2012—2021年文山州禽新城疫病原監(jiān)測(cè)及免疫效果評(píng)估

張立喜,張紹衛(wèi),陳瑞雪,袁正春

(1.文山州畜牧站,云南 文山 663099; 2.文山州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南 文山 663099)

新城疫疫苗的免疫接種工作在文山州已開展多年,為了解文山州禽新城疫病毒的流行情況,評(píng)估其免疫抗體水平及免疫效果,找出免疫工件中的薄弱環(huán)節(jié),為進(jìn)一步完善禽新城疫防疫措施提供科學(xué)依據(jù),2012—2021年持續(xù)在文山州13個(gè)交易市場(chǎng)采集雞、鴨喉氣管樣品,采用RT-PCR方法檢測(cè)新城疫抗原;采用血凝及血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定新城疫免疫抗體效價(jià),并對(duì)結(jié)果進(jìn)行時(shí)間、群間和空間分布分析?，F(xiàn)將2012—2021年文山州禽新城疫病原監(jiān)測(cè)及免疫效果評(píng)估結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

1.1.1雞血清

大部分雞血清樣品為每年春防、秋防集中監(jiān)測(cè)送檢樣品。按照隨機(jī)采樣原則,每年每個(gè)縣(市)抽查至少6個(gè)規(guī)模場(chǎng),每個(gè)規(guī)模場(chǎng)采集樣品20份;每個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))抽查至少10個(gè)散養(yǎng)戶,每戶采集樣品10份(不足10份的全部采集)。少量樣品為日常監(jiān)測(cè)采樣和定點(diǎn)采樣。

2012—2021年,共對(duì)全州99個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))的10411個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)采集80366份血清樣品進(jìn)行新城疫抗體檢測(cè)。詳見表1。

表1 2012—2021年雞血清樣品采集信息統(tǒng)計(jì)

1.1.2雞、鴨喉氣管樣品

雞、鴨喉氣管樣品固定在文山、硯山、麻栗坡、馬關(guān)、丘北、富寧6個(gè)縣(市)的13個(gè)交易市場(chǎng)采集。詳見表2。

表2 2012—2021年雞、鴨喉氣管樣品采集信息統(tǒng)計(jì)

1.2 檢測(cè)與結(jié)果判定

1.2.1免疫抗體檢測(cè)

采用血凝與血凝抑制試驗(yàn)對(duì)雞血清樣品進(jìn)行新城疫免疫抗體檢測(cè),檢測(cè)所需新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原和陰、陽(yáng)性對(duì)照血清由青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn),1%紅細(xì)胞和PBS液由文山州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室配制。陰性對(duì)照孔血清滴度≤2log2,陽(yáng)性對(duì)照孔血清滴度≥9log2,判定試驗(yàn)結(jié)果有效。樣品血清滴度≤4log2判定為陰性,樣品血清滴度≥5log2視為免疫抗體合格; 群體免疫抗體合格率達(dá)到70%以上,視為群體免疫抗體合格。

1.2.2病原學(xué)檢測(cè)

應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)新城疫病原。包含病毒核酸提取和新城疫RT-PCR檢測(cè)兩個(gè)部分。

1.2.2.1病毒核酸提取

采用無(wú)錫百泰克生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒提取新城疫病毒RNA,-80℃保存?zhèn)溆?具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.2.2新城疫RT-PCR檢測(cè)

采用青島立見生物科技有限公司生產(chǎn)的新城疫病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)新城疫病毒RNA,具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線且C值≤35,且陰性對(duì)照無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú)C值,則判定檢測(cè)結(jié)果有效。樣品的擴(kuò)增結(jié)果有典型的擴(kuò)增曲線且C值≤35時(shí)可判定為新城疫病毒核酸陽(yáng)性;C值>40或無(wú)C值時(shí)可判定為新城疫病毒核酸陰性;35

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

將檢測(cè)數(shù)據(jù)錄入Excel 軟件,按照不同年份、場(chǎng)點(diǎn)類別和區(qū)域進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析描述,應(yīng)用SPSS軟件對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析

2.1 總體情況

2.1.1免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

雞新城疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果(見表3)顯示:2012—2021年文山州禽新城疫免疫抗體水平均保持在75%以上,均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的免疫抗體合格率≥70%的標(biāo)準(zhǔn),說(shuō)明文山州新城疫免疫質(zhì)量較好。但2021年文山州新城疫免疫抗體水平有所下降,特別是麻栗坡縣新城疫免疫抗體水平僅達(dá)到58.6%,顯著低于其他縣(市)(P<0.05),存在發(fā)生疫情的風(fēng)險(xiǎn),麻栗坡縣應(yīng)高度重視,并采取切實(shí)有效的措施,盡快提高新城疫免疫抗體水平,避免發(fā)生疫情。

表3 2012—2021年雞新城疫免疫抗體檢測(cè)合格率統(tǒng)計(jì) 單位:%

2.1.2病原監(jiān)測(cè)結(jié)果

2012—2021年,全州8縣(市)共檢測(cè)雞、鴨喉氣管樣品2805份,檢出新城疫病毒陽(yáng)性樣品20份,新城疫病毒陽(yáng)性率為0.71%,涉及硯山、馬關(guān)、丘北、富寧四個(gè)縣。從時(shí)間上看,2012年新城疫病毒陽(yáng)性率最高,達(dá)到8.33%,顯著高于其他年份(P<0.05),涉及硯山、馬關(guān)、富寧三個(gè)縣,其次是2015年、2017年和2013年,新城疫病毒陽(yáng)性率分別為1.60%、0.77%、0.56%,僅涉及丘北一個(gè)縣,其他年份未檢出新城疫病毒陽(yáng)性樣品,且2018年后全州連續(xù)4年無(wú)新城疫病毒陽(yáng)性樣品檢出。新城疫病原監(jiān)測(cè)結(jié)果表明,通過(guò)多年的強(qiáng)化免疫,文山州新城疫帶毒狀況逐年改善,新城疫在文山州得到了比較有效的控制。

2.2 不同家禽情況

不同家禽新城疫病原監(jiān)測(cè)結(jié)果(表4)顯示:2012—2021年鴨綜合陽(yáng)性率為1.14%,較雞綜合陽(yáng)性率高了0.8個(gè)百分點(diǎn),鴨的陽(yáng)性率顯著高于雞的陽(yáng)性率(P<0.05),說(shuō)明文山州新城疫病毒帶毒狀況鴨比雞嚴(yán)重。

表4 2012—2021年不同家禽新城疫病原監(jiān)測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.3 不同養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)情況

不同養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)免疫抗體檢測(cè)結(jié)果(表5)顯示:規(guī)模場(chǎng)合格率顯著高于散養(yǎng)戶(P< 0.05) ,說(shuō)明規(guī)模場(chǎng)免疫效果較好。

3 討論

2012—2021年新城疫病原監(jiān)測(cè)及免疫效果評(píng)估結(jié)果表明,隨著免疫力度加大,新城疫免疫質(zhì)量逐年提高,新城疫病毒帶毒狀況逐年改善,但鴨的帶毒狀況明顯較雞的帶毒狀況嚴(yán)重。這可能是因?yàn)樗?鴨、鵝)對(duì)新城疫病毒有抵抗力,一般只帶毒而不引起發(fā)病,所以長(zhǎng)期以來(lái)大家都不夠重視水禽的免疫工作導(dǎo)致。鴨的帶毒問(wèn)題逐步顯現(xiàn),可能會(huì)成為今后新城疫病毒難以根除的重要因素之一,值得大家討論關(guān)注。

文山州2012—2021年新城疫整體免疫效果較好,達(dá)到了國(guó)家要求的抗體合格率70%以上標(biāo)準(zhǔn),且2018年后連續(xù)4年無(wú)新城疫病毒陽(yáng)性樣品檢出,說(shuō)明新城疫在文山州得到了比較有效的控制。但2021年文山州新城疫免疫抗體水平有所下降,且存在一定的地區(qū)和場(chǎng)群差異,散養(yǎng)戶和部分鄉(xiāng)(鎮(zhèn))免疫水平偏低,存在發(fā)生疫情的風(fēng)險(xiǎn)。全州應(yīng)依據(jù)地區(qū)和場(chǎng)群不均衡的抗體水平分布特點(diǎn),制定有針對(duì)性的免疫措施,分類指導(dǎo)推進(jìn)全州家禽新城疫防控工作,持續(xù)加強(qiáng)新城疫免疫,嚴(yán)格落實(shí)包括生物安全在內(nèi)的各項(xiàng)防控措施,嚴(yán)陣以待,避免發(fā)生疫情。