次氯酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦苗種培育中弧菌半致死濃度的探究

李春嶺 張志偉 宋清祥 何雁鴻 馬雪彬 高文雅 徐勝利 孫紹永

摘 要：用次氯酸作為消毒劑，在與凡納濱對(duì)蝦（Penaeus vannamei）苗種培育環(huán)境接近的條件下，探究其對(duì)弧菌（Vibrio）20 h半致死濃度，設(shè)定6個(gè)次氯酸濃度梯度，分別為0.5、2、5、10、15、25 mg/L，探究其在20 h消毒過(guò)程中對(duì)弧菌的殺滅效果，以及接近20 h半致死濃度的次氯酸濃度。結(jié)果表明，在加入次氯酸第20 h時(shí)，5 mg/L試驗(yàn)組致死率達(dá)到54.5%，最接近弧菌50%死亡率，其中25 mg/L試驗(yàn)組在第4 h便可達(dá)到50%致死率，在第20 h時(shí)25 mg/L試驗(yàn)組弧菌致死率達(dá)81.6%。

關(guān)鍵詞：次氯酸；弧菌（Vibrio）；半致死濃度

次氯酸（HClO）是含氯酸，只在溶液中存在，高濃度溶液為黃色，稀濃度無(wú)色，性質(zhì)極不穩(wěn)定，有漂白、消毒作用^[1-3]。

弧菌為革蘭氏陰性菌，是一種致病菌^[4]，尤其是對(duì)凡納濱仔蝦培育、工廠化養(yǎng)殖而言^[5-7]。目前只能依靠使用微生態(tài)制劑、抗生素及消毒劑進(jìn)行防治，但存在微生態(tài)制劑效果不盡人意，抗生素易產(chǎn)生耐藥性，消毒劑副作用大的缺點(diǎn)，造成苗種病害頻發(fā)、出成率低。

關(guān)于次氯酸在凡納濱對(duì)蝦（Penaeus vannamei）苗種培育中使用未見(jiàn)報(bào)道，本試驗(yàn)用次氯酸作為消毒劑初次探究其對(duì)弧菌（Vibrio）20 h半致死濃度，可為凡納濱對(duì)蝦苗種培育過(guò)程中對(duì)弧菌的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)在黃驊市利泰水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司凡納濱對(duì)蝦工廠化育苗車間進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境接近育苗車間環(huán)境，也是為了更好的接近實(shí)際生產(chǎn)。試驗(yàn)用水取自正在進(jìn)行凡納濱對(duì)蝦苗種培育的培育池，試驗(yàn)用蝦苗與試驗(yàn)用水取自同一培育池。次氯酸由渤海巨翔衡水新材料科技有限公司提供，弧菌瓊脂檢測(cè)平板購(gòu)買于青島中仁動(dòng)物藥品有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在1 m³水桶內(nèi)進(jìn)行，設(shè)置6個(gè)試驗(yàn)組（設(shè)置次氯酸0.5、2、5、10、15、25 mg/L等6個(gè)階梯濃度）及1個(gè)對(duì)照組，以此為基礎(chǔ)設(shè)置3個(gè)平行，共計(jì)21個(gè)水桶。每個(gè)桶內(nèi)均在同一個(gè)養(yǎng)殖池內(nèi)取水，每個(gè)桶內(nèi)投放5 000尾蝦苗；內(nèi)置4個(gè)氣石充氧，同時(shí)有攪水作用，使弧菌均勻分布；投喂時(shí)間及投喂量與育苗車間一致，每隔2個(gè)小時(shí)在桶內(nèi)取0.2 mL養(yǎng)殖水涂布在弧菌培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

培養(yǎng)完成后，記錄每個(gè)弧菌培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)量，通過(guò)數(shù)量對(duì)比來(lái)反應(yīng)次氯酸對(duì)弧菌的抑制效果，使用Excel對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。在記錄三個(gè)平行試驗(yàn)數(shù)據(jù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)每組平行試驗(yàn)數(shù)據(jù)相近，遂對(duì)每組平行試驗(yàn)數(shù)據(jù)求平均值后進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)水直接在培養(yǎng)皿中進(jìn)行涂布，培養(yǎng)后能清晰查數(shù)出菌落個(gè)數(shù)，故沒(méi)有對(duì)試驗(yàn)水進(jìn)行稀釋涂布。各試驗(yàn)組在定時(shí)觀察中弧菌數(shù)量均有不定程度的減少；對(duì)照組弧菌數(shù)量有上升趨勢(shì)。

2.1 各試驗(yàn)組第20 h弧菌死亡數(shù)量

將各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，弧菌數(shù)量逐漸減少，減少量隨次氯酸濃度的升高呈上升趨勢(shì)。投放次氯酸后每隔2小時(shí)取樣測(cè)試一次，在投放次氯酸第2小時(shí)采樣測(cè)試數(shù)據(jù)中，次氯酸濃度在5 mg/L以上（包含5 mg/L）弧菌數(shù)量有減少趨勢(shì)，0.5 mg/L和2 mg/L濃度組在投放次氯酸后第2小時(shí)弧菌變化不明顯；在試驗(yàn)進(jìn)行到第4 h時(shí)所有試驗(yàn)組弧菌數(shù)量均呈降低趨勢(shì)明顯，在此濃度梯度內(nèi)，弧菌死亡數(shù)量與次氯酸濃度呈正比。第20 h各試驗(yàn)組弧菌死亡數(shù)量如圖1所示，對(duì)照組第20 h弧菌數(shù)量增長(zhǎng)了26個(gè)。

2.2 第20 h各試驗(yàn)組弧菌死亡率

弧菌死亡率隨次氯酸濃度的升高而增加，20 h半致死率最接近的濃度為5 mg/L，死亡率為54.5%；10 mg/L試驗(yàn)組死亡率為61.7%；15 mg/L試驗(yàn)組死亡率為70.1%；25 mg/L濃度死亡率為81.6%，此濃度在第4 h致死率就達(dá)到50%；除0.5 mg/L和2 mg/L試驗(yàn)組外，其它濃度均在第14 h之后達(dá)到50%致死率?；【唧w死亡率如圖2所示。

2.3 不同時(shí)間段每組弧菌死亡數(shù)量

根據(jù)次氯酸濃度不同，每個(gè)時(shí)間段對(duì)弧菌致死量也存在一定差距。在實(shí)際生產(chǎn)當(dāng)中，對(duì)消毒速率及持久性有一定的需求，試驗(yàn)最初每隔2 h進(jìn)行一次采樣，在此數(shù)據(jù)中截取第4 h、第10 h、第16 h和第20 h弧菌致死數(shù)據(jù)，一是看短期內(nèi)次氯酸藥效發(fā)揮，二是看次氯酸持久性的差距，試驗(yàn)表現(xiàn)出在同一時(shí)間段內(nèi)次氯酸濃度越高，弧菌死亡率越高，呈正相關(guān)趨勢(shì)（如圖3）。

3 結(jié)論

本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)次氯酸對(duì)弧菌有較好的殺滅作用并且安全使用范圍大，從各個(gè)角度分析來(lái)看，試驗(yàn)濃度區(qū)間呈現(xiàn)出濃度正相關(guān)趨勢(shì)。試驗(yàn)中，每個(gè)濃度梯度內(nèi)的凡納濱對(duì)蝦苗種均無(wú)死亡現(xiàn)象，從吃食和活動(dòng)情況來(lái)看并未表現(xiàn)出狀態(tài)異常，試驗(yàn)結(jié)束與取苗池中的苗種對(duì)比，規(guī)格大小無(wú)差異，說(shuō)明并未影響苗種正常生長(zhǎng)。0.5 mg/L和2 mg/L濃度次氯酸試驗(yàn)組始終未達(dá)到50%致死率，25 mg/L濃度次氯酸試驗(yàn)組在短時(shí)間內(nèi)以及持效性方面均表現(xiàn)良好，每個(gè)濃度試驗(yàn)組均表現(xiàn)出不同的弧菌致死效果，最終都能對(duì)弧菌有很好的殺滅作用。高濃度次氯酸在短時(shí)間內(nèi)以及長(zhǎng)效性均好于低濃度次氯酸，對(duì)弧菌殺滅作用表現(xiàn)出濃度依賴性。此次試驗(yàn)初步粗略探究次氯酸的實(shí)際消毒效果，后期將繼續(xù)對(duì)其消毒濃度以及對(duì)苗種致死濃度進(jìn)行深度探究，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果再次驗(yàn)證及拓展。

次氯酸具有其它消毒劑比較有四大特點(diǎn)，一是它是人體自身嗜中性白血球吞噬病原菌釋放的物質(zhì)，是抵御外界細(xì)菌的成分之一，具有瞬間殺菌能力，不傷害人體，是人類健康天然的安全屏障；二是與微生物接觸后，能迅速破壞微生物細(xì)胞膜，并摧毀吸附于細(xì)胞膜表面上的病毒蛋白質(zhì)長(zhǎng)釘，能使其脫落，無(wú)法再傳染病菌；三是次氯酸分子在進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部后會(huì)釋放出原子狀態(tài)的氧，原子氧具有極強(qiáng)的氧化性，使微生物活性蛋白變性，喪失生命活力，從而殺滅細(xì)菌，任何微生物無(wú)法對(duì)其產(chǎn)生對(duì)抗性和耐藥性；四是次氯酸能滲入到細(xì)菌及其它微生物內(nèi)部，分解、破壞微生物的氨基酸、酶系統(tǒng)，進(jìn)而控制微生物蛋白質(zhì)的合成，終止微生物的代謝機(jī)能，且與微生物及有機(jī)物作用后能立即還原為水。

基于以上特點(diǎn)，次氯酸作為一種綠色環(huán)保、高效廣譜的殺菌劑，既沒(méi)有生物上的污染，也沒(méi)有化學(xué)上的殘留，隨著人們對(duì)環(huán)境及食品安全等級(jí)的更高要求，次氯酸將會(huì)有更廣闊的應(yīng)用前景。

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The half-lethal concentration of Vibrio in the cultivation of Litopenaeus vannamei seedlings by hypochloric acid

LI Chunling¹， ZHANG Zhiwei¹， SONG Qingxiang²， HE Yanhong³， MA Xuebin¹， GAO Wenya¹， XU Shengli⁴， SUN Shaoyong⁵

（1. Cangzhou Academy of Agricultural and Forestry Sciences， Cangzhou 061000，China; 2. Huanghua Litai Aquaculture Co.， Ltd.，Huanghua? 061100，China; 3. Cangzhou Aquatic Technology Promotion Station， Cangzhou 061000，China; 4. Bohai Juxiang Hengshui New Material Technology Co.， Ltd.， Hengshui 053000， China; 5. Fisheries Technology Extention Center of Hebei Province， Shijiazhuang 050035，China）

Abstract：Using hypochlorous acid as a disinfectant， under conditions similar to the cultivation environment of Penaeus vannamei seedlings， the effect of hypochlorous acid on Vibrio was investigated. Six hypochlorous acid concentration gradients were set at 0.5， 2， 5， 10， 15， and 25 mg/L， respectively， to investigate its efficacy in killing Vibrio during the 20 hour disinfection process， as well as the hypochlorous acid concentration close to the 20 hour half lethal concentration. The results showed that at the 20th hour of adding hypochlorite， the mortality rate of the 5 mg/L experimental group reached 54.5%， which was closest to the 50% mortality rate of Vibrio. Among them， the 25 mg/L experimental group reached 50% mortality rate at the 4th hour， and the 25 mg/L experimental group had 81.6% mortality rate of Vibrio at the 20th hour.

Key words：hypochlorous acid;Vibrio; half lethal concentration

（收稿日期：2023-02-10）