補(bǔ)腎活血復(fù)方對(duì)心肌梗死后心力衰竭大鼠心室重構(gòu)及心肌和結(jié)腸組織AQP4表達(dá)的影響

許瑞 ，張艷 ，何佳 ，尹文浩 ，鄒文聰 ，劉嫻賢 ，何曉騰

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110847；

2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032；

3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)博士后流動(dòng)站，遼寧 沈陽(yáng) 110847

心力衰竭是各種心血管疾病的終末階段。根據(jù)《2020中國(guó)心力衰竭醫(yī)療質(zhì)量控制報(bào)告》，我國(guó)35歲以上居民心力衰竭患病率為1.3%，與2000年相比患病人數(shù)增加近500萬(wàn)，嚴(yán)重影響我國(guó)居民健康[1]。急性心肌梗死常合并心力衰竭，主要表現(xiàn)為急性心肌細(xì)胞壞死后心臟結(jié)構(gòu)和/或功能異常導(dǎo)致心輸出量降低及肺循環(huán)或體循環(huán)瘀血等一系列臨床綜合征[2]。研究發(fā)現(xiàn)，心肌細(xì)胞膜表面水通道蛋白（AQP）4的異常表達(dá)與心力衰竭時(shí)水液代謝紊亂密切相關(guān)，影響心臟組織水腫及心肌梗死后心功能不全或慢性心力衰竭的進(jìn)展[3-4]。心力衰竭時(shí)會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的腸道細(xì)菌移位和水液代謝紊亂、液體超載[5-6]，而結(jié)腸組織表面AQP4異常表達(dá)會(huì)導(dǎo)致結(jié)腸對(duì)水分的吸收和分泌紊亂[7]。由此推測(cè)，心力衰竭后結(jié)腸水液代謝失調(diào)與AQP4維持水的轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙密切相關(guān)。課題組前期研究表明，AQP2參與腎臟水液代謝，應(yīng)用補(bǔ)腎活血方可明顯下調(diào)心力衰竭大鼠AQP2表達(dá)、緩解利尿劑抵抗、減少水腫，起到治療心力衰竭作用[8]。補(bǔ)腎活血復(fù)方由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院張艷教授團(tuán)隊(duì)結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)在該院院內(nèi)制劑參草通脈顆?；A(chǔ)上化裁而成。研究顯示，參草通脈顆?？商岣呗孕牧λソ呋颊呱钯|(zhì)量[9]，解決部分患者利尿劑抵抗的問(wèn)題，緩解尿少、大便異常癥狀，改善心功能，延緩心力衰竭進(jìn)展[10]。本研究基于“腎藏精主水”理論，聚焦心、腸之間水液代謝關(guān)系，探析補(bǔ)腎活血復(fù)方治療心肌梗死后心力衰竭的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

健康雄性SD大鼠60只，13周齡，體質(zhì)量（230±10）g，遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（遼）2015-0001。于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心分籠飼養(yǎng)，通風(fēng)良好，每日光照12 h，溫度25 ℃、濕度50%，自由攝食飲水。普通飼料由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)審批（21000092019038）。

1.2 藥物

補(bǔ)腎活血復(fù)方由菟絲子20 g、龜甲膠15 g、黃精20 g、黃芪40 g、丹參30 g、人參10 g、紅花15 g、益母草20 g、三七5 g組成，飲片由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑中心提供，由本課題組制成原藥材濃度為1.575 g/mL煎液。托伐普坦片，15 mg/片，浙江大冢制藥有限公司，批號(hào)211107S，用蒸餾水配制成濃度為0.135 mg/mL溶液。

1.3 主要試劑與儀器

N 端腦鈉肽前體（NT-proBNP）ELISA 試劑盒（上海酶聯(lián)生物公司，貨號(hào)ml003242-C），AQP4抗體（英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)ab259318），β-actin抗體（美國(guó)Affinity Biosciences公司，貨號(hào)AF7018），蛋白裂解液（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P0013B），蛋白酶抑制劑（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P1050），BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P0010），ECL顯色液（上海天能科技有限公司，貨號(hào)180-501），HRP-羊抗兔IgG（艾美捷科技有限公司，貨號(hào)A12004-1），10%PAGE凝膠制備試劑盒（上海雅酶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，貨號(hào)03648300）。小動(dòng)物心電圖機(jī)（湖南鼠行生物科技有限公司，型號(hào)RM6240B/RM6280C/RM-62160C），小動(dòng)物呼吸機(jī)（成都泰盟科技有限公司，型號(hào)HX-300），彩色多普勒超聲診斷儀（美國(guó)通用電氣公司，型號(hào)Vivid 7 Dimension），多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司，型號(hào)Multiskan MK3），組織包埋機(jī)、石蠟切片機(jī)（德國(guó)Leica公司，型號(hào)ASP6025/RM2235），顯微攝像系統(tǒng)（日本OLYMPUS 公司，型號(hào)DP73），電泳儀（美國(guó)Bio-Rad公司，型號(hào)JY300C）。

1.4 造模、分組及給藥

60只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組15只和實(shí)驗(yàn)組45只?？瞻捉M不予處理。實(shí)驗(yàn)組禁食不禁水12 h，腹腔注射3%戊巴比妥鈉50 mg/kg麻醉，固定于手術(shù)臺(tái)，氣管插管，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，設(shè)置呼吸頻率80～100次/min、呼吸比2∶1、潮氣量6～8 mL，接通心電圖。待大鼠呼吸平穩(wěn)后，于胸骨左緣第3～4肋間備皮，暴露皮膚，碘伏消毒，手術(shù)刀切開(kāi)后鈍性分離胸部肌肉，鑷子分離胸膜，擴(kuò)胸器撐開(kāi)胸腔，充分暴露心臟，擠壓右側(cè)胸腔并托舉心臟，鈍性分離心包膜，于左冠狀動(dòng)脈前降支距分叉3～4 mm處用縫合線結(jié)扎。閉合胸腔，手術(shù)線逐層縫合各層組織，術(shù)后心電圖顯示肢體導(dǎo)聯(lián)ST段抬高≥0.1 mV（見(jiàn)圖1），提示急性心肌梗死造模成功[11]。待大鼠呼吸恢復(fù)正常，撤去呼吸機(jī)和氣管導(dǎo)管，連續(xù)5 d腹腔注射青霉素6萬(wàn)單位避免傷口感染。存活大鼠正常飲食1周后飼料減半，且每日力竭式游泳1次（持續(xù)游泳至肢體無(wú)明顯擺動(dòng)及頭部完全沒(méi)入水中3 s以上），持續(xù)28 d。大鼠行心臟彩超檢測(cè)左心室射血分?jǐn)?shù)（EF）≤50%表明心力衰竭造模成功[11]。將最終造模成功的28只大鼠隨機(jī)分為模型組10只、托伐普坦組9只和補(bǔ)腎活血組9只。按人與大鼠等效劑量換算，托伐普坦組灌胃托伐普坦溶液1.35 mg/kg，補(bǔ)腎活血組灌胃補(bǔ)腎活血復(fù)方煎液15.75 g/kg[8，12]，3 mL/次，空白組和模型組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)4周。

圖1 大鼠造模前后心電圖

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 大鼠體征觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察大鼠毛色、精神、活動(dòng)、飲食、二便、體質(zhì)量以及有無(wú)喘促癥狀等。

1.5.2 左心室結(jié)構(gòu)與功能檢測(cè)

干預(yù)結(jié)束后，腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，固定于操作臺(tái)，心前區(qū)脫毛膏脫毛備皮，探頭涂抹耦合劑貼于大鼠心前區(qū)，應(yīng)用心臟彩超檢測(cè)左心室結(jié)構(gòu)[收縮末內(nèi)徑（ESD）、舒張末內(nèi)徑（EDD）]與功能[EF、短軸縮短率（FS）]。

1.5.3 血清N端腦鈉肽前體含量測(cè)定

腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min離心5 min，分離血清，ELISA測(cè)定血清NT-proBNP含量，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書操作，酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450 nm 處測(cè)定各孔OD 值，計(jì)算NT-proBNP含量。

1.5.4 心肌和結(jié)腸組織形態(tài)觀察

干預(yù)結(jié)束后，腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，沿正中線打開(kāi)腹腔，刺破橫隔膜，取出心臟和結(jié)腸，用生理鹽水沖洗，剪取左心室心肌組織與結(jié)腸組織，于4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋，切片，每組隨機(jī)選取4張切片進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察心肌和結(jié)腸組織形態(tài)。

1.5.5 心肌和結(jié)腸組織蛋白檢測(cè)

將心肌和結(jié)腸組織用超聲破碎機(jī)勻漿，4 ℃、12 000 r/min離心15 min，分離上清液，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，電泳槽加Marker及心肌和結(jié)腸組織蛋白樣品，濃縮膠電壓80 V，分離膠電壓120 V，電泳1.5 h。PVDF膜浸入甲醇活化5～10 min，將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF 膜，用5%脫脂奶粉封閉2 h。TBST洗膜5 min，重復(fù)2次，內(nèi)參蛋白（β-actin）及目的蛋白（AQP4）一抗以1∶1 000稀釋，PVDF膜置于孵育盒中，4 ℃孵育過(guò)夜。次日TBST洗膜10 min，重復(fù)3次，二抗以1∶10 000稀釋，將膜放入孵育盒中，室溫孵育2 h。TBST洗膜10 min，重復(fù)3次，顯色劑曝光成像，用Image J 1.8.0分析條帶灰度值，計(jì)算AQP4相對(duì)表達(dá)量（AQP4灰度值/β-actin灰度值）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，GraphPad Prism 8.0.1軟件作圖。計(jì)量資料符合正態(tài)分布用±s表示，多組間比較方差齊采用方差分析，方差不齊采用秩和檢驗(yàn)，兩兩比較采用Tukey法。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)腎活血復(fù)方對(duì)模型大鼠體征的影響

給藥過(guò)程中，因灌胃不當(dāng)、嚴(yán)重并發(fā)癥等原因大鼠共死亡6只，最終空白組11只、模型組8只、托伐普坦組和補(bǔ)腎活血組各9只。

空白組大鼠毛色光澤，精神佳，反應(yīng)靈敏，活潑好動(dòng)，飲食、二便正常，體質(zhì)量逐漸增加；模型組大鼠毛色黯淡、脫毛嚴(yán)重，爪、尾部呈紫色，精神頹廢，身體慵懶，活動(dòng)量小，納差，尿少，大便秘結(jié)，體質(zhì)量減輕，部分有呼吸急促、喘促及哮鳴音表現(xiàn)；托伐普坦組和補(bǔ)腎活血組大鼠毛色光澤逐漸恢復(fù)，精神良好，活動(dòng)、飲食、二便及體質(zhì)量均有改善，無(wú)喘促等癥狀。

2.2 補(bǔ)腎活血復(fù)方對(duì)模型大鼠左心室結(jié)構(gòu)與功能的影響

與空白組比較，模型組大鼠左心室ESD、EDD明顯增加，EF和FS明顯減?。≒＜0.05）；與模型組比較，托伐普坦組與補(bǔ)腎活血組大鼠左心室ESD、EDD明顯減小，EF、FS明顯增加（P＜0.05）；與托伐普坦組比較，補(bǔ)腎活血組大鼠左心室ESD、EDD、EF、FS差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1、圖2。

表1 各組大鼠左心室結(jié)構(gòu)與功能指標(biāo)比較（±s）

表1 各組大鼠左心室結(jié)構(gòu)與功能指標(biāo)比較（±s）

注：與空白組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05

組別空白組模型組托伐普坦組補(bǔ)腎活血組FS/%41.46± 8.29 22.85±14.57#35.61± 5.93*34.61± 4.15*只數(shù)11 8 9 9 ESD/mm 3.35±0.36 5.50±0.82#4.03±0.42*4.12±0.34*EDD/mm 5.77±0.47 7.18±0.52#6.27±0.49*6.31±0.49*EF/%66.91±4.84 35.41±5.61#54.48±5.41*57.03±4.23*

圖2 各組大鼠心臟彩超

2.3 補(bǔ)腎活血復(fù)方對(duì)模型大鼠血清N 端腦鈉肽前體含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清NT-proBNP含量明顯增加（P＜0.05）；與模型組比較，托伐普坦組和補(bǔ)腎活血組大鼠血清NT-proBNP 含量明顯減少（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清NT-proBNP含量比較（±s，pg/mL）

表2 各組大鼠血清NT-proBNP含量比較（±s，pg/mL）

注：與空白組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05

NT-proBNP 19.03±9.96 34.78±5.22#22.64±5.21*25.05±6.35*組別空白組模型組托伐普坦組補(bǔ)腎活血組只數(shù)11 8 9 9

2.4 補(bǔ)腎活血復(fù)方對(duì)模型大鼠心肌和結(jié)腸組織形態(tài)的影響

空白組大鼠心肌結(jié)構(gòu)形態(tài)完整，心肌纖維排列有序，細(xì)胞核無(wú)固縮、溶解，肌原纖維無(wú)斷裂、損傷；模型組大鼠梗死區(qū)心肌細(xì)胞壞死，周圍存活心肌出現(xiàn)心肌細(xì)胞代償性肥大、心肌間質(zhì)成分增加、心肌纖維化甚至瘢痕組織形成；托伐普坦組和補(bǔ)腎活血組大鼠心肌纖維排列較整齊，部分心肌纖維斷裂、壞死，細(xì)胞核位于細(xì)胞邊緣，極少細(xì)胞核固縮、碎裂，較模型組顯著改善。見(jiàn)圖3。

圖3 各組大鼠心肌和結(jié)腸組織形態(tài)（HE染色，×200）

空白組大鼠結(jié)腸黏膜完整，上皮排列有序，杯狀細(xì)胞豐富，無(wú)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組大鼠結(jié)腸黏膜上皮排列紊亂，杯狀細(xì)胞較少，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；托伐普坦組和補(bǔ)腎活血組大鼠結(jié)腸黏膜上皮相對(duì)完整、排列較整齊，杯狀細(xì)胞較多，偶見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，較模型組顯著改善。見(jiàn)圖3。

2.5 補(bǔ)腎活血復(fù)方對(duì)模型大鼠心肌和結(jié)腸組織水通道蛋白4表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組大鼠心肌組織AQP4蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05），結(jié)腸組織AQP4蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，托伐普坦組和補(bǔ)腎活血組大鼠心肌組織AQP4 蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05），結(jié)腸組織AQP4蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05）；與托伐普坦組比較，補(bǔ)腎活血組大鼠心肌和結(jié)腸組織AQP4蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)圖4、表3。

表3 各組大鼠心肌和結(jié)腸組織AQP4蛋白表達(dá)比較（±s）

表3 各組大鼠心肌和結(jié)腸組織AQP4蛋白表達(dá)比較（±s）

注：與空白組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05；與托伐普坦組比較，△P＜0.05

結(jié)腸組織1.54±0.41 0.19±0.07#0.40±0.04*1.01±0.19*△組別空白組模型組托伐普坦組補(bǔ)腎活血組只數(shù)11 8 9 9心肌組織0.28±0.15 1.29±0.11#0.10±0.06*0.80±0.08*△

圖4 各組大鼠心肌和結(jié)腸組織AQP4蛋白免疫印跡

3 討論

慢性心力衰竭病情較重且病程長(zhǎng)，其相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ碗y度較大。雖然心肌缺血性心力衰竭造模操作較為復(fù)雜，死亡率略高，但成模時(shí)間短，且模擬了心肌梗死后心功能下降、心室重構(gòu)，最終發(fā)展為心力衰竭的過(guò)程。冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法是急性心肌缺血模型的常用方法[13]。因此，本實(shí)驗(yàn)慢性心力衰竭造模采用心肌缺血性心力衰竭，通過(guò)結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈造成心肌梗死，再配合力竭式游泳、饑餓造成慢性心力衰竭[14]，此法更貼近臨床。

心肌梗死后心力衰竭動(dòng)物模型制備可通過(guò)心電圖檢測(cè)、心臟結(jié)構(gòu)與心功能檢測(cè)、NT-proBNP檢測(cè)及心肌病理形態(tài)觀察等判斷模型是否成功。本研究對(duì)比大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎前后心電圖，結(jié)扎后ST段抬高，提示結(jié)扎成功，引起急性心肌梗死。超聲心動(dòng)圖可無(wú)創(chuàng)檢測(cè)心臟結(jié)構(gòu)和心功能，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠左心室增大，心功能明顯下降，左心室EF 為35.41%，明顯低于空白組，符合心力衰竭判定標(biāo)準(zhǔn)。NT-proBNP主要由心室肌細(xì)胞合成與分泌，反映心室容量負(fù)荷與壓力變化。心肌梗死后心力衰竭時(shí)左心室增大，心室肌細(xì)胞合成并分泌大量NT-proBNP入血，因此其含量變化與心力衰竭診斷及指導(dǎo)用藥密切相關(guān)[15]，也可用于評(píng)估心力衰竭預(yù)后[16]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠血清NT-proBNP含量明顯高于空白組，說(shuō)明心肌梗死后心室肌發(fā)生一系列形態(tài)結(jié)構(gòu)重構(gòu)。HE染色顯示模型組大鼠梗死區(qū)心肌細(xì)胞壞死，周圍存活心肌出現(xiàn)心肌細(xì)胞代償性肥大、心肌間質(zhì)成分增加、心肌纖維化甚至瘢痕組織形成等變化，使心室發(fā)生不可逆重構(gòu)，進(jìn)而發(fā)展為心力衰竭。

中醫(yī)藥治療慢性心力衰竭效果顯著，但中藥方-證的辯證關(guān)系及其作用機(jī)制尚不明確。因此，采用動(dòng)物模型論證中醫(yī)藥理論是促進(jìn)中醫(yī)藥發(fā)展和實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化的有效舉措[17-18]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，慢性心力衰竭基本病機(jī)以心腎陽(yáng)氣虧虛為本，血瘀、痰飲、水毒為標(biāo)。本研究參考?xì)馓撗鲂蛣?dòng)物模型[19]和心力衰竭動(dòng)物模型[11，14]的制備，結(jié)合氣虛血瘀型心力衰竭乏力、喘促發(fā)病特點(diǎn)，建立大鼠氣虛血瘀型心力衰竭動(dòng)物模型，結(jié)果顯示，模型組大鼠爪、尾部呈紫色，精神頹廢，身體慵懶，納差，尿少，大便秘結(jié)，體質(zhì)量減少，呼吸急促，表明建立的心力衰竭大鼠模型符合氣虛血瘀證證候特點(diǎn)。

補(bǔ)腎活血復(fù)方以“腎藏精主水”理論為指導(dǎo)組方：菟絲子補(bǔ)肝腎、固精，黃精補(bǔ)氣養(yǎng)陰、益腎健脾，丹參活血祛瘀、益心通經(jīng)，三者補(bǔ)腎活血，共為君藥；龜甲膠滋陰潛陽(yáng)、益腎健骨，增強(qiáng)菟絲子和黃精補(bǔ)腎之功，紅花與三七活血不留瘀，助丹參活血祛瘀，共為臣藥；人參、黃芪補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)心腎，人參還可生津止渴，黃芪利尿消腫，二者為佐藥；益母草破瘀通脈、利水消腫，為使藥。治本虛宜補(bǔ)腎益心，除標(biāo)實(shí)宜活血利水，以上諸藥共奏此功效。托伐普坦是血管升壓素V2受體拮抗劑，屬新型排水利尿劑，可調(diào)節(jié)水鈉代謝，用于治療頑固性難治性心力衰竭，尤其適用于合并利尿劑抵抗和水電解質(zhì)紊亂患者，故本研究將其作為陽(yáng)性對(duì)照藥物[20]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)模型大鼠用藥4周后，補(bǔ)腎活血組大鼠毛色光澤逐漸恢復(fù)，精神良好，活動(dòng)量、飲食、體質(zhì)量均有改善，無(wú)喘促等癥狀，說(shuō)明補(bǔ)腎活血復(fù)方可改善大鼠心力衰竭體征。且補(bǔ)腎活血組大鼠血清NT-proBNP含量減少，左心室ESD、EDD明顯減小，EF、FS明顯增加，說(shuō)明補(bǔ)腎活血復(fù)方具有改善心室結(jié)構(gòu)及心功能作用。HE染色顯示，補(bǔ)腎活血組較模型組顯著改善，大鼠心肌纖維排列較整齊，部分心肌纖維斷裂、壞死，細(xì)胞核位于細(xì)胞邊緣，極少細(xì)胞核固縮、碎裂，說(shuō)明補(bǔ)腎活血復(fù)方可抑制心室重構(gòu)，改善心肌結(jié)構(gòu)，與托伐普坦組療效相當(dāng)。

從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度分析，心肌梗死后心排出量降低，反射性激活神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)，促進(jìn)心室重構(gòu)，引發(fā)心力衰竭，此時(shí)胃腸黏膜缺血缺氧造成胃腸道屏障損傷，腸道水液代謝紊亂、液體潴留，腸道吸收分泌功能受損，加重心力衰竭進(jìn)程[21]。因此，胃腸道既是心力衰竭過(guò)程中易損傷的靶器官，又是誘發(fā)病情進(jìn)展的始動(dòng)器官[22]。研究顯示，AQP4表達(dá)異常影響心肌梗死或心力衰竭大鼠心臟和結(jié)腸組織水液代謝平衡[23]。AQP是一組跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的水通道蛋白，廣泛存在于心臟及腸道組織，其中AQP4主要存在于結(jié)腸上皮細(xì)胞基底外側(cè)膜[24]和心肌細(xì)胞膜[25]。在急性心肌梗死狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)鈉鹽含量升高，滲透壓增加，細(xì)胞膜AQP4表達(dá)升高，水鈉潴留于細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞腫脹，心肌水腫，急性期引發(fā)心力衰竭，慢性期發(fā)生心肌纖維化[4]。當(dāng)結(jié)腸發(fā)生炎癥和損傷時(shí)，AQP4表達(dá)顯著降低，水液代謝紊亂[26]。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠結(jié)腸黏膜上皮排列紊亂，杯狀細(xì)胞較少，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌組織AQP4表達(dá)上調(diào)，結(jié)腸組織AQP4表達(dá)下調(diào)；應(yīng)用托伐普坦和補(bǔ)腎活血復(fù)方干預(yù)后，大鼠結(jié)腸黏膜上皮完整且排列整齊，杯狀細(xì)胞增多，偶見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞，心肌組織AQP4表達(dá)下調(diào)，結(jié)腸組織AQP4表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明補(bǔ)腎活血復(fù)方可能通過(guò)調(diào)控AQP4表達(dá)，調(diào)節(jié)心肌及結(jié)腸水液代謝。

綜上所述，補(bǔ)腎活血復(fù)方可能通過(guò)調(diào)節(jié)心肌和結(jié)腸組織AQP4蛋白表達(dá)改善心肌梗死后心力衰竭大鼠心室重構(gòu)及心功能，其具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步探究。