胃癌血清miR-375 和CHSY1 表達與幽門螺桿菌感染的相關(guān)性研究

蔡沾煥,陳 升,王艷良（儋州市人民醫(yī)院/海南醫(yī)學院附屬儋州醫(yī)院普通外科，海南 儋州 571700）

幽門螺桿菌（helicobacter pylori，Hp）可以觸發(fā)胃部的體液和細胞免疫反應[1]。Hp感染與胃癌發(fā)病密切相關(guān)，因此尋找與Hp 感染相關(guān)的指標對指導胃癌的治療具有重要意義。有研究證實，miRNA 表達水平的變化會引起胃癌發(fā)生，與胃黏膜細胞相比，胃癌細胞中miR-375 表達較低，且Hp 感染后miR-375 表達下調(diào)，表明miR-375 在Hp 感染胃癌中起重要作用[2-3]。研究表明，下調(diào)miR-375可促進胃癌細胞的增殖[4]。硫酸軟骨素酶1（chondroitin sulfate synthase 1，CHSY1）參與胃癌的發(fā)生發(fā)展[5]。臨床組織樣本的免疫組化分析和公共數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)挖掘顯示，CHSY1 在胃癌中顯著上調(diào)，且與腫瘤分期較晚、預后較差相關(guān)[6]。然而，目前對于胃癌患者miR-375 和CHSY1 表達與Hp 感染的關(guān)系還未完全闡明，本研究通過分析胃癌患者血清中miR-375和CHSY1的表達水平，探討二者與Hp感染的相關(guān)性，以期為胃癌患者的早期診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018 年6 月至2021 年6 月我院收治的胃癌患者96例設為胃癌組，另選取同期在我院就診的慢性淺表性胃炎患者68例設為對照組。2組患者一般資料無顯著差異（P＞0.05），具有可比性。胃癌患者納入標準：①符合《胃癌:診斷和治療方案的選擇》[7]的標準；②首次確診為胃癌。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②近3 個月有外科手術(shù)、放射治療或內(nèi)窺鏡手術(shù)史；③具有炎癥性疾病或免疫性疾病；④近6個月服用過抗生素或抗炎、胃黏膜保護類藥物。本研究已經(jīng)通過我院醫(yī)學倫理委員會審核批準（18-00516），所有患者均簽署知情同意書。

1.2 Hp感染檢測

采用13C 呼氣試驗測定清晨空腹狀態(tài)下所有患者Hp 感染情況?？崭狗?3C 尿素膠囊30 min 后通過紅外光譜儀進行呼氣，呼出氣體中13C原子峰大于基線5%時即為Hp陽性感染[8]。

Hp 感染密度檢測[9]：在術(shù)中取適量胃癌患者距離幽門2 cm 的胃黏膜組織，光學顯微鏡下進行病理診斷，油鏡下根據(jù)Hp 的感染密度將患者分為Hp 輕度組（輕度Hp感染，密度≤1/3）、Hp中度組（中度Hp感染，密度＞1/3～＜2/3）、Hp重度組（重度Hp感染，密度≥2/3）。

1.3 miR-375和CHSY1 mRNA表達水平檢測

分別采集胃癌組患者入院后第2天清晨和對照組患者就診當日清晨空腹靜脈血3 mL，離心，分離上清，將血清儲存于-80 ℃，避免反復凍融。利用TRIzol 試劑提取血清總RNA。利用PrimeScript RT 試劑盒合成cDNA。qRT-PCR 分析miR-375 和CHSY1 mRNA 的表達水平，采用2-△△Ct法進行分析。反應體系共12 μL：miScript SYBR?Green Mix 6 μL，cDNA 1 μL，上下引物各0.8 μL，ddH2O 3.4 μL。反應條件：95 ℃ 90 s，95 ℃30 s，63 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s，40 個循環(huán)。分別以U6、GAPDH 為內(nèi)參。本研究引物由北京擎科生物公司合成，引物序列見表1。

表1 引物序列

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)比較采用配對樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。Spearman相關(guān)性分析血清中miR-375 和CHSY1 表達水平與胃癌患者Hp感染的相關(guān)性。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Hp感染檢測結(jié)果

胃癌組96 例患者中，Hp 陽性81 例（84.38%）；對照組68 例患者中，Hp 陽性30 例（44.12%）。胃癌組Hp感染陽性率顯著高于對照組(χ2=29.493,P＜0.001)。

2.2 miR-375和CHSY1 mRNA表達水平比較

胃癌組Hp 陰性及Hp 陽性患者血清中miR-375 表達水平低于對照組（P＜0.05），CHSY1 mRNA 表達水平均高于對照組（P＜0.001）。胃癌組及對照組Hp 陽性患者血清中miR-375 表達水平低于Hp 陰性患者（P＜0.05），CHSY1 mRNA 表達水平高于Hp 陰性患者（P＜0.05），見表2。

表2 miR-375和CHSY1 mRNA表達水平比較（±s）

表2 miR-375和CHSY1 mRNA表達水平比較（±s）

*：與Hp陰性miR-375比較，P＜0.05；#：與Hp陰性CHSY1比較，P＜0.05

組別胃癌組對照組t P n 96 68 Hp陰性miR-375 0.88±0.12 0.95±0.08 2.476 0.017 CHSY1 1.25±0.13 1.12±0.06 5.007＜0.001 Hp陽性miR-375 0.76±0.08*0.85±0.15*4.074＜0.001 CHSY1 1.48±0.24#1.26±0.12#4.794＜0.001

2.3 不同Hp 感染患者血清中miR-375 和CHSY1 mRNA表達水平

油鏡結(jié)果顯示，8 例Hp 陽性感染胃癌患者Hp 輕度感染25 例，Hp 中度感染30 例，Hp 重度感染26 例。Hp陽性患者隨著Hp的感染程度增加，miR-375的表達水平呈降低趨勢（P＜0.05），CHSY1 mRNA 的表達水平呈升高趨勢（P＜0.05），見表3。

表3 不同Hp 感染患者血清中miR-375 和CHSY1 mRNA 表達水平（±s）

表3 不同Hp 感染患者血清中miR-375 和CHSY1 mRNA 表達水平（±s）

*：與Hp輕度組比較，P＜0.05；#：與Hp中度組比較，P＜0.05

組別Hp輕度組Hp中度組Hp重度組F P n 25 30 26 miR-375 0.86±0.09 0.75±0.08*0.66±0.07*#39.662＜0.001 CHSY1 1.26±0.24 1.48±0.24*1.68±0.23*#20.046＜0.001

2.4 胃癌患者Hp 感染與血清miR-375 和CHSY1 表達水平的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清中miR-375表達水平與胃癌患者Hp 感染呈負相關(guān)（r=-0.648，P＜0.001），血清中CHSY1 表達水平與胃癌患者Hp 感染呈正相關(guān)（r=0.534，P＜0.001）。

3 討論

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，進展快，預后差。全世界約有40 億人感染Hp，其在復雜的胃環(huán)境中定居可破壞胃黏膜，導致宿主胃部炎癥反應，引起消化性潰瘍和慢性胃炎甚至是胃癌[10-11]。因此，尋找與胃癌患者Hp 感染有關(guān)的生物標志物，對于胃癌的早期臨床治療和預防具有重要的意義。

胃癌中miR-375 的表達較胃炎下調(diào)，且Hp 感染下的胃上皮細胞和胃癌細胞中miR-375 表達下調(diào)[4,12]。miR-375 已被證明可通過JAK2-STAT3 信號通路調(diào)控胃癌組織中PD-L1 的表達，從而調(diào)控癌癥轉(zhuǎn)移[13]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組Hp 陰性及Hp 陽性患者血清中miR-375 表達水平顯著低于對照組，且胃癌組及對照組Hp 陽性患者血清中miR-375 表達水平低于Hp陰性患者，與以往研究結(jié)果一致[12]，提示miR-375 表達水平對Hp 感染胃癌患者的評估具有重要意義。同時，本研究Spearman相關(guān)性分析顯示胃癌患者血清中miR-375 表達水平與Hp 感染呈負相關(guān)，提示miR-375水平與Hp 感染密切相關(guān)，檢測miR-375表達水平有助于預測Hp 感染的發(fā)生，從而可對Hp 感染胃癌患者進行早期預防及治療。

CHSY1 是一種介導硫酸軟骨素聚合步驟的酶[14]。有研究表明，CHSY1 基因敲除可抑制結(jié)直腸癌細胞增殖、集落形成、遷移，并促進細胞凋亡[5]。CHSY1 基因敲除的胃癌細胞在體內(nèi)的成瘤性降低，腫瘤生長減慢[15]。CHSY1 對于胃癌的發(fā)生具有促進作用，可作為判斷患者預后的新指標，以及胃癌治療的新靶點[7,16]。有研究發(fā)現(xiàn)，CHSY1 在肝細胞癌中頻繁上調(diào)，可增強細胞生長、遷移、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[17]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組Hp 陰性及Hp 陽性患者血清CHSY1 表達水平均顯著高于對照組，且胃癌組及對照組Hp 陽性患者血清中CHSY1 表達水平高于Hp 陰性患者，推測CHSY1 可能發(fā)生促癌作用，且其表達與胃癌患者Hp 感染有關(guān)。同時，本研究Spearman相關(guān)性分析顯示血清中CHSY1表達水平與胃癌患者Hp 感染呈正相關(guān)，表明胃癌患者Hp感染與CHSY1表達水平有關(guān)，其有望成為胃癌患者Hp感染相關(guān)的生物學指標。

綜上所述，在胃癌患者血清中miR-375 表達水平降低，CHSY1表達水平升高，miR-375表達與胃癌患者Hp 感染嚴重程度呈負相關(guān)，CHSY1 表達與Hp 感染嚴重程度呈正相關(guān)。但由于本研究樣本量較少，研究結(jié)果有待更多研究來證實。