調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞與2型糖尿病腎病的關(guān)系研究

黃若妃 陳福宇 呂靜平 夏靜瑤 李可

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病患者常見的并發(fā)癥，在2 型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）患者中發(fā)病率高達(dá)25%，是導(dǎo)致糖尿病患者死亡和殘疾的重要因素[1-2]。DN 的基本病理特征是腎小球肥大，伴有基底膜增厚和細(xì)胞外基質(zhì)成分沉積，通常認(rèn)為代謝和血流動力學(xué)因素是引起腎臟病變的主要原因[3-5]。研究表明，炎癥反應(yīng)在DN的發(fā)生過程中起重要作用[6-7]，T 細(xì)胞參與了2 型DN（T2DN）的發(fā)生、發(fā)展[8]。CD4+Th 細(xì)胞被認(rèn)為在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[9]，其中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞（T regulation，Treg 細(xì)胞）亞群通過產(chǎn)生IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β 等抗炎細(xì)胞因子，在維持免疫穩(wěn)態(tài)和免疫耐受方面發(fā)揮重要作用[10]。有報道稱Treg 細(xì)胞比例失衡可能與T2DN 發(fā)生有關(guān)[11]。本研究擬通過分析不同疾病嚴(yán)重程度T2DN 患者Treg 細(xì)胞計數(shù)和比例，探討其與T2DN 發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2021 年1 至12 月永康市第一人民醫(yī)院內(nèi)分泌科收治的T2DN 患者150 例，T2DM 的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國2 型糖尿病防治指南（2020 年版）》[12]。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡＞18 歲；3 個月內(nèi)無抗感染藥物使用史；6 個月內(nèi)無免疫系統(tǒng)抑制劑使用史。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在嚴(yán)重心、肺系統(tǒng)疾??；存在腎小球腎炎、慢性腎衰竭及其他影響尿白蛋白水平的腎臟疾病；存在甲狀腺功能減退或亢進(jìn)；存在急性或慢性感染性疾病；存在其他炎癥性疾病或慢性免疫介導(dǎo)疾病。根據(jù)患者尿白蛋白-肌酐比值（urinary albumin to creatinine ratio，UACR）將患者分成3 組[13]：UACR＜30 mg/g 的正常白蛋白尿組84 例，30 mg/g≤UACR≤300 mg/g 的微量白蛋白尿組41 例，UACR＞300 mg/g 的大量白蛋白尿組25 例。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批件號：YKRM2021-LS006）。

1.2 方法 采集患者的晨尿標(biāo)本及空腹靜脈血標(biāo)本。采用免疫比濁法，使用羅氏c701 及其配套試劑測定尿白蛋白及尿肌酐水平，計算UACR。采用免疫熒光染色和流式細(xì)胞分析法，使用安捷倫NovoCyte 2060R 流式細(xì)胞儀及其配套試劑檢測Treg 細(xì)胞計數(shù)及比例。采用離子交換高壓液相法，使用BIO-RAD 糖化血紅蛋白（Hemoglobin A1C，HbAlC）測試系統(tǒng)及其配套試劑測定HbAlC水平。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較正常白蛋白尿組、微量白蛋白尿組、大量白蛋白尿組患者一般資料及實(shí)驗(yàn)室檢查指 標(biāo)；（2）分 析T2DN 患 者Treg 細(xì) 胞 計 數(shù) 及 比 例 與UACR 的相關(guān)性；（3）分析T2DN 患者Treg 細(xì)胞計數(shù)及比例與T2DM 病程的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 正常白蛋白尿組、微量白蛋白尿組、大量白蛋白尿組患者一般資料及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較 正常白蛋白尿組、微量白蛋白尿組、大量白蛋白尿組患者性別、年齡、BMI、隨機(jī)血糖、HbA1C、TC 和LDL水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。3 組患者高血壓、口服降壓藥和口服降糖藥比例比較差異亦均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。3 組患者T2DM病程、UACR 水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。正常蛋白尿組患者T2DM 病程明顯短于微量白蛋白尿組和大量白蛋白尿組（均P＜0.05），提示T2DM 病程可能與白蛋白尿水平有關(guān)；此外，正常白蛋白尿組患者UACR 水平＜微量白蛋白尿組＜大量白蛋白尿組（均P＜0.05），提示腎功能與白蛋白尿水平相關(guān)。見表1。

表1 正常白蛋白尿組、微量白蛋白尿組、大量白蛋白尿組患者一般資料及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較

2.2 T2DN 患者Treg 細(xì)胞計數(shù)及比例與UACR 的相關(guān)性分析 正常白蛋白尿組、微量白蛋白尿組、大量白蛋白尿組患者Treg 細(xì)胞計數(shù)分別為（33.45±15.21）個/μl、（28.07±13.72）個/μl 和20（16，40）個/μl，Treg 細(xì)胞占CD4＋T 細(xì)胞的比例分別為（4.99±1.57）%、（4.95±1.65）%和（5.53±1.76）%。相關(guān)性分析顯示，T2DN 患者Treg 細(xì)胞計數(shù)與UACR 水平呈負(fù)相關(guān)性（rs=-0.205，P＜0.05），即Treg 細(xì)胞計數(shù)與T2DN 的疾病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，見圖1。T2DN 患者Treg 細(xì)胞占CD4＋T細(xì)胞的比例與UACR 水平無關(guān)（rs=0.019，P＞0.05），見圖2。

圖1 T2DN 患者Treg 細(xì)胞計數(shù)與UACR 的相關(guān)性分析

圖2 T2DN 患者Treg 細(xì)胞比例與UACR 的相關(guān)性分析

2.3 T2DN 患者Treg 細(xì)胞計數(shù)及比例與T2DM 病程的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示，T2DN 患者Treg 計數(shù)與T2DM 病程呈負(fù)相關(guān)性（rs=-0.193，P＜0.05），即Treg 細(xì)胞計數(shù)隨T2DM 病程延長而逐漸下降，見圖3；而Treg 細(xì)胞占CD4＋T 細(xì)胞的比例與T2DM 病程無關(guān)（rs=-0.016，P＞0.05），見圖4。

圖3 T2DN 患者Treg 細(xì)胞計數(shù)與T2DM 病程的相關(guān)性分析

圖4 T2DN 患者Treg 細(xì)胞比例與T2DM 病程的相關(guān)性分析

3 討論

除了傳統(tǒng)的代謝和血流動力學(xué)危險因素外，目前越來越多的研究認(rèn)為糖尿病是一種炎癥過程，免疫細(xì)胞參與其發(fā)生、發(fā)展[14-15]。T 細(xì)胞已被證明在T2DN 的發(fā)展起重要作用。CD4+CD25+Treg 細(xì)胞功能障礙會促使機(jī)體自身免疫性疾病的發(fā)展。叉頭狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3（forkhead box P3，F(xiàn)oxp3）主要表達(dá)在CD4+CD25+Treg 細(xì)胞上，與Treg 細(xì)胞功能密切相關(guān)，是目前定義CD4+CD25+Treg 細(xì)胞的最佳標(biāo)志物[16]。既往研究表明，CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞可能參與T2DN 的發(fā)生、發(fā)展，但CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞與T2DN 發(fā)病機(jī)制的關(guān)系仍不清楚[17]。本研究分析發(fā)現(xiàn)，Treg 細(xì)胞計數(shù)隨T2DM 病程進(jìn)展不斷下降，且Treg 細(xì)胞水平和UACR 水平呈負(fù)相關(guān)。這表明，隨T2DM 病程進(jìn)展而發(fā)生的Treg 細(xì)胞生成減少和凋亡增多，可能是T2DN 發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制。但本研究發(fā)現(xiàn)，Treg 細(xì)胞比例并不隨著T2DM 病程的進(jìn)展而降低，且與UACR 的水平無相關(guān)性?？赡艿脑蛟谟?，T2DN 過程中CD4+T 細(xì)胞水平整體下降，使得Treg 細(xì)胞比例維持在一個相對穩(wěn)定的水平。既往研究發(fā)現(xiàn)，在T2DN 患者中，CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞明顯減少，Th2 細(xì)胞明顯減少，而Th1和Th17 細(xì)胞增多，提示T2DN 患者存在Th1/Th2/Th17/Treg 比例的改變，且伴隨著CD4+T 細(xì)胞整體計數(shù)的下調(diào)[18]。

人和小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞具有誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞從單核細(xì)胞分化的能力[19]。巨噬細(xì)胞的活化和積累可能是糖尿病并發(fā)癥發(fā)生的主要原因[20]。因此，推測CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞計數(shù)降低，可能對單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的免疫抑制作用減弱，并可能提示炎癥狀態(tài)，這可能促進(jìn)糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。既往研究發(fā)現(xiàn)，在T2DN 患者中，巨噬細(xì)胞相關(guān)的炎癥因子，包括IL-6、IL-17、IFN-γ 和TNF-α 等均存在著不同程度的上調(diào)，這正是CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞降低導(dǎo)致炎癥激活的結(jié)果。

盡管多種危險因素，如遺傳、代謝和炎癥已被證實(shí)在T2DM 和T2DN 的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，T2DN 的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞的下調(diào)是T2DN 的結(jié)果，還是促進(jìn)了T2DN 的發(fā)展，尚需明確。在T2DN 的發(fā)生、發(fā)展過程中，T2DN 與CD4+T 細(xì)胞之間可能存在一個雙向調(diào)控回路，可能通過炎癥和抗炎細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)控，未來需更多的臨床和基礎(chǔ)研究來明確Treg 細(xì)胞在T2DN 發(fā)生、發(fā)展中的作用。

綜上所述，Treg 細(xì)胞計數(shù)下降與T2DN 的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，Treg 細(xì)胞可能參與了抑制免疫激活和炎癥的作用。這些發(fā)現(xiàn)或可為進(jìn)一步了解T2DN 的發(fā)病機(jī)制提供參考。