消毒酒精的貯存條件和消毒效果研究

林淑儀，楊愛君，何 瑛，梁俊健，林木娣，黃浩杰

（廣東燕塘乳業(yè)股份有限公司，廣東廣州 510700）

75%酒精是一種廣泛使用的常規(guī)消毒劑[1]，具有很強(qiáng)的滲透能力，可穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部，凝固蛋白質(zhì)，從而起到殺菌的作用。酒精濃度過高或過低都會(huì)對(duì)殺菌消毒效果產(chǎn)生影響，酒精濃度越高，脫水能力越強(qiáng)，使蛋白質(zhì)凝固的作用也就越強(qiáng)。當(dāng)過高濃度的酒精與細(xì)菌接觸時(shí)，菌體表面會(huì)迅速凝固，形成一層包膜，阻止酒精繼續(xù)向菌體內(nèi)部滲透，導(dǎo)致細(xì)菌不能被徹底殺死。如果濃度太低，酒精含水量太高，單位體積內(nèi)乙醇分子含量太少，雖然可以滲透進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部，但不能將其體內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固，不足以徹底殺滅細(xì)菌。綜合以上兩點(diǎn)，兼顧殺菌消毒能力和滲透性，70%～75%的酒精可以使菌體蛋白質(zhì)脫水、變性、沉淀，不會(huì)使菌體形成包膜，而且酒精可以不斷地深入菌體內(nèi)部，作用于菌體內(nèi)所有的蛋白質(zhì)，最后殺死細(xì)菌，殺菌比較徹底。

食品加工企業(yè)通常直接購(gòu)買75%食品級(jí)酒精或用95%的食用酒精稀釋成75%酒精作消毒劑使用，75%的酒精穿透能力、作用速度最佳，但酒精具有揮發(fā)性，在使用一段時(shí)間后，酒精的消毒作用就會(huì)減弱，貯存環(huán)境的溫度直接影響酒精的揮發(fā)速度，對(duì)酒精的“有效期”影響明顯[2-4]。本文將75%酒精分別放在6 ℃、25 ℃和35 ℃的環(huán)境中存放30 d，模擬冬天室內(nèi)工作間、恒溫潔凈車間和夏天室內(nèi)工作間的工作場(chǎng)所溫度，觀察75%酒精濃度的揮發(fā)速度和消毒效果的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)微生物以金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）作為細(xì)菌繁殖體中化膿性球菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；大腸桿菌（ATCC 25922）作為細(xì)菌繁殖體中腸道菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；95%的食用酒精，廣西金源生化集團(tuán)；緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、結(jié)晶紫中性紅膽鹽培養(yǎng)基，北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

溫度測(cè)量?jī)x，德圖儀器國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海延翌儀器儀表有限公司；酒精計(jì)（量程在0%～100%）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 75%酒精的配制與貯存

采用公式法計(jì)算

式中：A為95%酒精的總體積；B為75%酒精的總體積。所需添加純水的量C=B-A。

本試驗(yàn)配制5 L 75%的酒精，根據(jù)上述的計(jì)算公式得出，需量取3 947 mL 95%酒精于5 L 的容器中，往容器中加入1 053 mL 純水，攪拌均勻，靜置，從中倒出220 mL 液體至量筒，用酒精計(jì)和溫度測(cè)量?jī)x測(cè)出酒精濃度和溫度，經(jīng)換算其酒精濃度為75.4%。用1 L的PP 錐形瓶盛裝，分別放置在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，每日早晚各開啟一次，每次5 min，目的是模擬企業(yè)日常每天開啟容器領(lǐng)取75%酒精的時(shí)間。

1.3.2 酒精濃度的檢測(cè)

每日取220 mL 酒精置于潔凈、干燥的250 mL量筒內(nèi)，靜置數(shù)分鐘，待酒精中的氣泡完全消失后，放入潔凈、擦干的酒精計(jì)，不接觸量筒壁，平衡時(shí)間5 min，水平觀測(cè)，讀取與彎月面相切處的刻度數(shù)值，同時(shí)用溫度測(cè)量?jī)x測(cè)定此時(shí)酒精的溫度。根據(jù)測(cè)得的酒精示值和溫度通過《酒精水溶液密度與酒精度（乙醇含量）對(duì)照表（20 ℃）》換算成20 ℃時(shí)的酒精度。同時(shí)，在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值，不應(yīng)超過平均值的0.5%[5]。

1.3.3 消毒效果試驗(yàn)

①菌液制備。使用已傳至3 代的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌菌株接種于緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基中，于36 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)后菌液濃度應(yīng)不少于1×105CFU·mL-1。②設(shè)置“6 ℃貯存條件”“25 ℃貯存條件”和“35 ℃貯存條件”共3 個(gè)組，每組3 個(gè)無(wú)菌離心管，然后分別往每個(gè)無(wú)菌離心管中加入1 mL 菌液和9 mL75%酒精溶液（陽(yáng)性對(duì)照管用緩沖蛋白胨水替代75%酒精），振蕩均勻，分別作用0.5 min、1.0 min 和2.0 min 后，向 混 合 液 中 加 入10 mL 營(yíng)養(yǎng)肉湯，10 min 后，取其中1 mL 混勻溶液進(jìn)行平板傾注，在36 ℃的電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。③根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002 年版），計(jì)算活菌濃度（CFU·mL-1），換算成對(duì)數(shù)值，然后計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：殺滅對(duì)數(shù)值＝陽(yáng)性對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值－實(shí)驗(yàn)組活菌濃度的對(duì)數(shù)值。判定標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的殺滅對(duì)數(shù)值均≥5.00，判為消毒合格[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同環(huán)境溫度貯存下75%酒精濃度變化檢測(cè)結(jié)果

75%酒精配制后，在PP 錐形瓶容器貯存下，其酒精濃度在6 ℃、25 ℃和35 ℃的趨勢(shì)變化見圖1。6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境貯存下，酒精濃度分別從75.4%下降至74.5%、73.3%和71.2%。總的來說，貯存環(huán)境溫度越高，酒精的揮發(fā)性越強(qiáng)，酒精濃度下降速度越快。雖然75%酒精在不同貯存溫度環(huán)境下?lián)]發(fā)速度有所不同，但在一個(gè)月的貯存期內(nèi)，酒精濃度仍在70%以上，可以達(dá)到酒精作為消毒劑的限值標(biāo)準(zhǔn)要求[7]。

圖1 酒精濃度趨勢(shì)變化

2.2 不同貯存溫度下75%酒精的消毒效果對(duì)比

75%酒精配制后分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，在貯存期間分別選擇貯存時(shí)長(zhǎng)0 d、7 d、9 d、15 d、20 d 和30 d 的6 個(gè)時(shí)間段對(duì)75%酒精的消毒效果進(jìn)行對(duì)比。在30 d 貯存期內(nèi)，75%酒精作用0.5 min、1.0 min 和2.0 min 都可以達(dá)到對(duì)金黃色葡萄球菌的消毒效果。其中貯存時(shí)長(zhǎng)為30 d 時(shí)，作用0.5 min 后有金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)，但作用1.0 min和2.0 min 可以100%殺滅金黃色葡萄球菌，平均殺滅對(duì)數(shù)值為8.41（見表1、表2、表3）。

表1 6 ℃貯存下75%酒精不同消毒作用時(shí)間的消毒效果

表2 25 ℃貯存下75%酒精不同消毒作用時(shí)間的消毒效果

表3 35 ℃貯存下75%酒精不同消毒作用時(shí)間的消毒效果

75%酒精對(duì)大腸桿菌的消毒效果隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低，其中2.0 min 的消毒效果最好，可以達(dá)到100%的殺滅率，作用1.0 min 和0.5 min 的消毒效果逐漸降低，但其6 個(gè)貯存時(shí)長(zhǎng)的平均殺滅對(duì)數(shù)值均≥5.00，達(dá)到規(guī)定的消毒合格要求。

3 結(jié)論與討論

研究75%酒精在不同環(huán)境溫度中貯存30 d 的過程中，其酒精濃度和消毒效果的變化。結(jié)果表明，75%酒精分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃ 3 個(gè)溫度中貯存30 d 后酒精濃度仍可以達(dá)到70%以上；在相同的貯存時(shí)間內(nèi)，環(huán)境溫度的高低會(huì)直接影響酒精濃度揮發(fā)性的速度，溫度越高，酒精揮發(fā)速度越快。在30 d 貯存期間，選擇6 個(gè)不同貯存時(shí)長(zhǎng)的75%酒精對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別作用0.5 min、1.0 min 和2.0 min，其平均對(duì)數(shù)值均可以達(dá)到5.00 以上，對(duì)細(xì)菌的殺滅效果可以達(dá)到規(guī)定的消毒要求。同時(shí)，在3 個(gè)不同的貯存溫度環(huán)境中，75%酒精在每日開啟10 min 情況下，貯存0 d 和30 d 對(duì)金黃色葡萄球菌作用1.0 min 和2.0 min 的滅菌作用沒有差別，但貯存30 d 對(duì)金黃色葡萄球菌作用0.5 min 后，有金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)?？梢?，75%酒精在6 ℃、和35 ℃環(huán)境中貯存30 d，仍具有較強(qiáng)的消毒作用，企業(yè)可以根據(jù)自身需求選擇不同的貯存時(shí)長(zhǎng)和消毒作用時(shí)間。

通過對(duì)75%酒精的貯存溫度和消毒效果的試驗(yàn)檢測(cè)，建議75%消毒酒精在30 d 的保存期中，存儲(chǔ)溫度≤25 ℃，消毒時(shí)間≥1.0 min，既可減少配制的次數(shù)，又可以保證消毒效果。