.0 mg/L,pH 8.0±0.4,氨氮0.20～0.35 mg/L(表2)。

表1 試驗(yàn)期間試驗(yàn)池塘輪蟲數(shù)量變化情況(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)Tab.1 Changes of rotifer number in ponds during the experiment(mean±SD)

表2 試驗(yàn)期間池塘主要生態(tài)因子指標(biāo)測(cè)定變化情況(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)Tab.2 Changes of several ecological factor indexes in the pond during the experiment(mean±SD)

2.5.2 魚苗下塘?xí)r間與成活率關(guān)系

不同日齡下塘的仔魚均有成活(表3),其中:9日齡下塘的仔魚成活率最小,為(40.0±2.0)%;6日齡下塘仔魚成活率最大,為(75.0±2.2)%;1～3日齡仔魚下塘成活率為58.0%～67.0%;4日齡、5日齡仔魚下塘成活率分別為(50.0±2.0)%、(42.0±2.0)%;6～8.5日齡仔魚下塘成活率為50.0%～75.0%,上午下塘比下午下塘成活率高;9～10日齡仔魚下塘成活率分別為(40.0±2.0)%、(48.0±2.7)%。

2.5.3 魚苗下塘?xí)r間與生長(zhǎng)關(guān)系

不同日齡仔魚下塘至試驗(yàn)?zāi)┢谌L(zhǎng)均增加(表4):2日齡仔魚下塘相對(duì)體長(zhǎng)增長(zhǎng)率最高(82.2±0.4)%,全長(zhǎng)達(dá)(10.88±0.73) mm;7.5日齡下塘的仔魚出塘?xí)r全長(zhǎng)變異系數(shù)最小,為5.09%,仔魚下塘全長(zhǎng)生長(zhǎng)最快,10日齡仔魚出塘?xí)r全長(zhǎng)變異系數(shù)最大,為12.54%。顯著性差異比較分析表明,6日齡仔魚出塘(終末)全長(zhǎng)與7、7.5、8、8.5日齡差異不顯著(P>0.05),1日齡仔魚出塘(終末)全長(zhǎng)與6、7、7.5、8、8.5、10日齡差異顯著(P<0.05)。

表4 同一批拉氏魚苗不同日齡仔魚下塘至試驗(yàn)?zāi)┢诘纳L(zhǎng)情況Tab.4 Growth of the same batch of P. lagowski at different age from the pond to the end of the experiment

6日齡仔魚下塘至試驗(yàn)?zāi)┢诔龀伢w質(zhì)量最大,為(9.0±2.0) mg。1日齡下塘的仔魚出塘?xí)r體質(zhì)量變異系數(shù)最大,為41.50%;8.5日齡下塘的仔魚出塘體質(zhì)量變異系數(shù)最小,為14.24%。2日齡仔魚下塘相對(duì)體質(zhì)量增長(zhǎng)率最高(515.4±1.0)%。顯著性差異分析表明,6日齡仔魚出塘(終末)體質(zhì)量與1、5、7、9、10日齡差異顯著(P<0.05),與6.5、7.5、8.0、8.5日齡出塘(終末)體質(zhì)量差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 拉氏仔稚魚期生長(zhǎng)特性

3.1.1 仔魚黑色眼點(diǎn)出現(xiàn)

3.1.2 仔魚平游、消化道貫通與鰾形成先后關(guān)系

3.2 拉氏初次攝食率和不可逆點(diǎn)

1963年,Blaxter等[27]首次提出初次攝食饑餓不可逆點(diǎn)的概念,饑餓不可逆點(diǎn)是仔魚耐受饑餓的臨界點(diǎn),當(dāng)仔魚饑餓至該時(shí)間點(diǎn)時(shí),仔魚個(gè)體即使仍能存活一段時(shí)間,但已經(jīng)不能恢復(fù)攝食能力,由此可見,饑餓是仔魚初期死亡的重要因素之一。有研究表明,饑餓狀態(tài)下的仔魚缺乏能量來源,體內(nèi)組織、器官都會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化,如消化器官的組織結(jié)構(gòu)、血液成分、酶的活性(尤其是消化酶)發(fā)生變化[28-29]。本試驗(yàn)中,饑餓組仔魚與正常投餌仔魚相比,腸道更窄,饑餓至死的仔魚具有頭頸彎曲、頭大、身體小且呈佝僂狀等現(xiàn)象,這與花鱸(Lateolabraxmaculatus)仔魚饑餓現(xiàn)象一致[30]。

3.3 拉氏仔魚適時(shí)下塘

仔魚下塘的時(shí)機(jī)選擇對(duì)提高仔魚的成活率和質(zhì)量尤為關(guān)鍵,仔魚適時(shí)下塘分為生態(tài)適時(shí)下塘和生理適時(shí)下塘[13]。生態(tài)適時(shí)下塘是指提供最佳仔魚適時(shí)下塘的生態(tài)條件,如適口餌料繁殖的數(shù)量和達(dá)到高峰期的時(shí)間[35];生理適時(shí)下塘是指仔魚下塘生理發(fā)育正適時(shí),分為仔魚生長(zhǎng)適時(shí)下塘和成活適時(shí)下塘。目前,生產(chǎn)普遍做法是以“腰點(diǎn)”(鰾充氣)出現(xiàn)確定下塘?xí)r間。

3.4 魚苗最適下塘和初次攝食率關(guān)系

4 結(jié) 論