基于網(wǎng)絡(luò)藥理及分子對(duì)接探討薏苡仁—浙貝母藥對(duì)治療慢性萎縮性胃炎的作用機(jī)制

周明 劉敏

慢性萎縮性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)是以不典型消化道癥狀為主要臨床表現(xiàn)的慢性消化系統(tǒng)疾病[1],隨著病情發(fā)展,常伴腸上皮化生或不典型增生[2-3],被視為胃癌的癌前疾病[4]。中醫(yī)藥在減輕患者臨床癥狀,延緩或逆轉(zhuǎn)病理進(jìn)展方面有確切效果[5-6]。

薏苡仁、浙貝母為中醫(yī)臨床治療脾胃病的常用藥。根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典(2020版)》記載,薏苡仁具有健脾滲濕、解毒散結(jié)等功效[7]。用于慢性萎縮性胃炎的治療符合CAG本虛標(biāo)實(shí)的病機(jī)共識(shí)[8-9]?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),薏苡仁除有調(diào)節(jié)腸道菌群、增強(qiáng)免疫、鎮(zhèn)痛抗炎、調(diào)節(jié)代謝、抗氧化等作用外,還有明確抗腫瘤效果,以其為原料藥開發(fā)的康萊特系列藥物已廣泛用于多種癌癥的臨床治療[10]。浙貝母是一味化痰藥,傳統(tǒng)認(rèn)為其具有清熱化痰、解毒散結(jié)等功效。而《景岳全書本草正》謂其“善開郁結(jié),止疼痛,消脹滿”[11],可見浙貝母也能理中焦之氣,可用來緩解CAG常見的脘腹脹滿。此外,“百病多由痰作祟”,對(duì)于脾胃病中疑難者,國(guó)醫(yī)大師徐景藩先生臨證常配浙貝母,往往都有不錯(cuò)療效[12-13]。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),浙貝母具有祛痰、抗炎、抗菌、抗?jié)冏饔?同時(shí)也常用于腫瘤治療[14]。兩藥配伍,在緩解CAG臨床癥狀、減輕炎癥反應(yīng)、抑制“炎癌轉(zhuǎn)化”等方面有可預(yù)期的效果。目前,單獨(dú)針對(duì)薏苡仁或浙貝母的基礎(chǔ)研究較為普遍,而對(duì)于薏苡仁—浙貝母藥對(duì)及其治療CAG的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及分子作用機(jī)制研究相對(duì)較少,值得進(jìn)一步探究。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于生物學(xué)、藥理學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)等多學(xué)科交叉融合的系統(tǒng)生物學(xué)理論,構(gòu)建“藥物—成分—靶點(diǎn)—通路”的相互作用網(wǎng)絡(luò),符合中藥研究的需求,能夠系統(tǒng)的揭示藥物起效的作用機(jī)制[15-16]。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)理論和方法,篩選薏苡仁—浙貝母藥對(duì)治療CAG的活性成分及對(duì)應(yīng)作用靶點(diǎn)[17],探尋其可能的作用機(jī)制,以期為CAG治療用藥的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 薏苡仁—浙貝母活性成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)篩選

以“薏苡仁”“浙貝母”為關(guān)鍵詞,運(yùn)用TCMSP平臺(tái)(https://tcmspw.com/tcmsp.php)[18]檢索兩藥的化學(xué)成分。根據(jù)藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性,以口服生物利用度(oral bioavailability,OB)及類藥性(drug-likeness,DL)[19]分別大于等于30%和0.18為條件,篩選薏苡仁—浙貝母藥對(duì)的候選活性成分。

以“薏苡仁”“浙貝母”為關(guān)鍵詞,在TCMSP數(shù)據(jù)庫中查找藥對(duì)所有靶點(diǎn),并利用Perl語言腳本及候選活性成分?jǐn)?shù)據(jù)篩選對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)。進(jìn)一步在UniProt 數(shù)據(jù)庫(http://www.uniprot.org/)下載人類基因注釋文件[20],將靶點(diǎn)名稱轉(zhuǎn)換為標(biāo)準(zhǔn)基因名,用于后續(xù)分析處理。

1.2 慢性萎縮性胃炎疾病相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“atrophic gastritis”或“gastritis”為關(guān)鍵詞,檢索在線疾病數(shù)據(jù)庫GeneCards(https://www.genecards.org/)、OMIM(https://omim.org/)、DrugBank(https://www.drugbank.ca/)、PharmGkb(https://www.pharmgkb.org/)及TTD(http://db.idrblab.net/ttd/)[21],分別下載CAG相關(guān)疾病靶點(diǎn),利用R語言“venn”程序包進(jìn)行篩選、整理,獲取疾病相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)。

1.3 薏苡仁—浙貝母治療CAG作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及中藥—活性成分—作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將薏苡仁—浙貝母藥對(duì)候選活性成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)基因與CAG疾病相關(guān)靶點(diǎn)基因進(jìn)行匹配,獲得的兩者共同基因,即為薏苡仁—浙貝母治療CAG的作用靶點(diǎn)。同時(shí)利用以上數(shù)據(jù),通過Perl語言腳本建立“中藥—活性成分—作用靶點(diǎn)”映射關(guān)系,使用Cytoscape 3.9軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)繪制及相應(yīng)分析[22]。

1.4 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與核心靶點(diǎn)篩選

使用預(yù)測(cè)出的作用靶點(diǎn),在STRING(https://string-db.org/cgi/input.pl)網(wǎng)站,選擇物種為人(Homo sapiens),設(shè)置置信度≥0.4,構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(Protein-Protein Interaction,PPI)[23],保存網(wǎng)絡(luò)圖及TSV格式分析結(jié)果。使用Cytoscape及其插件CytoNCA對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中各節(jié)點(diǎn)的介度中心性(betweenness centrality,BC)、接近中心性(closeness centrality,CC)、度中心性(degree centrality,DC)、 特征向量中心性(eigenvector centrality,EC)、局部邊連通性(local average connectivity-based method centrality,LAC)和網(wǎng)絡(luò)中心性(network centrality,NC)[24],選出5個(gè)篩選指標(biāo)均大于相應(yīng)中位數(shù)的節(jié)點(diǎn),即為篩選出的核心靶點(diǎn),并構(gòu)建核心靶點(diǎn)間的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。

1.5 基因本體富集與京都基因與基因組百科全書通路富集分析

使用R語言完成富集分析,涉及 “clusterProfiler”“org.Hs.eg.db”“enrichplot”“ggplot2”“pathview” 等相關(guān)程序包。薏苡仁—浙貝母治療CAG作用靶點(diǎn)的基因本體(Gene Ontology,GO)富集分析具體包含生物過程(biological process,BP)、細(xì)胞組分(cell component,CC)、分子功能(molecular function,MF)三部分[25],在結(jié)果中選擇各部分顯著富集的前10項(xiàng)繪制柱狀圖。京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析用來搜索作用靶點(diǎn)涉及的主要信號(hào)通路[26],選擇顯著富集的前30項(xiàng)通路條目繪制氣泡圖。兩富集分析均以P值及矯正P值小于0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn)。

1.6 分子對(duì)接驗(yàn)證

在Pubchem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中搜索下載核心靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)活性成分的2D數(shù)據(jù),利用ChemOffice 14.0軟件構(gòu)建3D結(jié)構(gòu),以mol2格式保存。核心靶點(diǎn)的3D結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)通過PDB數(shù)據(jù)庫(https://www.rcsb.org)獲取,靶蛋白3D結(jié)構(gòu)中包含的水分子和小分子配體均由PyMOL-2.4.0軟件去除。蛋白加氫、活性成分及靶蛋白的格式轉(zhuǎn)換及活性口袋的預(yù)設(shè)置,均在AutoDockTools-1.5.7軟件平臺(tái)處理。分子對(duì)接使用Autodock Vina軟件完成,通過結(jié)合能計(jì)算驗(yàn)證活性成分與靶蛋白的結(jié)合能力。PyMOL-2.4.0軟件用于對(duì)接結(jié)果的可視化。

2 結(jié)果

2.1藥對(duì)活性成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)

在TCMSP數(shù)據(jù)庫中,對(duì)薏苡仁、浙貝母分別進(jìn)行成分搜索,以 OB≥30%,DL≥0.18 為篩選條件,共得到16個(gè)候選活性成分,其中薏苡仁9個(gè)、浙貝母7個(gè),活性成分相關(guān)信息見表1。

表1 TCMSP數(shù)據(jù)庫中薏苡仁—浙貝母藥對(duì)活性成分相關(guān)信息

通過檢索,獲得薏苡仁—浙貝母藥對(duì)所有靶基因共356個(gè),其中薏苡仁246個(gè),浙貝母110個(gè)。利用UniProt數(shù)據(jù)庫下載的人類基因數(shù)據(jù)以及Perl語言腳本,將查詢到的靶基因進(jìn)行去重、篩選、規(guī)范基因名稱,最終獲得候選活性成分對(duì)應(yīng)的靶基因數(shù)據(jù)98條。

2.2 慢性萎縮性胃炎疾病相關(guān)靶點(diǎn)

通過1.2中所述五個(gè)疾病數(shù)據(jù)庫下載有關(guān)CAG的疾病相關(guān)靶點(diǎn)。利用R語言“venn”程序包進(jìn)行分析,去除重復(fù)基因,取并集,合計(jì)獲得769個(gè)疾病靶點(diǎn),其中DrugBank 18個(gè),GeneCards 449個(gè),OMIM 197個(gè),PharmGkb 159個(gè),TTD 1個(gè),繪制韋恩圖,結(jié)果見圖1。

圖1 5個(gè)疾病數(shù)據(jù)庫所得慢性萎縮性胃炎相關(guān)靶點(diǎn)取并集之韋恩圖

2.3 薏苡仁—浙貝母治療CAG作用靶點(diǎn)及中藥—活性成分—作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖分析

通過Perl語言腳本,對(duì)藥對(duì)候選活性成分對(duì)應(yīng)靶基因與CAG疾病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行整理后取交集,得到12個(gè)共有靶點(diǎn),即為預(yù)測(cè)出的薏苡仁—浙貝母治療CAG的作用靶點(diǎn),對(duì)應(yīng)7個(gè)活性成分,準(zhǔn)備網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析的關(guān)系文件。

將關(guān)系文件導(dǎo)入Cytoscape 3.9軟件,生成中藥—活性成分—作用靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖,如圖2所示,節(jié)點(diǎn)代表活性成分或作用靶點(diǎn),節(jié)點(diǎn)連線說明成分與靶點(diǎn)之間產(chǎn)生相互聯(lián)系。圖中節(jié)點(diǎn)越大其關(guān)聯(lián)的活性成分或作用靶點(diǎn)越多,此節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越重要。結(jié)果顯示,7個(gè)活性成分中degree值>3的有MOL000358(β-谷甾醇,beta-sitosterol,degree值為8)、MOL001004(天竺葵素,pelargonidin,degree值為5)、MOL000449(豆甾醇,Stigmasterol,degree值為3)。β-谷甾醇和天竺葵素來自浙貝母,豆甾醇為薏苡仁的活性成分。β-谷甾醇degree值為8,表示其與12個(gè)靶基因中的8個(gè)發(fā)生聯(lián)系。

注:圖中紫色節(jié)點(diǎn)代表來自浙貝母的活性成分,綠色節(jié)點(diǎn)代表來自薏苡仁的活性成分,藍(lán)色節(jié)點(diǎn)表示藥對(duì)活性成分調(diào)控慢性萎縮性胃炎的作用靶點(diǎn)。

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

蛋白相互作用分析顯示,薏苡仁—浙貝母治療CAG的12個(gè)作用靶點(diǎn)間共產(chǎn)生34條相互作用關(guān)系。進(jìn)一步采用CytoNCA對(duì)網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)鋵傩赃M(jìn)行分析,篩選大于所有指標(biāo)中位值的節(jié)點(diǎn),得到5個(gè)核心靶點(diǎn),分別為PTGS2、CASP3、CASP8、JUN、PPARG,如圖3所示,進(jìn)一步建立核心靶點(diǎn)間的互作關(guān)系網(wǎng)絡(luò)。

注:圖中黃色節(jié)點(diǎn)為經(jīng)拓?fù)浞治龊Y選出的核心靶點(diǎn)

2.5 GO富集及KEGG通路富集分析

12個(gè)作用靶點(diǎn)的“gene symbol(基因名)”通過R語言“org.Hs.eg.db”程序包轉(zhuǎn)換為“entrezID”,“enrichplot”程序包用于GO富集分析。分別選取在BP、MF、CC上顯著富集的前10個(gè)條目繪制柱狀圖,如圖4所示。分析結(jié)果顯示,薏苡仁—浙貝母治療CAG的作用靶點(diǎn)在生物過程方面主要與脂多糖、細(xì)菌來源分子及氧水平降低等反應(yīng)相關(guān);在細(xì)胞組成上主要位于細(xì)胞器外膜、線粒體外膜、膜微域等;在分子功能方面主要包括血紅素結(jié)合、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、四吡咯結(jié)合等。

注:縱坐標(biāo)表示富集到的GO條目名稱,橫坐標(biāo)表示富集到的基因數(shù)目。

作用靶點(diǎn)的KEGG通路富集分析使用 “enrichplot”和“pathview”程序包,以P值及矯正P值均小于0.05進(jìn)行篩選,結(jié)果得到87條富集的信號(hào)通路。選擇前30條通路繪制氣泡圖,見圖5。分析顯示,薏苡仁—浙貝母治療CAG的作用靶點(diǎn)主要富集在白細(xì)胞介素-17(interleukin-17,IL-17)信號(hào)通路、P53信號(hào)通路、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)信號(hào)通路等。以IL-17信號(hào)通路為例,通路中主要富集了PTGS2、JUN、CASP3、CASP8等靶基因,見圖6。

注:縱坐標(biāo)為富集到的通路名稱,橫坐標(biāo)為參與該通路的靶點(diǎn)占總靶點(diǎn)的比例。

圖6 薏苡仁—浙貝母藥對(duì)治療慢性萎縮性胃炎作用靶點(diǎn)在IL-17信號(hào)通路上的富集圖

2.6 活性成分及核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接驗(yàn)證

根據(jù)“中藥—活性成分—作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖中活性成分degree值排名,將薏苡仁—浙貝母藥對(duì)治療CAG的核心靶點(diǎn)PTGS2、CASP3、CASP8、JUN、PPARG與對(duì)應(yīng)的活性成分進(jìn)行分子對(duì)接。配體與受體的結(jié)合能越低,說明兩者形成的復(fù)合物結(jié)構(gòu)越穩(wěn)定,也預(yù)示著兩者有較大的可能發(fā)生相互作用。一般情況下以結(jié)合能小于-5.0 kcal/mol作為穩(wěn)定結(jié)合的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[27]。結(jié)果顯示,5個(gè)核心靶點(diǎn)與對(duì)應(yīng)活性成分的結(jié)合能均小于-5.0 kcal/mol,表明核心靶點(diǎn)與活性成分有較好的結(jié)合能力,對(duì)接結(jié)果見表2。利用PyMOL軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行可視化,以PTGS2蛋白分子對(duì)接結(jié)果為例進(jìn)行展示,對(duì)接模式圖見圖7。

圖7 薏苡仁—浙貝母藥對(duì)活性成分與PTGS2蛋白分子對(duì)接模式圖

表2 薏苡仁—浙貝母藥對(duì)核心作用靶點(diǎn)與對(duì)應(yīng)活性成分分子對(duì)接結(jié)果

3 討論

上世紀(jì)90年代,有學(xué)者提出胃炎的“炎癌轉(zhuǎn)化”路徑,即慢性非萎縮性胃炎—慢性萎縮性胃炎—腸上皮化生—異型增生—胃癌,被醫(yī)學(xué)界廣泛認(rèn)可[28]。有研究表明,我國(guó)萎縮性胃炎發(fā)病率在2014年已約占受檢人群的25%,并且呈逐年上升趨勢(shì)[29]。目前,常規(guī)治療CAG多用于緩解臨床癥狀,尚不能滿足臨床治愈的需求,且長(zhǎng)期使用質(zhì)子泵抑制劑等藥物對(duì)胃腸道有明顯副作用[30-31]。中藥副作用小,其協(xié)同起效特征在復(fù)雜疾病的治療中具有一定優(yōu)勢(shì)[32]。近年來越來越多的臨床醫(yī)生和患者開始關(guān)注并使用中醫(yī)藥來預(yù)防和治療CAG[33],尋找治療CAG效果確切的中藥,并明確其作用機(jī)制具有重要的社會(huì)意義。

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)理論和方法,篩選出薏苡仁—浙貝母藥對(duì)治療CAG的7個(gè)主要生物活性成分,映射12個(gè)CAG作用靶點(diǎn)。其中β-谷甾醇(beta-sitosterol)與核心靶點(diǎn)有著廣泛的結(jié)合作用。β-谷甾醇作為甾醇類化合物,有明確的抗炎作用,其可通過抑制表皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中炎癥小體NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3,最終抑制絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號(hào)通路的激活,使得細(xì)胞中的白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8等炎癥因子生成減少而起效[34]。同時(shí),有研究表明,β-谷甾醇能夠緩解阿司匹林導(dǎo)致的胃黏膜損傷,促進(jìn)愈合,有一定的保護(hù)胃黏膜效果[35]。此外,β-谷甾醇具有抗菌作用,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示β-谷甾醇可使結(jié)腸炎模型小鼠腸上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞上抗菌肽的表達(dá)顯著增加,降低腸道菌的存活率,并且對(duì)肺炎鏈球菌、金黃葡萄球菌等均有抑制效果[36-38],或?qū)刂艭AG相關(guān)的幽門螺桿菌感染有一定作用。另有研究表明β-谷甾醇對(duì)胃癌有治療效果,可抑制腫瘤細(xì)胞增值及誘導(dǎo)其凋亡[39-40],可見其或可延緩或逆轉(zhuǎn)CAG的“炎癌轉(zhuǎn)化”過程。

本研究通過PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?進(jìn)一步篩選到5個(gè)核心靶點(diǎn),包括PTGS2、CASP3、CASP8、JUN、PPARG,其中PTGS2與多個(gè)活性成分關(guān)聯(lián)。PTGS2又稱環(huán)氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),是前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)形成的關(guān)鍵酶,后者有強(qiáng)烈的促炎作用,因此PTGS2與抗炎功效關(guān)系密切,一直是非甾體類抗炎藥的重要靶點(diǎn)。此外,PTGS2是一種誘導(dǎo)型蛋白,正常組織或細(xì)胞中極少表達(dá),當(dāng)機(jī)體受到炎癥因子、腫瘤促進(jìn)劑、生長(zhǎng)因子等因素刺激時(shí)表達(dá)上升[41],參與炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖與凋亡等多種病理過程,并且與多種癌腫的發(fā)生密切相關(guān)[42-43]。本研究KEGG通路分析結(jié)果中涉及到的IL-17、TNF、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)等炎癥、腫瘤相關(guān)信號(hào)通路均與PTGS2基因有密切聯(lián)系,表明PTGS2在薏苡仁—浙貝母藥對(duì)治療CAG中,通過抗炎、抗腫瘤機(jī)制起著重要作用。

KEGG通路富集分析結(jié)果顯示,大多數(shù)靶標(biāo)蛋白的編碼基因富集在與CAG“炎癌轉(zhuǎn)化”相關(guān)的IL-17信號(hào)通路、P53信號(hào)通路和TNF信號(hào)通路上。研究證實(shí)IL-17信號(hào)通路在急慢性炎癥反應(yīng)中扮演著重要角色,IL17家族有6個(gè)成員(IL-17A-F),可通過與相應(yīng)受體結(jié)合,激活下游MAPK,NF-κB和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白通路中的抗細(xì)胞因子、趨化因子和抗菌肽,與CAG的發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)[44-45]。P53信號(hào)通路是一經(jīng)典的腫瘤相關(guān)通路,P53蛋白可促細(xì)胞凋亡,在腫瘤抑制中具有重要作用,其失活會(huì)促進(jìn)腫瘤發(fā)生或發(fā)展,大量基因組測(cè)序證實(shí),約一半的腫瘤伴有P53基因突變[46]。有研究發(fā)現(xiàn),隨著慢性胃炎程度的加重,患者胃黏膜中突變型P53基因表達(dá)明顯升高[47],可見薏苡仁—浙貝母通過對(duì)P53通路的調(diào)控,或可減緩CAG病情惡化。TNF通路是與腫瘤和炎癥均有關(guān)的信號(hào)通路,TNF-α可直接殺傷腫瘤細(xì)胞,同時(shí)參與全身炎癥反應(yīng),其與相應(yīng)受體結(jié)合后可激活下游,包括NF-κB和MAPK途徑,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞毒性、免疫調(diào)節(jié)和細(xì)胞凋亡等生物學(xué)功能[48]。相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn),中藥治療CAG的起效機(jī)制與TNF信號(hào)通路相關(guān)[49]。

綜上所述,本研究以薏苡仁—浙貝母為研究對(duì)象,使用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)相關(guān)理論與方法,探討了薏苡仁—浙貝母藥對(duì)治療CAG的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用靶點(diǎn)及相關(guān)起效機(jī)制,并通過分子對(duì)接實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證核心靶蛋白與對(duì)應(yīng)活性成分均有較好結(jié)合能力,預(yù)測(cè)結(jié)果有一定可靠性。研究方法先進(jìn)合理,研究結(jié)果體現(xiàn)了中藥多成分協(xié)同起效的獨(dú)特優(yōu)勢(shì),為臨床運(yùn)用薏苡仁—浙貝母治療CAG提供了理論支持,為后續(xù)新藥研發(fā)及推廣臨床應(yīng)用提供了相對(duì)可靠依據(jù)。然而,各平臺(tái)數(shù)據(jù)、相應(yīng)分析算法及軟件功能存在一定局限性,所得結(jié)論還可以通過進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。