基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接探討失笑散治療冠心病的作用機(jī)制

邵 鑫,朱云鵬,王 彥

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病簡(jiǎn)稱冠心病,是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起管腔狹窄、阻塞或痙攣,導(dǎo)致心肌缺血、缺氧引起的心臟病[1],是臨床常見(jiàn)的心血管疾病之一。中醫(yī)學(xué)將冠心病歸屬于“胸痹”“真心痛”“心悸”等范疇,相關(guān)研究證實(shí)中成藥在緩解心絞痛、防治再灌注后無(wú)復(fù)流、心肌梗死二級(jí)預(yù)防及提高生活質(zhì)量等方面有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[2]。

失笑散源自宋代《太平惠民和劑局方》,由蒲黃和五靈脂等組成[3],具有活血祛瘀、散結(jié)止痛之效,主治瘀血內(nèi)停、脈道阻滯所致之痛癥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示,失笑散具有抗心肌缺血缺氧、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗凝、降壓、降脂、鎮(zhèn)痛等作用[4-6]。中藥復(fù)方治療具有多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的特性,但其治療冠心病的潛在作用機(jī)制尚未明確。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是以系統(tǒng)生物學(xué)理論為基礎(chǔ),融合了藥理學(xué)等多學(xué)科的內(nèi)容和技術(shù)以闡明藥物的作用機(jī)制,其整體性、系統(tǒng)性及注重藥物成分間相互作用的特性與中醫(yī)治療疾病的基本觀念相符,可為優(yōu)化和評(píng)價(jià)中藥復(fù)方的臨床療效提供參考依據(jù)[7-8]。本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)“多成分-多靶點(diǎn)-多通路”的分析優(yōu)勢(shì)結(jié)合分子對(duì)接技術(shù)探討失笑散治療冠心病的潛在作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 失笑散活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選 基于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)(TCMSP,https://tcmspw.com/tcmsp.php/)檢索蒲黃的化學(xué)成分,以口服生物利用度(OB)≥30%、類(lèi)藥性(DL)≥0.18為條件篩選出蒲黃的有效活性成分,進(jìn)一步通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)檢索蒲黃活性成分對(duì)應(yīng)的潛在靶點(diǎn)信息,去除不含有靶點(diǎn)的活性成分。利用BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)(http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/)檢索五靈脂的活性成分及作用靶點(diǎn),設(shè)置Score cutoff≥39、P≤0.05進(jìn)行篩選。借助HERB數(shù)據(jù)庫(kù)(http://drug.ac.cn/)搜索五靈脂的活性成分,結(jié)合BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)查詢靶點(diǎn)以具有對(duì)應(yīng)潛在靶點(diǎn)及OB(≥30%)為限進(jìn)行補(bǔ)充。利用UniProt蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org/)設(shè)置“Reviewed”,且物種為“Human”,查詢潛在靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因名并進(jìn)一步規(guī)范,將蒲黃和五靈脂的潛在靶點(diǎn)合并去重。

1.2 構(gòu)建藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖 將整理后的藥物、活性成分、潛在靶點(diǎn)信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件中進(jìn)行可視化分析。利用“源節(jié)點(diǎn)(source node)”表示藥物和活性成分,“邊(dege)”表示節(jié)點(diǎn)之間的相互聯(lián)系,“靶節(jié)點(diǎn)(target node)”表示活性成分和潛在靶點(diǎn),從而構(gòu)建藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。

1.3 冠心病相關(guān)靶點(diǎn)及其與藥物靶點(diǎn)交集的獲取 以“coronary heart disease”作為關(guān)鍵詞在GenenCards基因信息數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)中進(jìn)行檢索,其中Score值代表靶點(diǎn)與疾病的關(guān)聯(lián)程度,Score值越高提示關(guān)聯(lián)越密切。去除Score值較低的靶點(diǎn),選取Score值>5.9的靶點(diǎn)。借助在線人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)(OMIM,https://omim.org/)、治療靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)(TTD,https://cn.bing.com/)以“coronary heart disease”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行補(bǔ)充最終得到冠心病相關(guān)靶點(diǎn)。利用Venny 2.1.0(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)將失笑散的潛在靶點(diǎn)與冠心病相關(guān)靶點(diǎn)取交集,得到交集靶點(diǎn)。

1.4 蛋白-蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將疾病與藥物的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING在線平臺(tái)(https://string-db.org/),物種設(shè)置為“Homo sapiens”,設(shè)定最低相互作用閾值為最高置信度“highest confidence(0.9)”,隱藏孤立節(jié)點(diǎn),其余參數(shù)保持默認(rèn)設(shè)置,得到PPI網(wǎng)絡(luò)圖。將其結(jié)果保存為“TSV”模式并導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件中,運(yùn)用“Network Analyzer”功能進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析,并基于拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)度值(Degree值)繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖,將Degree值>20作為篩選條件篩選出核心靶點(diǎn)。

1.5 基因本體(GO)功能富集分析及京都基因與基因組百科全書(shū)(KEGG)通路富集分析 基于Metascape數(shù)據(jù)平臺(tái)(https://metascape.org/)對(duì)失笑散治療冠心病的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析,物種選定為“人”,其余參數(shù)保持默認(rèn)值,借助R語(yǔ)言4.0.2對(duì)排名居前20位的結(jié)果進(jìn)行可視化分析。

1.6 構(gòu)建活性成分-潛在靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)圖 將活性成分、潛在靶點(diǎn)及排名居前20位的關(guān)鍵通路信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件中構(gòu)建活性成分-潛在靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)圖。并進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析,選取Degree值>10的活性成分作為核心成分。

1.7 分子對(duì)接分析 為進(jìn)一步驗(yàn)證核心成分與核心靶點(diǎn)結(jié)合的活性,將分析篩選出的失笑散治療冠心病的核心成分及核心靶點(diǎn)通過(guò)AutoDockTools-1.5.7進(jìn)行分子對(duì)接。具體步驟:①失笑散治療冠心病的核心靶點(diǎn)及核心成分結(jié)構(gòu)的獲取:利用TCMSP及PubChem開(kāi)放化學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)下載核心成分的結(jié)構(gòu)式(mol2格式),借助藥物綜合數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB,https://www.rcsb.org)獲取核心靶點(diǎn)的3D蛋白結(jié)構(gòu)。②分子對(duì)接前預(yù)處理:通過(guò)PyMOL軟件對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行去除水分子、移除配體、離子等。③核心成分(配體)與核心靶點(diǎn)(分子)的對(duì)接:利用AutoDockTools-1.5.7對(duì)靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行加氫、計(jì)算電荷、添加原子類(lèi)型,對(duì)核心成分進(jìn)行設(shè)置加氫、可扭轉(zhuǎn)鍵、計(jì)算電荷。使Grid Box網(wǎng)格籠罩整個(gè)靶點(diǎn)蛋白,之后進(jìn)行多次半柔性對(duì)接,對(duì)接結(jié)果只保留對(duì)接結(jié)合能絕對(duì)值最高者。④對(duì)接結(jié)果可視化:通過(guò)PyMOL軟件進(jìn)行可視化分析。

2 結(jié) 果

2.1 蒲黃、五靈脂的活性成分及對(duì)應(yīng)潛在靶點(diǎn) 經(jīng)過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出蒲黃的潛在化學(xué)成分8個(gè)(其中棕櫚酸睪酮及山柰酚-3-O-α-D-槐糖苷未發(fā)現(xiàn)相對(duì)應(yīng)滿足條件的靶點(diǎn)予以去除)。通過(guò)BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索五靈脂獲得7個(gè)潛在活性物質(zhì)(其中4′-聯(lián)苯酚未發(fā)現(xiàn)滿足條件的靶點(diǎn)予以去除),結(jié)合HERB數(shù)據(jù)庫(kù)檢索進(jìn)行補(bǔ)充,滿足條件的只有尿嘧啶。最終獲得失笑散治療冠心病活性成分13個(gè),其中蒲黃6個(gè)、五靈脂7個(gè)。詳見(jiàn)表1。通過(guò)TCMSP、BATMAN-TCM數(shù)據(jù)獲得蒲黃對(duì)應(yīng)潛在靶點(diǎn)326個(gè)、五靈脂對(duì)應(yīng)潛在靶點(diǎn)94個(gè),經(jīng)過(guò)合并去重篩選后共獲得失笑散治療冠心病潛在靶點(diǎn)267個(gè)。

表1 失笑散活性成分及對(duì)應(yīng)的潛在靶點(diǎn)信息

2.2 藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)可視化網(wǎng)絡(luò)圖 將失笑散中蒲黃、五靈脂兩味藥與篩選出的13個(gè)活性成分及267個(gè)潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件中構(gòu)建藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖,詳見(jiàn)圖1。網(wǎng)絡(luò)中共282個(gè)節(jié)點(diǎn)、429條邊,平均Degree值為3.021,根據(jù)拓?fù)鋵傩苑治鲲@示,槲皮素、異鼠李素、山柰酚、花生四烯酸、β-谷甾醇、尿嘧啶的連接度較高,可能為失笑散治療冠心病的關(guān)鍵活性成分。

圖1 藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.3 疾病相關(guān)靶點(diǎn)及藥物-疾病交集靶點(diǎn) 通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)檢索“coronary heart disease”獲得冠心病相關(guān)靶點(diǎn)7 682個(gè),OMIM數(shù)據(jù)檢索獲得555個(gè),TTD數(shù)據(jù)庫(kù)檢索出9個(gè)。合并去重后共獲得冠心病相關(guān)靶點(diǎn)3 470個(gè)。將其與失笑散活性成分靶點(diǎn)導(dǎo)入Venny 2.1.0取交集共獲得179個(gè)交集靶點(diǎn),詳見(jiàn)圖2。

圖2 藥物-疾病靶點(diǎn)Venny圖

2.4 藥物-疾病共同靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò) 將獲得的179個(gè)交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò),詳見(jiàn)圖3。將獲取到TSV格式文件導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件中基于Degree值繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖,節(jié)點(diǎn)越大,顏色越深,提示Degree值越高,表明該靶點(diǎn)聯(lián)系緊密進(jìn)而說(shuō)明靶點(diǎn)的重要性,詳見(jiàn)圖4。利用Network Analyzer進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析。PPI網(wǎng)絡(luò)中共151個(gè)節(jié)點(diǎn)、494條邊,平均Degree值為6.859。其中Degree值>20的相關(guān)信息見(jiàn)表2。

圖3 PPI網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖

圖4 PPI網(wǎng)絡(luò)圖

表2 PPI網(wǎng)絡(luò)中核心靶點(diǎn)拓?fù)鋮?shù)

2.5 GO功能富集及KEGG通路富集分析 為進(jìn)一步闡明交集靶點(diǎn)的潛在作用機(jī)制,將交集靶點(diǎn)上傳至Metascape數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行GO功能富集及KEGG通路富集分析。選取排名前20位的條目,利用R語(yǔ)言繪制GO及KEGG富集分析氣泡圖。其中縱坐標(biāo)代表基因名稱,橫坐標(biāo)表示基因比例(GeneRatio),氣泡越大代表基因富集數(shù)量越多,顏色越深代表富集程度越顯著(即P值越小)。富集結(jié)果見(jiàn)圖5～圖8。其中主要富集的通路包括環(huán)磷酸腺苷(cAMP)信號(hào)通路、核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB信號(hào)通路等。cAMP信號(hào)通路屬于環(huán)核苷酸系統(tǒng)。此系統(tǒng)中,細(xì)胞外信號(hào)與相應(yīng)受體結(jié)合后,通過(guò)腺苷酸環(huán)化酶調(diào)節(jié)cAMP引起反應(yīng)。NF-κB信號(hào)通路的表達(dá)是保持細(xì)胞增殖并保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)胞凋亡的條件。細(xì)胞內(nèi)cAMP的表達(dá)可抑制NF-κB的活性,從而抑制腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α),同時(shí)增加抗炎因子白細(xì)胞介素(IL)-10的產(chǎn)生,阻斷了炎性介質(zhì)釋放,從而保護(hù)心肌細(xì)胞。由此表明失笑散通過(guò)調(diào)節(jié)多種生物學(xué)過(guò)程、通過(guò)多通路治療冠心病,且各通路之間存在著相互聯(lián)系。

圖5 GO生物過(guò)程富集分析氣泡圖

圖6 GO分子功能富集分析氣泡圖

圖7 GO細(xì)胞組分富集分析氣泡圖

圖8 KEGG通路富集分析氣泡圖

2.6 活性成分-潛在靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)圖 將失笑散活性成分、潛在靶點(diǎn)及KEGG篩選出排名居前20位的通路信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件中構(gòu)建活性成分-潛在靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)圖,詳見(jiàn)圖9。運(yùn)用Network Analyzer進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析,依據(jù)Degree值表示,其中節(jié)點(diǎn)越大,顏色越深,提示Degree值越高,表明聯(lián)系越緊密。網(wǎng)絡(luò)中有節(jié)點(diǎn)212個(gè)、邊879條,平均Degree值為8.362。選取Degree值>10的活性成分作為核心成分,包括槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、異鼠李素、花生四烯酸、尿嘧啶。

圖9 活性成分-潛在靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)圖

2.7 分子對(duì)接驗(yàn)證 將Degree值排名前4位(即Degree值>30)的核心靶點(diǎn)與核心成分進(jìn)行分子對(duì)接,詳見(jiàn)圖10。分子對(duì)接可快速評(píng)估配體與蛋白質(zhì)受體的親和力和結(jié)合模式的能力[9],通常認(rèn)為結(jié)合能<0提示配體與受體可自發(fā)結(jié)合[10],結(jié)合能數(shù)值越小提示兩者越容易結(jié)合,結(jié)合越穩(wěn)定。當(dāng)結(jié)合能<-20.93 kJ/mol時(shí)提示結(jié)合活性較好,結(jié)合能<-29.30 kJ/mol時(shí)提示極易結(jié)合[11]。對(duì)接結(jié)果顯示結(jié)合能<-20.93 kJ/mol的共14種,占總數(shù)的75%,說(shuō)明多數(shù)核心成分與核心靶點(diǎn)具有良好的結(jié)合活性。其中β-谷甾醇與AKT1、HSP90AA1、MAPK1,HSP90AA1與山柰酚,槲皮素與HSP90AA1、MAPK1結(jié)合活性較好。運(yùn)用PyMOL軟件對(duì)分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化分析。詳見(jiàn)圖11。

圖10 分子對(duì)接結(jié)合能熱圖

圖11 失笑散核心成分與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接可視化圖

3 討 論

《金匱要略》記載:“夫脈當(dāng)取太過(guò)不及,陽(yáng)微陰弦,即胸痹而痛,所以然者,責(zé)其極虛也”,張仲景認(rèn)為此為本虛標(biāo)實(shí)之證?！端貑?wèn)·痹論》云:“心痹痛者,亦有頑痰死血”,明代王肯堂《證治準(zhǔn)繩·心痛胃脘痛》記載:“死血作痛,脈必澀”。意在指明瘀血阻絡(luò)、脈道不通可發(fā)為胸痹心痛。相關(guān)研究表明,血瘀貫穿冠心病心絞痛的始終[12]。國(guó)醫(yī)大師鄧鐵濤教授的“五臟相關(guān)、痰瘀相關(guān)”理論認(rèn)為痰瘀絡(luò)阻是冠心病的根本病機(jī)[13]。國(guó)醫(yī)大師雷忠義結(jié)合《內(nèi)經(jīng)》善從瘀血論治冠心病,創(chuàng)新性地提出從痰瘀互結(jié)診治冠心病[14]。

失笑散最早出自宋代《太平惠民和劑局方》,自宋代以后《景岳全書(shū)》《血證論》《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》等經(jīng)典著作中常有記載,主治病癥為后腹痛、心痛、產(chǎn)后心痛等。現(xiàn)代藥理研究顯示,失笑散具有抗心肌缺血和缺氧、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑制血小板聚集等功能[15]。失笑散全方由蒲黃、五靈脂組成,其中蒲黃具有降低血脂、修復(fù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用[16];五靈脂對(duì)血小板聚集、動(dòng)脈粥樣硬化及炎癥有良好的治療效果[17-18]。

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出核心成分,包括槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、異鼠李素、花生四烯酸、尿嘧啶。其中槲皮素為黃酮類(lèi)化合物,可抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性,具有舒張血管、抗心肌缺血缺氧及延緩動(dòng)脈硬化發(fā)展的作用[19-20]。槲皮素可抑制TNF-α誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖及心肌肥厚,減小血管脆性,增加冠狀動(dòng)脈血流量等作用[21]。山柰酚可激活哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路,促進(jìn)缺氧心肌細(xì)胞增殖,抑制其凋亡,提高超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低活性氧水平,抑制自噬,說(shuō)明山柰酚對(duì)心臟有保護(hù)作用[22]。β-谷甾醇可抑制心肌缺血再灌注損傷,可能與細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)1/2信號(hào)通路有關(guān)[23]。異鼠李素具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抑制脂肪分化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血栓、降血壓、降血脂及抑制心肌肥大等冠心病獲益的作用[24]。相關(guān)文獻(xiàn)研究表明,花生四烯酸可開(kāi)通三磷酸腺苷(ATP)敏感性鉀通道,從而舒張血管,并可改善冠狀動(dòng)脈微循環(huán),促進(jìn)血管生成以保護(hù)心肌,同時(shí)可抑制NF-κB激活以達(dá)到抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗炎的目的[25]。

本研究PPI網(wǎng)絡(luò)分析顯示,核心靶點(diǎn)涉及AKT1、p53、HSP90AA1、MAPK1、RELA、JUN、TNF、ESR1、RXRA。其中AKT1通過(guò)多種途徑影響心血管疾病,包括抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血管生成及成熟、調(diào)節(jié)血管通透性[26]。AKT1可抑制IL-6表達(dá),從而改善心肌氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、纖維化等,也可抑制新生內(nèi)膜細(xì)胞凋亡與內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的激活,在血管重塑中發(fā)揮著保護(hù)作用[27]。TNF-α是前炎癥細(xì)胞因子,可刺激細(xì)胞產(chǎn)生IL-17與IL-1,最終造成炎癥細(xì)胞募集,同時(shí)TNF-α抑制心肌收縮過(guò)程中β受體活性及Ca2+的轉(zhuǎn)運(yùn),引起心肌細(xì)胞及間質(zhì)結(jié)構(gòu)改變,從而進(jìn)一步加劇心肌損傷壞死[28]。p53在抑制血管生成等方面發(fā)揮著重要作用,相關(guān)實(shí)驗(yàn)顯示,p53可加重缺血再灌注過(guò)程中心肌損傷,p53參與調(diào)節(jié)血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)誘導(dǎo)缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡[29]。MAPK1作為重要的炎癥指標(biāo),參與冠心病的炎癥反應(yīng),可調(diào)控凝血功能及脂代謝。MAPK1可影響mTOR信號(hào)傳導(dǎo),從而影響內(nèi)皮細(xì)胞自噬能力,增強(qiáng)細(xì)胞活力,抑制細(xì)胞凋亡,因而對(duì)冠心病的發(fā)展產(chǎn)生影響[30]。分子對(duì)接驗(yàn)證顯示,多數(shù)核心成分與核心靶點(diǎn)具有良好的結(jié)合能。

通過(guò)KEGG富集分析結(jié)果可知,失笑散治療冠心病的潛在靶點(diǎn),主要富集在cAMP信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、NF-κB信號(hào)通路、缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF-1)信號(hào)通路等。其中cAMP信號(hào)通路上游部分相對(duì)簡(jiǎn)單,但其下游部分影響的組織、細(xì)胞類(lèi)型廣泛。cAMP作為第一個(gè)被識(shí)別的“第二信使”,通過(guò)刺激eNOS信號(hào)通路,可提高心肌細(xì)胞收縮力,增加心排血量[31-32]。低密度脂蛋白膽固醇可附著在血管壁內(nèi),通過(guò)氧化修飾形成氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),進(jìn)而損傷內(nèi)皮功能。動(dòng)脈粥樣硬化使動(dòng)脈壁變厚、變硬,血管管腔越來(lái)越狹窄,進(jìn)而導(dǎo)致心肌缺血缺氧。NF-κB信號(hào)通路作為一種炎癥通路,通過(guò)自噬穩(wěn)定斑塊。NF-κB自噬可防止右心室收縮壓、右心室肥厚指數(shù)增加及肺動(dòng)脈重塑。NF-κB自噬可降低IL-6等炎性因子表達(dá)以減輕炎癥反應(yīng),同時(shí)減輕內(nèi)皮損傷以延緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程[33]。有研究表明,HIF-1通路在缺氧條件下可激活下游血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、內(nèi)皮素1、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶2等靶基因的轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂和增殖、血管再生及細(xì)胞厭氧代謝等,以提高ATP的合成,促進(jìn)心肌血管新生,改善心功能[34]。

綜上所述,失笑散治療冠心病的機(jī)制具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)揭示了失笑散的物質(zhì)基礎(chǔ),為治療冠心病的可能機(jī)制提供了研究思路及理論基礎(chǔ)。然而基于中藥作用的復(fù)雜性及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的局限性,有待今后藥理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。