蝦肝腸孢子蟲(chóng)病及其防治手段的研究進(jìn)展

韋秀穎　杜泓明　覃紹敏　劉金鳳　吳健敏

摘要：蝦肝腸孢子蟲(chóng)?。℉epatopancreatic microsporidiaosis，HPM）是由蝦肝腸孢子蟲(chóng)（Enterocytozoon hepatopenaei，

EHP）感染引起的一種蝦類(lèi)專性細(xì)胞內(nèi)寄生的寄生蟲(chóng)病。近年來(lái)該病在全世界對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)域內(nèi)廣泛流行，造成對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢綜合癥（MSGS），損失堪比白斑綜合癥病毒病（WSSV），嚴(yán)重影響對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的健康與持續(xù)發(fā)展，引起了廣泛關(guān)注。本文就HPM的病原、流行情況、傳播途徑、預(yù)防與檢測(cè)手段及相關(guān)藥物研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為HPM防控提供參考。

關(guān)鍵詞：對(duì)蝦；蝦肝腸孢子蟲(chóng)；預(yù)防與檢測(cè)；藥物研究

中圖分類(lèi)號(hào)：S851.34+7.34文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1003-4374（2023）02-00-05

Research Progress on Hepatopancreatic Microsporidiaosis and Its Control Methods

Wei Xiu-ying Du Hong-ming Qin Shao-min Liu Jin-feng Wu Jian-min

（1. Guangxi Key Laboratory of Veterinary Biotechnology， Guangxi Veterinary Research Institute， Nanning， Guangxi 530001， China； 2. College of Animal Science and Technology， Guangxi University， Nanning， Guangxi 530004， China）

Abstract： Hepatopancreatic microsporidiaosis is an obligate intracellular parasitic disease of penaeid caused by Enterocytozoon hepatopenaei infection. In recent years， the disease has been widely prevalent in important penaeid farming areas around the world， causing Monodon Slow Growth Syndrome （MSGS）， and the loss has been comparable to with White Spot Syndrome Virus （WSSV）， seriously affecting the health and sustainable development of the penaeid farming industry， which has caused widespread concern. In this paper， the pathogen， epidemic situation， transmission route， prevention and detection methods， and related drug research progress of HPM are reviewed in order to provide a reference for the prevention and control of HPM.

Key words： penaeid， enterocytozoon hepatopenaei， prevention and detection， drug research

蝦肝腸孢子蟲(chóng)（EHP）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖行業(yè)危害較大的寄生蟲(chóng)病病原，最早于2003年在泰國(guó)生長(zhǎng)緩慢的斑節(jié)對(duì)蝦（Penaeus monodon）中被發(fā)現(xiàn)，直至2009 年才被成功分離，并被定義為孢子蟲(chóng)屬的一個(gè)新物種。［1］EHP隸屬于真菌界（Fungi kingdom）［2］微孢子蟲(chóng)門(mén)（Microspora）單倍期綱（Haplophase）微孢子蟲(chóng)目（Microsporida）微孢子蟲(chóng)科（Enterocytozoonidae）腸孢蟲(chóng)屬（Entero-cytozoon）［3］，是一種專性的細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(chóng)，具有高度的傳染性。EHP可感染真核細(xì)胞宿主，在宿主細(xì)胞質(zhì)中生活，無(wú)需中間宿主。它既可通過(guò)受精卵或種苗垂直傳播［4］，又可通過(guò)攝食被污染的飼料、生物餌料、死蝦及生活在含有EHP孢子的水體中造成水平傳播，該病原主要侵染凡納濱對(duì)蝦、南美白對(duì)蝦、斑節(jié)對(duì)蝦、日本對(duì)蝦、羅氏沼蝦和南美藍(lán)對(duì)蝦（P.stylirostris）導(dǎo)致肝腸孢子蟲(chóng)病，俗稱 “棉蝦病”。EHP主要寄生于蝦肝胰腺上皮細(xì)胞，使肝胰腺小管上皮細(xì)胞與小腸上皮細(xì)胞脫落，肌肉發(fā)白，導(dǎo)致蝦生長(zhǎng)緩慢，增重停滯，雖不引起死亡，卻極大影響生產(chǎn)性能，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。本文就HPM的病原、流行情況、傳播途徑、預(yù)防與檢測(cè)手段及相關(guān)藥物研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為HPM防控提供參考。

1 EHP形態(tài)特征

EHP成熟的孢子呈卵圓形或梨形，大小約0.7μm×1.1μm。孢子在包囊內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育，由胞壁、錨定盤(pán)、孢原質(zhì)、5～6圈極絲、細(xì)胞核、極膜層、多個(gè)核糖體、1個(gè)后液泡等組成。孢子具有折光性，革蘭氏染色為陽(yáng)性［1］。胞壁由3層結(jié)構(gòu)組成，從外到內(nèi)依次為高電子密度外壁，以及由蛋白質(zhì)和幾丁質(zhì)組成的低電子密度的內(nèi)壁和原生質(zhì)膜。EHP外壁上有大量白色瘤狀物，疑似胞壁蛋白［5］。該蛋白在微孢子蟲(chóng)侵染宿主細(xì)胞的過(guò)程中扮演著重要的角色［6-8］，與孢子壁的通透性相關(guān)，很可能是控制孢子與外界物質(zhì)交換的通道。微孢子蟲(chóng)的孢子內(nèi)具有獨(dú)特的侵染裝置—極管，與孢子頂端的錨定盤(pán)相連接。它能通過(guò)擠壓穿透宿主細(xì)胞膜，將具感染性孢子體轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中從而實(shí)現(xiàn)自身繁殖。［9］

2 流行情況與傳播途徑

自2003年泰國(guó)首次報(bào)道以來(lái)，多數(shù)對(duì)蝦養(yǎng)殖國(guó)家如印度、文萊、越南、委內(nèi)瑞拉、印度尼西亞、馬來(lái)西亞、泰國(guó)、澳大利亞等均陸續(xù)發(fā)現(xiàn)EHP的感染［10-12］。中國(guó)首次報(bào)道是在2013年，隨后在主要的對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)域先后都發(fā)現(xiàn)EHP的流行。陳祿芝等［13］針對(duì)粵西地區(qū)凡納濱對(duì)蝦長(zhǎng)不大的情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EHP的陽(yáng)性檢出率為41.38%，其中成蝦的檢出率最高達(dá)93.75%。許杰等［14］于2015—2017年在天津7個(gè)對(duì)蝦養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)采集對(duì)蝦及餌料生物等樣品進(jìn)行分批檢測(cè)，結(jié)果三年EHP陽(yáng)性率分別為56.96%、69.52%、29.28%。據(jù)2017年國(guó)家蝦蟹產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系開(kāi)展的被動(dòng)監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，EHP已在我國(guó)蝦類(lèi)主要養(yǎng)殖區(qū)廣泛分布，在山東、河北、江蘇、上海、浙江、福建、廣東、海南和新疆均有不同水平的檢出。［15］全國(guó)水產(chǎn)技術(shù)推廣總站于2017年將EHP列為新發(fā)的重大水生動(dòng)物疫病，要求重點(diǎn)防控。許昊川等［16］在2020年對(duì)浙江省寧波市南美白對(duì)蝦蝦苗主要病原攜帶情況進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)EHP、蝦血細(xì)胞虹彩病毒（SHIV）、WSSV以及副溶血弧菌（VP）4種病原中感染率最高為EHP（8.96%）。謝艷輝等［17］在2021年對(duì)湛江地區(qū)養(yǎng)殖水體（高位池和低位池）EHP感染情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均為陽(yáng)性。2021年國(guó)家水生動(dòng)物疫病檢測(cè)計(jì)劃中也把EHP列為檢測(cè)對(duì)象［18］，由此說(shuō)明目前為止EHP仍然是對(duì)蝦養(yǎng)殖中最主要的疫病之一。

蝦腸肝孢子蟲(chóng)病一年四季都會(huì)發(fā)生，5～9月是高發(fā)季節(jié)。由于EHP生活史較為簡(jiǎn)單，整個(gè)生命周期僅為5～11 d，因此，一旦有對(duì)蝦染病很快會(huì)引起暴發(fā)流行，通常在養(yǎng)殖40 d左右會(huì)出現(xiàn)1個(gè)暴發(fā)的高峰期。對(duì)蝦感染EHP時(shí)其死亡率與正常蝦沒(méi)有顯著差異，但會(huì)出現(xiàn)攝食減少或者攝食后生長(zhǎng)緩慢甚至停止生長(zhǎng)的情況。此外病蝦還表現(xiàn)出免疫功能下降，增加了細(xì)菌、病毒和其他微生物的繼發(fā)感染的概率。EHP 有兩種傳播途徑：一種是垂直傳播，即通過(guò)侵染親蝦的卵巢傳播給子代。另一種是水平傳播，即健康蝦經(jīng)口攝食攜帶EHP的介體，包括寄生EHP的鮮活餌料、病蝦、死蝦或環(huán)境中的孢子體而感染。［19］EHP先在蝦肝胰腺細(xì)胞內(nèi)形成孢原質(zhì)，待孢子成熟，可通過(guò)糞便排出體外，在水環(huán)境中形成孢子體，分布于水體或附著于飼料表面、藻類(lèi)、碎屑及養(yǎng)殖塘底泥環(huán)境中，孢子可在養(yǎng)殖環(huán)境中累積進(jìn)行傳播。

3 檢測(cè)手段與防治方法

EHP感染隱蔽性強(qiáng)，無(wú)特定示病癥狀，當(dāng)蝦出現(xiàn)采食減少、增重緩慢、生長(zhǎng)遲緩時(shí)應(yīng)該懷疑感染EHP。關(guān)于EHP檢測(cè)可用組織病理學(xué)方法、原位雜交技術(shù)（In situ hybridization，ISH）與分子生物學(xué)技術(shù)等。

組織病理學(xué)方法：可取蝦肝胰腺進(jìn)行切片，用HE染色，但該染色法對(duì)孢子的染色效果較差、與背景顏色對(duì)比不明顯且單個(gè)視野檢出率較低；如用熒光染色劑（calcofluor white，CFW），能使孢子發(fā)出白色熒光，可明顯檢出［20］；用Masson染色可看到蝦肝腸孢子蟲(chóng)被染成紅色，而蝦腸細(xì)胞則被染成藍(lán)色，鏡下對(duì)比明顯，更易檢出［21］，這類(lèi)方法的缺點(diǎn)是麻煩、耗時(shí)長(zhǎng)且難以區(qū)分EHP與其他微孢子蟲(chóng)。

原位雜交技術(shù)：利用帶有地高辛標(biāo)記的EHP-18S rRNA探針建立了地高辛標(biāo)記核酸探針原位雜交法，可以特異性檢出EHP感染且可以定位［19］，該方法不足之處操作仍比較繁瑣。

分子生物學(xué)技術(shù)：主要有PCR、Nested PCR、熒光定量 PCR（qRT-PCR）、LAMP等，這些技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)?？刹杉r的肝胰腺勻漿或糞便進(jìn)行檢測(cè)。而近期建立的重組酶介導(dǎo)的核酸技術(shù)（Recombinase-aid-amplification，RAA）［22］，除了特異、敏感外還具有操作簡(jiǎn)便、快捷、低成本的優(yōu)點(diǎn)，非常適用于基層及現(xiàn)場(chǎng)EHP的檢測(cè)。

對(duì)于蝦疫病原微生物采取早期檢測(cè)，從而盡快切斷重大和新發(fā)病原的傳播，被認(rèn)為是當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖中降低病原流行風(fēng)險(xiǎn)，減少病害大面積流行造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的有效手段。由于目前還沒(méi)有特效藥物用于EHP治療，因此在養(yǎng)殖過(guò)程中預(yù)防與控制顯得尤為重要。首先從蝦種源控制。購(gòu)買(mǎi)SPF蝦苗并用PCR等方法檢測(cè)蝦糞，陰性者方可引入生產(chǎn)（SPF級(jí)蝦還未將蝦肝腸孢子蟲(chóng)檢測(cè)納入標(biāo)準(zhǔn)）。其次做好養(yǎng)殖環(huán)境控制。蝦塘有機(jī)質(zhì)越多，患孢子蟲(chóng)病的風(fēng)險(xiǎn)越高，因此在放蝦苗前要徹底清塘消毒。用2.5%的氫氧化鈉浸泡飼養(yǎng)池3小時(shí)后沖洗，干燥7 d，再用含有效氯200 ppm以上的氯溶液（pH<4.5）沖洗，方可開(kāi)始養(yǎng)殖。亦可用生石灰以0.6 kg/m²的用量混入池底加水淋濕，使池塘底pH值升至12，靜置一周可有效殺滅大部分EHP。禁止用生餌料喂蝦苗（如必須使用，需在-20℃冷凍至少48小時(shí)）［23］。

養(yǎng)殖廢水不能直接排放，必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格處理。生物類(lèi)產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)過(guò)75℃，1分鐘以上加熱能使EHP孢子滅活，使EHP失去感染能力［23］，用15 mg/L高錳酸鉀、65%有效氯或20%乙醇處理養(yǎng)殖池水15分鐘均可減少、抑制EHP極絲釋放。

4 EHP相關(guān)藥物的研究

盡管世界上科學(xué)家們對(duì)EHP治療藥物進(jìn)行了大量研究，但是由于EHP具有幾丁質(zhì)的孢子壁，有很強(qiáng)的抗逆性，一般藥物很難穿透孢子壁殺滅孢子，到目前為止尚未找到一種低廉、安全、高效可以治療蝦肝腸孢子蟲(chóng)病的藥物，使EHP防治成為一個(gè)難題。

雖然Tang等［12］嘗試用對(duì)微孢子蟲(chóng)有一定作用的煙曲霉素（Fumagillin-B）治療EHP，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)EHP無(wú)效，但是相關(guān)藥物研究還是取得一定進(jìn)展。Aldama-cano等［9］通過(guò)體外研究表明，低溫及用高錳酸鉀（15 mg/L）等化學(xué)物質(zhì)處理，可以通過(guò)抑制極管的彈出而有效抑制EHP。Jaroenlak等發(fā)現(xiàn)［24］，EHP能夠利用肝素結(jié)合蛋白（EhSWP1）與對(duì)蝦肝胰腺細(xì)胞的肝素結(jié)合從而入侵細(xì)胞。這種入侵方式與克氏錐蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)和利什曼原蟲(chóng)相似。因此構(gòu)建針對(duì)肝素結(jié)合蛋白的抗體可以減少一部分孢子黏附［25，26］，更深入研究還待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。趙若恒［27］

將明膠作為包裹材料對(duì)17種潛在控制EHP藥物進(jìn)行篩選，結(jié)果篩選出4種能降低EHP載量的藥物。周志剛等［28］利用分子生物學(xué)技術(shù)克隆表達(dá)來(lái)源于氣單胞菌（Aeromonas sp）的ChiCD3幾丁質(zhì)酶，該酶具有降解幾丁質(zhì)的活性，并可以破壞粘孢子蟲(chóng)孢子壁，可以用于防治粘孢子蟲(chóng)病，特別是魚(yú)類(lèi)的粘孢子蟲(chóng)病。此外科學(xué)家們也利用中草藥防治EHP，進(jìn)行了大量的試驗(yàn)。高永剛等［29］以苦楝、貫眾、百部、雷丸、青葙子、鉤吻、檳榔為主要成分，預(yù)防與治療EHP取得一定效果。姜宗然等［30］用苦參、貫眾、雷丸配伍保肝健脾胃藥物，先通過(guò)納米低溫破壁技術(shù)粉碎藥物，再添加乳酸桿菌發(fā)酵，最后將得到的發(fā)酵產(chǎn)物用復(fù)合酶分解后，再添加天然蝦青素、葡萄糖醛酸內(nèi)酯以提高對(duì)EHP免疫力。江曉等［31］以阿苯達(dá)唑、青蒿粉和膽汁酸為主要成分合成飼料添加劑，各組分協(xié)同驅(qū)殺EHP，以期達(dá)到提高蝦成活率、體長(zhǎng)和體重，并降低EHP陽(yáng)性率的目的。

此外李宗全［32］報(bào)道一種綜合防治的方法：開(kāi)足增氧設(shè)備，降低水位至30～40 cm，撈出死蝦。用銀花、五倍子、青蒿末煮沸20分鐘后全塘潑灑。4%甘草、3‰維生素C、維生素B10、鈣片、3‰鹽酸土霉素、左旋咪唑適量混合拌料投喂。6小時(shí)后注入20 cm高的新水，用低壓電網(wǎng)去除網(wǎng)衣全池拖動(dòng)，來(lái)回2～3次，2小時(shí)后加水至原水位，12小時(shí)后重復(fù)2～3次，可有效控制EHP感染等。上述研究為EHP預(yù)防與治療打下了良好的基礎(chǔ)，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中具有很好的應(yīng)用前景。

5 展望

近年來(lái)有關(guān)EHP診斷技術(shù)的研究已經(jīng)取得顯著的進(jìn)展，但防治技術(shù)的研究進(jìn)展相對(duì)緩慢。由于EHP抗原成分復(fù)雜且抗原性弱，較難制成高效疫苗，人們逐漸把眼光放到藥物防治，但藥物防治目前最大的難點(diǎn)是EHP有細(xì)胞壁，且細(xì)胞壁外有厚厚的幾丁質(zhì)包裹并寄生于宿主細(xì)胞內(nèi)，對(duì)環(huán)境抵抗力強(qiáng)，外源藥物對(duì)其作用甚微；其次對(duì)蝦生活于水中，常規(guī)飼料混合給藥方式在水中會(huì)由于溶解擴(kuò)散作用而導(dǎo)致療效大大減弱甚至消失；注射給藥在對(duì)蝦養(yǎng)殖中由于操作繁瑣且死亡率高，所以一般較少使用，體外用藥或飲水給藥對(duì)水環(huán)境副作用大，不利于水產(chǎn)養(yǎng)殖的可持續(xù)發(fā)展。鑒于上述原因，有關(guān)防治藥物的研究除了要篩選針對(duì)性藥物、設(shè)計(jì)合理的劑型之外，還需研發(fā)合適的藥物包裹技術(shù)以增加藥物攝入量，降低藥物在水中損耗。隨著科技技術(shù)的發(fā)展，近年來(lái)利用分子生物學(xué)、生物信息學(xué)及免疫學(xué)等技術(shù)進(jìn)一步探索EHP侵染宿主的分子機(jī)制，篩選和鑒定其黏附、侵染宿主細(xì)胞、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和免疫反應(yīng)等相關(guān)的關(guān)鍵蛋白的研究也在不斷深入，期待不久的將來(lái)針對(duì)EHP侵染宿主細(xì)胞關(guān)鍵蛋白的靶向抑制藥物開(kāi)發(fā)出來(lái)，將有效控制蝦腸肝孢子蟲(chóng)病的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

［1］Tourtip S，Wongtripop S，Stentiford G D，et al.Entero-cytozoon hepatopenaei sp. nov.（Microsporida：Enterocyto-zoonidae），a parasite of the black tiger shrimp Penaeus monodon（Decapoda：Penaeidae）：Fine structure and phylogenetic relationships［J］. Journal of Invertebrate Pathology， 2009，102（1）：21-29.

［2］Hibbett D S，Binder M，Bischoff J F，et al. A higher-level phylogenetic classification of the Fungi［J］. Mycological research，2007，111（5）：509-547.

［3］Franzen C. Microsporidia：A Review of 150 Years of Research［J］. Open Parasitology Journal. 2008，2（1）：1-34.

［4］Vu-Khac H，Thanh T，Thu G，et al. Vertical Trans-mission and Early Diagnosis of the Microsporidian Enterocytozoon hepatonaei in Whiteleg Shrimp Penaeus vannamei［J］. Journal of Pure and Applied Microbiology， 2018，12（3）：1125-1131.

［5］喬毅，沈輝，萬(wàn)夕和，等. 南美白對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)的分離及形態(tài)學(xué)觀察［J］.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)， 2018，25（5）：1051-1058.

［6］Wu Z，Li Y，Pan G，Proteomic analysis of spore wall proteins and identification of two spore wall proteins from Nosema bombycis （Microsporidia）［J］. Proteomic， 2008，8（12）：2447-2461.

［7］Yang D，Dang X，Peng P，et al. NbHSWP11，a microsporidia Nosema bombycis protein，localizing in the spore wall and membranes，reduces spore adherence to host cell BME［J］. Journal of Parasitology，2014，

100（5）：623-632.

［8］Li Z，Pan G，Li T，et al. Swp5，a spore wall protein，interacts with polar tube proteins in the parasitic microsporidian nosema bombycis［J］. Eukaryotic Cell，2012，11（2）： 229-237.

［9］Aldama-Cano D J，Sanguanrut P，Munkongwongsiri N，et al. Bioassay for spore polar tube extrusion of shrimp Enterocytozoon hepatopenaei（EHP）［J］. Aquaculture，2018：S915874911X.

［10］Rajendran K V，Shivam S，Ezhil Praveena P，et al. Emergence of Enterocytozoon hepatopenaei（EHP）in farmed Penaeus（Litopenaeus）vannamei in India［J］. Aquaculture，2016，454（5）：272-280.

［11］Tang K F J，Aranguren L F，Piamsomboon P，et al. Detection of the microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei （EHP）and Taura syndrome virus in Penaeus vannamei cultured in Venezuela［J］. Aquacultur，2017，480（15）：17-21.

［12］Tang KFJ，Han J E，Aranguren L F，et al. Dense populations of the microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei（EHP） in feces of Penaeus vannamei exhibiting white feces syndrome and pathways of their transmission to healthy shrimp［J］. Journal of Invertebrate Pathology， 2016，140（8）：1-7.

［13］陳祿芝，余霞艷，胡一丞，等. 粵西地區(qū)凡納濱對(duì)蝦蝦肝腸胞蟲(chóng)，傳染性皮下和造血組織壞死病毒感染情況的初步調(diào)查［J］.漁業(yè)研究，2016，38（4）：273-280.

［14］許杰，霍文慧，鄧威，等. 2015—2017年天津市蝦肝腸胞蟲(chóng)流行情況調(diào)查［J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2018，35（8）：13-16.

［15］宋增磊.蝦肝腸胞蟲(chóng)的流行病學(xué)及防控技術(shù)的研究［D］.上海：上海海洋大學(xué)，2018.

［16］許昊川，徐勝威，王雯瓊，等. 2020年浙江省寧波市南美白對(duì)蝦蝦苗主要病原攜帶情況調(diào)查［J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2021，38（9）：29-32，39.

［17］謝艷輝，李家僑，斯?jié)啥鳎?湛江地區(qū)凡納濱對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)檢出實(shí)例分析［J］.水產(chǎn)養(yǎng)殖，2021，42（9）：1-5，11.

［18］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公報(bào). 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于印發(fā)《2021年國(guó)家水生動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)計(jì)劃》的通知農(nóng)漁發(fā)〔2021〕10號(hào)［J］.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公報(bào)，2021（5）：79-81.

［19］Tangprasittipap A，Srisala J，Chouwdee S，et al. The microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei is not the cause of white feces syndrome in whiteleg shrimp Penaeus （Litopenaeus） vannamei［J］. BMC Veterinary Research，2013（9）：1-10.

［20］Zhao R H，Gao W，Qiu L，et al. A staining method for detection of Enterocytozoon hepatopenaei （EHP） spores with calcofluor white［J］. Journal of Invertebrate Pathology， 2020，172（4）：107347-107358.

［21］常曉晴，王元，英娜，等. 8種染色方法對(duì)組織切片中蝦肝腸胞蟲(chóng)染色效果的比較［J］.海洋漁業(yè)，2019，41（1）：91-99.

［22］黃紀(jì)徽，吳山楠，王丹云，等. 蝦肝腸胞蟲(chóng)實(shí)時(shí)熒光RAA快速檢測(cè)方法的建立［J］.養(yǎng)殖與飼料，2018（11）：13-16.

［23］A N M，B A C A，A R S，et al. Microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei（EHP）spores are inactivated in 1 min at 75℃［J］.Aquaculture，2021，533（4）：736178-736186.

［24］Jaroenlak P，Boakye D W，Vanichviriyakit R，et al.? Identification，characterization and heparin binding capacity of a spore-wall，virulence protein from the shrimp microsporidian，Enterocytozoon hepatopenaei （EHP）［J］. Parasites & Vectors，2018，11（1）：177-191.

［25］Southern T R，Jolly C E，Lester M E，et al. EnP1，a Microsporidian Spore Wall Protein That Enables Spores To Adhere to and Infect Host Cells In Vitro［J］. Eukaryotic Cell，2007，6（8）：1354-1362.

［26］Wang Y，Dang X，Ma Q，et al. Characterization of a novel spore wall protein NbSWP16 with proline-rich tandem?repeats from Nosema bombycis （microsporidia）［J］.Parasitology， 2015，142（4）：534-542.

［27］趙若恒. 蝦肝腸胞蟲(chóng)的流行病學(xué)及防控藥劑的篩選和效果的研究［D］.大連：大連海洋大學(xué)，2019.

［28］周志剛，斌姚，劉玉春，等.具有粘孢子蟲(chóng)孢子壁降解能力的幾丁質(zhì)酶及其編碼基因：200910088808.9［P］.2019-12-16.

［29］高永剛，劉寧，唐永新，等. 一種防治南美白對(duì)蝦肝腸孢子蟲(chóng)病的中藥組合物及其防治方法. 2013，CN201610088935.9［P］.2016-05-11.

［30］姜宗然，鄭杰民，卓火龍，等. 一種預(yù)防治療對(duì)蝦腸道微孢子蟲(chóng)的中藥組合物、粉劑及其制備方法. 2017，CN201710439743.2［P］.2020-09-01.

［31］江曉，羅鵬，任春華，等.一種對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)專殺藥物及其制備方法與應(yīng)用：202010006084.5［P］.2021-08-27.

［32］李宗全.對(duì)蝦孢子蟲(chóng)病怎么處理［EB/OL］.農(nóng)村網(wǎng)，2023-04-21.http：//www.nongcun5.com/jishu/3915.html.

（責(zé)任編輯：楊翠）